Количественный анализ липидов

КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ АНАЛИЗ ЛИПИДОВ [c.98]

Целью хроматографии липидов являются разделение липидов различных классов и последующее получение индивидуальных соединений с целью их идентификации и количественного анализа. В ходе изучения липидов с помощью хроматографических методов выяснилось, что многие организмы, ткани, клетки и субклеточные компоненты имеют характерный состав липидов, который можно определить, не прибегая к полному разделению и получению индивидуальных соединений. Количественный анализ липидов, полученных в результате частичного разделения первичного экстракта, часто является достаточным для установления источника, из которого были выделены эти липиды, и выяснения, с каким метаболическим состоянием (нормальным или аномальным) связан данный состав этих соединений. Практически все хроматографические методы могут быть применимы для выполнения этой задачи, однако более предпочтительны те, которые сочетают быстрое разделение с эффективной количественной оценкой. Такой подход имеет широкое применение — от определения полного состава липидов плазмы до характеристики индивидуальных липидов бактерий, основанной на анализе метиловых эфиров жирных кислот этих липидов или продуктов пиролиза последних. [c.204]

В работе описаны современные практические данные по анализу высших жирных кислот методом обращенно-фазовой распределительной хроматографии на бумаге, по исследованию состава жирных кислот методом тонкослойной и колоночной хроматографии, по анализу жирных кислот методом газо-жидкостной хроматографии, также по исследованию липидов методом адсорбционной и распределительной хроматографии и в тонком слое силикагеля. Детально описываются все этапы практического производства качественного и количественного анализа в условиях лаборатории, необходимые реактивы, условия проведения исследований и т. д. [c.2]

Электронные спектры широко используются в химии липидов для качественного и количественного анализа. [c.134]

Количественный анализ липидов с помощью сочетания методов тонкослойной и газо-жидкостной хроматографии. (Обзор лит-ры с 1957 по 1965 г.) [c.58]

Общие понятия. Газожидкостная распределительная хроматография является быстрым методом количественного анализа таких составляющих липидов, как углеводороды, алифатические спирты, жирные кислоты, стерины и т. д. [c.123]

Липиды пищи являются не только источниками энергии для организма, но и содержат ряд физиологически активных веществ (полиненасыщенные жирные кислоты, стерины, фосфолипиды, жирорастворимые витамины). Определения лишь количественного содержания липидов в продуктах питания недостаточно для полной характеристики их пищевой ценности. Таким образом, при анализе липидного состава продуктов должен быть использован комплекс методов, обеспечивающих полное извлечение суммы липидов из продуктов, определение их колияесТ ва и возможность качественной и количественной характеристики отдельных компонентов. [c.211]

ПХБ отделены от липидов [153] пе- [139] ред количественным анализом [c.428]

Число работ, посвященных использованию этих хроматографических методов для анализа липидов, столь велико, что в рамках одной главы дать достаточно полный их обзор не представляется возможным. Поэтому мы ограничимся лишь описанием наиболее удачных рутинных методик количественного анализа различных глицеро- и сфинголипидов, а также свободных жирных кислот и простагландинов получаемых из природных источников. При обсуждении методов анализа описанных объектов мы будем ссылаться на работы, касающиеся достижений соответствующего метода или его типичных приложений. Отда- [c.130]

Дальнейший анализ липидов проводят методами гидролиза и количественного определения компонентов сложных смесей фосфолипидов, В результате избирательного гидролиза липидов мембран образуются продукты, которые можно разделить по полярности или по остающимся неполярным группам. Описаны различные способы щелочного или кислотного гидролиза мембранных липидов. При использовании ферментативного гидролиза [c.227]

Количественный анализ сложных смесей фосфолипидов проводят хроматографическими методами. Для препаративных целей в основном используют хроматографию на колонках. Для микроаналитических исследований успешно применяют тонкослойную хроматографию, с помощью которой можно разделить практически все классы липидов, локализовать и идентифицировать их при использовании специальных реактивов. [c.228]

К оптическим методам количественного анализа продуктов пероксидного окисления липидов относят целый ряд методов УФ-спектрофотометрию для обнаружения гидропероксидов, исследование уровня гидропероксидов с использованием тиоциа-ната аммония, определение промежуточных продуктов ПОЛ по реакции с 2-тиобарбитуровой кислотой (ТБК-тест), диеновых конъюгатов ненасыш енных жирных кислот, флуоресцентный анализ шиффовых оснований — конечных продуктов ПОЛ и др. [c.246]

Длинноцепочечные кислоты, спирты или альдегиды, выделяемые из природных липидов, отличаются в основном длиной цепи и степенью ненасыщенности, однако смеси таких соединений могут содержать соединения с разветвленным углеродным скелетом, циклические остатки или дополнительные функциональные группы. После перевода в соответствующие производные такие смеси количественно анализируют методом газовой хроматографии. В случае очень сложных смесей или если требуется более тонкий анализ, газожидкостную хроматографию проводят на нескольких фазах или в сочетании с другими методам разделения, например с хроматографией в присутствии ионов серебра или распределительной хроматографией. [c.80]

Манголдидр. [123] использовали радиоактивный диазометан для приготовления метиловых эфиров с целью их последующего применения при количественном анализе липидов. Получали они эти эфиры следующим образом. Раствор 10 мг (0,05 ммоль) /г-толилсульфонилметил- С-нитрозамида (удельная активность 0,6 мКи/моль) в 1 мл диэтилового эфира взаимодействует в микрогенераторе газа с 2 мл охлажденного льдом раствора 0,1 г гидроксида натрия в смеси этанол—вода (10 1). Диазометан и эфир отгоняют из реакционной смеси, пропуская через помещенную в баню с водой реакционную колбу при 60—70°С медленный ток азота. Раствор диазометана в эфире собирают по очереди в два приемника, в каждый из которых предварительно помещают 1—2 мл эфира. Чтобы температура в приемнике не поднималась выше О—5°С, его погружают в воду со льдом. По окончании перегонки растворы диазометана сливают вместе. Пробы эфира с растворенным диазометаном (по 0,5—1 мл) сразу вводят в растворы, содержащие от 2 до 20 мг жирных кислот (0,01—0,1 ммоль) в смеси диэтиловый эфир—метанол (90 10) [124, 126]. Липиды (по 10—20 мг), содержащие гидроксильные или аминные группы, метят реакцией с 1 10 раствором уксусного 1- С-ангидрида (СНд С0)20 (удельная активность 0,6 мКи/ммоль) в пиридине. Реакцию ведут с 20 %-ным избытком реагента в запаянной трубке размером 5/150 мм в течение 30—60 мин при 100°С. После охлаждения трубку вскрывают и разбавляют реакционную смесь 10 мл однонормальной серной кислоты ацетилированные липиды экстрагируют эфиром, промывают водой и сушат. Полученные радиоактивные соединения используют также при проведении очистки различных липидов. [c.83]

Приветт и др. [303] обобщили литературу, посвященную методам количественного анализа липидов, а также денситометрии обугленных хроматограмм [304]. Куксис [305] опубликовал обзор работ по количественному анализу липидов посредством сочетания ТСХ и ГХ. Максу и Кварлесу [306] принадлежит обзор методов анализа ганглиозидов. Раузер и др. [307] опубликовали обзор по применению колоночной и тонкослойной хроматографии для количественного анализа смесей полярных липидов. [c.103]

Radwan s.s.-j. hromatogr.soi., 1978,2 б,1И 1,538-542 РЖХим,1979,12Г208. Сочетание методов двумерной хроматографии в тонком слое и газо-жидкостной хроматографии для количественного анализа липидов и составляющих их жирных кислот. [c.329]

Данные по ИК-спектрам широко используются при работе с жирными кислотами и родственными соединениями, как природными, так и синтетическими. В литературе дано отнесение около 100 полос поглощения, которые представляют интерес при структурных исследованиях, связанных с проблемами цис-, гране-изомерии [96], степени ненасыщенности [140], полиморфизма глицеридов [26, 119], длины цепи [66], разветвленности цепи (поглощение в рабочих областях призм Na l [42] и LiF [54]), липопротеинов [43] и мыл [28, 55]. Спектры жирных кислот в ближней ИК-области представляют интерес при практическом решении всех этих вопросов [60]. Задачи количественного анализа, такие, как определение частоты препаратов, можно решать при помощи дифференциальных методов [29] или же используя интегральные интенсивности [140]. Фримен [44] применил ИК-спектроскопию для изучения липидов сывороток, полагая, что образцы крови, которые легко получить в клинической лаборатории, могут дать дополнительную информацию при диагностике. [c.113]

При изучении биомембран обычно имеют дело с относительно небольшими количествами липидов, поэтому для их разделения чаш е всего используют метод тонкослойной хроматографии (ТСХ) на силикагеле, позволяюп ий проводить и качественный, и количественный анализ липидов различных классов. ТСХ осуществляют в тонком слое силикагеля, нанесенном на подложку — стеклянную, пластиковую или алюминиевую пластинку. В качестве адсорбентов можно применять и другие вещества (оксид алюминия, сефарозу, целлюлозу). Силикагель может быть с кальциевой связующей добавкой (силикагель О) или без нее (силикагель И). Для разделения липидов используют хроматографические камеры, стенки которых выстилают изнутри фильтровальной бумагой для ускорения насыщения ее парами растворителя. Камеру готовят предварительно (примерно за 1 ч или более до эксперимента), залив в нее достаточное количество растворителя на глубину около 1,5 см. Фильтровальная бумага, выстилающая стенки камеры, должна пропитаться растворителем. Необходимо плотно закрывать камеру крышкой (если необходимо — использовать вазелиновую смазку). В камеру обычно помещают одновременно не более двух пластинок так, чтобы поверхность подложки была обращена в сторону выстилающей камеру бумаги, а слои адсорбента находились на максимальном удалении друг от друга. Слой адсорбента не должен соприкасаться с боковыми стенками камеры. [c.256]

Для ускорения количественного превращения эфиров в производные с целью их последующего ГХ-анализа широко используют переэтерификацию, особенно метанолиз. Весь процесс требует немного времени и позволяет отказаться от использования концентрированной щелочи, которая может вызывать частичную изомеризацию полиненасыщенных кислот. Для проведения метанолиза на эфир действуют метанолом, содержащим кислоту или основание в результате образуется метиловый эфир соответствующей кислоты. Для определения метиловых эфиров жирных кислот, полученных из липидов [47] и эфиров воска [48], использовали метанольный раствор хлористого водорода. При анализе эфиров, полученных из воска, спирты и метиловые эфиры разделяли с помощью колоночной хроматографии, а затем уже анализировали методом ГХ, причем спирты определяли в форме трифторацета-тов. Для определения метиловых эфиров жирных кислот от Си до Сго, выделенных из липидов сыворотки человека [49], использовали метанол и серную кислоту еще одним реагентом для анализа липидов является ВСЬ в метаноле [50]. В работе [51] описан удобный метод получения производных при комнатной температуре и без выпаривания. В этом методе раствор жира в бензоле переносят в закрытую колбу, добавляют в колбу 2,2-диметокси-пропан (ДМП), метанольный раствор хлористого водорода и оставляют на ночь. После нейтрализации порцию полученного раствора вводят в газовый хроматограф. Кроме пиков метиловых эфиров на получаемой хроматограмме присутствуют и пики изо-пропилиденгликоля, образованного из ДМП и глицерина. Эти пики являются удобными стандартами для определения времен удерживания. ДМП связывает воду и способствует тем самым полному прохождению реакции. [c.141]

Методам получения производных для ХМС анализа различ ных органических соединений был посвящен ряд обзоров [127—130], поиск новых производных продолжается хотя в по следние годы количество работ, посвященных этому вопросу, несколько уменьшилось В монографии Кнепа [131] рассмотре ны вопросы получения производных и их масс спектральные характеристики Два обзора Никольсона [132, 133] посвящены получению и использованию производных в количественном ГХ анализе в фармацевтической химии Вопросы выбора соответ ствующих производных в ГХ — МС анализе липидов были рас смотрены в работе [134] [c.79]

Составные компоненты фосфолипидов для количественного анализа вначале обрабатывают концентрированной серной кислотой, затем снимают слой силикагеля и сжигают для определения фосфора. Для этого хроматограммы опрыскивают 18 н. раствором серной кислоты, нагревают при 110° до обугливания пятен пятна соскабливают в пробирку. Рядом с последней фракцией соскабливают в пробирку пустой участок, равный обугленному. Добавляют 1 мл H IO4 (уд. вес 1,70), вводят две стеклянные бусины и нагревают на песчаной бане 3 часа. Охлаждают, вводят 5 мл дистиллированной воды, нагревают и фильтруют через ватман № 44. Пробирки и фильтр дополнительно смывают 1 мл теплой дистиллированной водой. Охлаждают и проводят реакцию молибденовой сини. Для этого добавляют 1 мл 2,5% раствора молибдата аммония и 0,4 мл восстанавливающего раствора (1-амино-2-нафтол-4-суль-фоновая кислота), перемешивают, нагревают на кипящей водяной бане в течение 7 минут. Фотометрируют при 830 ммк. Стандартная кривая строится в пределах 0,5—5 мкг фосфора. Наилучшие результаты получены при оптимальных условиях развития окраски [194], т. е. после нагревания растворов с концентрацией 1 н. раствора фосфора на кипящей водяной бане в течение 5 минут. Тонкослойная хроматография с успехом применяется для анализа липидов крови у больных с поражением печени [147] и др. [c.90]

Особый интерес представляют биологические системы (типа липид — вода). В таких системах радикалы, находящиеся в липидной и в водной частях, отличаются константами СТВ и -факторами. На рис. X. 3 показаны спектры ЭПР ди-грег-бутилазотокисного радикала в эмульсии вода — кокосовое масло [17] эти спектры подобны тем, которые изображены на рис. X. 1. Количественный анализ таких спектров позволяет определить коэффициент распределения радикала между фазами, а само наблюдение спектров подобного [c.343]

Для количественного определения липидов применялись почти все методы количественного анализа результатов ТСХ. Виок и Холмен [257] оценивали содержание сложных эфиров колориметрически. После разделения соединений пятна экстрагировали диэтиловым эфиром и переводили соединения в гидроксамовые кислоты. С этой целью к каждой экстрагированной пробе добавляли по 0,1 мл 2,5 %-ного раствора гидроксида натрия и 0,1 мл 2,5 %-ного раствора гидрохлорида гидроксиламина (оба раствора в 95 %-ном этаноле), нагревали на водяной бане при 65—70°С до полного испарения растворителя, охлаждали, добавляли 5 мл обнаруживающего реактива —перхлората железа. В результате образовывались окрашенные комплексы. Через 30 мин измеряли оптическую плотность на спектрофотометре при длине волны 520 нм. Обнаруживающий реагент можно приготовить следующим образом [257] сначала исходный раствор, содержащий 5,0 г перхлората железа (не желтого) в 10 мл 70 %-ной хлорной кислоты плюс 10 мл дистиллированной воды, разбавляют до объема 100 мл холодным абсолютным этанолом. Далее 4 мл этого раствора плюс 3 мл 70 %-ной хлорной кислоты разбавляют до 100 мл охлажденным абсолютным этанолом и сразу же после этого используют реактив. [c.98]

Минорные кислые фосфолипиды можно анализировать также методом ТСХ в менее полярных элюирующих системах, содержащих меньшие количества метанола и воды, например хлороформ — метанол —вода (40 10 1) [262, 263]. Система хлороформ — метанол — вода (65 25 4) и сходные с ней [212,. 253] подходят для разделения смеси нейтральных липидов с наиболее часто встречающимися фосфолипидами всех классов. В сочетании с пластинками силикагеля, приготовленными с силикатом магния (вместо сульфата кальция) в качестве связующего вещества, эта элюирующая система очень эффективна и широко используется при одномерной ТСХ в количественном анализе [262—264] и в препаративном варианте ТСХ [265, 266]. Она также применяется для ТСХ плазмалогеновых фосфолипидов [267, 268]. Эти фосфолипиды нестабильны в кислых растворителях и могут разлагаться при элюировании и упаривании. Методом ТСХ с использованием этой системы для элюирования можно разделить лизофосфатидилхолин, сфингомиелин, фосфатидилхолин с фосфатидилинозитом, фосфатидилэтаноламин с фосфатидилсерином, фосфатидилглицерин с кардиолипи-ном и фосфатидной кислотой, нейтральные липиды. Следует отметить, что в такой системе тиоэфирные аналоги фосфатидилхолина и фосфатидилэтаноламина мигрируют намного бы- [c.152]

Соли серебра, метилированные смесью метилиодида и пентана [23]. После омыления фракции липидов спиртовым раствором КОН спирт удаляют посредством перегонки с паром. Основной раствор титруют стандартной разбавленной соляной кислотой, pH которой доведен фосфорной кислотой до 2, а свободные кислоты экстрагируют эфиром. Эфир удаляют и добавляют избыток КОН. Раствор солей калия нагревают на паровой бане и добавляют избыток нитрата серебра. Воду отделяют от выпавших в осадок солей серебра сначала под вакуумом и окончательно в вакуумном термостате при 40°. К высушенной соли добавляют раствор метилиодида в н-пентане и сухой песок, промытый кислотой, и смесь перемешивают с помощью магнитной мешалки в течение 1 чае в плотно закрытой колбе. Смесь оставляют стоять на 8 час, чтобы завершить реакцию. Для количественного анализа в качестве внутреннего стандарта используют метилгептаноат. Затем известное количество метиловых эфиров анализируют, вводя в хроматограф. Этот метод применим для определе-лия поликарбоновых кислот и оксикислот в биологическом материале. [c.487]

В настоящее время для разделения и структурного анализа нейтральных липидов преимущественно используют различные варианты тонкослойной хроматографии (ТСХ) и газо-жидкостную хроматографию (ГЖХ). Так, с помощью тонкослойной хроматографии на силикагеле и кремневой кислоте разделяют нейтральные плазмалогены, триглицериды и алкилдиглицериды в нативном виде или в виде их производных. Широкое распространение метод тонкослойной хроматографии в сочетании с денситометрическим методом получил для количественного анализа отдельных классов нейтральных липидов [3]. [c.187]

Для качественного и количественного анализа высших жирных спиртов, являющихся составной частью липидов, применяют различные методы. Большая часть из них основана на выделении алкиловых эфиров глицерина при помощи щелочного гидролиза или восстановления Ь1АШ4 фракции нейтральных или сложных липидов и последующего разделения полученной смеси алкиловых и алкен-1-иловых эфиров глицерина либо тонкослойной хроматографией на силикагеле, пропитанном А ЫОз, либо расщеплением алкен-1-иловых эфиров глицерина кислотным гидролизом. [c.215]

Достижения в области хроматографии позволили к настоящему времени получить обширную информацию о строении и свойствах разнообразных представителей класса липидов. В результате простое увлечение переросло за последние десятилетия в истинный интерес к химии и биохимии этих соединений. Этот интерес основывается на понимании того факта, что липиды играют важную роль в поддержании биологической структуры и функции. В настоящее время многие лаборатории занимаются изучением этих соединений как на тканевом, так и на клеточном и субклеточном уровнях. В связи с этим возникла необходимость создания методов количественного анализа микропроб, которые содержат липиды в концентрации, часто находящейся в диапазоне предельной чувствительности большинства аналитических систем. Поэтому последние разработки в области хроматографии липидов связаны с увеличением чувствительности анализа и повышением точности методов обработки экспериментальных данных. Обе цели в значительной степени были достигнуты благодаря созданию систем ГЖХ и ВЭЖХ, контролируемых микропроцессорами, что позволило полностью реализовать разрешающую способность этих методов. [c.130]

Для целей качественного анализа липидов первичного экстракта наиболее полезным является метод ТСХ. Однако таким методом даже с помощью самых тщательно разработанных процедур не удается осуществить количественную оценку фракций липидов. Трансметилирование эфиров различных жирных кислот с последующим количественным анализом метиловых эфиров жирных кислот методом ГЖХ дает удовлетворительные результаты, но анализ занимает много времени [45, 663—668]. Этот метод широко применяют для количественной оценки соотношения глицеролипидов в различных фракциях, полученных с помощью ТСХ, а также для дальнейшей характеристики состава этих фракций. Опубликованы многочисленные работы, в которых указанные методы были использованы для анализа липи- [c.204]

Битман и др. [689] разработали метод ТСХ для анализа липидов крови, молока, яичного желтка и других тканей, приводящий к быстрому и воспроизводимому разделению, после кото-poro можно сразу провести количественную оценку методом денситометрии. Авторы использовали двухступенчатое разделение сначала в системе хлороформ — метанол — уксусная кислота (98 2 1) до достижения фронтом растворителя отметки 16 см, затем в системе гексан — диэтиловый эфир—уксусная кислота (470 30 1) до прохождения растворителем 20 см. Перед карбонизацией пластинку погружали в 3%-ный раствор ацетата меди в 8%-ной фосфорной кислоте на 3 с. [c.205]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология