Электрофорез в обнаружение зон

Причина обоих явлений, обнаруженных Ф. Ф. Рейссом, одна и та же — наличие разноименных зарядов у твердой и жидкой фазы. При электрофорезе в результате возникновения электрического поля между электродами, благодаря малому размеру частиц глины, происходит перенос отрицательно заряженной дисперсной фазы к положительному электроду. При электроосмосе ввиду того, что частицы песка слишком тяжелы, под влиянием электрического поля по капиллярам, имеющимся в слое песка, к отрицательному электроду передвигается положительно заряженная жидкость. [c.170]

Возникновение коллоидной химии как науки связано с именем английского ученого Т. Грэма, начавшего в 1861 г. систематические исследования коллоидных растворов, в которых он обобщил выполненные до него исследования. К числу исследований, сыгравших большую роль в становлении коллоидной химии, следует отнести работы М. В. Ломоносова по получению цветных стекол, в том числе рубина (1744—1755 гг.), открытие К. Шееле и Ф. Фонтана явления адсорбции газов углем (1777 г.) и русского ученого Т. Ловица — явления адсорбции из растворов (1785 г.), открытие русским физиком Ф. Рейсом явлений электрофореза и электроосмоса, обнаруженную И. Берцелиусом неустойчивость и опалесценцию коллоидных растворов, получение золей золота и серебра М. Фарадеем. [c.381]

Гель-электрофорез. Электрофорез на геле и крахмале применяют для аналитических целей. Наиболее важным применением гель-электрофореза является иммуноэлектрофорез. Для этого вида анализа используют макропористые гели, в частности гели агара и агарозы. Метод иммуноэлектрофореза основан на том, что после разделения электрофорезом происходит диффузия разделенных веществ — антигенов — в направлении, перпендикулярном направлению электрофореза. Навстречу этим соединениям диффундируют антитела. При соединении антигенов и антител образуются характерные дуги осаждения. Метод иммуноэлектрофореза очень чувствителен при обнаружении антигенов, специфических для данных антител. В настоящее время применяют метод введения радиоактивной метки в антигены, благодаря чему радиоиммуноэлектрофорез является одним из самых чувствительных методов анализа биополимеров. [c.364]

Чрезвычайно затруднено обнаружение соединений — отдельных представителей гомологического ряда — при совместном их присутствии, особенно если имеется избыток одного из компонентов. В. этом случае существенную помощь оказывает лишь применение эффективных методов разделения (разд. 7.1), таких, например, как хроматография в ее различных вариантах, электрофорез или многократное распределение. [c.57]

Если мицеллу поместить в электрическое поле, то слабо удерживаемые ионы диффузного слоя начнут перемещаться к одному из электродов, а частица, заряженная в данном случае отрицательно, — к другому. Мицелла как бы разрывается по границе ОЕ, и между адсорбционным и диффузным слоями может быть обнаружен другой потенциал, составляющий часть полного скачка потенциала. Этот потенциал получил название электрокинетического или (дзета)-потенциала (на схеме 0, а процесс переноса коллоидных частиц в электрическом поле — электрофореза. [c.13]

N НС1, в качестве растворителя [97]. Для обнаружения алюминия хроматограмму опрыскивают раствором алюминона после предварительной обработки хлористым водородом (красное пятно) / / для алюминия — 0,05. После выделения алюминий определяют весовым методом. Авторы работы [713] для разделения А1, Ga, In и Т1 друг от друга, а также для отделения от других элементов испытали различные смеси растворителей. Лучшей оказалась смесь пентанол-1 — 4 jV H l. Описан метод отделения алюминия от некоторых катионов электрофорезом на бумаге [731]. Электролитом служил 0,06 Ai раствор диэтилентриамина, pH раствора И, градиент потенциала 10 в см, время миграции 1 час. Ti, Ве, Ai и Са можно разделить методом хроматографии на бумаге с применением неор- [c.190]

Видно, что электрохимические детекторы также применяются в капиллярном зонном электрофорезе. Среди них наибольшее распространение получили амперометрические детекторы. В качестве индикаторных электродов обычно используются углеродные волокна диаметром 1-10 мкм, которые помещаются в капилляр и устанавливаются с помощью микроманипулятора. При оптимизации условий детектирования возможно применение капилляров с диаметром до 2 мкм. В этом случае предел обнаружения, например катехина, достигает 10 молей, а эффективность разделения 140 ООО теоретических тарелок. Обычно применяют двухэлектродную схему измерений. [c.585]

Кроме того, выделен в чистом виде [94] 7-глиадин (глиадин 50), который по молекулярной массе явно превосходит все другие, обнаруженные ранее 7-глиадины. Таким образом, еще остается определенная неясность в отношении истинных молекулярных масс у разных 7-глиадинов, которая может очень отчетливо отражать гетерогенность 7-глиадинов, намного более сильную, чем та, что выявляет анализ с помощью электрофореза в кислой среде. Впрочем, выявлено существование, по крайней мере, 9 7-глиадинов [134], а некоторые исследователи на основе анализа N-концевых последовательностей полагают, что фракция, обозначаемая 72 в действительности, включает не менее двух главных и трех минорных белков и что фракция 73 также гете-рогенна [19]. По молекулярной массе ш-глиадины превосходят а-, Р- и 7-глиадины, но они также образованы одной — единственной полипептидной цепью. Совокупность результатов, полученных разными авторами, указывает на существование двух групп ш-глиадинов — с молекулярными массами соответственно около 65 000 и 75 000—80 000 (табл. 6Б.7). [c.191]

Радиохимическая чистота может быть исследована различными методами, но наиболее важными из них являются бумажная хроматография и тонкослойная хроматография (см. с. 92—97). После завершения разделения на хроматограмме определяют распределение радиоактивности. Количество вещества, наносимого на хроматограмму, часто крайне мало (вследствие высокой чувствительности обнаружения радиоактивности), и поэтому надо быть особенно осторожным в интерпретации результатов в связи с возможностью возникновения артефактов. Кроме хроматографии, для разделения может быть использован электрофорез (см. с. 114—118). Как упоминалось выше, иногда может оказаться полезным добавление к самому радиофармацевтическому соединению или к ожидаемым примесям носителей, т. е. соответствующих нерадиоактивных соединений. Существует, однако, опасность, что прибавленный неактивный носитель радиоактивного фармацевтического вещества может взаимодействовать с радиохимической примесью, что в свою очередь может привести к заниженной оценке этих примесей. Другой подходящий метод— наблюдение за биологическим распределением инъецированного радиофармацевтического вещества в испытании на животных. [c.83]

Для обнаружения мест нахождения радиоактивных компонентов на хроматограммах (электрофореграммах) используют авторадиографию, радиометрию (в том числе сканирование) или проводят хроматографирование (электрофорез) со свидетелем — неактивным аналогом определяемого вещества. Измерения скоростей счета должны проводиться на радиометрической установке с соответствующим детектором, выбор которого зависит от типа и энергии излучения радионуклида. При работе с препаратами, испускающими достаточно интенсивное гамма-излучение, измерения следует проводить по гамма-излучению. В этом случае удобен, например, сцинтилляционный гамма-счетчик с колодцем. Измеряют скорости счета от участков хроматограммы (электрофореграммы), содержащих основное вещество или определенную радиохимическую примесь, относят их к скорости счета от всей хроматограммы (электрофореграммы) и результат выражают в процентах. Радиохимическая чистота РФП может изменяться со временем под действием различных факторов (радиационное разложение, окисление, воздействие света, температуры и т.д.). Значения радиохимической чистоты, приводимые в фармакопейных статьях на конкретные препараты, указывают на конец срока годности данного РФП. [c.72]

Можно обнаружить 0,1 мкг Аи после концентрирования на бумаге электрофорезом при помощи хлорида титана(1П). Предель ное разбавление 1 2,5-10 напряжение 200 в, электролит 2Л СНзСООН. Золото перемещается к аноду. Обнаружению не мешают Сс1, Со, Сг(1П), Мп(П), №, РЬ, Т1(1), иоГ, Ре(1П), Ag, движущиеся к катоду. Кроме Аи, к аноду мигрируют ВОГ) Вг , Г, МоОГ,УОз [1495]. [c.75]

Очень важной областью применения радиоавтографии является обнаружение радиоактивного ДНК-зонда после его гибридизации с препаратом ДНК, подвергнутым электрофоретическому разделению. К сожалению, провести гибридизацию в самом геле невозможно, поскольку зонд не может в него проникнуть. Поэтому ДНК после электрофореза переносят на нитроцеллюлозный или найлоновый фильтр по методу Саузерна (Саузерн-блоттинг) или с помощью элюции. Расположение молекул ДНК на фильтре в точности соответствует таковому в геле. Перенесенную на фильтр ДНК подвергают [c.65]

Электрофорез особенно успешно применяется для обнаружения моносахаридов, в молекуле которых имеются основные (как в аминосахарах) или кислые (как в альдоновых, уроновых, сахарных кислотах, фосфатах и сульфатах сахаров) группировки (см., например, ). В тех случаях, когда необходимо разделить нейтральные моносахариды, используют их способность образовывать отрицательно заряженные комплексы с борной кислотой или ее солями , с молибдатами , вольфраматами, германа-тами и рядом других неорганических анионов разные анионы предъявляют часто различные требования к стереохимии моносахарида, необходимой для образования устойчивых комплексов. Естественно поэтому, что выбор комплексообразователя и условий проведения электрофореза, в первую очередь pH растворов, весьма существенно влияет на результат разделения (см. ). Для обнаружения зон веществ на электрофореграммах применяется большинство реагентов, используемых при хроматографии на бумаге. [c.411]

Открытие на хроматограммах. Предложены способы обнаружения кадмия после разделения смеси ионов органическими растворителями на фильтровальной бумаге в кольцевой бане [5 5], круговой бумажной хроматографией [536], электрофорезом на бумаге, пропитанной фосфатом [700], методом тонкослойной хроматографии на силикагеле [606] и другие [185, 617, 689, 784]. [c.49]

Тематика диссертаций по токсикологической химии охватывает широкий круг веществ (алкалоиды, барбитураты, гликозиды, синтетические лекарственные вещества, спирты, химические вещества неорганической природы и т. п.) и методов исследования (микрокристаллоскопия с кристаллооптикой, хроматография, оптические методы анализа, электрофорез и т. д.). Углубленному изучению подвергаются специфические вопросы токсикологической химии методы изолирования различных химических веществ из биологических жидкостей и внутренних органов трупа, методы их обнаружения и определения, распределение ядов в организме при отравлении, сохраняемость их в организме и трупе. Изучаются вопросы метаболизма (превращения) отдельных органических веществ в организме и трупе. [c.25]

При зонном электрофорезе электромиграция заряженных частиц образца происходит в стабилизующей среде, которая удерживает частицы после выключения тока. Для обнаружения разделяемых компонентов стабилизующую пористую среду обрабатывают подходящими фотометрическими реагентами. [c.465]

К электрокинетическим также относятся явления электрофореза и электроосмоса, впервые обнаруженные русским ученым Ф. Ф. Рейссом (1808). Схема опыта Рейсса показана иа рис. 72. В j y oK сырой глины помещали две стеклянные трубки, на дно которых насыпался слой чистого песка, трубки заполнялись водой и в них помещались электроды. При пронускапии электрического тока через некоторое время Рейсс заметил, что в анодной трубке появились частицы глины (муть), а уровень воды в катодной трубке повысился, причем вода в ней по-прежнему оставалась прозрачной. [c.366]

Полиамидный характер цианокобаламина установлен по выделению 6 мол. аммиака при кислотном гидролизе. При кислотном гидролизе витамина В12 горячим раствором соляной кислоты обнаружен красный аморфный осадок, содержащий кобальт, представляющий собой смесь кислот, содержащих от одной до семи карбоксильных групп, разделенных электрофорезом. То обстоятельство, что отщепление -1-аминопропанола-2 происходит после отщепления нуклеотида (I), а также отсутствие основных групп в красном кобальтосодержащем продукте гидролиза позволило заключить, что аминопропиловый спирт этерифицирован фосфорной кислотой и соединен амидной связью с остальной молекулой. [c.682]

Упомянем также об обнаружении фосфорилированных под действием киназ аминокислот после кислотного гидролиза белков. В этом случае наиболее удобным оказался двумерный высоковольтный электрофорез на бумаге ( Whatman ЗММ ) при pH 3,5 и 1,9 [ linton et al., 1982]. [c.485]

Применеиие субстехиометрич. выделения (СВ) позволяет избежать определения массы выделенного соед., проводить определение только по измерению активности и снизить предел обнаружения до 10" -10 %, СВ-прием количеств, выделения части определяемого компонента, меченного радионуклидом, путем переведения (обычно на 50-70%) в др. хим. форму добавлением недостаточных, по сравнению со стехиометрией (т.е. субстехиометрических), кол-в реагента. При практич. осуществлении к стандартному и анализируемому р-рам, в к-рые было введено одииаговое кол-во радионуклида определяемого компонента, добавляют реагент в равных субстехиометрич. кол-вах. Реагент должен полностью расходоваться на образование соед. с определяемым компонентом, а продукт р-ции легго отделяться от исходного в-ва. Состав соед. должен быть постоянным. Чаще всего продукты р-цяи выделяют экстракцией, ионообменной хроматографией, электрофорезом на бумаге и измеряют их активности (стандартный р-р) и А, (анализируемый р-р). Значения т, рассчитывают по ф-ле т, = m AJA - 1). Определяемое соед. и продукт его взаимод, с реагентом могут находиться в разных или в одной и той же фазе. В последнем случас необходимы дополнит, меры для их разделения, [c.195]

При качественных исследованиях успешно применяют стеклянную бумагу типа ватман ОР/А. В этом случае электрофорез проводят при 33 в/см и 140 ма в течение 45 мин. Для обнаружения полисахаридов применяют опрыскивание воздушносухой полоски с обеих сторон реагентом, содержащим 1 г и-анизи-днна и 2 мл концентрированной серной кислоты в 100 мл влажного н-бутанола и последующего 15-минутного нагревания при 100° С. Полисахариды после этой обработки образуют пурпурные зоны. [c.50]

Наличие изоферментов может быть обусловлено также генетическими вариациями в гетерозиготах. Так, если генетически детерминированный вариант определенного белка несет на один положительный или отрицательный заряд больше (или меньше), чем стандартный фермент, то при электрофорезе соответствующей белковой фракции у гете-розигот будет обнаружен новый изофермент. Следует отметить, что электрофоретический метод, часто используемый для выявления изоферментов, не позволяет обнаружить генетические варианты, в которых замещения аминокислот не приводят к изменению заряда молекулы. [c.68]

Один из ПЦР-тестов основан на выявлении фрагмента ДНК длиной 188 п. н., который присутствует во множестве копий в геноме Т. ruzi, но отсутствует в геномной ДНК нескольких родственных паразитов. После амплификации этот фрагмент без труда обнаруживается с помощью электрофореза в полиакриламидном геле. Незначительно варьируя методику проведения ПЦР (например, изменяя нуклеотидную последовательность праймеров), последнюю можно использовать для обнаружения широкого спектра бактерий, вирусов и паразитов. [c.190]

ДНК-диагностика основывается на обнаружении известных нуклеотидных последовательностей для этого синтезируют специфичес1сие праймеры и амплифицируют последователь-ность-мишень. Это позволяет использовать нерадиоактивные системы детекции (например, хемилюминесцентный метод) или регистрировать ПЦР-продукты методом гель-электрофореза. Кроме того, ПЦР-продукты можно пометить флуоресцентным красителем, присоединив его к 5 -концу праймера. [c.202]

Саузерн-блотгипг (Southern blotting) Обнаружение специфических нуклеотидных последовательностей путем переноса денатурированных молекул ДНК, подвергнутых электрофорезу, с агарозного геля на нитроцеллюлозный или найлоновый фильтр за счет капиллярного эффекта и гибридизации с меченым зондом, комплементарным искомой последовательности. [c.559]

Общие методы разделения включают хроматографию в смесях водных и органических растворителей или электрофорез, или и то и другое на бумаге. Из двух методов более медленным является хроматография, в то время как высоковольтный электрофорез может быть проведен в течение 30 мин. Способы обнаружения фосфатов на бумаге варьируют в зависимости от исследуемых соединений наличие в молекуле нефосфатного фрагмента может позволить применить быстрый недеструктивный метод анализа, например нуклеотиды можно определять по поглощению в УФ-свете. [c.411]

Боратный буфер используют и для электрофореза полисахаридов на бумаге , но в этом случае возникают трудности, связанньГе с обнаружением полисахаридов на бумаге и с сильным взаимодействием разделяемых полисахаридов с целлюлозой. Для преодоления этих трудностей в качестве носителя при электрофорезе была предложена бумага из стекло-Еолокна . Электролитом в этом случае служит 2 н. раствор едкого натра, а лля обнаружения полисахаридов могут быть использованы такие реагенты, как реактив Молиша или щелочкой раствор перманганата калия. С помощью этого метода была установлена гетерогенность многих препаратов полисахаридов, например аравийской и трагакантовой камедей, ряда галакто- и глюкоманнанов и пентозанов. Препаративный вариант этого метода — электрофорез на колонке со стеклянным порошком — был успешно использован при выделении сложного гетерополисахарида из одноклеточной зеленой водоросли hlorella pyrenoidosa . [c.487]

Приготовление слоя силикагеля согласно работе [145]. Стеклянную пластинку (200X80 мм) тщательно промывают этанолом. На края пластинки приклеивают полоски фильтровальной бумаги (например, ватман № 1) размером 80X65 мм, которые для улучшения притока буферного раствора имеют продольные разрезы. Клей наносят только в отдельные точки, чтобы буфер мог равномерно проходить через полоски бумаги. Из 4,5 г силикагеля G и 8 мл 3%-ного раствора борной кислоты готовят суспензию, наливают ее на пластинку и разравнивают, причем слой силикагеля должен покрыть и участки бумажных полосок, приклеенных к краям пластинки. Слой высушивают 25 мин при комнатной температуре. Толщина слоя составляет около 0,4 мм. После фиксирования на пластинке места старта и нанесения образца последующие операции производят согласно обычным методикам, применяемым в электрофорезе. По окончании разделения полоски бумаги отрезают, слой высушивают и проводят обнаружение. Та же методика используется и при работе со слоями из кизельгура. [c.161]

Повышение чувствительности определения как за счет появления современных способов детектирования (ЛИФ и масс-спектрометрия) [82, 91], так и вследствие разработки оперативных вариантов концентрирования пробы ([109-111, 165, 166]) обеспечили доступ капиллярному электрофорезу к следовому анализу [138]. Многие лекарственные препараты находятся на уровне ниже пределов обнаружения для КЭ и ВЭЖЗС. Описаны методы повышения чувствительности при одновременном детектировании нескольких лекарств с использованием комбинированного варианта им-муноферментного, лазерно-инд5Щ1фованного детектирования и КЭ [182]. [c.366]

Количественное определение резерпина и продуктов его распада производится флюорометрическим методом после выделения и очистки алкалоида с помощью электрофореза на бумаге. Химико-токсикологнческое обнаружение резерпина возможно только в свежем трупном материале. [c.221]

В качестве преимуществ метода ХТС по сравнению с хроматографией, на бумаге следует специально отметить следующее а) небольшая диффузия приводит к меньшим пятнам, благодаря чему достигается более высокая чувствительность б) меньшее время разделения в) возможность применять самые агрессивные реагенты для обнаружения разделяемых веществ. Последа нее справедливо также для ионофореза в тонких слоях, а пункт б), уменьшение времени разделения, имеет силу в первую очередь для низковольтного электрофореза. Применение свободных неохлаждаемых стеклянных пластинок в качестве носителей адсорбционного слоя имеет известные недостатки. Вследствие сравнительно большой толщины стеклянных пластинок (3,5 мм) затрудняется эффективное охлаждение, совершенно необходимое-для разделения при высоком напряжении (выше 500 в). При использовании более тонких стеклянных пластинок этот недостаток в некоторой степени устраняется. Из-за опасности повреждения слоя труднее осуществить охлаждение с верхней стороны, которое, в противоположность Пастуска и Тринксу [195], мы считаем необходимым уже при напряжении 400—500 в. [c.430]

В качестве критериев чистоты ферментов используют данные электрофореза, ультрацентрифугирования (седиментограмма), определения молекулярной массы различными методами, по растворимости (кривые растворения), оценки полидисперсности с определением специфической активности каждой фракции, хроматографирования на различных носителях и в нескольких системах, аминокислотного состава (особенно — при обнаружении белковых примесей), включая секвенирование (от англ sequen e — последовательность) на автоматизированных приборах - секвенаторах, ит д [c.56]

В качестве прямых методов обнаружения пептидов в элюатах применяют колориметрию и спектрофотометрию. При работе с летучими буферами аликвотную часть можно упарить, а затем анализировать методами бумажной и тонкослойной хроматографии или электрофореза. Этот прием требует много времени, но зато дает полезную информацию о составе полученных фракций. В принципе анализ можно вести, наблюдая изменение какого-либо физического параметра, например коэффициента преломления. Действительно, дифференциальные рефрактометры находят применение для разделения некоторых классов веществ, однако для обнаружения пептидов эти приборы обладают недостаточной чувствительностью. [c.390]

Для обнаружения белков на бумажной реплике можно использовать любой метод проявления, рекомендуемый при электрофорезе на бумаге. Преимущество лиссаминового зеленого (в виде насыщенного раствора в 5%-ной уксусной кислоте) по сравнению с амидо-черным В состоит в том, что избыток красителя отмывается полностью [8], давая совершенно чистый фон. В качестве высокочувствительного проявителя Моррис [9] предложил 0,01%-ный раствор нигрозина в смеси метанол — ледяная уксусная кислота — вода (50 40 10) с последующим промыванием в той же системе. Чувствительным красителем для проявления белков на бумаге является также кумасси бриллиантовый синий К-250, введенный Фазекашем де Сан Гро и др. [c.261]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология