Электронная методы приготовления препаратов

МЕТОДЫ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ПРЕПАРАТОВ МИКРООРГАНИЗМОВ ДЛЯ ЭЛЕКТРОННОЙ МИКРОСКОПИИ [c.114]

Недостатками электронно-микроскопического метода являются сложность методики и значительная продолжительность определения. Особую трудность представляет приготовление препарата в виде неагрегированных первичных частиц. Так как на поверхности частиц сажи имеется значительное число ненасыщенных связей, то получить суспензию в виде отдельных, частиц удается с трудом. Обычно частицы располагаются на подложке в виде агрегатов. [c.193]

В сочетании с разнообразными методами приготовления и окрашивания тканей электронная микроскопия позволила выявить много важных деталей в строении мембран. На приведенных ниже фотографиях видны три разных изображения плазматической мембраны эритроцита, полученные при электронной микроскопии препаратов, приготовленных тремя различными методами. [c.343]

На рис. 3 и 4 показана внутренняя сторона мембраны эритроцита электронная микрофотография на рис. 4 получена с использованием метода замораживания-скалывания. При приготовлении препаратов этим методом клетки сначала замораживают, а затем замороженный блок раскалывают. Иногда линия раскола проходит в плоскости между двумя липидными слоями (рис. 3). С обеих образующихся при этом поверхностей делают отпечатки, которые затем исследуют в электронном микроскопе (рис. 4). Внутренняя часть каждого из липидных слоев имеет гладкую поверхность расположенные на ней скопления-это молекулы интегральных белков. Стрелкой показан внешний край скола. [c.344]

Данных о возможности изменения формы и размеров дисперсных частиц термоустойчивых загустителей или их агрегатов в процессе приготовления препаратов консистентных смазок (в которых они содержатся) для электронного микроскопа пока опубликовано не было. Поскольку эти загустители нерастворимы в смазочных маслах, они не могут кристаллизоваться из растворов, а отдельные частицы не могут расти, как кристаллы мыл форма и размеры их, по-видимому, могут изменяться только в результате механических воздействий. При тех незначительных воздействиях, которым подвергаются консистентные смазки в процессе приготовления препаратов для электронного микроскопа методами сухой техники, дробление дисперсных частиц мало вероятно, и возможно только дробление их агрегатов. [c.69]

В этой главе описывается небольшое число методов, которые мы в соответствии с собственным опытом считаем полезными для исследователя, изучающего анатомию бактерий. Мы делаем акцент на применении негативно контрастированных препаратов и тонких срезов образцов для анализа в просвечивающем электронном микроскопе. Здесь нет описания операций по управлению и эксплуатации электронного микроскопа [15—19], но есть краткая информация о необходимых для работы материалах и их поставщиках (разд. 4.6 и 4.7). Предполагается, что доступны вспомогательные приборы и что помощь в работе могут оказать опытные операторы. Мы поставили своей целью снабдить обучающегося сведениями о методах приготовления образцов и способах интерпретации результатов. Хотя помимо методов и оборудования, на которых делается акцент, будут упоминаться и другие, детальную информацию о них можно найти, лишь обратившись к специальной литературе, другим руководствам и журнальным статьям. В конце главы мы приводим литературу по общим вопросам [1 —14] и перечень источников специальной информации. [c.95]

Вопрос о структурной организации цитоплазмы уже очень давно вызывает споры среди цитологов. Ранние микроскопические наблюдения над живыми клетками показали, что цитоплазма-это вязкая жидкость, консистенция которой может изменяться от более жидкой до состояния, напоминающего пластичную твердую массу. В период между 1870 и 1885 гг. благодаря развитию методов фиксации и окрашивания клеток широко распространилось мнение, что цитоплазма содержит разветвленную трехмерную сеть белковых нитей. Эту точку зрения энергично оспаривали некоторые гистологи, утверждавшие, что наблюдаемая после фиксации сетчатая структура цитоплазмы есть не что иное, как артефакт-результат коагуляции белков в процессе приготовления препаратов. Сейчас, спустя почти 100 лет, все еще можно слышать подобные возражения, хотя речь идет уже о значительно более тонких нитях, увидеть которые можно только с помощью электронного микроскопа. [c.126]

Решающее значение в проблеме исследования электронных структур принадлежит спектральному анализу и измерению магнетизма атомов и соединений. Последний метод продолжает применяться по мере приготовления все более и более чистых препаратов рзэ. [c.15]

Наиболее универсальным является обычно применяемый светлопольный метод, при помощи которого можно исследовать препараты, приготовленные любым из описанных в главе II способов. Темнопольный метод в принципе пригоден для изучения как кристаллических, так и аморфных тел, однако на современном уровне развития электронной микроскопии его целесообразно применять почти исключительно для изучения кристаллических препаратов. Остальные методы предназначены для исследования кристаллов (или для препаратов, содержащих достаточно ярко выраженные элементы кристаллической структуры), причем для осуществления, метода муара необходимо подбирать определенным образом ориентированные друг относительно друга кристаллы с некоторыми оптимальными значениями толщин и параметров кристаллической решетки. Несмотря на некоторые ограничения, эти методы вполне заслуживают право на самостоятельное существование. Микродифракция является сочетанием электронной дифракции [c.15]

Рис. 5.25. Электронная микрофотография ядра, на которой видны ядерные поры. (Препарат получен методом замораживания—травления.) хЗО ООО. При приготовлении таких препаратов быстро замороженные клетки раскалывают металлическим лезвием. Скол проходит в плоскости, представляющей наименьшее сопротивление, часто через мембрану. После удаления льда вытравленная поверхность обнажается.

Снимки, полученные методом электронной микроскопии в сочетании с методом замораживания — скалывания, дают дополнительные доказательства наличия водных включений в микрочастицах. Указанная методика позволяет визуализировать наружный контур благодаря существованию поверхностей спайности и дает важные данные в отношении ультраструктуры стенки-мембраны. На рис. 74 и 75 приведены снимки, полученные методом замораживания — скалывания, для сравнения нескольких препаратов микросфер, содержащих отдельные фосфолипидные везикулы. Наличие поверхностей спайности полусферической и полуэллиптической формы указывает на то, что гидрофобность молекул липидного типа отвечает условиям образования липидных мембран. Возникновение разрывов неправильной формы (вероятно, во время приготовления проб по методу замораживания — скалывания) является дополнительным свидетельством существования полостей в структуре микросфер (рис. 74,6). [c.100]

При помощи электронной микроскопии можно уловить содержание примесей менее 1 % [849]. Но в некоторых случаях загрязнения, имеющие форму и размер, близкие к вирусным частицам, можно принять за вирус. Доказательство отсутствия контаминирующих частиц в препарате также в некоторой степени будет зависеть от чувствительности метода препарирования. Поэтому необходимо просмотреть достаточно большую серию препаратов, приготовленных различными методами, чтобы получить достоверные данные. Следует отметить важное преимущество данного метода, Он позволяет непосредственно наблюдать за возможными морфологическими изменениями вирусных частиц на различных этапах очистки. [c.154]

В настоящее время электронная микроскопия достигла такого уровня, когда целесообразно рассмотреть специфику ее приложений к отдельным отраслям науки, в том числе и к физической химии. В соответствии с отмеченными выше трудностями в развитии прикладной электронной микроскопии в данной книге обсуждаются две основные проблемы. В первой части рассматриваются методы проведения исследований в электронном микроскопе и методы приготовления препаратов. Это различные вопросы, хотя иногда их не разделяют достаточно четко. Изложение их,хотя и несколько устаревшее из-за быстрого развития электронной микроскопии, имеется в уже упоминавшихся отечественных монографиях [8, 9], книге Косслетта [43], а также в содержательной книге Холл [1], написанной автором на основании пятилетнего чтения курса по электронной микроскопии в высшем учебном заведении. Поэтому в данной книге основное внимание будет уделено современному положению в этой области — анализу имеющегося материала и изложению новых, наиболее эффективных методов. Устройство электронных микроскопов, описанное в цитированных монографиях, здесь рассматриваться не будет. Из числа обзорных статей по методике исследования следует отметить статьи Косслетта [44, 45] и Кёнига [46]. [c.12]

Методы приготовления препаратов для электронных микрокристаллоскопических исследований и ряд реакций разработаны Л. И. Земляновой и Ю. М. Кушнир ч [c.36]

Таким образом, высоте объекта дается предварительное увеличение в виде его тени, отбрасываемой на подложку. Металл, употребляемый для этой цели, должен давать непрерывную пленку подходящими металлами являются хром, золото, уран. Специфическим преимуществом этого метода является возможность достигнуть удовлетворительной контрастности для таких частиц, которые обладают слишком малой задерживающей способностью, чтобы давать обычным путем изображение с хорошим контрастом [127]. Другим преимуществом теневого метода является то, что при этом получаются препараты, более устойчивые к электронной бомбардировке, чем большинство исходных препаратов, из которых они изготовляются. Согласно Уайкову, оттенение металлом настолько улучшает возможности фотографирования молекул, что практически нижний предел тех молекулярных размеров, которые теперь могут быть различимы, определяется молекулярными неоднородностями подложки, если коллодий или формвар обладают таковыми. Однако влияние структуры этих материалов большей частью может быть устранено применением метода реплик, при котором молекулы оттеняются металлом на гладкой стеклянной поверхности и получающаяся металлическая пленка переносится на неоттененный пластик. Хилер и Бейкер [128] описали метод приготовления препаратов бактерий, который заключается в том, что поверх колонии бактерий, растущей на поверхности агар-агара, наносится [c.327]

Для многих вирусов кратность наборов п можно определить исходя из организации капсомеров на поверхности частицы. Однако у пикорнавирусов капсомеры обычно просматриваются плохо (рис, 18.2,Л). В тех редких случаях, когда капсомеры все же видны, они недостаточно отчетливы, и для их подсчета необходимы опыт и значительная доля воображения [196]. Точ-ное число капсомеров, которое, по данным разных авторов, сО ставляет 32, 42 или 60, по всей видимости, зависит от вируса и метода приготовления препарат для проведения электроннО микроскопических исследований. Плеоморфность капсомеров пикорнавирусов можно объяснить разной группировкой трех основных цепей 60-субъединичной оболочки (см. рис. 6 в работе [269]), [c.201]

Выбор оптимальных условий работы и правильное приготовление препаратов позволяют получить в электронном микроскопе оптическое разрешение, равное приблизительно 20 А С помощью электронного микроскопа мон но непосредственно наблюдать и фотографировать отдельные молекулы белков, так как их минимальные размеры в большинстве случаев превышают 20 А. Молекулярный вес белка легко рассчитать, если известны 1) число белковых частиц (т. е. отдельных молекул) в данном поле зрения электронного микроскопа, 2) объем раствора, из которого были получены эти частицы, и 3) сухой вес белка в миллилитре исходного раствора. Условия (1) и (3) легко выполнимы (первое — путем подсчета числа частиц на электронной микрофотографии, третье — с помощью рассмотренных в этой главе аналитических методов). Объем, соответствующий данному полю зрения, можно рассчитать, добавляя к исходному раствору известное число частиц полистирольного латекса. Пусть, например, в электронном микроскопе иссдедуется раствор, содержащий 1 мг белка и 10 частиц латекса на 1 мл, и пусть в поле зрения обнаруживается 10 частиц латекса и 1000 частиц белка. Из простого расчета следует, что каждая белковая частица должна весить приблизительно 10 г, т. е. что молекулярный вес белка в Дальтонах составляет около 6 10 . При определении молекулярного веса с помощью электронного микроскопа необходимо производить статистическую обработку данных из нескольких независимых измерений. [c.61]

Подробный обзор литературы о всех известных вирусах рода Borrelina содержится в работе Мартиньони и Ленгстона [174]. Список вирусов — возбудителей болезней насекомых — ежедневно растет, появляются новые описания, хотя часто неизвестно, действительно ли описаны новые виды. Безусловно, проще дать обнаруженному вирусу название как новому виду, чем сопоставлять все его свойства со свойствами ранее описанных видов, чтобы точно определить его систематическое положение, в особенности когда это касается разных типов одного вида. Один из признаков — разницу в размере вирусных палочек — следует оценивать с учетом различий в методах приготовления электронно-микроскопических препаратов. Только измерения, полученные на срезах материала, дают до известной степени сравнимые данные. Опыты с искусственным заражением некоторых видов дают положительный результат, в то время как у многих других видов часто возникает лишь латентное заражение. Перекрестное заражение не всегда выявляет устойчивую видовую специфичность возбудителя, и этот признак рискованно использовать для определения таксономического положения изучаемого возбудителя, пока не будут найдены надежные критерии, позволяющие различать виды этим методом. [c.111]

Та типичная клетка, которую мы до сих пор рассматривали и которая изображена схематически на фиг. 4, представляет собой клетку эукариотического типа. Такая клетка является основной единицей не только всех высших, многоклеточных животных и растений, но также и таких низших, одноклеточных организмов, как грибы, простейшие и водоросли. Изобретение в 30-х годах электронного микроскопа, разрешающая способность которого Б сто раз превышает разрешающую способность светового микроскопа, и последующее появление более тонких методов окрашивания и приготовления препаратов дали возможность разглядеть гораздо больше деталей строения эукариотической клетки. На фиг. 20 показана электронная микрофотография ядра и окружающей его цитоплазмы клетки летучей мыши. На этой фотографии хорошо видна двухслойная структура ядерной мембраны, а также отверстия, или поры, в этой мембране, через которые ядро сосбшается с цитоплазмой. Можно видеть, что находящиеся в цитоплазме митохондрии, как и ядро, окружены мембраной. Но самсе важнее, что те цитоплазматические структуры, которые на основании данных световой микроскопии принято было называть вакуолями , оказались на электронных микрофотографиях сетью удлиненных, тонких образованных мембранами структур. Эта сеть, названная ждоплазматической сетью, представляет собой сложную систему впячиваний наружной мембраны. Таким образом, полость вакуоли на самом деле непосредственно связана с внеклеточной средой. Темные точки, которые, как можно видеть, выстилают эндоплазматическую сеть, — это рибосомы, маленькие частипы, состоящие примерно из одинаковых количеств белка и РНК. В рибосомах локализовано около двух третей всей цитоплазматической РНК. [c.44]

Одна из наиболее важных областей применения радиоактивных изотопов в биологии клетки - )то определение локализации радиоактивных соединений в срезах клеток или живых тканей методом радиоавтографии. При использовании этого метода живые клетки подвергают кратковременному (импульсному) мечению с последующей инкубацией в течение различных промежутков времени в нерадиоактивной среде. Затем клетки фиксируют и обрабатывают для проведения световой или электронной микроскопии. Каждый приготовленный препарат покрывают тонким слоем фотоэмульсии и оставляют на несколько дней в темноте - время, в течение которого происходит распад радиоактивного изотопа. Затем фотоэмульсию проявляют. Местоположение радиоактивных молекул в каждой клетке можно определтгть по расположению темных зерен серебра. Если инкубировать клетки с радиоактивным предшественником ДНК С Н-тимидином), то можно увидеть, что ДНК синтезируется в ядре и там же остается. И наоборот, мечение клеток радиоактивным предшественником РНК СН-уридииом) показывает, что РНК исходно синтезируется в ядре и затем быстро накапливается в цтгтонлазме клеток. [c.223]

Проводка материала для заливки в аралдит. Фиксирование исследуемого материала необходимо для того, чтобы свести к минимуму структурные изменения,, которые могут произойти на всех стадиях приготовления препарата. Наиболее широко распространенными фиксаторами в электронной микроскопии являются альдегиды и тетраокись осмия, действие-которых сводится к образованию поперечных связей между молекулами ткани и образованию в ткани прочной сети. Чаще всего применяется двойная фиксация, состоящая из первичной фиксации в глутар альдегиде и последующей фиксации в тетраокиси ОСМИЯ. Этот метод сочетает в себе преимущества обоих фиксаторов, поскольку альдегиды эффективнее связывают белки, а тетраокись осмия — липиды. [c.227]

Полиовирус относится к наиболее подробно охарактеризованным вирусам. В табл. 18.4 описаны некоторые его физические свойства. Вирион имеет примерно сферическую форму. Он лишен липидной оболочки, поэтому его инфекционность практически не меняется при обработке органическими растворителями, такими как эфир или хлороформ. Согласно электронно-микроскопическим данным, диаметр частиц варьирует от 24 до 30 нм. Столь широкий диапазон размеров обусловлен уплощением частиц или разной проницаемостью их для красителей (солей тяжелых металлов) в ходе высушивания и окрашивания, проводимых при приготовлении образцов для электронной микроскопии. Лиофилизованные препараты теряют 99,99% или более исходной инфекционности это означает, что вода играет важную роль в поддержании целостности нуклеокапсида. Недеструктивные методы, такие как седиментационное равновесие [32], малоугловое рентгеновское рассеяние, рентгеновская дифракция [93, 160], с помощью которых измеряют диаметр влажных частиц, показывают, что диаметр вириона находится в интервале 29,8—30,7 нм. [c.199]

При проверке чистоты вещества помимо элементного анализа пользуются определением физических постоянных, если соответствующие величины, а возможно, и их зависимость от температуры точно известны. Наибольшее распространение в лабораторной практике имеют определения температуры плавления, плотности, показателя преломления и давления пара. Если эти методы неприменимы, то можно в качестве испытания на однородность подвергнуть вещество операциям разделения. Для этой цели применяют прежде всего не требующие значительных затрат времени методы газовую, тонкослойную хроматографию нлн хроматографию на бумаге. Высокой чувствительностью по отношению к примесям обладают спектроскопические методы. При этом для характеристики жидкостей (например, растворителей, см. разд. 6) и растворенных веществ наиболее важны электронные спектры. Полезно иметь также инфракрасный и масс-спектр, которые в соответствующем аппаратурном оформлении могут быть сняты для образцов в твердом, жидком н газообразном состоянии. Оба метода дают возможность проводить качественное и полуколнчественное определение примесей, что очень облегчает принятие решения о целесообразности дальнейшей очистки. Например, содержание воды в твердом препарате легко определяется по широким полосам поглощения при 1630 н 3400 см в ИК-спектре. Разумеется, в этом случае следует иметь в виду, что галогениды щелочных металлов, используемые при приготовлении таблеток для ИК-спектроскопии, гигроскопичны. Их применение для съемки гигроскопичных объектов или для определения воды возможно только после нх тщательной осушки и лишь прн полном отсутствии воздуха (отмеривание, растирание с веществом, наполнение пресс-формы проводятся в сухой камере). Другой возможностью является съемка суспензии вещества в сухом нуйоле или в другой подходящей жидкости. Подобные жидкости должны обладать достаточно высокой вязкостью и по возможности малым собственным поглощением в соответствующей области спектра. В качестве материала для изготовления окон кювет для съемки ИК-спектров газов и жидкостей применяют вещества, перечисленные в табл. 26. Если нет необходимости вести съемку в области ниже 600 см , то следует пользоваться сравнительно дешевыми монокристаллами хлорида катрня. Конечно, вещество не должно реагировать с материалом окон (при необходимости предваритель- [c.142]

За период с 1936 по 1960 г. с помощью методов дифракции рентгеновских лучей, поляризационной микроскопии, измерений электрических характеристик мембран, их проницаемости и поверхностной активности были получены многочисленные факты, свидетельствующие в пользу моделей Даниелли — Давсона. Но наиболее мощную поддержку эта модель получила на рубеже 1950—1960 гг. благодаря прогрессу, достигнутому в технике приготовления ультратонких срезов тканевых препаратов для электронной микроскопии. На полученных микрос тографиях различных мембран была отчетливо видна трехслойная структура толщиной [c.582]

Для исследования препаратов в электронном микроскопе вместо предметных стекол применяются специальные пленки, незначительно поглощающие электроны. Они крепятся на опорные сетки. Материалом для приготовления пленок служат коллодий, окись алюминия и кварц. Тщательно очищенный от различных примесей и нанесенный на пленку исследуемый материал после испарения жидкости оставляет на ней тончайший слой, который и подлежит микроскопии. В электронном микроскопе можно также исследовать срезы тканей, клеток, микроорганизмов, полученные с помощью ультрамикротома. Препараты контрастируют с помощью электронно-плотных (задерживающих электроны) веществ, используя разные методы напыление тяжелых металлов, обработка фосфорно-вольфрамовой кислотой, уранилацета-том, солями осмиевой кислоты и др. [c.11]

Обычно число регистрируемых счетчиком частнц не равно числу актов распада в препарате. Это происходит вследствие ограниченности телесного угла, под к-рым счетчик виден со стороны препарата, вследствие поглощения частиц в окошке счетчика п воздухе, самопоглощения и саморассеяния в препарате, рассеяния от подложки, а также вследствие того, что вероятность регистрации частиц, попавших в счетчик, может быть не равна 100%. Поэтому иамеретш числа актов распада в препарате, т. е. абс. измерения, требуют применения специальной аппаратуры и особым образом приготовленных источников излучения (пример 4л -счетчики р-частиц, внутрь к-рых помещают чрезвычайно тонкие препараты, в к-рых не происходит самопоглощение р-частиц, см. далее). Были предложены также методы абс. счета активности (напр., метод определенного телесного угла), основанные на введении большого числа поправок (на телесный угол, поглощение, рассеяние), учитывающих перечисленные выше факторы. Наиболее точные определения абс. активности производят с использованием счетчиков с телесным углом 2я или 4я, в к-рых препарат располагают т. обр., чтобы в рабочий объем счетчика попадала половина или все испущенные частицы. Газонаполненные счетчики и ионизационные камеры применяют для определения абс. активности а- и р-активных изотопов, сцинтилляционные счетчики — для счета по рентгеновскому и у-излучению. С большой точностью абс. активность ряда изотопов можно определить по т. наз. методу бета-гамма совпадений. Измерения производятся двумя бета- и гамма-счетчиками. Электронная схема позволяет измерять число р-частиц, попавших в единицу времени в бета-очетчик (iVr,). число у> вантов, сосчитываемых в единицу времени гамма-счетчиком <]Y. ), а также число частиц одновременно регистрируемых обоими счетчиками, Аб- [c.226]

Исследование [36] литиевой смазки при помощи поляризационного микроскопа выявило ориентированное расположение кристаллических частиц, не изменившееся после осторожной замены масла нафтой с последующим ее испарением. Однако в препарате этой же смазки, приготовленном по дисперсионному методу, ориентации обнаружено не было. Это дало основание предполагать, что ориентация частиц мыла в указанной смазке является результатом воздействия гомогенизации в процессе ее производства. Но частицы мыла в смазках могут ориентироваться и в результате механического воздействия при препарировании образца. На электронной микрофотографии солидола часто структурная сетка бывает растянута в направлении намазывания [34]. [c.46]

Тень формируется в результате отложения под определенным углом электроноплотного материала на образце во время пребывания в вакуумном испарителе. Те области, которые расположены под углом к направлению напыления металла, остаются не покрытыми им и, будучи менее электроноплотными, пропускают электроны. В результате электроны как бы очерчивают эти области, которые на обработанном негативе видны в виде черных теней. Поскольку выглядит это, как позитивное изображение, обычно (хотя и не всегда) негативы обращают контактным способом и для воспроизведения позитивного изображения окончательные фотографические отпечатки получают с обращенных негативов. (Техника оттенения хорошо описана в гл. 5 [И] и в гл. 4 и 5 т. 2 многотомника [7].) Прямое отгенение испаряющимися металлами применяется по отношению к целым клеткам или их компонентам, бактериофагам или различным суспензиям этот метод используется также для анализа реплик, приготовленных из интактных препаратов или при замораживании—скалывании и замораживании—травлении (см. ниже). Помимо очерчивания поверхностных неровностей и периодически повторяющихся структур, техника оттенения может применяться для измерения высоты образца по вертикали посредством нахождения длины тени и геометрических расчетов, опирающихся на известный угол оттенения. Измерению [c.117]

А. Денатурационная карта одной молекулы рДНК. Частично денатурированная ДНК была получена путем добавления щелочи. После фиксации расплавленных участков формальдегидом препарат был приготовлен для электронно-микроскопического анализа по методу Кляйншмита. На рисунке воспроизведена картина чередования легкоплавких и более стабильных участков. [c.289]

Структура антител. Белки иммуноглобулинов по химическому составу относятся к гликопротеидам, так как состоят из протеина и сахаров построены из 18 аминокислот. Имеют видовые отличия, связанные главным образом с набором аминокислот. Молекулярная масса иммуноглобулинов находится в пределах 150—900 кД. Их молекулы имеют цилиндрическую форму, они видны в электронном микроскопе. До 80 % иммуноглобулинов имеют константу седиментации 7S устойчивы к слабым кислотам, щелочам, нагреванию до 60 °С. Вьщелить иммуноглобулины из сыворотки крови можно физическими и химическими методами (электрофорез, изоэлектрическое осаждение спиртом и кислотами, высаливание, аффинная хроматография и др.). Эти методы используют в производстве при приготовлении иммунобиологических препаратов. [c.149]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология