Разделение липидов различных классов

Разделение липидов различных классов [c.135]

Целью хроматографии липидов являются разделение липидов различных классов и последующее получение индивидуальных соединений с целью их идентификации и количественного анализа. В ходе изучения липидов с помощью хроматографических методов выяснилось, что многие организмы, ткани, клетки и субклеточные компоненты имеют характерный состав липидов, который можно определить, не прибегая к полному разделению и получению индивидуальных соединений. Количественный анализ липидов, полученных в результате частичного разделения первичного экстракта, часто является достаточным для установления источника, из которого были выделены эти липиды, и выяснения, с каким метаболическим состоянием (нормальным или аномальным) связан данный состав этих соединений. Практически все хроматографические методы могут быть применимы для выполнения этой задачи, однако более предпочтительны те, которые сочетают быстрое разделение с эффективной количественной оценкой. Такой подход имеет широкое применение — от определения полного состава липидов плазмы до характеристики индивидуальных липидов бактерий, основанной на анализе метиловых эфиров жирных кислот этих липидов или продуктов пиролиза последних. [c.204]

После того как триглицериды выделены методом адсорбционной хроматографии из смеси липидов различных классов, можно приступать к разделению этой группы соединений на от- [c.60]

Углеводороды с длинной цепью, спирты, альдегиды, кислоты, моно-глицериды, диглицериды, триглицериды и аналогичные липиды можно разделять методом адсорбционной ХТС на классы соединений, обладающих различной полярностью, в зависимости от природы и числа функциональных групп в них. Большие различия в длине цепи и степени ненасыщенности компонентов данного класса соединений в редких случаях могут приводить к дополнительному фракционированию внутри этого класса соединений. Подобное дополнительное фракционирование выражено, однако, не столь отчетливо, чтобы это могло осложнить разделение на отдельные классы соединений. [c.149]

В данной главе рассмотрено применение колоночной хрома тографии для разделения различных классов фосфорорганиче-ских соединений, за исключением фосфорилированных сахаров, липидов, нуклеотидов и пестицидов, хроматографии которых пО священы отдельные главы. [c.161]

Термин липиды охватывает большое количество различных типов соединений, в том числе сложные эфиры, свободные кислоты, простые эфиры, моно-, ди- и триглицериды. Исследуя такую сложную природную смесь, прежде всего целесообразно разделить входящие в нее компоненты на классы. Эту задачу можно выполнить с помощью ТСХ данному вопросу посвящен ряд обзоров [1 — 10]. Большинство работ по ТСХ липидов, а таких работ было довольно много, проводили на слоях силикагеля. Для того чтобы разделить на силикагеле неполярные липиды на классы, применяли неполярные растворители, например петролейный эфир, бензол и тетрахлорид углерода, а также их смеси с очень малыми количествами более полярных растворителей, например диэтилового эфира и уксусной кислоты. Выбор растворителя, конечно, зависит от природы смеси, подлежащей разделению. Ниже приводится несколько примеров подбора растворителей, предназначенных для разделения нейтральных липидов. [c.52]

Разделение липопротеидов плазмы с помощью ультрацентрифугирования основано на существенном различии в плотности липидов и белков (соответственно 0,88—1,06 и 1,30—1,35). Различные классы липопротеидов плазмы, имеющие разное соотношение липид белок, характеризуются определенными значениями плотностей. Один из вариантов этого метода включает измерение скорости флотации (в единицах Сведберга, 5г) липопротеидов в водной среде данной однородной плотности. Величина 5 зависит от плотности, размера и формы молекулы липопротеида. Липопротеиды наиболее низкой плотности (низкое отношение белок липид) имеют наибольшее значение Другой вариант основан на центрифугировании по градиенту плотности. С этой целью плотность плазмы ступенчато повышают добавлением растворов веществ, не влияющих на ее свойства, в результате чего липопротеиды в процессе ультрацентрифугирования концентрируются в виде полос в тех местах раствора, где его плотность соответствует плотности липопротеида. [c.369]

Нейтральные липиды и свободные жирные кислоты можно разделить на соединения, принадлежащие к различным классам, с помощью модификации хроматографических систем, предназначенных для разделения неполярных и полярных липидов. Обычно в этих целях применяют ТСХ, однако достаточно часто используют и адсорбционную, и распределительную колоночную хроматографии, особенно если требуется разделить большие количества вещества. [c.137]

Современная биохимия, занимающаяся исследованием химических реакций, которые протекают в живых клетках, представляет настолько широкую и сложную область, что включает в себя почти все отрасли химии и биологии. Создание вводного курса по этому предмету — весьма нелегкая задача, и я никогда бы за нее не взялся, если бы стремился только улучшить существующие учебники. Но я убежден, что курс биохимии, предназначенный для широкого круга студентов и преподавателей, должен быть создан на принципиально новой основе. Вместо того, чтобы делить книгу на части, посвященные описанию отдельных классов химических соединений — белков, нуклеиновых кислот, липидов и углеводов, — я опирался при таком разделении на типы химических реакций, протекающих в клетках. Неизменно подчеркивая биологические аспекты рассматриваемых явлений, я стремился проследить химическую основу различных физиологических явлений. [c.7]

Различные более старые методы хроматографического фракционирования этих групп веществ описаны Ханааном [32]. Сильно полярные природные липиды и синтетические вещества с аналогичными свойствами разделяются методом ХТС на классы соединений. Фракционирование таких соединений осуществляют как адсорбционным, так и распределительным методом. Особенно хорошее разделение было достигнуто при применении дезактивированных слоев (для подавления адсорбционных эффектов, ведущих к образованию хвостов). Силикагель, не содержащий гипса (см. примечание на стр. 40), оказался при этом более подходящим, чем силикагель Г. [c.162]

С помощью ТСХ на силикагелях различных типов удается достичь практически такого же разделения нейтральных липидов на отдельные классы, как и на колонках с флоризилом [c.140]

Жидкостную хроматографию на кремневой кислоте успешно применили для разделения липидов на классы и выделения отдельных липидов. Например, Лоэр и Кукар [90] с помощью ЖХ выделили 8 основных классов липидов из проб сточных вод и илов. В их число входят насыщенные и ненасыщенные углеводороды, эфиры стеринов, метиловые эфиры жирных кислот, три-, ди- и моноглицериды и сложные липиды. Для разделения липидов на классы применили также гель-хроматографию. Примеры определения примесей липидов в различных пробах приведены в табл. 12.8. Некоторые образцы липидов, выделенные с помощью жидкостной хроматографии, содержат нелетучие жирные кислоты. [c.410]

Пропитка силикагеля боратами препятствует изомеризации моно- и диацилглицеринов, а также улучшает разделение их изомеров [153]. Так, изомерные моноацилглицерины можно разделить на силикагелевых пластинках, пропитанных 5— 10%-ным боратным буфером, в системе хлороформ — ацетон (24 1). Для очистки 2-моноацилглицеринов была использована более сложная система растворителей хлороформ — ацетон — метанол — уксусная кислота (170 25 5 1) [154]. Ренконен [155] разделял нейтральные липиды различных классов на пластинках, пропитанных 0,1 М боратным буфером, в системе хлороформ — метанол — 3,5 М раствор аммиака (65 35 8), а Лэмб и др. [156] использовали в аналогичных целях систему гексан — диэтиловый эфир—уксусная кислота (75 25 2). [c.142]

Условия ВЭЖХ, выбранные с целью обнаружения производных различных гликолипидов (обнаружение пербензоильных производных при 230 нм), позволяют провести полное разделение только липидов различных классов. Однако некоторые соединения, отличающиеся по длине цепи входящих в них остатков жирных кислот, можно частично разделить в этих условиях. [c.203]

При изучении биомембран обычно имеют дело с относительно небольшими количествами липидов, поэтому для их разделения чаш е всего используют метод тонкослойной хроматографии (ТСХ) на силикагеле, позволяюп ий проводить и качественный, и количественный анализ липидов различных классов. ТСХ осуществляют в тонком слое силикагеля, нанесенном на подложку — стеклянную, пластиковую или алюминиевую пластинку. В качестве адсорбентов можно применять и другие вещества (оксид алюминия, сефарозу, целлюлозу). Силикагель может быть с кальциевой связующей добавкой (силикагель О) или без нее (силикагель И). Для разделения липидов используют хроматографические камеры, стенки которых выстилают изнутри фильтровальной бумагой для ускорения насыщения ее парами растворителя. Камеру готовят предварительно (примерно за 1 ч или более до эксперимента), залив в нее достаточное количество растворителя на глубину около 1,5 см. Фильтровальная бумага, выстилающая стенки камеры, должна пропитаться растворителем. Необходимо плотно закрывать камеру крышкой (если необходимо — использовать вазелиновую смазку). В камеру обычно помещают одновременно не более двух пластинок так, чтобы поверхность подложки была обращена в сторону выстилающей камеру бумаги, а слои адсорбента находились на максимальном удалении друг от друга. Слой адсорбента не должен соприкасаться с боковыми стенками камеры. [c.256]

Биологические мембраны, состоящие из сложных смесей различных классов липидов с разными алкильными цепями, при физиологических температурах находятся, по-видимому, в состоянии латерального разделения фаз. Высокая способность к латеральному сжатию, обусловленная одновременным существованием твердой и жидкой фазы, может влиять на активность находящихся внутри мембраны ферментов, что позволяет включаться в мембрану новым компонентам и сказывается на процессах транспорта. Исследованы [23] свойства мембран клеток мутантных щтаммов Е. oli, для роста которых необходимо наличие жирных кислот состав их внутренней мембраны может быть обогащен определенными алкильными цепями путем прибавления к питательной среде соответствующих жирных кислот. Изменение текучести бислоя и скорости транспорта -глюкозида для внутренней мембраны соИ, выращиваемой на среде с добавкой линолевой кислоты, в зависимости от температуры показано на рис. 25.3.6. Точки перегиба на графике Аррениуса соответствуют экстремумам латерального разделения фаз. Наблюдается также изменение энергии эктивации транспорта, которое приблизительно коррелирует с гра- [c.119]

На рис. 70 схематическипоказано разделение отдельных типичных липидов на классы соединений. Как и следовало ожидать, разделение различных типов соединений происходит в соответствии с правилами, сформулированными Броцманом и ФольПерсом [6] углеводороды не адсорбируются, эфиры адсорбируются слабо, альдегиды находятся впереди спиртов и кислот — [c.150]

Сорбент. Различные классы фосфолипидов, сульфолипидов и гликолипидов фракционируют методом ХТС на силикагеле Н или силикагеле Г. Распределительная ХТС на мокром силикагеле Г приводит, согласно Шаль-варджану [И], к более четкому разделению, чем хроматография на высушенных и активированных слоях этого адсорбента. Добавка сульфата аммония позволяет также получить дезактивированные слои. Методом распределительной ХТС на одной пластинке можно разделить максимум 10 мг липидов, т. е. значительно меньше, чем методом адсорбционной хроматографии. [c.163]

Разделение веществ проводится адсорбционной и распределительно хроматографией с обращенной фазо 1. В последнем случае в качестве неподвижной фазы для пропитки слоя были использованы такие лииофильные вещества, как ундекан, тетрадекан, парафиновое масло и силиконовые масла различной вязкости. Применение последнего метода позволило разделять гомологи высших жирных кислот. Для разделения смесей веществ различных классов, часто встречающихся ири гидролизе липидов, с успехом используют двумерньи метод хроматографирования. При этом в некоторых случаях нрименяют частичную пропитку слоя. Иногда при использовании двумерного метода в одном направлении применяют адсорбционную, а в другом — распределительную хроматографию. [c.63]

Разделение нейтральных липидов на соединения, принадлежащие к различным классам, достигается обычно с помощью адсорбционной колоночной хроматографии на таких адсорбентах, как кремниевая кислота или флоризил. В работе [100] подробно описаио разделение нейтральных липидов иа колонках с этими сорбентами и отмечены некоторые небольшие различия, которые можно использовать на практике, в хроматографических свойствах кремниевой кислоты и флоризила. При разделении на флоризиле и кремниевой кислоте очередность элюирования различных классов нейтральных липидов примерно одинакова, но время удерживания моноацетилглицеринов и свободных жирных кислот на колонках с флоризилом несколько больше, чем на колонках с кремниевой кислотой. Используя градиентное элюирование (линейный градиент диэтилового эфира в гексане), нейтральные липиды можно разделить на соединения типа углеводородов (100%-ный гексан), эфиры холестерина и носки (1%-ный диэтиловый эфир в гексане), триацилглицерины (5%-ный диэтиловый эфир), свободные жирные кислоты (18%-ный диэтиловый эфир), свободный холестерин (15%-ный диэтиловый эфир), диацилглицерины (15%-ный диэтиловый эфир) и моно- [c.137]

Полле и др. [682] описали метод микроанализа липидов мозга, основанный на двумерной ТСХ, с использованием многократного элюирования. Первичный экстракт липидов сначала подвергали тех в системе хлороформ — метанол — вода (35 15 2), что позволяло разделить липиды на фракции, содержащие соединения различных классов. Однако исключение составляли фосфатидилхолины, фосфатидилсеринь и фосфатидилинозиты, образующие одну фракцию. Это же относится и к смеси ганглиозидов и протеолипидов, которые также составляют одну фракцию. Последующая хроматография во втором направлении в двух элюирующих системах хлороформ — метанол (1 4), а затем хлороформ — метанол (2 1) и, наконец, повторная хроматография в первом направлении в системе хлороформ — метанол (2 1) позволяла разделить остальные компоненты. Разделенные зоны на хроматограмме окрашивали иодом и проводили количественную опенку с помощью химических методов. Такое определение можно проводить, не превращая фосфат в неорганический фосфор [683, 684]. Широко практикуется карбонизация липидов с последующей денситометрией [681, 685, 686], однако методы требуют стандартизации [687, 688]. [c.205]

Биохимические методы позволяют разделять, выделять и анализировать в чистом виде липидные и белковые компоненты, изучать их физико-химические свойства в свободном состоянии и в составе надмолекулярных комплексов в условиях воздействия различных внешних факторов (температуры, концентрации водородных ионов и др.), исследовать их время жизни , пути биосинтеза и распада этих компонентов. К ним относят методы выделения (недеструктивные и включаюп] ие разрушение клеток) разделения субклеточных фрагментов (хроматография, электрофорез, центрифугирование, иммуноаффинные методы) идентификации и оценки чистоты субклеточных фракций выделения органелл и мембранных систем экстракции липидов и разделения их по классам количественного определения фосфолипидов исследования трансмембранного распределения липидов солюбилизации мембранных белков, их реконструкции и определения функциональной активности реконструированных мембран, выделения и модификации мембранных белков. [c.202]

Для тонкослойной хроматографии липидов применяют слои мелкозернистого силикагеля (силикагель Н). Для аналитических целей используют слой сорбента толпд иной 0,25 мм, для препаративных — 0,5 мм. Размер стеклянной пластинки для разделения чаще всего — 20x20 см. Для разделения различных классов липидов используют разные системы растворителей. Например, полярные фрсфолипиды и гликосфинголипиды разделяют в смеси хлороформ—метанол, содержащей аммиак или разведенную уксусную кислоту. Элюирующая способность смесей растворителей определяется полярностью ее составных компонентов. [c.228]

Старые методы разделения и идентификации липидов, основанные на классических операциях кристаллизации, перегонки и экстракции, в настоящее время в существённой степени дополнены хроматографическими методами. Особенно полезно применение тонкослойной хроматографии для разделения различных классов липидов и газо-жндкостной хроматографии (рис. 15.32) для разделения индивидуальных жирных кислот. Предварительной стадией при использовании этих методов является экстракция липидов системой растворителей—чаще всего смесью хлороформа и метанола (2 1). [c.162]

Первый элементный анализ жиров был выполнен А. Лавуазье, показавшим, что жиры и масла состоят в основном из углерода и водорода. Он полагал, что сахара и крахмал являются окислами жиров , а в растениях углекислый газ соединяется с водой с образованием жиров и выделением кислорода. Первые работы по химии липидов были выполнены К. Шееле, который открыл глицерин и установил, что это вещество содержится в животных жирах. и растительных маслах. М. Шеврёль в 1811 г. при кислотной обработке мыла, полученного из свиного жира, выделил кристаллическую жирную кислоту, а затем охарактеризовал большое число разнообразных жирных кислот — от масляной до стеариновой. В 1812 г. он открыл холестерин <в желчных камнях) и разделил все жиры на два класса — омыляемые и неомыляемые, доказав, что омыляемые жиры представляют собой сложные эфиры жирных кислот и глицерина. М. Шеврёль ввел в практику метод разделения жирных кислот на основе их различной растворимости в органических растворителях. Итоги этих исследований были опубликованы им в 1823 г. в книге под названием Химическое изучение жировых тел . [c.514]

В настоящее время для разделения и структурного анализа нейтральных липидов преимущественно используют различные варианты тонкослойной хроматографии (ТСХ) и газо-жидкостную хроматографию (ГЖХ). Так, с помощью тонкослойной хроматографии на силикагеле и кремневой кислоте разделяют нейтральные плазмалогены, триглицериды и алкилдиглицериды в нативном виде или в виде их производных. Широкое распространение метод тонкослойной хроматографии в сочетании с денситометрическим методом получил для количественного анализа отдельных классов нейтральных липидов [3]. [c.187]