Сахара идентификация хроматографией

Идентификацию и количественное определение сахаров можно осуществить различными хроматографическими методами хроматографией на бумаге [202, 204, 213, стандарт TAPPI Т 250 рт-7Ъ тонкослойной хроматографией [235] газовой хроматографией частично в комбинации с масс-спектроскопией [18, 102, 204, 244, стандарт TAPPI Т 249 ргп-75]. Позднее для определения полисахаридного состава древесины и технических целлюлоз применили автоматизированный анализ сахаров методом ионообменной хроматографии через боратные комплексы [73, 75, 76, 200]. Описан быстрый спектроскопический метод определения сахаров [192, 193, 194], основанный на измерении поглощения при 322 и 380 нм продуктов дегидратации сахаров (производных фурана), образовавшихся после полного гидролиза древесины или технической целлюлозы. [c.30]

Перед идентификацией сахаров методом хроматографии на бумаге их подвергают ферментативному расщеплению [4.432] (табл. 4.22). Некоторые смеси олигосахаридов после разделения хроматографией на бумаге гидролизуют непосредственно на бу- [c.105]

Озазоны представляют собой соединения, окрашенные в желтый цвет, которые могут быть очищены дробной кристаллизацией или хроматографией. Э. Фишер использовал их для выделения и идентификации многочисленных сахаров. При действии соляной кислоты озазоны гидролизуются с образованием озонов. Однако в большинстве случаев используется расщепление озазонов при нагревании с бензальдегидом, Эта реакция точно так же приводит к образованию озонов, но протекает с лучшими выходами, поскольку при этом одновременно связывается освобождающийся фенилгидразин [c.634]

Рассмотренные цветные реакции осуш,ествляются непосредственно на углеводной фракции, полученной из исследуемого объекта без предварительного отделения от обычных сахаров, и указывают только на наличие-высших сахаров. Следуюш,им этапом в установлении строения высших сахаров является более строгая идентификация методом хроматографии, на бумаге. [c.319]

Полный гидролиз полисахарида проводят для установления природы и соотношения составляющих его моносахаридных остатков. Качественный анализ гидролизата в настоящее время неизменно выполняют с помощью распределительной хроматографии на бумаге, что требует лишь микроколичеств сахаров и вместе с тем дает возможность идентифицировать присутствующие нейтральные, основные и кислые моносахариды. По хроматографии углеводов существует обширная литература [91, 97, 127, 131, 162]. Было испытано множество систем растворителей и много обнаруживающих реагентов как специфических, так и неспецифических, и составлены таблицы относительных скоростей движения сахаров на бумажных хроматограммах [131]. Для окончательной идентификации определенного сахара не достаточно одного только хроматографического анализа. [c.303]

После идентификации сахаров, присутствующих в гидролизате, их можно количественно определить специфическими колориметрическими методами [53], ферментативными способами [117, 211] или гравиметрическими методами, заключающимися в избирательном осаждении нерастворимого производного. Количественное определение сахаров с помощью бумажной хроматографии, требующее всего лишь 1—50 мг исходного вещества, представляет собой общий и точный метод анализа сложных смесей [61, 97]. [c.304]

Анализируемую смесь веществ сначала пытаются разделить физическими методами. Разделение возможно, например, на основе различной растворимости веществ, входящих в состав смеси. При заметном различии в растворимости компонентов смесь можно разделить обычной или дробной кристаллизацией. Если вещества мало различаются по своей растворимости, то для разделения смеси можно использовать методы экстракции и адсорбции (а также и комбинацию этих методов). Для аналитических целей применяют адсорбционную, газовую хроматографию и хроматографию на бумаге. Последняя особенно удобна для разделения и идентификации сахаров и аминокислот. [c.587]

Методом распределительной хроматографии на бумаге были разделены сахара. Для их идентификации они были превращены нагреванием с кислотой в производные фурфурола, после чего была применена цветная реакция с нафторезорцином. Этим методом были разделены сотни веществ других классов, в том числе алкалоиды, порфирины и птерины, пенициллины, природные и синтетические пигменты антрахинонового ряда, антоцианидины, глюкозиды флаванолов, продукты алкилирования 3,5-динитроанилина, фенолы и фенолокислоты в связи с исследованием ферментативного окисления ароматических соединений, алифатические кислоты и неорганические соединения. В условиях распределительной хроматографии на бумаге фенолокислоты адсорбируются слабее, чем соответствующие амиды. [c.1513]

Другой путь идентификации частично метилированных сахаров [24], применяемый при определении структуры полисахаридов [80, 81], включает восстановление частично метилированных сахаров, последующее ацетилирование и анализ с использованием системы газожидкостной хроматограф — масс-спектрометр. В этом случае для проведения анализа нужны заведомые образцы ацетатов частично метилированных альдитов. [c.418]

Практически все методы исследования углеводов включают стадию гидролиза органических компонентов почвы и определение образующихся сахаров соответствующим способом идентификации. Для этих целей наряду с колоночной хроматографией применяют БХ. [c.312]

Колориметрический способ определения редуцирующих сахаров, широко используемый в биохимических и клинических лабораториях, нашел применение и при анализе пищевых продуктов, как об этом сообщается в работе [336], сравнивающей этот иетод с методом Менсона — Уокера. Метод окисления феррицИани-дом калия приспособлен для определения лактозы и сахарозы в молочных продуктах [356] однако в присутствии других редуцирующих сахаров он неприменим. Для анализа смеси глюкозы, галактозы, рамнозы, присутствующих в гидролизате глюкозидов флавона из гречихи, пригодно определение медного числа по Шор-лю [321 ] до и после сбраживания дрожжами, способными селективно сбраживать одну глюкозу или глюкозу и галактозу вместе. Для идентификации сахаров использована хроматография на бумаге [384]. Для смесей простых гексоз и пентоз процесс был весьма упрощен применением смешанных растворителей этилацетат-уксусная кислота-вода и этилацетат-пиридин-вода, в которых сахара имеют низкий коэффициент Rp [359]. [c.158]

Границы применения температуры плавления отдельных озазонов слишком близки друг к другу, и это иногда затрудняет идентификацию. Удобными методами идентификации являются бумажная и тонкослойная хроматография (см. разд. А, 2.5.4,1 и А, 2.6.3). В качестве растворителя при этом рекомендуется смесь бутанола, ледяной уксусной кислоты и воды (4 1 1) или фенол, насыщенный водой. Употребляемые растворители должны быть перегнаны, для контроля одновременно с исследуемой пробой хроматографируют аутентичный образец. Восстанавливающие сахара проявляют, опрыскивая фталатом анилиния (приготовление см, в разд. Е), а затем 10 мин нагревая при 105 ""С. Невосстанавли-вающие сахара проявляют смесью равных частей 0,2%-ного спиртового раствора нафторезорцина и 2%-ного водного раствора трихлоруксусной кислоты с последующим нагреванием до 100 °С. [c.310]

Чувствительность метода составляет около 10 мкг. Метод пригоден для идентификации сахаров (хроматографирование в сопоставлении с заведомо известным углеводом), контроля индивидуальности продукта, предварительного подбора условий препаративной хроматографии. [c.194]

Начальной стадией структурного анализа полисахарида является изучение его мономерного состава и установление типов связей мономерных звеньев между собой. Для этого проводят полный гидролиз полисахарида или его полностью метилированного производного и периодатное окисление с анализом образующихся продуктов. Способы модификации полисахаридной молекулы (метилирование, окисление) и гидролиза можно считать хорошо разработаннь1ми. Идентификация же получаемых при гидролизе фрагментов молекулы, успешно осуществляемая для самих моносахаридов (кроме отнесения к Г>- или L-pядy), еще недостаточно разработана применительно к метилированным сахарам и продуктам распада по Смиту. Предложенные в самое последнее время методы идентификации, включающие газо-жидкостную хроматографию и масс-спектрометрию, по-видимому, заслуживают самого пристального внимания. Особенна важным было бы здесь создание специальной аппаратуры, позволяющей максимально стандартизировать процесс, сделать его быстрым и надежным. В связи с этим привлекательной кажется идея сочетания газо-жид-костного хроматографа с масс-спектрометром. [c.632]

Разработаны микрометоды для полной идентификации антоцианов, включая определение вида сахара и места его присоединения. Эти методы основаны на бумажной хроматографии гликозидов (в нескольких обычных растворителях), агликонов, сахаров и коричных кислот, получающихся при гидролизе (Харборн [175]), с последующим изучением спектров гликозидов и агликонов [176]. Антоцианы поглощают в видимой области при 500—550 ммк в 0,01%-ном растворе соляной кислоты в метаноле в ультрафиолетовой области полоса менее интенсивна. Положение максимума в видимой области изменяется в зависимости от значения pH и типа растворителя, поэтому существенным является использование указанных выше стандартных растворителей. Антоцианы с 3, 4 -диоксигруппой обнаруживают батохромный сдвиг в присутствии хлористого алюминия. Соотношение сахар — агликон в антоцианах определяют спектрофотометрически 1) путем установления вида сахаров после разделения кислотных гидролизатов на бумаге и опрыскивания фосфатом анилина 2) путем спектрофотометрического определения концентрации антоцианидина в гидролизате. Место присоединения и природа сахарных групп (если присутствуют ди- и трисахариды) определяют изучением сахаров, образующихся после расщепления молекулы путем окисления перекисью водорода и перманганатом калия (Чандлер и Харпер [177]), а также при частичном кислотном или ферментативном гидролизе. [c.65]

Книга Э. Шталя посвящена детальному описанию метода хроматографии в тонких слоях. В общей части излагаются приемы, аппаратура, сорбенты и некоторые общие методы идентификации. Подробно освещены вопросы теории хроматографии в тонких слоях. Специальный раздел посвящен изотопным методам. Специальная часть состоит из ряда глав, в которых п )иводятся примеры анализов отдельных классов соединений, например алифатических липидов, эфирных масел, бальзамов, смол, витаминов, стероидов, аминокислот, сахаров и т. д. [c.5]

Идентификацию углеводов проводят с помощью хроматографии на бумаге. Для этого используют метод восходящей хроматографии, описанный на стр. 78. В качестве подвижной фазы рекомендуется применять смесь бутилового спирта, уксусной кислоты и воды (4 1 1) или насыщенный водный раствор фенола. (Растворители для хроматографии перед употреблением следует перегнать, хроматограммы ставить со свидетелями ) Восстанавливающие сахара проявляют на хроматограмме, обрызгивая раствором фталата анилина и нагревая (в течение 10 мин) до 105°. Невосстанавливающие сахара проявляют смесью равных объемов 0,2%-ного спиртового раствора нафторезорцина и 2%-ного водного раствора трихлоруксусной кислоты. Окраска появляется при нагревании хроматограммы до 100°. [c.582]

Дальнейших успехов в химии гликонротеинов следовало ожидать на основе развития методов и лабораторной техники идентификации и количественного определения малых количеств сахаров и аминокислот, структурного анализа олиго- и полисахаридов, эффективного разделения и очистки белков, оценки гомогенности макромолекул и определения их молекулярных весов. С введением улучшенных методов исчерпывающего метилирования и периодатного окисления углеводов, реагентов (борогндридов щелочных металлов), избирательно восстанавливающих карбонильную группу, аналитической ультрацентрифуги Сведберга, аппарата Тизелиуса для электрофореза с подвижной границей, ультрафиолетовой и инфракрасной спектроскопии, метода меченых атомов, метода фракционирования белков плазмы крови холодным спиртом по Кону, хроматографии на бумаге и на колонках, хроматографии на ионообменниках, полученных из целлюлозы, упрощенных микрометодов электрофореза (электрофорез на бумаге, крахмальном или агаровом гелях), иммуноэлектрофореза и, наконец, последнего по времени, но важного в этой области открытия конститутивных и индуцируемых бактериальных ферментов, действующих избирательно на гетеросахариды, настало время для третьего и наиболее сложного и плодотворного периода исследования гликонротеинов. [c.18]

Примечания. Тип бумаги Ц — целлюлозная (см. разд. 122), С — стекловолокнистая (см. разд. 125). 1—4. Стекловолокнистая бумага приготовлена без добавок свяаующего, отличается высокой скоростью движения растворителя и допускает проявление хроматограмм с помощью серной кислоты при нагревании до 200—300 °С. Бумага № 1 — с небольшим содержанием сорбента, рекомендована для хроматографии липидов и других неполярных соединений. Содержание сорбента в бумагах № 2—4 значительно больше, причем в направлении к одному краю листа pH немного возрастает. Рекомендованы для разделения полярных веществ сахаров, аминокислот, витаминов. Сорт бумаги № 4 предназначен для идентификации наркотиков. 6. Для препаративных работ. 8.9. Время капиллярного поднятия воды на 75 мм —22 и 15 мин (№ 8 и 9), бензола на 115 им — 30 мин. Средний диаметр пор силикагеля 11 нм. 11, 12. Бумаги соответственно аналитического и технического сортов. [c.247]

Идентификация двух-и трехатомных фенолов (пирокатехина, пирогаллола, резорцина, флуорглюцина, орсина и гидрохинона) [102]. Идентифицировать эти вещества можно методом бумажной хроматографии. Хроматограмму обрызгивают сахаром (2,0 г) в растворе соляной кислоты (10 мл) и спирта (90 мл), нагревают 40—60 секунд и наблюдают возникающую характерную для различных фенолов окраску и флуоресценцию в ультрафиолетовом свете. [c.214]

Ранее упоминалось, что применение лишь хроматографических методов для анализа свободных сахаров в гидролизатах полисахаридов. недостаточно, необходимы препаративное выделение компонентов и их идентификация. То же относится и к анализу смесей метилированных сахаров. При препаративном разделении метилированных моносахаридов также пользуются хроматографическими методами, используя в качестве сорбентов целлюлозу, уголь и силикагель. Завершают очистку препаративной хроматографией на бумаге (картон, блоки из бумаги). [c.69]

Идентификация компонентов основана на том, что их положение на хроматограмме при данных условиях постоянно и может быть установлено предварительными опытами. Таким путем удалось идентифицировать не только все содержащиеся в природных смесях, белковых гидролизатах и т. д. известные аминокислоты, но и обнаружить ряд новых. Бумажная хроматография применена с успехом также к анализу сахаров, пуринов и пири-мвдинов, антибиотиков и т. д. Методика применима и для количественного микроанализа Для этого отдельные пятна экстрагируются, и экстракт анализ нруетч я колориметрическим или [c.219]

Для выделенных метиловых эфиров сахаров можно определить степень метилирования и при помощи хроматографии осуществить их идентификацию со свидетелями известного строения. В ряде случаев метиловые эфиры можно идентифицировать по физико-химичеоким свойствам (температура плавления, ИК-спектры, рентгеноструктурный анализ, масс-опектрометрия). Возможно деметилирование полученного эфира треххлористым или трехбромистым бором и идентификация образовавшегося моносахарида. [c.82]

Тонкослойная хроматография (ТСХ) в том виде, в каком она известна сейчас, впервые была описана Шталем [1] в 1958 г., а в 1961 г. появилось первое сообщение о применении ТСХ для разделения углеводов [2, 3]. Начиная с этого времени ТСХ широко используется для идентификации углеводов, в том числе незамещенных моно- [4—13] и олигосахаридов [14—21] и различных производных сахаров простых [22—26] и сложных эфиров [24, 27—32], циклических ацеталей [22, 24, 27 и других производных [31, 33, 34]. Опубликован ряд книг [35— 39], обзорных статей [40—43] и библиографий [44—46], в которых описываются области применения ТСХ в большинстве работ содержатся специальные главы, посвященные ТСХ углеводов. [c.37]

Первое сообщение об использовании ТСХ для изучения сахаров появилось в 1961 г. [404]. В настоящее время этот метод находит широкое применение для идентификации и разделения углеводов всех типов. ТСХ отличают более высокая чувствительность и скорость разделения, чем при хроматографии на бумаге. Прекрасный обзор наиболее важных работ, посвященных различным аспектам применения ТСХ в области химии углеводов, опубликован в 1976 г. [405]. Практические вопросы качественного и количественного анализа, а также препаративного ТСХ-разделения углеводов подробно рассмотрены в трех статьях Уинга и БеМиллера [406]. [c.64]

Примеры использования хроматографии для идентификации веществ приведены в гл. XVI, разделы VII, 7 (аминокислоты) и VIII, 3 (сахара.) [c.364]

При идентификации или выделении сахаров, входящих в состав гли-конротеинов, с помощью хроматографии на бумаге необходимо учитывать, что присутствие в растворителе аммонийных солей слабых кислот может приводить к образованию моно- и дигликозиламинов (замещение глико-зильными остатками одного или двух атомов водорода в аммиаке), имеющих отличные от свободных моносахаридов величины Rf [31]. [c.119]

В других экспериментах была сделана попытка выяснить, может ли ультрафиолет заменить основной катализатор при образовании сахаров из формальдегида в водном растворе. Было найдено, что в соответствующих условиях под влиянием ультрафиолетового или 7-излучеиия (источником 7-лучей служил кобальт-60) из формальдегида образуются пентозы и гексозы [70]. В частности, среди продуктов реакции были идентифицированы рибоза и дезо-ксирибоза. В этих экспериментах использовался формальдегид, меченный . Растворы, облучавшиеся ультрафиолетом, помещались в пробирки из увиолевого стекла, тогда как 7-облучеиие проводилось в стеклянных пробирках. Перед облучением удаляли кислород. Формальдегид поглощает в области 2880 А. Увиолевое стекло пропускает свет с этой длиной волны. В экспериментах с 7-облучением ( Со) мощность дозы составляла 5-10 рад/ч. Идентификация продуктов проводилась при помощи хроматографии на бумаге. Наряду с пентозами и гексозами, образовавшимися в наибольших количествах, были обнаружены и другие сахара. Поскольку реакция проводилась при pH 4,5, очевидно, что в данном случае синтез сахаров не зависит от оснований в качестве катализаторов. [c.177]

Наиболее часто типичные гликопротеины млекопитающих содержат следующие моносахариды ь-фукозу (6-дезокси-ь-га-лактоза), о-маннозу, о-галактозу, Ы-ацетил-о-глюкозамин (2-ацетамид-2-дезокси-о-глюкоза) и сиаловые кислоты (различные производные нейраминовой кислоты). В состав некоторых гликопротеинов входят о-глюкоза или Ы-ацетил-о-галактозамин (2-ацетамид-2-дезокси-о-галактоза). Наилучшие результаты для разделения, идентификации и количественного определения этих семи моносахаридов достигаются с помощью газожидкостной хроматографии. Существует два основных метода модификации сахаров для последующего анализа газожидкостной хроматографией альдит-ацетатный и метил гл икозид-триметил сил ильный. Первый включает водный кислый гидролиз с последующим восстановлением образующихся альдоз до соответствующих аль-дитов и их ацетилирование второй основан на применении метанолиза, приводящего к образованию метилгликозидов и метиловых эфиров сиаловых кислот, которые затем превращаются в триметилсилильные производные. [c.318]

Образующиеся в результате гидролитической деградации агликоны, сахара, ацилирующие агенты и другие продукты разделяют и подвергают последующему анализу с помощью методов спектрофотометрии, тонкослойной и бумажной хроматографии. Идентификацию полученных фрагментов проводят, сравнивая их спектральные свойства и хроматогрофическое поведение с имеющимися коммерческими стандартами. При необходимости, например, отсутствии соответствующих стандартов, для выяснения структуры продуктов деградации флавоноидов используют методы ядерного магнитного резонанса и масс-спектроскопии. [c.105]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология