Методы идентификации сахаров

МЕТОДЫ ИДЕНТИФИКАЦИИ САХАРОВ [c.332]

Деметилирование метилированных моносахаридов, полученных, например, при расщеплении метилированного полисахарида, с последующим хроматографированием на бумаге представляет удобный метод идентификации сахаров в малых количествах. Продолжительная обработка метилированной альдозы концентрированной водной бромисто- [c.110]

Хотя озазоны иногда трудно перекристаллизовываются и нередко разлагаются при температуре плавления, они часто обладают очень характерной формой кристаллов или образуют отчетливые кристаллические друзы, что ранее использовалось для идентификации сахаров. В настоящее время этот метод полностью заменен хроматографическим способом, [c.271]

В случае углеводов классическим методом идентификации концевых групп служит исчерпывающее метилирование. Многократная обработка метилирующим реагентом, например диметилсульфатом, превращает все свободные ОН-группы в ОСНз-группы. Полный кислотный гидролиз с последующим разделением метилированных сахаров и их количественным определением позволяет оценить число концевых звеньев (содержащих четыре метоксильные группы), число звеньев в неразветвленных участках цепи (содержащих по три метоксильные группы) и число точек ветвления (содержащих по две метоксильные группы). Кроме того. [c.176]

После идентификации сахаров, присутствующих в гидролизате, их можно количественно определить специфическими колориметрическими методами [53], ферментативными способами [117, 211] или гравиметрическими методами, заключающимися в избирательном осаждении нерастворимого производного. Количественное определение сахаров с помощью бумажной хроматографии, требующее всего лишь 1—50 мг исходного вещества, представляет собой общий и точный метод анализа сложных смесей [61, 97]. [c.304]

Анализируемую смесь веществ сначала пытаются разделить физическими методами. Разделение возможно, например, на основе различной растворимости веществ, входящих в состав смеси. При заметном различии в растворимости компонентов смесь можно разделить обычной или дробной кристаллизацией. Если вещества мало различаются по своей растворимости, то для разделения смеси можно использовать методы экстракции и адсорбции (а также и комбинацию этих методов). Для аналитических целей применяют адсорбционную, газовую хроматографию и хроматографию на бумаге. Последняя особенно удобна для разделения и идентификации сахаров и аминокислот. [c.587]

Перед идентификацией сахаров методом хроматографии на бумаге их подвергают ферментативному расщеплению [4.432] (табл. 4.22). Некоторые смеси олигосахаридов после разделения хроматографией на бумаге гидролизуют непосредственно на бу- [c.105]

Этим методом невозможно определить последовательность сахаров, однако он дает сведения о концевых звеньях. В сочетании с дру-гим и методам , такими как периодатное окисление, ферментативный гидролиз, физико-химические методы идентификации, данный метод является важным источником информации о деталях структуры олиго-и полисахаридных цепей. [c.81]

Применение БХ дает положительные результаты при качественной идентификации сахаров, входящих в состав почвы, и других биологических соединений. Возможно, наибольщая трудность при проведении количественного анализа состоит в том, что существующие методы гидролиза не обеспечивают количественных превращений органических составляющих почвы. [c.313]

Хроматографическое обнаружение этого сахара в гонадотропном гормоне жеребых кобыл (стр. 208) делает желательным описание методов идентификации этого сахара, не вызывающих сомнения. ь-Рамноза встречается в природе как компонент ряда гликозидов и полисахаридов, полученных из растений. в-Рамноза, по-видимому, не встречается в природе. [c.187]

При установлении строения химики широко пользуются методом частичной деструкции молекулы с последующим исследованием осколков. Полипептиды расчленяются на отдельные аминокислоты, гликозиды — на сахар и агли-кон, сложные эфиры — на спирты и кислоты. Здесь нередко используется метод прямой идентификации осколков сведением неизвестного к известному при помощи физических констант, табличных данных. [c.19]

Перечисленные методы выделения и идентификации углеводов действием различных реагентов требуют значительного количества определяемого сахара, реакции не всегда специфичны, а разделение сложной смеси углеводов, какими являются гидролизаты, перечисленными приемами не достигается. Поэтому эти методы редко применяются при исследовании углеводного состава гидролизатов. [c.70]

Формазаны сахаров не получили широкого распространения в синтетической химии углеводов. В последнее вре.мя было сделано несколько попыток использования формазанов при идентификации продуктов периодатного окисления моносахаридов и даже полисахаридов Однако эти методы также не нашли применения. [c.120]

Рассмотренные цветные реакции осуш,ествляются непосредственно на углеводной фракции, полученной из исследуемого объекта без предварительного отделения от обычных сахаров, и указывают только на наличие-высших сахаров. Следуюш,им этапом в установлении строения высших сахаров является более строгая идентификация методом хроматографии, на бумаге. [c.319]

Образование формазанов, обладающих четкими температурами плявления, является хорошим методом идентификации сахаров, имеющим преимущества перед реакцией образования озазонов возникает возможность отличать альдозы от кетоз, не дающих формазанов, а также различать эпимерные альдозы, дающие одинаковые озазоны. [c.646]

Перед Э. Фишером встала задача точной идентификации продуктов синтеза. Решение ее было тем более неотложно, что не было удовлетворительных методов идентификации природных сахаров. Э. Фишер использовал фенилгидразин (H2NNH 6H5), открытый им в 1875 г., как реактив на альдегиды и кетоны. Однако при действии фенилгидразина на сахара часто получались совершенно одинаковые озазоны. Для объяснения этого явления Э. Фишер использовал положения стереохимии, основы которой заложили Я. Вант-Гофф и А. Ле Бель. Он допустил, что положение гидроксогрупп в молекуле может быть пространственно различно и что эти сахара достаточно устойчивы и реально существуют в природе. Для фруктозы можно было представить восемь изомеров и т. д. [c.258]

Границы применения температуры плавления отдельных озазонов слишком близки друг к другу, и это иногда затрудняет идентификацию. Удобными методами идентификации являются бумажная и тонкослойная хроматография (см. разд. А, 2.5.4,1 и А, 2.6.3). В качестве растворителя при этом рекомендуется смесь бутанола, ледяной уксусной кислоты и воды (4 1 1) или фенол, насыщенный водой. Употребляемые растворители должны быть перегнаны, для контроля одновременно с исследуемой пробой хроматографируют аутентичный образец. Восстанавливающие сахара проявляют, опрыскивая фталатом анилиния (приготовление см, в разд. Е), а затем 10 мин нагревая при 105 ""С. Невосстанавли-вающие сахара проявляют смесью равных частей 0,2%-ного спиртового раствора нафторезорцина и 2%-ного водного раствора трихлоруксусной кислоты с последующим нагреванием до 100 °С. [c.310]

Чувствительность метода составляет около 10 мкг. Метод пригоден для идентификации сахаров (хроматографирование в сопоставлении с заведомо известным углеводом), контроля индивидуальности продукта, предварительного подбора условий препаративной хроматографии. [c.194]

Начальной стадией структурного анализа полисахарида является изучение его мономерного состава и установление типов связей мономерных звеньев между собой. Для этого проводят полный гидролиз полисахарида или его полностью метилированного производного и периодатное окисление с анализом образующихся продуктов. Способы модификации полисахаридной молекулы (метилирование, окисление) и гидролиза можно считать хорошо разработаннь1ми. Идентификация же получаемых при гидролизе фрагментов молекулы, успешно осуществляемая для самих моносахаридов (кроме отнесения к Г>- или L-pядy), еще недостаточно разработана применительно к метилированным сахарам и продуктам распада по Смиту. Предложенные в самое последнее время методы идентификации, включающие газо-жидкостную хроматографию и масс-спектрометрию, по-видимому, заслуживают самого пристального внимания. Особенна важным было бы здесь создание специальной аппаратуры, позволяющей максимально стандартизировать процесс, сделать его быстрым и надежным. В связи с этим привлекательной кажется идея сочетания газо-жид-костного хроматографа с масс-спектрометром. [c.632]

Идентификацию и количественное определение сахаров можно осуществить различными хроматографическими методами хроматографией на бумаге [202, 204, 213, стандарт TAPPI Т 250 рт-7Ъ тонкослойной хроматографией [235] газовой хроматографией частично в комбинации с масс-спектроскопией [18, 102, 204, 244, стандарт TAPPI Т 249 ргп-75]. Позднее для определения полисахаридного состава древесины и технических целлюлоз применили автоматизированный анализ сахаров методом ионообменной хроматографии через боратные комплексы [73, 75, 76, 200]. Описан быстрый спектроскопический метод определения сахаров [192, 193, 194], основанный на измерении поглощения при 322 и 380 нм продуктов дегидратации сахаров (производных фурана), образовавшихся после полного гидролиза древесины или технической целлюлозы. [c.30]

Книга Э. Шталя посвящена детальному описанию метода хроматографии в тонких слоях. В общей части излагаются приемы, аппаратура, сорбенты и некоторые общие методы идентификации. Подробно освещены вопросы теории хроматографии в тонких слоях. Специальный раздел посвящен изотопным методам. Специальная часть состоит из ряда глав, в которых п )иводятся примеры анализов отдельных классов соединений, например алифатических липидов, эфирных масел, бальзамов, смол, витаминов, стероидов, аминокислот, сахаров и т. д. [c.5]

Дальнейшие возможности для идентификации сахаров открывает анализ методом ХТС соответствующих производных, например гидразонов, как уже кратко упоминалось Рейхштейном и сотрудниками [3]. [c.460]

Чувствительность метода составляет около 10 цг. Метод пригоден, для идентификации сахаров (хроматографирование в сопостмв-лении с завело., u известным угле.водом), конгроля индивидуальности продукта, пре 1нарителького подбора условий препаративной хро.матографии. [c.119]

В процессе разделения сахаров водонасыщенным раствором фенола из бумаги вымываются окрашенные в желтый цвет продукты, которые образуют затеки и могут помешать идентификации сахаров этим методом. Поэтому бумагу предварительно обрабатывают путем двух-трехкратного пропускания водонасыщенного раствора фенола через бумагу. После этого бумагу высушивают, и она пригодна к употребленшо. Для улучшения разделения сахаров применяют бумажные полосы специальной формы (рис. 19, стр. 114). [c.156]

Колориметрический способ определения редуцирующих сахаров, широко используемый в биохимических и клинических лабораториях, нашел применение и при анализе пищевых продуктов, как об этом сообщается в работе [336], сравнивающей этот иетод с методом Менсона — Уокера. Метод окисления феррицИани-дом калия приспособлен для определения лактозы и сахарозы в молочных продуктах [356] однако в присутствии других редуцирующих сахаров он неприменим. Для анализа смеси глюкозы, галактозы, рамнозы, присутствующих в гидролизате глюкозидов флавона из гречихи, пригодно определение медного числа по Шор-лю [321 ] до и после сбраживания дрожжами, способными селективно сбраживать одну глюкозу или глюкозу и галактозу вместе. Для идентификации сахаров использована хроматография на бумаге [384]. Для смесей простых гексоз и пентоз процесс был весьма упрощен применением смешанных растворителей этилацетат-уксусная кислота-вода и этилацетат-пиридин-вода, в которых сахара имеют низкий коэффициент Rp [359]. [c.158]

Подробное изложение методов разделения сахаров имеется в литературе 1208J. Приведенная ниже методика содержит простейшие указания для идентификации ряда обычных сахаров. Используют аппаратуру, описанную в гл. XIV, раздел V. 1—10 А. раствора наносят так, что каждое пятно включает 100—500 у вещества. Пятна наносят на расстоянии 2 см от поверхности растворителя. В качестве растворителей обычно используют следующие смеси а) 42 о воды, 42% этилацетата и 16% уксусной кислоты б) равные части воды, бутанола-1 и коллидина в) 20% воды, 20% пиридина и 60% этилацетата г) 37/о воды, 36/о коллидина и 27% спирта. Компоненты каждой смеси встряхивают и оставляют на 24 часа если происходит разделение фаз, то отделяют и используют в качестве растворителя органическую фазу. После проявления хроматограммы высушивают и опрыскивают раствором индикатора. В литературе описаны различные индикаторы [208]. Однако для большинства обычных работ используют аммиачный раствор азотнокислого серебра (0,1 н. AgNO i в равном объеме 5 н. Nn,iOH). После опрыскивания хроматограмму нагревают в сушильном шкафу при 105° в течение 5—10 мин. Восстанавливающий сахар обнаруживается в виде коричневых пятен. Автор установил, что из других индикаторов наиболее пригодными для обычной работы являются соли п-аминодиметиланилина и щелочного 3,5-динитросалицилата. Последний приготовляют растворением 500 мг 3,5-динитросалициловой кислоты в 100 мл 0,1 н. едкого натра. После [c.447]

Бурн и сотр. [138] разделили сахара в буферных растворах бората как на бумаге, так и на листах из стекловолокна. Эйлар и Джинлоз [56] применили этот метод для идентификации сахаров в орозомукоиде. [c.209]

Наиболее часто типичные гликопротеины млекопитающих содержат следующие моносахариды ь-фукозу (6-дезокси-ь-га-лактоза), о-маннозу, о-галактозу, Ы-ацетил-о-глюкозамин (2-ацетамид-2-дезокси-о-глюкоза) и сиаловые кислоты (различные производные нейраминовой кислоты). В состав некоторых гликопротеинов входят о-глюкоза или Ы-ацетил-о-галактозамин (2-ацетамид-2-дезокси-о-галактоза). Наилучшие результаты для разделения, идентификации и количественного определения этих семи моносахаридов достигаются с помощью газожидкостной хроматографии. Существует два основных метода модификации сахаров для последующего анализа газожидкостной хроматографией альдит-ацетатный и метил гл икозид-триметил сил ильный. Первый включает водный кислый гидролиз с последующим восстановлением образующихся альдоз до соответствующих аль-дитов и их ацетилирование второй основан на применении метанолиза, приводящего к образованию метилгликозидов и метиловых эфиров сиаловых кислот, которые затем превращаются в триметилсилильные производные. [c.318]

Очевидно, что методика идентификации при помощи ГХ-МС или прямого ввода пробы и ионизации электронным ударом не всегда приводит к успеху. В принципе можно сказать, что ее применение ограничено веществами, имеющими значительную плотность паров (летучесть) и термическую стабильность. В этом отношении прямой ввод пробы имеет более широкий диапазон приложений, чем ГХ-МС. Область применения ГХ-МС может быть расширена за счет дериватизации компонентов, увеличивающей их летучесть, что часто находит применение в традиционном газохроматографическом анализе (см. разд. 5.2). В масс-спектрометрии использование подобных реакций дериватизации преследует две цели. Первая из них заключается в увеличении летучести вещества экранированием полярных групп, т. е. полярные протоны кислот, аминов, спиртов и фенолов заменяются более инертными группами путем, например, этерификации кислотных групп, ацетилирования амихюгрупп или силанизиро-вания. Кроме этого, дериватизацией можно улучшить параметры ионизации. Так, включение пентафторфенильного заместителя обеспечивает более интенсивный отклик в случае масс-спектрометрии отрицательно заряженных ионов при химической ионизации электронным захватом. В рамках этих направлений, многие нелетучие и (или) термически нестабильные вещества, такие, как стероиды, (амино)кислоты, сахара, и широкий спектр лекарственных препаратов, становятся доступными газохроматографическому и ГХ-МС-анализу. Очевидно, что процедура дериватизации влияет на массу исследуемого соединения. В общем случае, сдвиг в область более высоких значений m/z является преимуществом, так как в этой области должно быть меньшее число мешающих компонентов. Однако в случае идентификации неизвестных соединений надо помнить, что дериватизация может привести и к непредвиденным артефактам тогда для определения молекулярных масс рекомендуется использовать методы мягкой ионизации (разд. 9.4.2). [c.301]

При опрыскивании хроматограммы сахара образуют цветные пятна, а полиолы — нет. Метод используется для идентификации полиолов. [c.192]

Строение значительного числа изопропилиденовых производных сахаров было доказано химическими методами, в основе которых лсх<али частичный гидролиз и метилирование свободных гидроксильных група с последующей идентификацией частично метилированных сахаров. В настоящее время доказательство строения изопропилиденовых производных сахаров может быть осуществлено значительно проще с помощью физико-химических методов анализа, главным образом ЯМР-спектроскопии В ЯМР-спектрах изопропилиденовых производных сахаров сигналы метильных протонов в диоксолановом цикле не расщепляются и находятся в интервале г = 8,0—9,0. Химический сдвиг протонов, метильной группы зависит от природы диоксоланового цикла в связи с. этим различают три типа метильных групп метильную группу изопропилиденовой группировки, находящуюся в i(w -положении по отношению к двум, водородным атомам, называют а (СН ) группу, находящуюся в цис-положении по отношению к радикалу и водороду, —р (СНр), а группу,, находящуюся в положении по отношению к двум углеродсодержащим заместителям, —у (СН ). [c.175]

Установление строения бензилиденовых производных сахаров представляет собой сложную проблему. Известно много представителей таких производных (в особенности для ациклических производных моносахаридов), строение которых не установлено до сих пор. Химические методы доказательства структуры, основанные главным образом на частичном кислотном гидролизе с последующим метилированием и идентификацией частично метилированных сахаров, позволяют, в лучшем случае, определить только места присоединения бензилиденового остатка. Но, поскольку при образовании бензилиденового производного возникает асимметрический центр (бензилиденовый атом углерода), возможно образование [c.180]

Этот метод основан на устойчивогти метиловых эфиров сахаров в условиях кислотного гидролиза гликозидных связей и состоит в метилировании всех свободных гидроксилов исследуе юго олигосахарида с последующим гидролизом гликозидных связей и идентификацией образовавшихся метилированных производных моносахаридов. В этих соединениях остаются свободными только те спиртовые гидроксилы, которые участвовали в образовании гликозидных связей или окисных циклов, что позволяет судить о размерах циклов моносахаридных звеньев и местах присоединения моносахаридных остатков друг к другу в молекуле исходного олигосахарида. [c.433]

Константа распределения чистых антоцианинов зависит главным образом от имеющихся остатков сахара [170] она заметно повышается при введении в сахара ацильных групп [171] и лишь незначительно понижается, если уменьшать число гидроксильных групп во флороглюциновой части молекул на одну [172]. Метод изучения констант распределения особенно удобен для идентификации антоцианинов, различающихся по остатку сахара, и его следует предпочесть исследованию спектров поглощения или цветным пробам. Этот способ дает, например, возможность отличить хлористый З- -галактозидо-пеонидин от хлористого З- -глюкозидоцианидина [170], а также диглюкоз иды от глюкозидов пентоз. Коэффициент распределения диглюкозидов и глюкозидов пентоз в амиловом спирте и разбавленной соляной кислоте равен нулю однако если к водному слою прибавить соль, то глюкозиды пентоз в значительной степени извлекаются амиловым спиртом, тогда как растворимость диглюкозидов не изменяется [173]. [c.251]

Одним из наиболее информативных методов установления строения полисахаридов является метилирование. Его основы и различные модификации рассмотрены в монографии Н. К. Кочеткова и соавт. и в ряде методических пособий [68, 77, 78]. Сущность метода сводится к преобразованию свободных гидроксильных групп иолисахаридов в мМоксильиые, устойчивые к воздействию кислот, последующей деструкции модифицированного биополимера до мономеров и их дальнейшей идентификации. Образующиеся ири гидролизе метилированного полисахарида метиловые эфиры простых сахаров содержат свободные гидроксильные группы, по положению которых судят о размерах окнсных циклов мо-носахаридных звеньев и местах присоединения мономерных, остатков друг к другу в молекуле исходного соединения. [c.61]

Спектроскопические методы анализа являются одними из самых распространенных и широко применяемых методов, позволяющих получить полную информацию о важнейших свойствах органического вещества. Они позволяют определять содержание веществ в диапазоне от 30—40% до 10 %. Фотометрические методы используют, например, для определения пектиновых веществ, фенольных соединений, витаминов, цветности сахара, крахмала, муки, степени окнсленности жиров. Люминесценцию наиболее широко применяют для идентификации и количественного определения ввгтаминов, белков, жиров, углеводов, лекарственных препаратов, а также для определения сорта муки и наличия в ней примеси, дпя контроля всхожести семян. [c.475]

Идентификацию углеводов проводят с помощью хроматографии на бумаге. Для этого используют метод восходящей хроматографии, описанный на стр. 78. В качестве подвижной фазы рекомендуется применять смесь бутилового спирта, уксусной кислоты и воды (4 1 1) или насыщенный водный раствор фенола. (Растворители для хроматографии перед употреблением следует перегнать, хроматограммы ставить со свидетелями ) Восстанавливающие сахара проявляют на хроматограмме, обрызгивая раствором фталата анилина и нагревая (в течение 10 мин) до 105°. Невосстанавливающие сахара проявляют смесью равных объемов 0,2%-ного спиртового раствора нафторезорцина и 2%-ного водного раствора трихлоруксусной кислоты. Окраска появляется при нагревании хроматограммы до 100°. [c.582]