Нуклеиновые кислоты адсорбция

МОНОМОЛЕКУЛЯРНЫЙ СЛОЙ — слой толщиной в одну молекулу, образуется на границе раздела фаз в результате адсорбции или нанесения вещества при помощи легкого растворителя и поверхностной диффузии. Нанесение М. с. имеет большое практическое значение для снижения испарения воды, изучения строения нуклеиновых кислот, моделирования процессов проникновения отравляющих веществ и многих других явлений. [c.164]

Многократное повторение актов адсорбции и десорбции при течении раствора через слой адсорбента приводит к отставанию наиболее поверхностно-активных компонентов, что позволяет определить их содержание в исходном растворе или отделить их от других, менее адсорбционно-активных веществ. Методы адсорбционной хроматографии широко применяются для фракционирования аминокислот, нуклеиновых кислот, белков и других биополимеров, для выделения различных ферментов и лекарственных препаратов (пенициллина, тетрациклина, алкалоидов и др.). [c.93]

В настоящее время накоплен обширный материал об электрохимических превращениях органических веществ на ртутном, платиновом, графитовом и других электродах. В частности, адсорбция и электроокисление нуклеиновых кислот на графитовом электроде используются для их определения методом дифференциальной импульсной вольтамперометрии. Интересные возможности открываются с применением угольного пастового электрода, в объем которого концентрируется определяемое вещество. В табл. 11.5 приведены примеры определения органических веществ методом инвер- [c.433]

Весьма важное место принадлежит аффинной хроматографии [116, 117]. Она основана на использовании особых адсорбентов, специфически взаимодействующих с макромолекулами и избирательно удерживающих данный вид макромолекул (отсюда и название метода). Примером, о котором уже говорилось в разд. Г.10, служит адсорбция комплементарных фрагментов молекулы нуклеиновой кислоты на иммобилизованной ДНК. Аффинная хроматография используется также для очистки ферментов, антител и других белков, способных прочно связываться со специфическими малыми молекулами. [c.161]

Эту технику нельзя, конечно, четко выделить отдельно, поскольку она зависит от набивки колонны это лишь развитие и совершенствование ранее описанных методов. Однако данный метод имеет столь большие преимущества в эффективности и в скорости разделения, что целесообразно отдельно рассмотреть области его применения. Были применены набивки для ионного обмена, адсорбции и гель-фильтрации использование всей этой техники описано Леонардом для разделения некоторых цитокининов (производных аденозина), включая их разделение ня цис- и транс-то-меры [34]. Применение в области нуклеиновых кислот находится еще в стадии становления, но со временем этому методу несомненно предназначено сыграть важную роль в разделении смесей нуклеозидов, а колонки для гель-фильтрации будут широко применяться при обессоливании элюатов нуклеозидов после ионообменной хроматографии. [c.75]

Применение импульсной вольтамперометрии позволило установить адсорбцию на графите нуклеиновых кислот [225] и белков [226]. [c.85]

При подготовке образцов для хроматографирования и дальнейшей обработки обычно целесообразно удалить избыток солей и низкомолекулярных веществ (например, мочевина), так как они могут мешать последующему разделению и анализу. Диализ и гель-фильтрацию (основные методы обессоливания нуклеиновых кислот) применяют в этой области ограниченно. Обычно используют экстракцию смесью ацетон—спирт [17, 18] или адсорбцию на активированном угле [15, 19]. При очистке на колонке адсорбцию ведут при pH 4—5, а элюирование проводят спиртом, содержащим аммиак. Для очистки нуклеотидов и их [c.37]

Опарин показал, что при достижении критической концентрации. белков и нуклеиновых кислот в воде они выделяются из раствора в виде крошечных капелек (называемых коацерватами). Концентрация белков и нуклеиновых кислот в этих капельных гораздо выше, чем в исходном растворе, и капельки коацервата имеют гораздо более высокую степень организации. Кроме того, при добавлении фермента происходит его избирательная адсорбция на капельках коацервата, где фермент становится более активным, чем в растворе. Это очень интересно, поскольку то же самое наблюдается в живых клетках, однако в данном случае это происходит в гораздо более простой системе. [c.28]

Вследствие этого с помощью фронтального метода изучались почти исключительно белки и некоторые другие нолиэлектролиты (например, нуклеиновые кислоты). Важным преимуществом при изучении таких лабильных веществ, как белки, является то, что исследование ведется в очень мягких условиях, при низкой температуре, определенных значениях pH и ионной силы, отсутствует опасность адсорбции и денатурации на поверхности твердой фазы, которой нелегко избежать при зональном электрофорезе (см. ниже). [c.62]

Если проводить электрофорез в порах какого-либо твердого материала, гравитационная стабильность уже не играет существенной роли. Отпадают многие трудности, связанные с введением образца и тепловой конвекцией. Но возникают специфические проблемы возможность адсорбции исследуемого вещества на поверхности раздела фаз, электроосмотическое движение жидкости в порах, влияние неоднородности поддерживающей среды и т. д. Несмотря на это, именно электрофорез на твердом носителе нашел наиболее широкое распространение в лабораторной и клинической практике благодаря простоте аппаратуры, быстроте и хорошему качеству разделения, применимости к самым различным классам веществ, ионизованных в водных растворах, начиная от белков и нуклеиновых кислот и кончая неорганическими ионами. [c.80]

Малые значения Сн в импульсной полярографии позволяют исследовать этим методом растворы низких концентраций таких деполяризаторов, как нуклеиновые кислоты, и избегать при этом нежелательных эффектов их адсорбции [46]. Большое значение отношения времени поляризации электрода начальным потенциалом к времени поляризации другими потенциа-, лами, свойственное импульсной полярографии, позволяет подобрать такие условия опыта, при которых эффект адсорбции снижается или наоборот проявляется в большей степени, чем во всех других вариантах полярографии [47—49]. [c.20]

Наши исследования и целый ряд новейших работ об изменении спектров при димеризации, агрегации, адсорбции красителей [59], по метахромазии (изменение спектра при абсорбции на коллоидных субстратах — протеинах, агар, нуклеиновых кислотах), наблюдения о недействительности закона Бэра для ряда красителей [47] убеждают нас, что в определенных условиях фактор экзо необходимо учитывать и для соединений с конъюгированными системами как дополнительный к основному фактору эндо . [c.114]

Во фракции II нуклеиновых кислот в норме до обработки углем на долю ДНК приходилось около 20%, на долю РНК — около 80%. После обработки углем содержание РНК в этой фракции составляло около 90% от содержания ДНК- Таким образом, во фракциях I и II ДНК было значительное количество РНК, комплексно связанной с ДНК. РНК не удалялась из последней теми методами, при помощи которых удаляется свободная РНК (адсорбция активированным углем, обработка рибо-нуклеазой) [16]. [c.46]

Приведенное выше обсуждение адсорбции газов и твердых веществ на поверхностях может показаться достаточно далеким от вопросов, связанных с поведением макромолекулярных систем в живых клетках. Однако при более внимательном взгляде. можно обнаружить весьма тесную связь между этими явлениями. Хотя макромолекулы белков, полисахаридов или нуклеиновых кислот и не адсорбируют на своих поверхностях газы или посторонние твердые вещества, но они связывают ионы, а также неподвижные водные пленки толщиной всего лишь в несколько молекул. Возникающие при этом оболочки из молекул растворителя и появляющиеся заряды в сильной степени повы- [c.387]

Эти четыре примера показывают, что если в 0,1 или 1%-ных растворах желатины красители ведут себя различно в зависимости от их структуры, они всегда находятся в неагрегированном состоянии в растворах НСЖ с теми же концентрациями. Пока еще не было обнаружено исключений из этого последнего наблюдения. Можно отметить, что максимум а-полосы в спектре поглощения красителя, в растворе НСЖ, претерпевает батохромный сдвиг около 10 M i относительно его положения в спиртовом растворе. Это явление наблюдал также Михаэлис [3] в процессе исследования нуклеиновой кислоты. Повидимому, этот факт указывает на адсорбцию красителя или какое-либо другое взаимодействие его производным протеина. Растворы красителей в 1%-ном растворе НСЖ сильно флуоресцируют. [c.329]

Стереоспецифичность, несомненно, является одним из основных факторов в биологических реакциях — в ферментативных реакциях вообще и в специальном случае репликации ДНК путем спаривания дополнительных оснований из-за образования водородных связей. Но стереоспецифичность сама по себе не объясняет, почему АТФ так часто принимает участие в реакциях, где не очевидно какое-либо специальное участие самого аденина. Такой вид адсорбции сам по себе также не обязательно приводит к возникновению большой химической активности. Хорошо известна легкость, с которой реагирует хемосорбированный водород. Она обусловлена главным образом образованием атомов Н на поверхности. Но, по-видимому, нет очевидной причины, по которой дополнительные основания, удерживаемые на нуклеиновой кислоте водородными связями, должны особенно легко участвовать в реакциях поликонденсации. Однако если молекулы удерживаются в благоприятных положениях до тех пор, пока их соответствующие части не станут активными в результате перемещения свободных валентностей, которые, как мы видели, могли бы непрерывно распространяться по макромолекулярному остову клетки, то можно ожидать, что реакция и эффективная полимеризация будут происходить довольно легко. [c.524]

Другой метод изучения гомологии, который можно назвать методом реассоциации в растворе, основан на связывании одноцепочечных нуклеиновых кислот в растворе, т. е. в данном случае, в отличие от мембранного метода, когда один из компонентов связан, оба компонента находятся в растворе. За реассоциацией цепей ДНК можно следить с помощью ультрафиолетовой спектрофотометрии или, в случае инкубации небольшого количества денатурированной ДНК с высокой удельной радиоактивностью в присутствии большого избытка немеченой денатурированной ДНК, с помощью измерения радиоактивности. В последнем случае способность меченых фрагментов образовывать двухцепочечные комплексы с немеченой ДНК количественно определяют по адсорбции на гидроксилапатите или по устойчивости к гидролизу нуклеазой 51. [c.130]

Ионнообменная хроматография. Процесс ионного обмена широко известен в связи с его применением для умягчения воды. Впервые он был использован для разделения неорганических катионов и анионов. Позже были сделаны попытки применить хроматографическую теорию к ионнообменной адсорбции. В хроматографическом анализе диссоциирующих органических соединений в последнее время все более широкое применение получают синтетические смолы, способные к избирательной адсорбции и обладающие ионнообменными свойствами (Адамс и Холмс, 1935). Получены смолы с кислыми свойствами для катионного обмена и смолы с основными свойствами для анионного обмена. Адсорбция этими смолами в значительной мере определяется зарядом растворенного вещества (при этом надо отметить, что обменная адсорбция представляет собой очень сложный процесс), а для элюирования применяются растворы кислоты, щелочи или соли. Синтетические анионнообменные смолы (например, Амберлит IR4) применялись для хроматографического разделения аминокислот (например, глутаминовой и аспарагиновой кислот в продуктах гидролиза шерсти). Другими примерами применения ионного обмена могут служить анализ нуклеиновой кислоты, адсорбция алкалоидов и отделение свободных сульфокислот от азокрасителеЙ с ЗОзМа-группами в молекуле. Ричардсон наблюдал, что свободные сульфокислоты Небесно-голубого FF и других высокомолекулярных красителей быстро адсорбируются ионнообменной смолой Деацидит В. С уменьшением величины молекулы может быть достигнут такой предел, при котором начинается медленная диффузия в структуру смолы, юз Ионнообменная хроматография может применяться для разделения, очистки и анализа ионизирующихся красителей (кислотные красители и прямые красители для хлопка с сульфогруппами в молекуле и оспов- [c.1514]

По своему существу аффинная хроматография — это особый тип адсорбционной хроматографии. В отличие от того, что было описано в гл. 6, адсорбция здесь осуществляется за счет биоспецифп-ческого взаимодействия между молекулами, закрепленными на матрице, т. е. связанными в неподвижной фазе, и комплементарными к ним молекулами, подлежащими очистке или фракционированию, поступающими, а затем элюируемыми с подвижной фазой. Биоспеци-фическое взаимодействие отличается исключительной избирательностью, а зачастую и очень высокой степенью сродства между партнерами. Оно лежит в основе множества строго детерминированных процессов, протекающих в организме. В качестве примеров можно назвать взаимодействия между ферментами и их субстратами, кофакторами или ингибиторами, между гормонами и их рецепторами, между антигенами и специфическими для них антителами, между нуклеиновыми кислотами и специфическими белками, связывающимися с ними в процессе осуществления своих функций (полимераза.мп, нуклеазами, гистонами, регуляторными белками), а также между самими нуклеиновыми кислотами-матрицами и продуктами их транскрипции. Наконец, многие малые молекулы (витамины, жирные кнслоты и др.) специфически связываются со специальными транспортными белками. [c.339]

Для ВЭЖХ используют фракции сферона с размером зерен менее 25 мкм, которые очень желательно дополнительно седиментировать. С 1985 г. начат выпуск сорбентов сферой микро с размером зерен 12, 16 и 20 мкм, которые отличаются более узким распределением по размеру частиц и повышенной механической прочностью. В литературе приведено много примеров использования сферонов для разделения гидрофильных полимеров, белков, нуклеиновых кислот и других биологических объектов. При этом неоднократно наблюдали заметную адсорбцию некоторых биополимеров на матрице геля, что иногда повышает эффективность разделения. [c.105]

Можно назвать множество примеров использования микрофильтрационных мембран в качестве фильтров для сбора частиц, подвергаемых затем анализу сбор бактерий для прямого подсчета с помощью микроскопа в прошедшем свете подсчет частиц в напитках подсчет фитопланктона измерение и подсчет инертных частиц подсчет асбестовых волокон, раковых клеток, адсорбция и элюирование вирусов и подсчет жизнеспособных водопереносимых бактерий [7]. Электрофорез является электрически управляемым процессом, в котором белковые фракции разделяются либо в микропористых ацетатцеллюлозных гелях [8], либо в ультрапористых агаровых или полиамидных гелях. Активному возбуждению гибридизации нуклеиновой кислоты помогает способность нитрата целлюлозы сильно сорбировать ДНК, поэтому и ДНК ДНК-, и ДНК РНК-гибриди-зации могут быть осуществлены на мембранном фильтре [7]. [c.85]

Прежде чем перейти к опытам с фотографическими эмульсиями, следует кратко обсудить полученные выше результаты. Изменения спектра поглощения в присутствии желатины или НСЖ обусловливаются взаимодействием между молекулами этих веществ и молекулами красителя. В старых работах Шеппарда было установлено наличие адсорбции цианина на протеине, причем цианин направлен к протеину своими основными атомами, а центрами адсорбции служат ионизированные карбоксильные группы в боковых цепях молекулы протеина. (В связи с этим следует упомянуть, ЧТО полимеры типа полиметакриловой или нуклеиновой кислот вызывают изменения в спектре поглощения цианинов, тогда как поливиниловый спирт или ацеталь, лишенные карбоксильных групп, не оказывают никакого влияния.) Взаимодействие активных групп будет зависеть от склонности к ассоциации как молекул протеина между собой, так и молекул красителя. В случае желатины это является важным фактором, поскольку основные группы боковых цепей (NHf) могут конкурировать с молекулами красителя за центры адсорбции (—СОО ). Такого типа взаимодействие между молекулами протеинов было допущено Клётцем [6] для объяснения некоторых результатов, полученных при реакции между кислыми красителями и протеинами. (Безусловно, полимеризация молекул протеинов может в некото- [c.329]

Исследования показали (Тараканов, 1970, 1971), что в рубце коров постоянно присутствуют в значительных количествах разные по форме и размерам бактериофаги. Показано, что последние встречаются как в свободном состоянии, так и адсорбируются на всех основных морфологических формах микроорганизмов, обитающих в рубце (рис. 2,3). Описано 8 морфологических типов бактериофагов и 4 фага, специфичные для селеномонад. Установлено, что взаимоотношения микроорганизмов с бактериофагами в. рубце не ограничиваются только адсорбцией последних на чувствительных бактериях. Адсорбированные фаговые частицы инъецируют нуклеиновую кислоту внутрь клеток, что, в конечном итоге, закапчивается лизисом микроорганизмов и освобождением фагового потомства (рис. 4). [c.204]

Большинство микроорганизмов хорошо растет в темноте. Исключение составляют фототрофы, использующие энергию солнечного луча. Прямой солнечный свет губительно действует на микроорганизмы. Микробоцидное (убивающее) действие его обусловлено главным образом ультрафиолетовой частью спектра. Адсорбция ультрафиолетовых лучей белками и нуклеиновыми кислотами клетки приводит к необратимым химическим изменениям. Наиболее чувствительны к действию света вегетативные клетки. Большинстю патогенных микробов более чувствительно к ультрафиолетовым лучам, чем- сапрофиты. Эти лучи обладают низкой проникающей способностью и действуют, в основном, на поверхности. [c.68]

Это затруднение можно преодолеть, если иммобилизовать один из препаратов ДНК таким образом, чтобы он не мог ренатурировать. Для этой цели используют ни-троцеллюлозные фильтры, которые адсорбируют одноцепочечную ДНК и не адсорбируют РНК. Фильтры с адсорбированной одноцепочечной ДНК обрабатывают специальным образом, для того чтобы предотвратить дальнейшую адсорбцию одноцепочечных молекул. На рис. 2.16 показана схема эксперимента, в котором препарат ДНК денатурировали, полученные одноцепочечные молекулы адсорбировали на фильтре и затем добавляли второй препарат денатурированной ДНК (или препарат РНК). Связывание второй нуклеиновой кислоты происхо- [c.37]

Адсорбция — это процесс, обусловленный вандерва-альсовыми силами, электростатическим и гидрофобным взаимодействиями, а также стерическими факторами. Адсорбция индивидуального вещества описывается типичной изотермой адсорбции Ленгмюра, которая представляет собой гиперболу на графике зависимости концентрации растворенного вещества от количества адсорбированного вещества. Такой же кривой описывается и насыщение фермента субстратом, а также закон убывающего плодородия . Поверхностную сорбцию и элюцию неполярных веществ успешно осуществляют с помощью силикагеля, кизельгура, окиси алюминия, фло-рисила и активированного угля. Полярные макромолекулы, такие, как белки и нуклеиновые кислоты, очищают либо методом статической сорбции, либо в условиях колоночной хроматографии с использованием гидрокси-апатита, кальций-фосфатного геля или Су -модификации окиси алюминия. [c.202]

Водородная связь КА—Н...ВРл представляет собой особый вид межмолекулярного и внутримолекулярного взаимодействия, осущ,ест-вляемого при участии атома водорода полярной группы Л — Н (О — Н, N — Н, реже С — Н) и атома В (О, Ы, реже С1, Вг, I), имеющего не-поделеппую пару электронов. Водородная связь имеет фундаменталь-1юе значение в физике, химии, биологии. Ее образованием определяется структура многих жидкостей и растворов, органических и неорганических кристаллов, белков и нуклеиновых кислот. Она играет важную роль в процессе адсорбции, катализа оказывает существенное влияние на механиз.м химических реакций. [c.83]

Готовые силиконирующие растворы, такие, как Сигмакот (Sigma), можно использовать для предотвращения адсорбции и, следовательно, возможных потерь ДНК, а также предотвращения прилипания осадка к стенкам пробирки и облегчения сбора небольших объемов водных растворов в больших центрифужных пробирках. Завинчивающиеся крышки с тефлоновыми прокладками тоже предотвращают потери нуклеиновых кислот, которые могут произойти при перемешивании. [c.244]