Справочник химика 21

Химия и химическая технология

Статьи Рисунки Таблицы О сайте English

Методы идентификации аминокислот

    Для определения строения белков разработан ряд методов, которые еще 20 лет тому назад были неизвестны, — хро матография, противоточное распределение и ионофорез в неподвижной среде. Благодаря указанным методам удалось получить белки в чистом виде и выделить их составные части— пептиды, аминокислоты и их производные. Эти методы характеризуются не только высокой эффективностью, но позволяют работать с количествами вещества порядка нескольких микрограмм. Следующим этапом явилась разработка химических методов идентификации аминокислот и пептидов, полученных расщеплением полипептида [266, 277, 320]. [c.164]


    В дальнейшем (.в 60—70-х гг.) были найдены структурные формулы и других белков. Применение при исследованиях новейших методов идентификации аминокислот и автоматических устройств значительно облегчило и ускорило выполнение опе- [c.263]

    Методы идентификации аминокислот [c.499]

    МЕТОДЫ ИДЕНТИФИКАЦИИ АМИНОКИСЛОТ [c.380]

    Метод бумажной хроматографии (БХ) был открыт в 1943 г. как метод разделения и идентификации аминокислот при их малых количествах. В БХ в качестве неподвижной фазы используют фильтровальную или хроматографическую бумагу. [c.352]

    Изучение химического строения белка начинают с определения аминокислотного состава. Для этого проводят полный кислотный гидролиз белка с последующим разделением и идентификацией аминокислот гидролизата. С развитием методов хроматографии эта задача ре-щается достаточно просто. [c.376]

    Внесение специфических изменений в кодирующие последовательности ДНК, приводящих к определенным изменениям в аминокислотных последовательностях, называется направленным мутагенезом. Идентификация аминокислот, замена которых даст желаемый результат, облегчается, если детально известна пространственная структура белка (ее устанавливают с помощью рентгеноструктурного анализа или других аналитических методов). Однако для большинства белков такие данные отсутствуют, поэтому направленный мутагенез - это в значительной мере эмпирическая процедура, основанная на методе проб и ошибок. Каждый белок, кодируемый мутантным геном, нужно протестировать и убедиться в том, что мутация дала желаемый эффект. [c.159]

    Первым методом превращения аминокислот для использования в ГХ-анализе была реакция с нингидрином. Как известно, в этой реакции наряду с окрашенными веществами и СОг образуются и упоминавшиеся выше альдегиды, имеющие на один углеродный атом меньше, чем в исходной молекуле. Опираясь на метод количественного определения аминокислот, разработанный на основе этой реакции [92], с помощью ГХ удалось разделить и идентифицировать эти летучие альдегиды [37]. Очевидно, этот метод пригоден только для тех аминокислот, которые в реакции с нингидрином дают летучие альдегиды, и, следовательно, из этой группы, естественно, исключаются Про и родственные ему аминокислоты [61]. Побочные реакции при ГХ, такие, как полимеризация, затрудняют или вообще делают невозможным идентификацию определенных аминокислот [130]. Чтобы преодолеть указанные трудности, альдегиды окисляли [3] до карбоновых кислот и хроматографировали в виде метиловых эфиров. Несмотря на отмеченные недостатки, Златкис и др. [130] указывают, что этот процесс модификации аминокислот интересен в техническом отношении. По принципу реакций, используемых в ГХ, превращение аминокислот, а затем разделение и количественное определение альдегидов, переводимых в результате каталитического гидрокрекинга в метан, может происходить [c.326]


    Сначала этот метод применялся для идентификации металлов, минералов, глин, керамических материалов. В настоящее время метод используется для идентификации аминокислот и белков, углеводов, координационных соединений, каменного и бурого угля, жиров и масел, солей и окислов металлов, полимеров, пищевых продуктов. [c.63]

    Я. Янак [20, 42] впервые применил метод идентификации веществ по хроматографическим спектрам продуктов их пиролиза на нагреваемой спирали к нелетучим органическим соединениям (барбитураты, аминокислоты и другие биохимические объекты). [c.122]

    Свободные аминокислоты определялись при помощи бумажной хроматографии (К. В. Чмутов, 1962 К. П. Магницкий и др., 1959), которая основана на различном распределении (передвижении) по фильтровальной бумаге аминокислот, обладающих разной растворимостью. Идентификация аминокислот проводилась по методу пятна на чистой хроматограмме и по расстоянию, пройденному пятном от места нанесения растворителя [c.13]

    Очень важно помнить, что, несмотря на большую ценность хроматографического метода как способа разделения аминокислот, для окончательной идентификации аминокислот этот метод следует использовать в сочетании с другими. Даже если величины неизвестной аминокислоты и аминокислоты, [c.42]

    Не останавливаясь подробно на указанных методах идентификации, рассмотрим количественное определение аминокислот. [c.69]

    В большинстве случаев коэффициент распределения не зависит т концентрации, и потому распределительная изотерма представляет собой прямую линию (рис. 38, а). В этом случае транспортный фактор не будет зависеть от концентрации растворенного веш,ества и наблюденную величину его можно даже использовать для идентификации компонентов смеси. Пользуясь именно этим методом, определяют аминокислоты нрп помош,и распределительной хроматографии на бумаге. [c.155]

    Распределительная хроматография в начале своего развития довольно щироко применялась в анализе органических веществ, как очень тонкий и эффективный метод. Было произведено разделение близких по свойствам органических кислот, дубильных веществ, аминокислот, пенициллинов и т. д. Подтверждением универсальности метода распределительной хроматографии является полная пригодность и исключительная эффективность этого метода при разделении неорганических веществ с очень близкими химическими свойствами. Например, для разделения редкоземельных элементов, которые имеют незначительные различия в свойствах, требуется провести не мене 40 ООО операций (для выделения их в чистом виде). До появления многоступенчатого метода анализа лишь несколько редкоземельных элементов были получены в чистом виде с содержанием 95%- В настоящее время разработаны надежные методы идентификации редкоземельных элементов хроматографией на бумаге и получение их в чистом виде на колонках. [c.105]

    Один из самых чувствительных методов идентификации белков — это иммунная реакция, т. е. реакция между антигеном и антителом. Если раствор кристаллического яичного альбумина ввести кролику, то чужой белок действует как антиген, стимулируя образование антител в организме кролика. Антитело, выделенное из крови кролика, осаждает из смеси неизвестных аминокислот только яичный альбумин. [c.292]

    В поисках надежных методов идентификации аминокислот Вульфсон и сотрудники [207] исследовали масс-спектры ме-тилтиогидантоинов 17 аминокислот и установили общие закономерности диссоциативной ионизации соединений типа  [c.124]

    Двумерная и одномерная распределительная ТСХ на целлюлозных, силикагелевых и полиамидных иластинках аминокислот, их данзилированных, динитрофенильных и фенилтногидантоиновых производных (ФТГ-АК) последнее — как основной или контрольный метод идентификации аминокислот при секвенировании белков по методу Эдмана. [c.460]

    Очень чувствительным методом идентификации аминокислот является тонкослойная хроматография их диметиламинонафталин-5-сульфонильных производных (гл. ХП1). Для фракционирования их на силикагеле можно, например, воспользоваться следующими системами растворителей хлороформ — бензиловый спирт — уксусная кислота (100 30 3) бензол — пиридин — уксусная кислота (80 20 2) 2-бутанон — пропионовая кислота — вода (15 5 6). [c.237]

    Новым методом идентификации аминокислот и их количественного определения является также спектрофотометрия в инфракрасном свете. Каждая аминокислота и каждая а-хлорокис-лота (получаемая при действии соляной и азотной кислот на аминокислоты) имеют характерную кривую поглощения в инфракрасном свете [68]. При помощи спектрофотометрии в инфракрасном свете было показано, что определение лейцина и изолейцина микробиологическим методом дает слишком высокие величины [69]. [c.35]

    При исследовании структуры белков используются эти и другие методы расщепления. Предложен ряд технических приемов для идентификации конечных аминокислот. Один из них широко применяется для идентификации аминокислот, содержащих концевую аминогруппу. Согласно этому методу, проводят реакцию полипептида с 2,4-динитрофторбензолом, при этом свободная аминогруппа превращается в 2,4-динитрофенил-производное (разд. 4.2.2). Последовательный гидролиз полипептидов дает обычные аминокислоты, за исключением конечной N-apилaмииoки лoты, которую можно отделить и идентифицировать хроматографически. [c.297]


    Уже упоминалось, что высокоэффективная жидкостная хроматография при высоком дав.лении (ЖХВД) по.лучила очень широкое распространение главным образом в качестве экспресс-метода технологического контроля производства низкомолекулярпых природных (и неприродных) соединений. В исследованиях белков и нуклеиновых кислот ЖХВД играет пока бо.лее скромную, но заметную роль (фракционирование пептидов, идентификация аминокислот прц секвеннровании белков и др.). Далее мы увидим, что для исследо- [c.91]

    Особо чувствительный метод двойной метки основан на применении меченого ( Н]-дансилхлорида в качестве реагента и меченой [ С]-аминокислоты как внутреннего стандарта. Отношение Н С в дансильном производном зависит от отношения количества добавленной ( 0]-аминокислоты к концентрации немеченой аминокислоты в пробе. Этот метод особенно подходит для идентификации аминокислот в биологическом материале. Его чувствительность лежит в пикомольной области [196]. [c.66]

    Один нз методов идентификации Л -концевой аминокислоты пептида нли белка состоит в замещении -аминогруппы иа такую груп-. пу, которая выдерживает гидролиз, и таким образом, после кислотного нлн ферментативного гидролиза меченую аминокислоту можно обнаружить спектрофотометрнчески, спектрофлуорометри-чески илн по радиоактивности и идентифицировать с помощью хроматографии. [c.264]

    Кислотно-основные свойства. Эти свойства аминокислот определяют многие физико-химические и биологические свойства белков. На этих свойствах основаны, кроме того, почти все методы выделения и идентификации аминокислот. Аминокислоты легко растворимы в воде. Они кристаллизуются из нейтральных водных растворов в форме биполярных (амфотер-ных) ионов (цвиттерионов), а не в виде недиссоциированных молекул (последнюю структуру приводят для удобства представления, однако все аминокислоты при физиологических значениях pH имеют структуру цвитте-риона). [c.37]

    Анализ. Методы анализа белковых макромолекул селективны и осуществляются в зависимости от того, какая структура является объектом исследования, и начинаются с определения аминокислотного состава. Для этого необходимо провести полный гидролиз пептидных связей и получить смесь, состоящую из отдельных аминокислот. Гидролиз проводят при помощи 6 М соляной кислоты при кипячении в течение 24 ч. Так как для гидролиза пептидных связей изолейцина и валина этого может быть недостаточно, проводят контрольный 48- и 72-часовой гидролиз. Некоторые аминокислоты, например триптофан, при кислотном гидролизе разрушаются, поэтому для их идентификации используют гидролиз при помощи метансульфоновой кислоты в присутствии триптамина. Для определения цистеина белок окисляют надмуравьиной кислотой, при этом цистеин превращается в цистеиновую кислоту, которую затем анализируют. Вьщеление и идентификацию аминокислот проводят при помощи аминокислотных анализаторов, принцип действия которых основан на хроматографическом разделении белкового гидролизата на сульфополистирольных катионитах, В основе количественного определения той или иной аминокислоты лежит цветная реакция с нингидрином, однако более перспективным следует считать метод, при котором аминокислоты модифицируют в производные, поглощающие свет в видимом диапазоне. Разделение смеси аминокислот проводят при помощи высокоэффективной жидкостной хроматографии, а само определение — спектрофотометрически. Следующим этапом является определение концевых аминных и карбоксильных [c.40]

    Книга Э. Шталя посвящена детальному описанию метода хроматографии в тонких слоях. В общей части излагаются приемы, аппаратура, сорбенты и некоторые общие методы идентификации. Подробно освещены вопросы теории хроматографии в тонких слоях. Специальный раздел посвящен изотопным методам. Специальная часть состоит из ряда глав, в которых п )иводятся примеры анализов отдельных классов соединений, например алифатических липидов, эфирных масел, бальзамов, смол, витаминов, стероидов, аминокислот, сахаров и т. д. [c.5]

    Попытки применить описанный выше метод для идентификации аминокислот мелассы не дали положительных результатов. Последнее объясняется не только сложностью мелассы, но и искажением простой распределительной хроматографии рядом побочных явлений. При хроматографировании водного раствора мелассы (4 1) и (9 1) па проявленных листах обнаружена сплошная полоса неразделившихся аминокислот или одно пятно глютаминовой кислоты и длинный до старта хвост . На стартовой линии остается расплывшееся пятно неизвестного [c.214]

    Теоретически этот процесс можно проводить многократно до полного определения последовательности аминокислот. Однако многократное отщепление концевых аминокислотных остатков приводит к усиливающемуся повреждению оставшейся пептидной цепи, и обычно можно отделять максимум шесть или семь остатков. Для определения последовательности аминокислот необходим метод идентификации фенилтиогидантоинов, получаемых в результате ступенчатой деградации пептидов. Идентификация и определение фенилтиогидантоинов иногда трудно осуществимы, и следует использовать метод отщепления , примененный, например, при определении структуры рибонуклеазы. После удаления Ы-концевой аминокислоты в виде фенилтиогидантоина оставшийся пептид гидролизуют и анализируют. Последовательность аминокислот в этом пептиде определяют по аминокислотным остаткам, сохраняющимся в нем после каждого отщепления N-кoнцeвoй аминокислоты. [c.31]

    Развитие хроматографических методов разделения и идентификации аминокислот значительно облегчило проведение исследований с аминокислотами многие успехи, достигнутые в изучении аминокислот за последнее время, непосредственно связаны с применением хроматографии. Занимаясь разделением аминокислот, Нейбергер [154] в 1938 г. обнаружил, что у ацетил-производных разных нейтральных аминокислот коэффициенты распределения между водой и несмешивающимися с водой растворителями различны. В 1941 г. хМартин и Синг [155] осуществили разделение ацетилированных аминокислот на силикагеле последний служил инертной опорой для водной фазы, через которую протекал неводный растворитель. В дальнейшем эта техника была усовершенствована. Большим достижением явилось использование фильтровальной бумаги в качестве неподвижной фазы [156], что привело к широкому развитию разнообразных методов хроматографии на бумаге (см. Блок и др. [157]). В настоящее время считают, что в процессе разделения веществ на бумаге наряду с распределением между растворяющими фазами играют роль также механизмы адсорбции и ионного обмена. [c.40]

    Идентификация аминокислот, присутствующих в активных центрах ферментов, разумеется, очень важна для понимания главных особенностей механизма ферментативных реакций. Существует ряд методов, с помощью которых можно идентифицировать хотя бы некоторые из аминокислотных остатков, участвующих в построении активного центра. Наиболее прямой метод состоит в присоединении к какому-нибудь аминокислотному остатку, входящему в состав активного центра, ковалентной метки, которая оставалась бы устойчивой в условиях деградации полипептидных цепей. С точки зрения такой возможности все ферменты можно разделить на два класса в один из них входят ферменты, образующие в ходе каталитического процесса ковалентно связанные промегкуточные фермент-субстратные производные, а в другой — ферменты, которые таких производных не образуют. Для ферментов первого класса проблема введения специфической метки в активный центр (а не просто неспецифического введения метки в белок) часто решается путем использования в качестве носителей метки либо обычных субстратов этих ферментов, либо соединений, структурно родственных субстрату. Вследствие специфического сродства этих веществ к активному [c.196]

    Б последнее время получил широкое распространение метод идентификации К-концевых аминокислот в виде 1-деметилами-но-5-сульфонафтильных (ДНС) производных. Эти метки люминес-цируют под воздействием излучения X 365 ммк, что позволяет детектировать пятна ДНС-аминокислот с чувствительностью 10 моль. Имеется несколько работ, посвященных тонкослойной хроматографии ДНС-аминокислот. С наибольшими деталями метод описан в работе [28]. [c.312]

    Использование иммерсионного метода и элементарных кристаллооптических определений повышает надежность и в ряде случаев упрощает методику качественного микрохимического анализа. Внешний облик кристаллов часто меняется в зависимости от примесей, условий кристаллизации и т. п. Проверка показателей преломления и других кристаллооптических свойств продуктов микрохимических реакций дает возможность их идентификации независимо от формы кристаллов и в ряде случаев позволяет обойтись без разделения элементов на аналитические группы. Опыт применения иммерсионного метода к микрохимическому анализу излагается в работах Аншелеса и Бураковой [47, 48, 49], к открытию и определению алкалоидов — в книге Поздняковой [50], к идентификации аминокислот — в статье [51]. Статьи [52—55] дают примеры использования иммерсионного метода в некоторых специальных исследованиях. [c.282]

    Эти производные аминокислот образуются при разложении продуктов реакции белков или пептидов с фенплизотиоцианатом. Они очень удобны при изучении структур пептидов и позволяют отделить аминокислоты от мешающих анализу соединений. Кроме этого, с появлением усовершенствованного автоматического способа разделения аминокислот стал необходим метод идентификации этих соединений, поскольку за 72—90. мин с одним производным можно провести от 10 до 25 операций. В качестве такого быстрого метода идентификации соединений была предложена газовая хроматография однако в ряде случаев результаты анализа недостаточно однозначны и требуют подтверждения. [c.501]

Смотреть страницы где упоминается термин Методы идентификации аминокислот: [c.28]    [c.135]    [c.135]    [c.111]    [c.392]    [c.61]    [c.131]    [c.255]    [c.221]    [c.116]    [c.495]   
Смотреть главы в:

Органическая химия -> Методы идентификации аминокислот

Органическая химия Издание 2 -> Методы идентификации аминокислот

Органическая химия -> Методы идентификации аминокислот



ПОИСК





Смотрите так же термины и статьи:

Идентификация методы



© 2025 chem21.info Реклама на сайте