Элюирование в хроматографии на бумаге

ДНК, очищали ее, гидролизовали до оснований и проводили хроматографию [47], В элюированных с бумаги пятнах определяли радиоактивность, соответствующую С-метионину. Аденин, гуанин, тимин и 5-метилцитозин обнаруживали большую радиоактивность в фазе 5 клеточного цикла. Цитозин не метился. Метилирование ДНК, прослеженное по метке 5-метилцитозина, проходило параллельно с синтезом ДНК, о котором судили по включению метки в аденин, гуанин и тимин (рис, 13). Метка в этих трех основаниях в сопоставлении с меткой в 5-метилцитозине служила, таким образом, надежным внутренним контролем при установлении корреляции между синтезом и метилированием ДНК. [c.36]

Щелочно-земельные металлы. Ионы Са, 5г, Ва и Mg можно разделить методом круговой хроматографии на непропитанной бумаге при элюировании смесью метанола и этанола (1 1) и обнаружить, например, с помощью виолуровой кислоты или 8-оксихинолина. [c.242]

Количественное определение аминокислот методом распределительной хроматографии на бумаге. Цель работы — определить концентрацию аминокислоты в анализируемом растворе методом колориметрического анализа раствора, полученного при элюировании хроматографического пятна. [c.529]

Далее колонку с сефадексом А-25 промывали растворами муравьиной кислоты (по 4 л) возрастающих концентраций от О до 0,1 н. и затем 0,5 л 2 н. раствора НСООН. Вещества, полученные элюированием 2 н. раствором муравьиной кислоты, разделяли хроматографией на бумаге с растворителем этилацетат—уксусная кислота—муравьиная кислота—вода (18 3 1 4). На хроматограммах после проявления был обнаружен ряд пятен, соответствующих кислым олигосахаридам. [c.125]

При исследовании гидролизата методом хроматографии на бумаге обнаружены 3,4-ди-0-метил-Д-ксилоза и 2,3,4-три-0-метил-0-глюкоза. Смесь этих метил-, производных разделяли на колонке с углем элюированием 20%-ным водным [c.131]

Для упрощения переноса исследуемого материала из одной системы разделения в другую предложен прием пришивания , который используют при электрофорезе на бумаге, анализируя пептидные карты. Участок фильтровальной бумаги, содержащий фракцию исследуемого материала, выделенную хроматографией или электрофорезом, вырезают и затем пришивают на швейной машине к новому листу фильтровальной бумаги. Этим приемом устраняется необходимость элюирования, которое обычно сопровождается нежелательными потерями материала. Фактически можно ограничиться элюированием только на конечном этапе очистки. [c.96]

Разделение взаимодействий в 2М-спектроскопии можно сравнить с двумерной хроматографией. В одномерной тонкослойной хроматограмме или хроматограмме на бумаге разделение составных частей смеси при элюировании тем или иным растворителем часто оказывается неполным. Полного разделения компонентов можно достичь при элюировании исследуемого вещества вторым растворителем в направлении, перпендикулярном исходному. [c.428]

В плане этих общих подходов электромиграционный метод близок к хроматографии (те же два основных направления повышения эффективности разделения) — поиск методических приемов лучшего разрешения зон при постоянных Кс и использование химических превращений с целью увеличения Кс. Похожи и основные схемы практического осуществления процесса разделения на колонке, на бумаге, в тонком слое. Возникший на заре развития электромиграции метод подвижной границы внешне аналогичен фронтальному анализу в хроматографии. В этом случае движение разделяемых ионов в электрическом поле происходит непосредственно из раствора их смеси. В наиболее распространенном случае зонного электрофореза просматривается общность с проявительным режимом элюирования в хроматографии. Узкая полоса исходной смеси веществ в среде определенного электролита разделяется на индивидуальные зоны. Существует внешняя аналогия противоточного и двухмерного электромиграционного разделения с соответствующими способами осуществления хроматографического процесса. Поэтому при всем принципиальном различии методов по природе химических процессов, лежащих в их основе, хроматографию и электрофорез иногда даже рассматривают как смежные методы [95]. [c.243]

К недостаткам адсорбционной хроматографии можно отнести большую продолжительность элюирования, необходимую для удовлетворительного разделения компонентов смесей, и искажение зон компонентов за счет диффузии в массе сорбента. Если применять достаточно маленькие колонки, оба этих недостатка можно свести к минимуму. Предельное уменьшение массы целлюлозного сорбента достигается при использовании полосок фильтровальной бумаги. Преимущества такого сорбента вполне очевидны, поскольку в этом случае применяются тонкие слои сорбента, и хроматограмма быстро развивается, что уменьшает влияние диффузии. Эти преимущества позволили предложить новый хроматографический метод. [c.461]

В результате в литературе накоплен большой объем информации по хроматографии на бумаге или в тонких слоях, пропитанных различными неподвижными фазами с последующим элюированием растворами разного состава. Эти данные охватывают не только почти все экстракционные системы, которые в настоящее время уже используются в колонках, но также системы, которые пока еще в колоночных методах разделения не применяются. [c.461]

Элюирование проводят восходящими, нисходящими и горизонтальными методами. Методики нанесения пятен и детектирования элементов аналогичны уже описанным для хроматографии на бумаге. Здесь также справедливы замечания об окрашенных реагентах для детектирования элементов. Тонкослойные хроматограммы следует сушить в сушильном шкафу, а не в струе воздуха, что достаточно при работе с бумагой. [c.464]

Редкоземельные металлы разделяют на бумаге, пропитанной нонообменни-ками или нитратом аммония. На сильнокислой катнонообменной бумаге 8а-2 можно разделить лантан, церий и неодим методом центрифужной круговой хроматографии, используя для элюирования 0,4 М раствор гликолята (pH 3,76). Смесь Се, Рг, N(1, 8т, и 0(1 разделяют на анионообменной бумаге Ватман ОЕ-20 в растворе 0,15 М азотной кислоты в 99%-ном метаноле (Л/ Се — 0,06 Рг — 0,12 N(1 — 0,21 51т — 0,40 0(1 — 0,60). Для разделения 10 редкоземельных элементов и иттрия использую бумагу, пропитанную 10%-ным раствором нитрата аммония. Эллюируют пробу смесью ацетона и эфира (1 1) с добавками роданида аммония и соляной кислоты, а обнаруживают опрыскиванием насыщенным раствором ализарина в 90%-ном спирте. Порядок расположения пятен элементов соответствует порядку возрастания их атомных масс. Значения / , увеличиваются в ряду Ьа (0,08) Се (0,11) Рг(0,16) N(1 (0,20) 5т (0,31) 0(1 (0,44) V (0,49) Оу (0,50) Ег (0,56) Ь (0,59) Тт (0,90). [c.242]

В табл. 1-10 приведень значения -Ку и Rj протеиногеннЬ1Х аминокислот, полученные при хроматографии на бумаге шляйхер-шюль 2043 Ь в системах бутанол — уксусная кислота — вода (4 1 1) и бутанол — изомасляная кислота — уксусная кислота — вода (5 0,5 0,7 5). Значения Р зультаты трехкратного элюирования. Значения коэффициентов удерживания воспроизводятся, если хроматографирование идет в направлении волокна бумаги. [c.57]

В работе Гросса [5] описано получение S-этил-1-С -/-гомоци-стеина из йодистого этила-1- и 8-бензил-/-гомоцистеина. Исходное вещество (1,14 г), полученное из метионина через 8-бен-зил- /-гомоцистеин [6] и Ы-ацетил-5-бензил- /-гомоцистеин [7], восстанавливают металлическим натрием в жидком аммиаке, и образовавшийся меркаптид обрабатывают 0,63 г йодистого этила-ЬС Прибор для проведения реакции представляет собой модификацию прибора, о котором идет речь в примечании 2. Вещество, оставшееся после испарения аммиака, растворяют в воде, и полученный раствор подкисляют соляной кислотой до pH 1—2, затем этот раствор пропускают через колонку [8] (высота 2,5 м, диаметр 22 см), наполненную ионообменной смолой дауэкс-50 (степень сшивания 8%) с величиной зерен 200—400 меш. Фракции, содержащие продукт реакции, полученные при элюировании 2,5 н, соляной кислотой, объединяют и испаряют при пониженном давлении. Остаток растворяют в воде и с помощью раствора едкого натра создают среду с pH 6,2. Для очистки вещество сублимируют при температуре 180—200° и давлении 1 мм рт. ст. Выход 0,400 г (60%),[а]д + 23°, концентрация 1% в 2 н. растворе соляной кислоты. Методом бумажной хроматографии в системе бутиловый спирт — вода— уксусная кислота (10 5 2) или в системе третичный амиловый спирт — вода — пиридин (7 6 8) при температуре 22—25° на бумаге ватман № 4 показано, что вещество состоит из свободной аминокислоты и радиохимических примесей RjSi,61 и 0,61 соответственно. [c.218]

Ненасыщенная обычная камера. Первые работы в области 10ИК0СЛ0ЙН0Й хроматографии проводились при использовании ненасыщенных обычных камер, в которые не вкладывалась фильтровальная бумага. Лишь в 1959 г. Шталь предложил обкладывать стенки камеры фильтровальной бумагой, чтобы устранить предполагаемые краевые эффекты на хроматограмме. Когда в камеру залит растворитель, в газовой фазе начинает формироваться градиент через 10 мин насыщение камеры оказывается полным в нижней трети, составляет примерно 80% (от полного) в середине, но на насыщение верхних частей камеры с высотой 25 см уходит более часа. Следовательно, во время элюирования растворитель испаряется только из верхних зон слоя (близких к фронту). [c.101]

Предварительное насыщение слоя молекулами из газовой фазы (из атмосферы камеры) не является ни новинкой, ни специфичной особенностью тонкослойной хроматографии еше в бумажной хроматографии стандартным приемом считалось "уравновешивание" бумаги перед началом элюирования. При обеспечении- равновесия со всеми компонентами газовой фазы такое равновесное состояние оказывалось столь же сложным, как и состав самих подвижных фаз, обычно употреблявшихся в бумажной хроматографии. Бунгенберг, Де Джонг и Хогивин [162] бьши среди первых специалистов, обративших внимание на необходимость специального предварительного насыщения в бумажной хроматографии и пользовавшихся таким подходом для сглаживания градиентов, обусловленных расслоением подвижной фазы [c.107]

Хроматография. Фракционируемый материал растворяют с таким расчетом, чтобы 15 мг содержалось примерно в 30—40 мл растворителя, pH раствора подводят до 5—6 и раствор медленно наносят на колонку. После нанесения образца через колонку пропускают равный объем дистиллированной воды, а затем начинают элюирование 0,1 н. НС1. Скорость элюирования должна быть примерно вдвое меньше скорости нанесения фракционируемого материала. Вытекающий с колонки элюат собирают фракциями в пробирки по 1 мл. За ходом элюирования можно следить с помощью нингидриновой реакции, которую ставят с аликвотами фракций на фильтровальной бумаге начиная с 11-ой пробирки 1 каплю каждой фракции [c.195]

Б. Известное количество изучаецрй ДНФ-фракции хроматографируют на бумаге в условиях, необходимых для данного ДНФ-производного. Пробы контрольного препарата, содержащие различное количество вещества, хроматографируют на том же листе бумаги. По окончании хроматографии пятна ДНФ-аминокислот вырезают вместе с контрольными, бумагу измельчают на мелкие кусочки и помещают в пробирки. В каждую пробирку наливают по 5 мл 1 %-ного раствора NaH XDa и в течение 30 мин при периодическом встряхивании в темноте производят элюирование проб. Экстинкцию растворов при 360 нм измеряют в спектрофотометре. Содержание ДНФ-аминокислот в исследуемой фракции определяют по калибровочной кривой, построенной для контрольных образцов. [c.272]

Кетокислоты в растительных продуктах можно определить методом распределительной хроматографии на бумаге, разработанным И. А. Егоровым и М. Б. Борисовой для анализа кетокислот в вине. В основу этого метода положена реакция образования гидразонов кислот при взаимодействии их с фенилгидразином. Гидразоны разделяют с помощью бумажной двухмерной хроматографии. Количество гидразона каждой отдельно выделенной кетокислоты, в том числе и пировиноградной, определяется после элюирования пятен в фотоэлектроколориметре по цветной реакции гидразона с NaOH. Р. Я- Школьник (1954) разработал метод количественного разделения органических кислот с помощью распределительной хроматографии иа силикагеле. Этот метод применяют для разделения кислот, находящихся в растительных тканях. Разделение кислот ведут на хроматографической колонке. Элюируемые кислоты титруют 0,01 н. спиртовым раствором NaOH. [c.215]

V NH4OH (2 1 2) [7571 ацетон—пиридин—вода (4 2 1) [380]. На бумаге Ватман № 3 последняя из названных ПФ обеспечивает высокую эффективность разделения. Как и в предыдущих случаях, разделение осуществляют методом восходящей хроматографии полоски бумаги длиной 60 см и шириной 2,6 см с нанесенной на них анализируемой смесью помещают в вертикальном положении в стеклянные цилиндры с ПФ. После 24 час. хроматографирования полоски бумаги сушат, кондиционируют 30 мин. в атмосфере с влажностью 90% и проявляют 1 %-ным раствором AgNOg, а после освещения дневным светом измеряют Rf. Для ионов F , СГ, Вг и значения Rf соответственно равны О, 0,20 + 0,03, 0,36 + 0,06 и 0,69 0,06. В случае необходимости количественного анализа каждую зону после проявления элюируют 25 мл воды и измеряют радиочастотное сопротивление полученного раствора. В других случаях количественный анализ выполняют после сухого или влажного сожжения проявленных пятен в этнх методах отпадают возможные погрешности за счет неполноты элюирования. [c.65]

Метод разделения перекисей с помощью бумажной хроматографии разработан Рихе и Шульцем В работе применялась частично ацетилированная фильтровальная бумага, смесь этилацетат— диоксан — вода (2,0 4,5 4,6) для элюирования и раствор солянокислого п-аминодиметиланилина в водном метаноле — для проявления. В результате были определены значения Р/ для ряда перекисей и установлена возможность разделения изомерных соединений, например двух гидроперекисей (1П) и (IV), образующихся при окислении 1, 2-диметилциклогексена и двух изомерных гидроперекисей, полученных [ТТметилолеата. Успешно была разделена смесь перекисей (V) и (VI), присутствующая в технической перекиси циклогексанона , а также различные перекиси, полученные прн аутоокнслении 1-метил-фталана (VII—XI и перекись водорода). [c.439]

Качество полученных азотолов характеризуют бумажной хроматографией. Для этого хроматографическую бумагу сначала обрабатывают 10 /о-ным раствором 1-бромнафталина в хлороформе. После того как растворитель испарится, наносят микрокаплю 0,5— 1 %-ного испытуемого раствора арилида в 50%-ном водном растворе пиридина или бензола. Элюирование ведут 1-бромнафталином, насыщенным 80%-ной уксусной кислотой. Сушат хроматограмму иа воздухе при комнатной температуре, а просматривают при ультрафиолетовом освещении или проявляют О, 1%-ным раствором 1-диазо-2-хлор-4-нитробензолом, с которым азотолы дают красное окрашивание. Проявление можно вести также и другими диазосоединениямн. [c.103]

Эти методы применяют для быстрой и селективной идентификации аскорбиновой кислоты в смеси витаминов. Количественное определение, как и в случае хроматографии на бумаге [34], следует проводить титрометрически или фотометрически после локализации пятна (непосредственной или с использованием метода направляЬзщей полосы), соскабливания и элюирования. Таким способом Штрогеккер [55] определил аскорбиновую кислоту в продуктах питания в смеси с растворимыми углеводами, соскабливая окрашенные в кирпично-красный цвет пятна динитрофенилгидразона аскорбиновой кислоты, элюируя 85 %-ным раствором серной кислоты, фильтруя и фото-метрируя. [c.247]

Для разделения этой смеси использовалась бумажная хроматография. В качестве подвижной фазы для элюирования использовались толуол, этиловый спирт и четыреххлористый углерод. Из окисляющегося углеводородного раствора фенола отбирались пробы и наносились в виде полоски вблизи нижнего края ленты фильтровальной бумаги. После высушивания лента опускалась нижним краем в растворитель, служащий подвижной фазой. Наилучшее разделение происходило при элюировании 96%-ным этиловым спиртом. В этом случае нанесенная полоска раствора окисленного фенола четко разделялась на два фронта нижний — оранжевый, с = О, и верхний — желтый, Rf 1. Типичная хроматограмма приведена на рис. 54. После высушивания хроматограмма разделялась на участки, каждый из которых помещался в резонатор спектрометра ЭПР, а затем записывались спектры ЭПР. Показано, что первый, желтый участок хроматограммы дает спектр ЭПР, в точности совпадающий со спектром ЭПР первичного радикала (рис. 9,а,стр. 57).Второй, оранжевый участок дает спектр, представляющий собой несколько асимметричный дублет с соотношением интенсивностей 1 1 и расщеплением 14,5 э (рис. 55,а). После смачивания этого участка бумаги растворителем (бензол, толуол, ССЦ) этот спектр превращался в другой, изображенный на рис. 55,6. Как мы видели ранее, такой спектр дают радикалы фенола, образующегося в качестве основного продукта при окислении 2,6-дитретбутил-4-метил-фенола в результате изомеризации его первичных радикалов. [c.164]

С целью быстрой качественно оценки природы неизвестных и.ли разделенных другими методами фракций жирных кислот могут быть также применены методы бумажной [224, 331 ] или тонкослойной хроматографии [224, 330 ] с использованием в качестве стационарной фазы слоя карбамида. Для проведения бумажного хроматографирования полосы целлюлозной бумаги (200x30 мм) пропитывают 20%-ным раствором карбамида в метаноле и высушивают на воздухе. После нанесения исследуемой смеси жирных кислот в свободном виде проводят элюирование обычным путем в камере с 20 /о-ным раствором карбамида. Для цветового проявления полосы опрыскивают этанольным раствором бромкрезолового пурпурного и выдерживают в парах аммиака, на голубовато-фиолетовом фоне проявляются желтые пятна. [c.151]

Разработан спектрофотометрический метод количественного определения серпентина в препарате раунатин и корнях раувольфии змеиной. Методика заключается в разделении выделенной из растительного материала суммы алкалоидов методом хроматографии на бумаге в системе растворителей хлороформ — изопропиловый спирт (20 1), насыщенной формамидом,. элюировании серпентина из пятна хроматограммы этанолом с последующим количественным определением серпентина спектрофотометрически при длине волны 308 нм. [c.348]

Моноалкильные производные можно обнаружить при помощи простой хроматографичеокой методики. Разработанный Харди и Скардилом метод восходящей хроматографии [28] позволяет определять до 0,5% (объемных) моноалкильного производного в Д2ЭГФК на бумаге ватман № 3 (длина полосы 20—30 ом) при элюировании свежеприготовленной смесью равных объемов -бу- [c.119]

На рис. 2 (верхний) приведены 7 /-спектры четырех элементов, полученные методом восходящей хроматографии на бумаге, обработанной Д2ЭГФК. Кроме того, с помощью этого же метода установлено, что пятно алюминия Rf > 0 имеет неправильную форму и сопровождается хвостом, галлий дает два пятна при элюировании 5,5—6,5 М соляной кислотой, т. е. такой элюент соответствует области концентрации кислоты, где значения Rf резко уменьшаются вследствие сильной сольватации комплекса галлия молекулами экстрагента, который координируется своими Р —нО-груп-пами. В этой области концентраций кислоты Rf одного из пятен [c.477]

Двойной пик на кривой элюирования галлия, очевидно, прямо связан с двойным пятном, наблюдаемым на бумаге при элюировании концентрированной соляной кислотой. Хроматография на бумаге, обработанной Д2 ЭГФК, позволила объяснить причину появления двойных пятен. Использование для нанесения исходного пятна галлия растворов этого элемента в соляной кислоте различной концентрации и элюирование 5,5—6,5 М кислотой сразу после нанесения пятна показало, что пятно галлия на хроматограмме с Rp близким к 1, отсутствует, если исходный раствор [c.479]

Исследована возможность использования кислот (капроновой, каприловой, пеларгоновой и олеиновой) для экстракционной хроматографии на бумаге при элюировании хлоридными растворами с pH 1—9. Получены i - пeктpы приблизительно 15 элементов [35]. Опубликованы также i /- neKTpbi нескольких элементов (Fe, Со, N1, Zn) на бумаге, обработанной стеариновой, элаидиновой или олеиновой кислотами, при элюировании ацетатными буферными растворами с pH 4—5,5. Несмотря на то что в системах с кислотами обнаружены необычная селективность для висмута, железа (П1) и тория, экстрагенты этого класса ни разу не использовались в качестве неподвижных фаз в колоночной хроматографии. [c.484]

Спектры для систем с три-н-бутилфосфатом (ТБФ) в качестве неподвижной фазы и при элюировании 0,5—12 М НС1 получены на разных носителях, а именно на бумаге [22, 37—40], целлюлозе [1, 41, 42] и тонких слоях силикагеля [43]. Опубликованы также результаты исследования хроматографии некоторых металлов на тонких слоях сополимера винилхлорида и винилаце-тата (корвик) [44]. Если учесть, что методы существенно различаются между собой, то необходимо считать, что результаты хорошо согласуются [6], Тонкие слои, например, целлюлозы удерживают больше ТБФ, чем силикагель, и, таким образом, удерживающая способность целлюлозы выше. /-Спектры элементов, полученные на тонких слоях целлюлозы и силикагеля, представлены на рис. 5. [c.484]

Большой объем информации имеется по хроматографии на бумаге, обработанной ТОФО, и при элюировании 0,1—4 М H2SO4 [4] и на тонких слоях силикагеля при элюировании 0,2—9 М НВг, а также 2—10 М LiBr, содержащими 0,5 моль/л НВг [53]. Опубликованы также результаты, полученные при использовании в качестве элюентов 0,5 и 3 М растворов H IO4 [39, 40]. [c.488]

Исследован также ряд экстракционно-хроматографических систем с аминами при использовании в качестве подвижных фаз растворов хлоридов. Поведение 18 элементов изучено на тонких слоях силикагеля, обработанных ТОА или амберлитом LA-1, и при элюировании 1—10 или 1—8 М Li l, содержащими 0,1 моль/л H IO4 [63], Исследована хроматография нескольких элементов при использовании следующих аминов амберлита LA-1, алами-на-336 или адогена-464 [Си(П), Со, Мп(П), Zn, Fe(IlI)] на бумаге и силикагеле при элюировании подкисленными 0,5—11 М рас- [c.489]

Систематически изучена хроматография примерно 40 элементов на бумаге, обработанной ТОА или амберлитом LA-2, при элюировании 0,5—5МНВг, 0,6—6М NaBr (pH 2) или 0,5—7MNaI, а также на силикагеле (в тонких слоях), обработанном аламином-336, амберлитом LA-1 и амином праймен JM-T, при элюировании 0,2— [c.491]

Исследована хроматография на силикагеле, обработанном ТОА или амберлитом LA-1, при элюировании 0,1—4 и 0,1—7 М K N соответственно при этом получены /-спектры около 20 элементов [63]. При использовании в качестве элюентов растворов азотной кислоты значения R/ для большинства элементов довольно высоки. Систематически изучено поведение большого числа ионов при элюировании 1—10 М HNO3 на бумаге, обработанной гекса- [c.492]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология