Флуоресценция витаминов

Принципиальная схема типового флуориметра показана на рис. 1.34. Излучение источника 1, выделенное первичным светофильтром 2, попадает на кювету с пробой 3. Возникающее излучение флуоресценции Уф через вторичный светофильтр 4 попадает на фотоэлемент или фотоумножитель 5, где оно преобразуется в электрический сигнал, пропорциональный интенсивности флуоресценции, который усиливается электронным усилителем 6 и измеряется миллиамперметром. При использовании линейного участка градуировочного графика воспроизводимость флуориметрических определений составляет приблизительно 5%. Метод применяют для чувствительного определения очень малых количеств элементов при анализе органических веществ, при определении малых количеств витаминов, гормонов, антибиотиков, канцерогенных соединений, нефтепродуктов и др. [c.97]

Витамин Ва связан, кроме того, с углеводным и жировым обменом, метаболизмом аминокислот он необходим для нормального зрения. Эйлер (1938) объясняет влияние витамина В. его светочувствительностью, благодаря которой он превращает действующие на него фиолетовые и синие лучи в длинноволновые (светло-зеленой флуоресценции), к. которым глаз обладает большей чувствительностью таким образом, витамин Bj выполняет как бы роль сенсибилизатора. [c.675]

Витамин Ва — желто-оранжевый кристаллический порошок, иногда сросшийся в друзы, горького вкуса, без запаха, т. пл. 280° (с разл.), мало растворим в воде, не растворим в спирте, эфире, ацетоне, бензоле, хло-ро( рме, хорошо растворяется в соляной и ледяной уксусной кислотах. Нейтральные водные растворы обладают зеленовато-желтой окраской с интенсивной желто-зеленой флуоресценцией, ослабевающей в кислых и щелочных растворах. Интенсивность окраски и флуоресценцию растворов используют для количественного определения содержания рибофлавина в природных продуктах. [c.678]

Примечательно, что многие коферменты обладают способностью к поглощению света (см. гл. 13). Это свойство проявляется в виде спектра поглощения и может также сопровождаться круговым дихроизмом и флуоресценцией. Оптические свойства коферментных форм витамина Вб особенно чувствительны к изменениям окружающей среды и состояния ионизации различных групп в молекуле. Так, например, РМР в нейтральной биполярной ионной форме, которая преобладает при pH 7, имеет три полосы сильного поглощения света, центры которых находятся при 327, 253 и 217 нм [50]. [c.227]

Витамин Во принимает важнейшее участие в механизме зрения. Благодаря своей светочувствительности он превращает действующие на него фиолетовые и синие лучи в более длинноволновые (свет зеленой флуоресценции), к которым глаз обладает большой чувствительностью [306], т. е. выполняет как бы роль сенсибилизатора в зрении, производя батохромный эффект. Некоторые глазные заболевания успешно излечиваются рибофлавином. [c.546]

Окисление тиамина в тиохром. Качественная реакция на витамин Bl основана на окислении его в щелочной среде [Fe ( N) ] с образованием тиохрома желтого цвета, раствор которого обладает голубой флуоресценцией в ультрафиолетовом свете. [c.138]

Рибофлавин, связанный с фосфорной кислотой, входит в состав ферментов, обычно называемых флавиновыми ферментами. Желтый рибофлавин сообщает желтую окраску флавиновым ферментам, входящим в группу аэробных дегидрогеназ. Таким образом, витамин Ва участвует в окислительно-восстановительных процессах. При восстановлении витамин Ва (желтый цвет) переходит в лейкоформу (бесцветный). Рибофлавин встречается в виде флавинмононуклеотида (ФМН) и флавинадениндинуклеотида (ФАД), а также в связанном с белками состоянии, образуя качественно новые системы — желтые дыхательные ферменты. Нейтральный водный раствор рибофлавина обладает желто-зеленой флуоресценцией. При подкислении или при подщелачивании флуоресценция рибофлавина уменьшается и исчезает. В щелочной среде витамин Ва разрушается, в кислой среде он устойчив. [c.141]

При окислении витамина В1 щелочным раствором красной кровяной соли, а также различными другими окислителями получают окрашенный в желтый цвет тиохром (ХСУП) [437]—вещество, выделенное также из дрожжей [438], хотя как таковое оно, по-видимому, в дрожжах не присутствует и образуется в процессе их обработки. Тиохром характеризуется интенсивной синей флуоресценцией, и это свойство используют для Оценки содержания витамина В, в биологических материалах [439]. Структура тиохрома подтверждена двумя независимыми синтезами [440]. Другие свойства витамина В1, например способность к обратимому окислению в дисульфид, являются по существу свойствами тиазольной части молекулы (см. т. 5). [c.255]

Доступным для использования во внутриаптечном контроле является метод флуориметрии. По характеру флуоресценции кристаллов или растворов можно, например, осуществить идентификацию препаратов некоторых алкалоидов, витаминов и др. Для возбуждения флуоресценции на растворы испытуемых веществ воздействуют ультрафиолетовым излучением с длиной волны 365—366 нм. Некоторые лекарственные вещества сами не флуоресцируют, но при взаимодействии с рядом реактивов образуют флуоресцирующие продукты. [c.249]

Метод флуориметрии применяется для определения 8т, Ей, Ос1, ТЬ, Е)у, и, Т1, 8п, РЬ в водных растворах по их собственной флуоресценции. Низкотемпературную флуоресценцию галогенидных комплексов В1(1П), 8Ь(1П), А8(Ш), 8е(1У), Те(1У) используют для высокочувствительного и селективного определения этих элементов. Непереходные элементы, а также лантаноиды определяют по флуоресценции их комплексов с 8-оксихинолином, Р-дикетонами, основаниями Шиффа, азосоединениями, оксифлавонами, родаминовыми красителями и др. органическими реагентами. Разработаны методы определения порфиринов, витаминов, антибиотиков и других органических веществ по их собственной флуоресценции. [c.515]

Нейтральный растворитель очень медленно перемещ,ает фолиевую кислоту на пластинке силикагеля (см. табл, 34). Скорость перемещ,ения значительно увеличивается при использовании 1%-или 10 %-ного раствора аммиака (Rf X 100 95 и 85 соответственно). При испытании чистого витамина возможно отделение сопутствующ,их веш,еств в виде голубоватой флуоресценции (обнаруживается в длинноволновом УФ-свете). [c.245]

Рибофлавин (витамин Ве или G) можно также определить флуоресцентным способом [4]. Мощность флуоресценции в большой степени зависит от условий измерения, а также от природы и количества примесей. Для того чтобы быть уверенным, что примеси одинаково влияют как на эталон, так и на определяемое вещество, применяют метод добавок эталонов, т. е. измеряют флуоресценцию порции эталона в одном и том же растворе с определяемым. Этот метод обладает также и тем преимуществом, что рибофлавин легко окисляется, переходя в нефлуоресцирующее вещество, которое в свою очередь легко восстанавливается, переходя количественно в витамин. [c.64]

Например, определение содержания витамина В в молоке и использование флуоресцентного метода в геолого-поисковой работе для обнаружения залежей нефти — оба эти анализа, несмотря на свое внешнее различие, должны быть отнесены к одному и тому же тину в обоих случаях но флуоресценции вещества обнаруживают его присутствие и определяют содержание. Биолог же, который изучает скорость циркуляции крови в теле путем впрыскивания кролику в ухо флуоресцентного раствора и наблюдения промежутка времени, по истечении которого флуоресценция обнаруживается в крови другого уха, и геолог, устанавливающий, есть ли связь между природными водоемами путем подкрашивания флуоресцеином воды в одном из них, — оба исследователя тоже используют по существу один и тот же прием, но уже иной, резко отличный от упомянутого выше. Классификация многообразных применений люминесцентного анализа по признаку используемых приемов (независимо от того, какова цель и объект исследования) облегчит специалисту любой области выбрать задачи, для разрешения которых люминесцентный метод может оказаться более эффективным, чем другие методы, а ири проведении анализа поможет правильно использовать соответствующий прием, правильно вести наблюдения. [c.59]

Кун и Кальтшмндт [16] восиользокались флуоресценцией витамина Bg для решения вопроса, находится ли витамин в молоке в свободном состоянии или в связанном с фосфорной кислотой они наблюдали поведение обезжиренного молока в электрическом поле и обнаружили, что, тогда как молочно-белая суспензия передвигалась к аноду, вещество, флуоресцирующее желто-зеленым светом (витамин Bj), оставалось неподвижным следовательно, в молоко витамин с фосфорной кислотой не связан. [c.65]

Работы Соботка с сотрудниками, относящиеся к 1943—1944 гг., выясняют до некоторой степени вопрос о возможности определения витамина А люминесцентным методом [52]. Согласно данным этих авторов, эфиры витамина А при облучении ультрафиолетовым светом начинают флуоресцировать нод влиянием протекающей при этом фотохимической реакции. Интенсивность флуоресценции вначале возрастает, затем ири дальнейшем облучении начинает спадать, и в конечном счете свечение гаснет,очевидно, тоже в результате фотохимической реакции, но уже иной. В полярных растворителях (спиртах) витамин А, подобно его эфирам, ири засвечивании ультрафиолетовым светом обнаруживает сначала возрастание флуоресценции, а затем полное ее исчезновение. В растворителях слабо полярных — в эфире, хлороформе, бензоле — наблюдается незначительное снин ение флуоресценции витамина А, если его облучать ультрафиолетовым светом при хранении в темноте интенсивность флуоресценции остается постоянной. Авторы считают, что в пределах концентраций 0,1—5,0 мг мл интенсивность флуоресценции раствора пропорциональна содержанию витамина. Просасывапием азота или углекислого газа через раствор витамина А можно снизить концентрацию кислорода в нем при этом уменьшается спад интенсивности свечения. Соботка и его соавторы приводят спектры абсорбции флуоресцирующего продукта, получаемого из витамина А при его облучении ультрафиолетовым светом, и высказывают предположения относительно его химической природы. Таким образом, по-ви- [c.206]

Электронный флуориметр ЭФ-3 (бывший завод Москип) — двуплечий прибор с поперечной схемой возбуждения, предназначенный для определения флуоресценции витаминов. Источник возбуждения — лампа ДРС-50 с тремя сменными (ультрафиолетовыми и фиолетовыми) стеклами. Вторичные светофильтры — фиолетовое, голубое и желтое стекла. Приемник излучения— два селеновых фотоэлемента, расположенные по бокам спе- [c.91]

В настоящее время витамин В получен синтетически. Кристаллы рибофлавина — иглы желто-оранжевого цвета собранные в друзы, слаборастворимы в воде и спирте, совсем нерастворимы в эфире и хлороформе и других органических растворителях. Точка плавления кристаллов 292° С. Растворы витамина Ва имеют резко выраженную флуоресценцию. Витамин В выдерживает нагревание до 120° С, не теряя витаминной активности, но под действием ультрафиолетовых лучей быстро ее утрачивает, расщепляясь на рибит и 6,7-диметилизоаллоксазин или люмихром (см. Люмихром). Рибофлавин способен легко окисляться и восстанавливаться. [c.161]

Содержание масла на салфетках можно определит наблюдением флуоресценции салфеток при их облучент ультрафиолетовыми лучами с использованием аппарат для анализа витаминов в растворах [модель 833 (Л-80) или определением содержания масла в растворителе, ко торым обрабатывается салфетка. [c.209]

Витамин В2. Так называют водорастворимый стимулятор роста, распространенный в растительном мире и органах животных. Для него характерны желтая окраска, сильная желто-зеленая флуоресценция и светочувствительность. Его химическое название рибофлавин, или лактофлавин группа родственных ему соединений называется флавинами, или лиохромами. [c.893]

Идентификацию компонентов смеси проводят по величинам Rf. Количеств, определение в-в в зонах мож.но.осуществлять непосредственно на слое сорбента по площади хроматографич. зоны, интенсивности флуоресценции компонента или его соед. с подходящим реагентом, радиохим. методами. Использ. также автоматич. сканирующие приборы, измеряющие поглощение, пропускание, отражение света или радиоактивность хроматографич. зон. Разделенные зоны можно снять с пластин вместе со слоем, десорбировать компонент в р-ритель и анализировать р-р спектрофотометрически. С помощью ТСХ можно определить в-ва в кол-вах от Ю до 10 г ошибка определения не менее 5—10% число определяемых компонентов не более 20—30. ТСХ широко использ. для разделения и анализа как неорг.,,так и орг. в-в, в т. ч. синтетических полимеров, лек. ср-в, пестицидов, аминокислот, липидов, ПАВ, витаминов, стероидов. [c.584]

Детектирование по флуоресценции применяют в биологии, медицине, форма-кологии, при анализе пищевых продуктов и контроле загрязнения окружающей среды. Флуоресцентными свойствами, т.е. способностью излучать свет (в видимой области спектра) под действием ультрафиолетового излучения, обладают многие биологически-активные вещества лекарства, витамины, стероиды. Красители, соединения с сопряженными связями, в том числе полиядерные ароматические углеводороды, также можно определять с помощью флуориметрического удетектора, при этом чувствительность определения велика. [c.155]

Рибофлавин умеренно растворим в ледяной уксусной и муравьиной кислотах [4]. Он имеет удельное вращение [а] = —114° в 0,1 н. растворе NaOH. Максимум спектра флуоресценции наблюдается при 565 нм [111. Рибофлавин в щелочной среде переходит в люмифлавин (6,7,9-триметил-изоаллоксазин), растворяющийся в хлороформе и не обладающий биологическими свойствами витамина В2. При облучении солнечным светом в нейт- [c.108]

Качественные реакции на витамин В1. Тиохром-н а я реакция. Тиамин п и елочной среде окисляется железосинеродистый калием в тиохром, обладающий 10-лубой флуоресценцией в ультрафиолетовом свете [c.100]

РИС. 2-34. Двумерная тонкослойная хроматография (в силикагеле) смесн флавинов, образовавшихся при облучении витамина рибофлавина. Появление светлых пятен на снимке обусловлено флуоресценцией соединений в ультрафиолетовом свете. Какое-то количество рибофлавина сохраняется в первоначальном виде (пятно, обозначенное RF). Стрелки указывают место нанесения образца. Для разделения в первом направлении использована смесь уксусная кислота/2-бутанон/метанол/бензол, во втором — смесь н-бутанол/уксусиая кислота/вода [147]. [c.160]

Внимание химиков сначала привлекли интенсивная оранжево-желтая окраска и яркая зеленоватая флуоресценция рибофлавина. Блайт в 1879 г. выделил витамин из молочной сыворотки, а затем другие ученые получили это же флуоресцирующее желтое соединение из куриных яиц, мыщ-цы и мочи. В конце концов была установлена идентичность всех этих соединений, которые из-за своего желтого цвета были названы флавинами. [c.255]

Количественно тиамин определяется по интенсивности флуоресценции тиохрома (см. с. 381), в который он окисляется (51—53]. Связанные формы природного витамина перед определением подвергаются предварительному ферментативному расщеплению [54 ]. При взаимодействии с диазотированной сульфаниловой кислотой в присутствии формальдегида тиамин образует красное окрашивание, интенсивность которого зависит от концентрации. Это свойство тиамина также находит применение дтя его количественного определения [55]. В синтетическом кристаллическом препарате тиамин определяется последовательным титрованием азотнокислым серебром и щелочью в присутствии бромтимолоиого синего разность между этими определениями соответствует количеству брома, связанного в виде четвертичной соли. [c.380]

На измерении флуоресценции продуктов окисления птероил-L-глутаминовой кислоты основан метод обнаружения малых количеств витамина в биологических материалах [37—39]. [c.462]

Флуорометрический метод определения витамина в пищевых продуктах (по К. А. Половолоцкой, Н. И. Зайцевой, Е.П. Скоробогатовой). Метод основан на измерении интенсивности флуоресценции раствора витамина В . В флуорометре световая энергия флуоресценции превращается при помощи фотоэлементов в электрическую, которая измеряется чувствительным гальванометром. Восстановленная форма рибофлавина утрачивает свою флуоресцирующую способность. Недостатком флуорометрического метода является то, что флуоресценция вытяжек может зависеть не только от содержания в них рибофлавина, но и от содержания других веществ. Это учитывают, дополнительно определяя в отдельной пробе флуоресценцию сопутствующих веществ после восстановления рибофлавина ( гашения флуоресценции восстановителями, например Na SaOi HjO). [c.142]

Витамин Вг-С [(рибофлавин, лактофлавин, овофла-вин) или 6,7-диметил-9-(1-с -рибитил)-изоаллоксазин эмпирическая формула 17H20O6] представляет собой оранжево-желтые иглы с молекулярным весом 376 и температурой плавления 282° С (с разложением). Плохо растворяется в воде (0,612% при 275° С 0,23% при 100° С), в метиловом, этиловом (0,0045%) и других спиртах, нерастворим в ацетоне, эфире, бензоле, хлороформе. Растворяется в соляной кислоте (0,026% в 3%-ной 0,61% в 12%-ной 2,9% в 18%-ной 6,7% в 24%-ной 18% в 30%-ной НС1). Нейтральный раствор имеет желто-зеленую флуоресценцию. Рибофлавин чувствителен к свету. Освещением в нейтральных и кислых растворах переводят рибофлавин в лумихром [c.79]

Под лампой ультрахемископа отмечают светящееся пятно витамина Bj (желто-зеленая флуоресценция ) иа хроматограммах и рассчитывают Rf. Хроматограммы разрезают иа куски длиной не более 1,5 мм и измеряют скорое ь счета каждого прямоугольника. [c.87]

При хроматографии в тонких слоях работают стандартным методом (стр. 35). К адсорбенту добавляют 2% светяш егося веш ества 78-супер , вследствие чего слои в УФ-свете в области 254 м х. флуоресцируют. Пластинки с нанесенными на них слоями должны обладать одинаковой активностью, должны иметь слой одинаковой толш ины и одинакового состава, поскольку уже небольшое различие слоев может привести к искажению и смеш ению пятен. Аналогичные аффекты могут быть вызваны также сопутствуюш ими веш ествами или слишком концентрированными растворами, вследствие перегрузки слоев. Для соблюдения стандартных условий камеры, оклеенные фильтровальной бумагой (насыш ение камеры), для каждого хроматографического анализа насыш аются свежим растворителем. Поскольку величины которые следует рассматривать как ориентировочные, могут сильно колебаться, в экстракт для сравнения необходимо добавить чистый витамин. Перед опрыскиванием хроматограммы рассматривают в коротковолновом УФ-свете (254 к[х) на поглош ение, в длинноволновом УФ-свете (365 к[х) на флуоресценцию и с помош ью лампы дневного света для установления собственной окраски. [c.213]

Тиамин (витамин В1) обычно определяют по синей флуоресценции его продукта окисления — тиохрома [4]. Образец для анализа (мясо, хлебные злаки, витаминные концентраты) после экстрагирования кислотой обрабатывают фосфатазой — ферментом, вызывающим гидролиз сложных эфиров тиаминфосфатов, которые часто присутствуют в продуктах питания. ФО Сфатазу и другие нерастворимые вещества отфильтровывают и фильтрат разбавляют до определенного объема. Берут две равные аликвотные части — одну для анализа, другую для холостого опыта. К первой прибавляют окислитель (ферри-цпанид калия) и к обеим частям — одинаковые количества едкого натра и изобутилового спирта. После встряхивания и последующего уда.ленля водного слоя спиртовой раствор исследуют в флуорометре. Всю операцию, включая и холостой опыт, повторяют с эталонным раствором тиамина. [c.63]

Свинину анализируют на содержание витамина Bi окислением последнего в тиохром. Для этого образец свинины весом 2 г экстрагируют соляной кислотой, обрабатывают фосфатазой и полученный раствор разбавляют до 100 мл. Очищают 15 мл этого раствора адсорбцией и элюирование.м при этом процессе раствор разбавляют до 25 М.Л. Из этрго раствора берут две порции по 5 мл одну из них обрабатывают феррицианидом и обе разбавляют до объема 10 мл для флуорометрического исследования. Эталонный раствор, содержащий 0,2 мкг тиамина на 1 мл, подвергают аналогичной операции с той лишь разницей, что порцию, введенную в адсорбионную колонну, после элюирования доводят до первоначального объема (т. е. до неразбавленного ). Берут две аликвотные части ио 5 мл (одну из них окисленную) для измерения флуоресценции обе части доводят до конечного объема 10 мл. Получены следующие данные [c.67]

Витамин В] (рибофлавин, лактофлавин) — оранжево-желтые кристаллы горького вкуса, водный раствор окрашен в желто-зелеиый цвет с характерной флуоресценцией. При варке пиши не разрушается. Витамин Ва входит в состав флавиновых коферментов. Широко распространен в природе как в микроорганизмах (дрожжи), так и в растительных (бобовые) и животных клетках (мясо, молоко, яичный желток). Синтезируется витамин Ва только растениями. При недостатке этого витамина развиваются дерматиты, конъюк-тивит и анемия. [c.555]

Реакциям в пленках посвящено очень много работ, мы рассмотрели только немногие из них. Другими примерами таких реакций являются реакции полимеризации, например полимеризация альдегида стеариновой кислоты [154], фотохимические процессы и различные биологические реакции. К фотохимическим реакциям, в частности, относятся разложение монослоев стеариланилида светом длиной волны 240 нм [155], фотохимическое превращение пленок эргостерола в витамин D [156], различные фотохимические реакции монослоев белков [159], фоторазложение и тушение флуоресценции в моиослоях хлорофилла [144, 158]. В очень интересной работе Виттена [159] описано частичное уменьшение площади смешанных пленок трипальмитина и цис-тио-индигового красителя вследствие изомеризации последнего в транс-форму под действием ультрафиолетового излучения. Субмонослойные пленки ненасыщенных жирных кислот и их сложных эфиров на силикагеле подвергаются самоокислению со скоростью более низкой, чем скорость аналогичной реакции в гомогенном растворе (самоокисление сопровождается хемилюминесценцией) [159а]. [c.136]

Аппарат для анализа адре- БИАН-130 налипа, норадреналина и витамина В. в растворах методом визуального сравнения интенсивности флуоресценции и растворов [c.235]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология