Активность ферментов при низких получение

Другой возможный путь получения цианобактериями в темноте энергии — гликолиз. У некоторых видов найдены все ферменты, необходимые для сбраживания глюкозы до молочной кислоты, однако образование последней, а также активности гликоли-тических ферментов низки. Кроме того, содержание АТФ в клетке в анаэробных условиях резко падает, так что, вероятно, жизнедеятельность цианобактерий только за счет субстратного фосфорилирования поддерживаться не может. [c.315]

Как видно на рис. 4, при очень низких (ниже О °С) и высоких (80-100 °С) температурах активность ферментов равна нулю. Однако при низких температурах ферменты сохраняют свою нативность и при повышении температуры у них вновь появляется каталитическая активность. В настоящее время ферменты выделяют из растворов путем лиофильной сушки, т. е. сушки в замороженном состоянии при очень низком давлении. Полученные таким образом лиофилизированные ферментные препараты хорошо сохраняются в течение длительного времени даже при комнатной температуре. [c.30]

Эти же процедуры по стандартизации следует провести с клетками культуры Б. После расчета ферментативной активности, приходящейся на единицу биомассы (1 мг или 1 мкг сухого веса или одна единица оптической плотности при 420 нм), и сравнения полученных результатов с результатами для клеток культуры А определяют удельную активность фермента, присутствующего в каждой культуре. Клетки культуры Б, подвергавшиеся катаболитной репрессии, имеют более низкую по сравнению с клетками культуры А активность р-галактозидазы на единицу биомассы. [c.394]

На рис. 77 представлено распределение ферментативных активностей по субклеточным фракциям, полученным описанным методом. Как видно из рисунка, активность ферментов, являющихся маркерами ПМ, максимальны во фракциях, полученных на 35- и 30 %-м растворах сахарозы. Уровень ингибирования общей АТФ-азной активности азидом натрия, свидетельствующий о наличии митохондриальных примесей, самый низкий для препаратов на 30 %-м растворе сахарозы. Исходя из этого для дальнейшей работы целесообразно выбирать фракцию ПМ, получаемую на 30 %-м растворе сахарозы. [c.221]

Характеристика полученных вариантов. Способность клеток расти на среде в присутствии токсических концентраций селективного агента не является свидетельством того, что полученные варианты — истинные мутанты. Для этого вновь полученные варианты оценивают по следующим параметрам 1) частота обнаружения вариантов (она должна быть низкой, 10 —10 ) 2) стабильность наследования исследуемого признака в неселективных условиях (признак должен стабильно сохраняться в ряду клеточных поколений в отсутствие селективного агента) 3) влияние предварительной обработки мутагенами на частоту обнаружения исследуемых вариантов (мутагены должны повышать частоту обнаружения устойчивых вариантов) 4) частота обнаружения ревертантов 5) отсутствие или изменение активности фермента в том случае, если селективный агент действовал непосредственно на фермент. Если варианты удовлетворяют всем этим требованиям, то с высокой вероятностью можно говорить о том, что речь идет об истинных [c.152]

В свое время считали, что значение р/Са = 4,2, полученное из рН-зависимости активности фермента, относится к карбоксильной группе боковой цепи, поскольку обычно эти группы ионизируются именно в данной области pH. Однако ближайшая к ys-25 карбоксильная группа ( Asp-158) находится от этого остатка на расстоянии 7,5 А [92], т. е. слишком далеко, чтобы выступать в роли кислотно-основного катализатора, в отличие от благоприятно расположенного имидазольного кольца His-159. Низкое значение р/Са гистидина связано в основном с тем, что этот остаток частично погружен в гидрофобную область белка. Системы, эквивалентной системе с переносом заряда, у сериновых протеаз нет имидазольное кольцо His-159 не взаимодействует с погруженной в белковую молекулу карбоксильной группой. [c.375]

Следует тем не менее подчеркнуть, что структура кристаллической решетки играет определенную роль, нанример, в эффекте связывания лизоцимом ионов металлов. Так, после вымачивания тетрагонального лизоцима в растворе Gd (III) в течение 20 часов степень заполнения активного центра ионами металлов составляла 24—38%, а в случае триклинного лизоцима эта величина составила 1,6—3,6% после вымачивания в течение 4 недель [33]. Это говорит о различной межмолекулярной упаковке белков в двух данных полиморфных формах кристаллического лизоцима. Тем не менее результаты исследования методами ЯМР [46] и рентгеноструктурными методами [2] в целом показали, что кон- формация лизоцима и ориентация функциональных групп его активного центра весьма близки (если не идентичны) в растворе и кристалле [46]. В цитируемой работе [46], однако, ие обсуждается, что рентгеноструктурный анализ был выполнен при низких или комнатных температурах, а изучение ЯМР — ири 54° С [46]. Иначе говоря, эти исследования выполняли по разные стороны от температуры конформационного перехода фермента (25—30° С 47—54]) и, следовательно, с различными конформациями лизоцима, которые заметно различаются по эффективности связывания фрагментов субстрата и, возможно, по конформации активного центра. Вопрос этот остается пока открытым в литературе, но требует более критического анализа при сопоставлении экспериментальных данных, полученных при различных условиях (в особенности, данных по изучению структуры фермента в растворе и кристаллическом состоянии). [c.158]

Получение экстракта, содержащего митохондрии. Гомогенат мышц центрифугируют в течение 10 мин при 600 и температуре 4°С для удаления обломков клеток и ядер. Надосадочную жидкость (экстракт мышц) фильтруют через четыре слоя влажной марли. Экстракт содержит гликолитические ферменты, митохондрии и микросомы. Измеряют pH и доводят его до значения 7,4. До опыта экстракт хранят при низкой температуре. Получение гомогената и экстракта рекомендуется проводить в холодной комнате и использовать в день получения, чтобы сохранить достаточно высокую активность митохондрий. [c.50]

Многие ферменты дороги и быстро теряют свою активность. Применение бактерий, микроорганизмов и биологических тканей различного происхождения позволяет устранить недостатки, присущие ферментным биосенсорам. При этом отпадает необходимость в получении и очистке ферментов. Однако такие биосенсоры имеют низкую селективность вследствие того, что микроорганизмы, ткани растений и животных являются источниками самых разнообразных ферментов. Кроме того, время отклика биосенсоров на основе тканей и микроорганизмов может быть достаточно большим. Тем не менее, в последнее время наблюдается повышенный интерес к электродам, содержащим не сами ферменты, а их первозданные источники - биологические материалы. Установлено, что тканевые срезы выполняют функцию биокатализаторов. При этом пластины биоматериала могут храниться без потери активности в течение года. [c.504]

Однако эти пигменты деградируют под действием активных окислительных механизмов [79], которые могут быть ферментативными или связанными с радикалами [23]. Даже термически денатурированные ферменты могут быть такими агентами окисления [29]. На практике наблюдались случаи, когда гомогенизация и прессование при щелочном pH снижают потери при получении препаратов зеленого протеина [3]. Кроме того, условия хранения, неблагоприятные для окисления (низкая влажность, отсутствие света, холод, инертная атмосфера, присутствие антиокислителя), также повышают устойчивость каротиноидов [72], Легко понять, что технологический и экономический эффект от [c.253]

Во-вторых, при исследовании ацетилхолинэстераз нервной ткани не исключено, что в неочищенных ферментных препаратах могут быть примеси холинэстеразы, также катализирующей гидролиз ацетилхолина. В этом случае результаты измерения Кт при применении низких концентраций ацетилхолина, когда активность примесей холинэстеразы незначительна, также более достоверны. Видимо, этими причинами объясняется то, что величины/Ст, полученные в работе [75], приблизительно в 200 раз выше, чем в работе [77]. Вероятно, значения Кт порядка 10 М наименьшие из всех известных для холинэстераз, что свидетельствует о наибольшем сродстве естественного субстрата к ферменту нервной ткани. Это вполне понятно с точки зрения физиологического значения ацетилхолина и ацетилхолинэстеразы для функций нервной системы. [c.159]

Чрезвычайно важные данные, говорящие о белковой природе ряда пищеварительных ферментов, в частности фермента желудочного сока — пепсина, были получены в лаборатории И. П. Павлова. И. П. Павловым и его учениками было впервые установлено, что ферментативная активность желудочного сока, получаемого через желудочную фистулу у собак, всегда прямо пропорциональна содержанию в соке коагулируемого белка. Низкое содержание белка в соке всегда указывало на недостаточное содержание в нем пепсина. Исходя из этих, а также и из других данных, полученных в его лаборатории, И. П. Павлов пришел к выводу, что ферменты являются белками. [c.121]

Во время обработки тканей органическими растворителями (ацетоном, спиртом и др.) при низкой температуре происходит обезвоживание, которое и приводит к разрушению клеток. Получаемые при этом сухие ацетоновые препараты могут долгое время храниться без потери ферментативной активности и служат хорошим исходным материалом для получения и высокой очистки многих ферментных белков. Автолиз клеток, их разрушение действием лизоцима или иных добавляемых извне ферментов часто применяют при обработке дрожжей, бактерий, микроскопических грибов. Дефект этих приемов в том, что в получаемых растворах выделяемый белок бывает довольно сильно загрязнен побочными веществами. При использовании таких методов, т. е. при использовании эндогенных и экзогенных разрушающих фер- [c.140]

Направленная селекция микроорганизмов — продуцентов ферментов. Цель ее — получение у микробов ферментных систем в больших количествах, высокой активности, а также обладающих специальными свойствами — высокой или, наоборот, низкой стабильностью, нужным комплексом ферментов при заданном соотношении активностей и т. п. Важным при селекции является постоянство (устойчивость) полученных изменений, выяснение условий образования новых форм, изучение их физиологии — питания, дыхания, энергетики и т. п. [c.327]

Методика опыта. В мерную колбу емкостью 100 мл отмеря пипеткой Мора 5 мл ферментной вытяжки (фильтрата), доводят дис1 лированной водой до метки и перемешивают (при низкой активное ферментов вытяжку не разбавляют). Из полученного раствора в четы [c.98]

Глицерофосфатдегндрогеназная активность была обнаружена Эйлером и его сотрудниками в мышцах крыс. Кристаллический фермент был получен Барановским из мышц кролика. В настоящее время фермент обнаружен во многих органах и тканях (сердечная и скелетные мышцы, печень, почки, мозг и др.). Высокой активностью он обладает в летательных мышцах насекомых, активность его в скелетных мышца позвоночных животных намного выше, чем в сердечной мышце и почках, низкая активность в мозге. [c.102]

Изучение уровня порфобилиноген-дезаминазы при острой перемежаюшейся-порфирии показало, что значения активности этого фермента, характерные для 30% контрольной (т. е. нормальной) популяции, перекрываются со значениями, полученными на выборке несомненных гетерозигот, страдаюших острой перемежаюшейся пор-фирией (1) (табл. 4.11). Только у 20% гетерозигот уровень фермента был ниже, чем у всех представителей контрольной популяции. Рассмотрим модельный случай, когда у людей различных групп установлена одна и та же активность фермента-95 единиц (табл. 4.11). В соответствии с априорными оценками вероятности (табл. 4.11, А) общая оценка вероятности носительства гена порфирии составит а) 0,07% для человека из обшей популяции без каких-либо симптомов б) 7% для человека с 1%-ным риском в) 44% для лиц с 10%-ным априорным риском и г) 87% для близкого родственника больного с 50%-ным риском. Эти данные показывают значительную неопределенность диагноза в том случае, когда не может быть получена надежная априорная оценка вероятности заболевания. Надо отметить, что повторные измерения не всегда делают окончательную оценку более точной. При очень низких и очень высоких уровнях фермента интерпретация отличается, если, как в нашем примере, для большого числа нормальных и гетерозиготных особей известны уровни активности фермента. [c.59]

Установлено, что при низких значениях pH у С. асе1оЬШуИ-сит увеличивается активность ферментов, катализирующих превращение ацетоацетил-КоА в ацетон (рис. 24.2) и больше НАДН используется на восстановление бутирил-КоА до бутанола. Кроме того, бутанол может частично синтезироваться из ранее образованной масляной кислоты, вновь поступающей в клетки из среды и превращающейся в бутирил-КоА. Поэтому для получения в большом количестве нейтральных продуктов важно соблюдать определенные условия процесса брожения. [c.472]

Выявлено, что при окислении медленно окисляемых субстратов, таких как аскорбиновая кислота, в механизме действия пероксидазы заложен сложный регуляторный механизм, имеющий биологическое значение. В основе этого механизма лежит способность самих субстратов регулировать процесс окисления. При этом аскорбиновая кислота, являющаяся основным антиоксидантом растений, может активировать реакции собственного пероксидазного окисления. Предложено, что данный регуляторный механизм обеспечивает выполнение избирательной антиоксидантной функции пероксидазы в растениях. Установлено биологическое значение эффекта активации пероксидазы в реакциях окисления медленно окисляемого субстрата в присутствии быстро окисляемого и ингибирование активности фермента высокими концентрациями субстрата. Выявленные закономерности позволяют понять механизм действия большого количества соединений, используемых в предпосевной обработке семян и обладающих стимулирующим, ретардантным, ингибирующим действием в отдельности, а также в различных сочетаниях. Пероксидаза входит в состав комплекса ферментов, катализирующих окисление различных соединений, используемых в аэробных метаболических процессах, интенсивность которых возрастает в процессе набухания и прорастания семян. До сих пор являются спорными вопросы относительно эффектов активирования всхожести семян низкими концентрациями соединений и механизмы понижения всхожести семян высокими концентрациями веществ. На основании полученных данных мы предложили механизм участия пероксидазы в этих процессах. Поскольку фермент является показателем проте- [c.69]

Для изучения четвертичной структуры НАД-киназы из скелетных мышц кролика использовали препараты фермента, очищенные в 150—300 раз. Тремя независимыми методами электрофорезом в однородном геле и в градиенте концентрации полиакриламидного геля, путем разделения в тонком слое сефадекса С-200, с помощью гель-фильтрации через колонку с сефадексом С-200 — была обнаружена большая гетерогенность препарата в отношении НАД-киназы [2, 4]. Локализацию фермента в геле определяли по измерению активности в элюатах, полученных после разрезания столбика геля на диски толщиной 2 мм. При это оказалось, что по данным диск-электрофореза в однородном геле ферментативной активностью обладают четыре зоны, характеризующиеся значениями Rf 0,1, 0,52, 0,73 и 0,98. Повторный электрофорез белка с электрофоретической подвижностью, близкой к 1,0, после его элюции и кондентрирования обнаружил несколько белков с более низким, чем у исходного, значением Rf (0,73, 0,52, 0,07). [c.137]

Важное значение в процессе получения биомассы дрожжей имеет pH среды. Активная кислотность среды воздействует на образование и активность ферментов, от которых зависят рост, размножение и накопление синтезируемых клетками продуктов. Она действует на микроорганизмы как непосредственно путем влияния на клетку ионов водорода и гидроксильных ионов, так и косвенно--изменяя степень диссоциации веществ среды, их растворимость и другие свойства (Weide, 1987). Дрожжи рода andida способны развиваться в довольно широком интервале значений pH — от 2,5 до 8,8. Однако зона интенсивного роста микроорганизмов лежит в более узких границах значений pH, характерных для определенных видов и штаммов, а также зависит от состава среды и условий выращивания (Родионова, Родина, 1971 б). На гидролизатах растительного сырья интенсивное накопление биомассы дрожжей отмечено при pH 5—6. Отдельные штаммы дрожжей хорошо растут при низких [c.34]

Эти величины являются сложными, включающими Км, кз и ряд других констант уравнения Михаэлиса, и не могут быть использованы для получения индивидуальных констант. В тех случаях, в которых были получены индивидуальные константы [109], величины Ез оказались низкими и по порядку величины равными 5 —15 ккал/молъ. Интересно отметить, что хотя ферменты, выделенные из разных биологических объектов, могут отличаться по своей активности, однако температурная зависимость констант скоростей дает одинаковую для всех случаев энергию активации [110]. [c.564]

Флавиновый фермент имеет нормальный потенциал —0,06 в (гпггересно, что белок, входящий в состав фермента, снижает потенциал активной небелковой части фермента от —0,208 до —0,06 в). Этот фермент мол<ет восстанавливать редокс-системы только с более высокими потенциалами, в частности цитохромы, а окислять системы с более низкими потенциалами (н приведенной схеме — коде-гидразу). Это обстоятельство объясняет, почему в данной схеме перенос электронов и протонов происходит сверху вниз в с.дучае обратного процесса должно было бы протекать восстановление систем с более низким потенциалом, что противоречит изложенной теории. Кроме того, строгая последовательность ферментов в цепи окисления исключает резкую разницу между потенциалами двух взаимодействующих систем, а это обусловливает постепенное выделение энергии окисления. Указанные особенности биологического окисления позволяют организму более полно регулировать получение и использование энергии. [c.55]

Для двух оставшихся классов протеолитических ферментов характерны совершенно другие механизмы действия. Пепсин [73] является основным компонентом группы протеолитических ферментов, активных в желудке при низких значениях pH. Хотя пепсин был вторым по времени ферментом, полученным в кристаллическом состоянии (1926 г.), детали его трехмерной структуры стали известны только в последнее время. Свиной пепсин содержит одну полипептидную цепь из 327 аминокислотных остатков известной последовательности. Для нее характерно наличие большого количества (29) аминокислотных остатков, содержащ,их карбоксильную группу, и, как полагают, две или три из них принимают участие в катализе. Так, фермент инактивируется диаз.о-метаном при pH 5,5, хотя для этого и требуется избыток реагента, а для полной инактивации необходима этерификация пяти карбоксильных групп. Более специфичными ингибиторами являются диазокетоны — аналоги субстрата. Toзил-L-фeнилaлaнилди-азометан (45), например, быстро ингибирует фермент в соотношении 1 1 [74] (схема (38) . [c.500]

Хорошие результаты дает использование сульфат-изопропило-вого способа выделения целлюлазы из культуральной жидкости. В качестве оптимальных условии выделения целлюлолитических ферментов можно считать следующие температура 4—15°С, исходный pH культуральной жидкости 7—8, длительность высаливания сульфатом аммония 12—16 ч, концентрация изопропанола 10%. При этом выход фермента по активности достигает 75— 80%, а активность полученного ферментного препарата составляет 1 — 1000 Сз — ИЗО и Сж — 3900 ед./г. Лучшим методом сушки, обеспечивающим максимальную стабильность препарата является лиофильная или вакуумная сушка при относительно низкой температуре. [c.201]

Стадии предобработки сырья, получения целлюлаз и, особен-10, ферментативного гидролиза и регенерации ферментов является ключевыми, и именно здесь встречаются наибольшие труд-юсти, связанные с низкой удельной активностью ферментных трепаратов целлюлаз, низкой реакционной способностью сырья, ложностью и дороговизной традиционных методов регенерации ферментов. [c.185]

При гидролитическом прогоркании происходит гидролиз жира (триацилглицеринов) с образованием свободных жирных кислот. Химизм этого процесса был рассмотрен ранее. Автокаталитиче-ский гидролиз протекает с участием растворенной в жире воды скорость его при обычных температурах невелика. Ферментативный гидролиз происходит при участии фермента липазы на поверхности соприкосновения жира и воды и возрастает при эмульгировании. При получении жира и во многих других процессах пищевой технологии липазы инактивизируются (теряют свою активность), поэтому гидролитическое прогоркание, активно идущее при хранении липидсодержащего сырья и некоторых продуктов, не оказывает большого влияния на качество ряда хранящихся жиров и масел. Необходимо также отметить, что приобретение неприятного вкуса и запаха наблюдается при гидролизе жиров, содержащих низко- и среднемолекулярные кислоты (например, кокосового и пальмового масел), которые обладают неприятным запахом и вкусом. Высокомолекулярные кислоты вкуса и запаха не имеют (а именно они содержатся в большинстве масел и жиров) и повышение их содержания не приводит к изменению вкуса масел. [c.35]

Влияние на ферментативную активность гидрофобности носителя исследовано Иохансоном и Мосбахом [26]. На матрицах с различной степенью гидрофобности (полученных с использованием сополимера акриламид—метилметакрилат) была иммобилизована алкогольдегидрогеназа. Кт(каж) для н-бутанола в качестве субстрата смещались в сторону более низких значений пропорционально возрастанию гидрофобного характера препаратов сополимера, с которым фермент был связан. [c.431]

Из тканей млекопитающих был получен только один препарат оксидазы L-аминокислот он был выделен из почек крысы Бланшаром и сотрудниками [118]. Этот фермент, катализирующий окисление 13 L-аминокислот (см. табл. 18), был подвергнут очистке найдено, что его число оборотов равно примерно 6. Он отличается от остальных общих аминокислотных оксидаз тем, что его коферментом служит рибофлавинфосфат. Примечательное свойство этого фермента состоит в том, что он окисляет L-a-оксикислоты несколько быстрее, чем L-аминокислоты. Субстратная специфичность фермента по отношению к аминокислотам сходна со специфичностью оксидазы D-аминокислот для обоих ферментов характерно очень медленное окисление дикарбоновых аминокислот и диаминокислот. Помимо почек, оксидаза L-аминокислот в других тканях животных не найдена. Представляется маловероятным, чтобы фермент, столь мало распространенный и обладающий такой низкой активностью, мог играть существенную роль в общем процессе дезаминирования L-аминокислот у млекопитающих. [c.187]

Наиболее удобной для этой цели оказалась амилаза плесневых грибов. Она значительно превосходит амилазу, полученную из растительного сырья или бактерий. Низкая температура инактивации а-амилазы грибов (около 70°С) позволяет применять этОт фермент в значительных количествах без заметной декстри-низации крахмала при выпечке. Благодаря значительной активности удается быстро получить требуемое количество сахара, после чего фермент сразу инактивируется. Бактериальные же [c.226]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология