Сефадекс, применение

Свойства и применение ионообменных целлюлоз и сефадексов [c.154]

Декстраны служат исходными веществами при получении молекулярных сит — сефадексов, нашедших сейчас широкое применение в лабораторной практике. Описаны также многие другие технические применения декстранов (см. обзор ). [c.548]

Если применение силикагеля невозможно, и при варьировании растворителя хроматографирование проводят на других сорбентах (силикагель с обращенной фазой, оксид алюминия, целлюлоза, полиамид или сефадекс) или используют хроматографию на сухой колонке [9]. [c.48]

Основу — вольфрам отделяют от микроколичеств натрия сорбцией вольфрама Сефадексом ДЕАЕ [898]. Метод применен для определения натрия в вольфраме и его соединениях. [c.47]

Область применения. Фракционирование на ДЭАЭ-сефадексе с успехом можно использовать во всех областях биохимии, белковой химии, иммунологии и клинической химии для выделения белковых фракций. [c.215]

Предложено разделение неорганических полифосфатов методом хроматографии молекулярно-ситового типа [986] с применением колонок, заполненных сефадексом 9-25, и 0,1 М раствора КС1 в качестве проявителя. [c.98]

Степень полимеризации иолисахаридов ГМЦ в большинстве случаев находится в диапазоне 30—300. Для характеристики величины молекулярной массы широко используются химические методы, основанные на определении восстанавливающей способности полисахарида. Из физических методов находят применение вискозиметрия, осмометрия, светорассеяние, ультрацентрифугирование, определение скорости седиментации и др. [57,77,78]. Распространено определение молекулярных масс полисахаридов с помощью молекулярных сит — сефадексов, биогелей. [c.56]

Как сообщают некоторые авторы [17, 18], применение молекулярных сит, например сефадекса 0-25 или 0-10, позволяет получать лишь частичное разделение этих соединений. В настоящее время основным методом разделения таких соединений [c.282]

Проводилось концентрирование изопреноидных углеводородов Сю—С20 жидкостной хроматографией на сефадексе LH-20 [89]. Отмечено, что применение сефадекса позволяет выделять нзопре-ноиды даже при весьма незначительном содержании их в сырье, [c.63]

Примером может служить применение гель-хроматографии для диагностики заболеваний щитовидной железы. В этом случае используется избирательное сродство трииодтирозина к сефадексу. Предварительно сыворотку инкубируют в стандартных условиях с гормоном, меченным радиоактивным иодом, затем хроматографируют на колонке с сефадексом. Растворителем служит вода. В результате получают три ника пик связанного с белком гормона, пик свободного гормона и между ними пик радиоактивного иода, образовавшегося при фотохимическом разложении гормона. Диагноз устанавливают по количеству иода, т, е. по величине пика. [c.233]

За последние годы широкое применение для разделения высокомолекулярных веществ и определения их молекулярной массы нашел предложенный Л. Поратом и П. Флодином метод гель-фильтрации (гель-хроматографии). Гель-хроматография состоит в фильтровании исследуемого раствора через колонки, заполненные зернами набухающего трехмерного полимера (сефадекса). Набухшие зерна сефадекса представляют собой своеобразные клетки , внутрь которых могут проникнуть путем диффузии только молекулы (ионы) подходящего размера. Более крупные молекулы проходят с фильтрационным потоком мимо зерен сефадекса (рис, 10.8). Набор различных марок сефадексов с возрастающим размером клеток позволяет отделять низкомолекулярньк вещества от высокомолекулярных, разделять макромолекулы, изучать образование ассоциатов в макромолекулярныхрастворах. [c.299]

В практике биохимических лабораторий широко применяют карбокси-метилцеллюлозу и ДЭАЭ-целлюлозу, сефадексы — нерастворимые сшитые декстраны (глюканы), нашедшие применение в технике разделения различных полимерных веществ. Высокомолекулярный полисахарид агар-агар, содержащийся в некоторых морских водорослях, широко используется в микробиологии дпя приготовления твердых питательных сред, а в кондитерской промышленности для изготовления желе, пастилы, мармелада. В пищевой и кондитерской промышленности нашли применение такие природные гликозиды, как ванилин, синигрин, пеларганидин. Как вкусовая добавка в пищевой промышленности используется сорбит — продукт восстановления о-глюкозы. В настоящее время получило широкое распространение биотехнологическое производство ксантана — бактериального полисахарида для нефтедобывающей, пищевой, медицинской промышленности, сельского и лесного хозяйства. [c.238]

Диализ [121] и ультрафильтрация [122] основаны на применении в качестве полупроницаемого барьера тонкой мембраны (например, из ацетата целлюлозы — целлофана), имеющей поры диаметром 1—10 нм (чаще всего 5 нм). Малые молекулы такая мембрана пропускает, а крупные задерживает. Диализ определяется диффузией, и его можно ускорить перемешиванием раствора, а скорость фильтрования зависит от разности давлений по разные стороны мембраны. Более сложный характер имеет гель-фильтрация [123]. Колонку наполняют материалом типа декстрана с большим числом поперечных сшивок (сефадекс ) . обычно он имеет вид спрессованных мягких шариков. Шарик представляет собой трехмерную сеть из углеводных цепей (рис. 2-18). Пространство между цепями (оно зависит от числа сшивок, образующихся в геле при его химической обработке) недостаточно для проникновения туда крупных молекул, но в нем вполне могут задерживаться малые молекулы. При пропускании через такую колонку смеси разных моле- [c.162]

В дополнение к полисахаридным гелям фирмой Bio-Rad (США) предлагаются биогели на полиакриламидной основе (табл. 3-4). Введение в практику макропористых полистирольных смол, ненабухаюшнх пористых стеклянных шариков и иммобилиза-Ш1Я гидрофобных радикалов на декстрановой матрице сделали возможным гель-хроматографическое фракционирование в среде органических растворителей. Алки-лированные декстраны (типа сефадекс-LH) находят широкое применение в синтетической пептидной химии [38]. [c.350]

С тех пор как Порат и Флодин в 1959 г. в качестве носителя при фракционировании белков применили первые гели из сетчатого декстрана сефадекса (Sephadex), произошло очень суш,ественное развитие этой техники. Она стала повседневной во всех лабораториях и даже в промышленных производствах, нуждаюш,ихся в выделении белков. Разработано много других носителей, все более расширяющих возможности их применения. [c.73]

Метод нашел широкое применение в препаративной энзимологии. С помощью сефадекса можно разделить белки с разной молекулярной массой. [c.30]

Наконец, разделение может проводиться по размеру частиц с использованием ситового эффекта. Молекулярные сита представляют собой материалы с порами определенного размера или с порами, размер ко4ч)рых находится в некотором определенном не очень широком диапазоне. Вещества, молекулы которых по размеру меньше, чем размеры пор молекулярного сита, при пропускании через колонку с таким ситом задерживаются на некоторое время в этих порах и движутся медленнее, чем большие молекулы, которые обтекают частички сита и выходят в свободном объёме раствора. В качестве молекулярных сит в биохимии наиболее широкое применение нашли так называемые сефадексы, представляющие собой полисахарид декстран, обработанный эпихлоргидрином, в результате чего слабо разветвленные цепи декстрана оказываются соединены (сшиты) трехуглеродными мостиками [c.235]

НОЧНОЙ хроматографии. Привитые и обращенные фазы не являются новинкой упомянем использование бумаги и слоев на основе ацетилированной целлюлозы, сефадекс Ш-20, хроматографию с высаливанием на ионообменной бумаге и слоях, применение полиамидных слоев [121]. К сожалению, все эти методы и теоретические обоснования протекающих процессов разработаны в основном специалистами, занимающимися ВЭЖХ, и тонкослойная хроматография буквально плетется в хвосте. Полезно было бы обратиться к старым публикациям, посвященным этим вопросам. [c.83]

Для разделения и концентрирования ферментных белков часто используют метод гель-фильтрации с применением сефадексов—полимерных цепей полисахарида декстрана, соединенных через определенные промежутки поперечными связями и образующих своеобразные молекулярные сита, способные разделять белки в соответствии с их молекулярной массой [48, 49]. [c.170]

Комбинированное использование тонкослойной гель-фильтрации с электрофорезом или иммунодиффузией до настоящего времени представляет собой один из наиболее тонких методов микроанализа белков. Хансон и др. [10] разработали метод двумерного разделения, используемый для анализа белков. На первом этапе белки подвергают гель-фильтрации в тонком слое сефадекса G-200 или G-100, а на втором — электрофорезу. Они предложили прибор, в котором хроматографическую пластинку можно закреплять под углом для гель-фильтрации и горизонтально для электрофореза. В описанных экспериментах использовали стеклянные пластинки размером 30 x 30 см и толщиной 1 мм, на которые наносили слой геля сефадекса толщиной 0,5 мм. Для набухания сефадекс оставляли в 0,05 М вероналовом буферном растворе pH 8,6. Сначала проводили гель-фильтрацию, а затем в направлении, перпендикулярном первому, в течение 3 ч вели электрофорез при градиенте напряжения 10 В/см. Этот метод весьма успешно был применен для анализа сывороток крови человека, спинномозговой жидкости и гормона роста. [c.240]

В последние годы все большее распространение получает хроматографическое разделение веществ по их молекулярному весу, причем первое место среди таких вариантов хроматографии принадлежит гель-фильтрации на сефадексах . Сефадекс представляет собой полусинтетический -сорбент полисахаридной природы, гранулы которого обладают порами определенного размера, так что диффузия внутрь этих гранул возможна только для молекул, величина которых не превышает величину пор. Поэтому сефадекс работает как своего рода молекулярное сито , задерживающее проникающие внутрь гранул низкомолекулярные вещества и не задерживающее полимеры. Гель-фильтрация незаменима для быстрого отделения полимера от низкомолекулярных примесей (неорганических солей, мономеров и т. д.). Ее применяют и для разделения полимеров, причем одновременно можно приблизительно оценить их молек лярный вес, так как существует набор сефадексов, различающихся величиной пор. Есть все основания полагать, что в химии полисахаридов этот перспективный метод будет находить все большее применение. Особенно интересным является использование сефадексов для разделения высоко- и низкомолекулярных осколков, образующихся при расщеплении биополимеров различными реагентами , и для выделения полисахаридов из различных природных источников Хроматография на модифицированных сефадексах, обладаюш.их ионообменными свойствами, например на диэтиламиноэтилсефадексе, также может служить эффективным приемом фракционирования полисахаридов . [c.487]

Ионообменная хроматография целлобиогидролаз и целлобиаз протекает, как правило, с высокими выходами ферментов по активности (50-90%). Иная картина наблюдается при очистке эндоглюканаз в режиме сорбции фермента с последующей его элюцией путем увеличения ионной силы. Как уже отмечалось, для этого требуется нанесение фермента при pH 7-8,5, что наряду с длительностью процесса (особенно при использовании мягких носителей типа сефадекс) приводит к значительным, до 90%, потерям активности фермента. Выходом из этого положения является применение более жестких носителей на основе сферона, трисак-рила, методов ВЭЖХ. Как будет показано ниже, это позволяет значительно увеличить разрешающую способность методов при практически полном сохранении активности фермента за счет быстрого проведения процесса. [c.125]

Так как в большинстве случаев белки стабильны в анионной форме (т. е. при pH > ИЭТ), для разделения их используются анионообменные сефадексы. Элюирующие буферные растворы — см. раздел 53. Ионообменные сефадексы регенерируют 0,1—0,5 н. растворами соляной кислоты (для катионитов) нли NaOH (для анионитов) или 0,5—1 М растворами солей. О применении ионообменных сефадексов см. в разделе 59. [c.163]

В практику полиакриламидные гели введены Хьерте-ном и Мосбахом — см. S. Н j е г t e п and R. Mosba h Ana . Bio hem., 3, 109 (1962). Используются в основном для гель-фильтрации в водных средах (области применения — аналогично сефадексам, см. раздел 64). Для обессоливания биохимических субстратов наиболее пригодны гели марок от Р-2 до Р-10, для концентрирования растворов с помощью сухого порошка — гель Р-2. [c.165]

Агароидные бисерные гели применяются для гель-фильтрации (см. раздел 64) очень крупных молекул, которые нельзя разделить на сефадексах (однако область применения агароидов частично перекрывает область применения сефадекса G-200). Агароидные гели используются для выделения и разделения протеинов, нуклеопротеидов, нуклеиновых кислот, полисахаридов, вирусов, бактериофагов, субклеточных частиц и т. п. [c.169]

Совершенно новым в разделенип высокомолекулярных соединений является применение фильтров из сефадекса [20] — набухающего декстрана, образующего сетчатую, пористую структуру. В то время как большие молекулы в эти поры не проникают, неорганические соли и небольшие молекулы беспрепятственно диффундируют в гель. При пропускании водного раствора таких соединений через колонку с сефадексом первая фракция содержит высокомолекулярные соединения, а небольшие молекулы некоторое время задерживаются в колонке, однако всегда количественно вымываются водой или разбавленным раствором соли. Преимущество этого изящного метода диализа заключается прежде всего в экономии времени эта операция требует всего около 60 мин. [c.397]

Было проведено также разделение о-глюкозы и сахаров ряда циклодекстрина вплоть до целлогексаозы как на биогеле Р-2, так и на сефадексе G-15 с применением воды для элюирования [96]. Наблюдалось взаимодействие между гелем, особенно в случае с сефадексом G-15, и растворенным веществом, оно возрастало с увеличением молекулярной массы вещества. Оказалось, что сефадекс G-15, предварительно обработанный 1М соляной кислотой, пригоден для разделения смеси голубой декстран— стахиоза—мальтоза—о-глюкоза при использовании воды в качестве подвижной фазы [41]. [c.94]

Одним из основных факторов, влияющих на хроматографию сложных гликозидов, является объемный агликон, поэтому, кроме хроматографии, в системе жидкая фаза—жидкая фаза для их разделения применяют также гель-проникающую хроматографию (табл. 22.12). Из коры и листьев Populus tremula гель-фильтрацией на сефадексе С-25 и LH-20 с применением воды в качестве подвижной фазы были выделены сахароза, о-глюкоза и их фенольные гликозиды [143, 144]. Однако разделение продуктов синтеза, например Кёнигса—Кнорра, обычно проводят до удаления защитных групп методом хроматографии в системе жидкая фаза—твердая фаза. Систему растворителей обычно выбирают по результатам тонкослойной хроматографии, которую также применяют для детектирования. Примеры приведены в табл. 22.12. [c.108]

В последние несколько лет гель-хроматография нашла разнообразное применение в анализах жирных кислот. Чангу [28] удалось разделить на биобедсе 5Х-2 и 8Х-8 кислоты таллового масла на нормальные жирные кислоты и мономерные, димерные и гримерные смоляные кислоты. Триметилсилильные производные сефадекса 0-25 и другие смолы оказались весьма удовлетворительными для разделения смесей, содержащих эфиры жирных кислот и спирты жирного ряда [33]. [c.193]

ЛИПИДОВ на сефадексе LH-20 с применением с качестве элюента хлороформа и этанола. Первая методика оказалась пригодной для отделения глицериновых эфиров от эфиров гликолей, простых эфиров от сложных эфиров и других нейтральных липидов (рис. 27.1). Для полного разделения использовалась комбинация гель-хроматографии и-тонкослойной хроматографии на кремневой кислоте. Кальдерон и Бауман [31] анализировали смеси липидов этиленгликоля, липидов глицирина, углеводов и восков. Наилучшие результаты были получены путем сочетания гель-хроматографии на сефадексе LH-20 с распределительной хроматографией [32]. [c.201]

После димеризации глицеридов, которая происходит во время нагревания, может проводиться их хроматографирование или на геле сефадекса LH-20 [42], или на геле сферона (Spheron) S-232 [43] (рис. 26.1). В работе [44] описано разделение топленых жиров на мономеры, димеры и более высокие олигомеры триацилглицеринов с применением гель-хроматографии. Анализы окисленных триацилглицеринов проводили методом жидкостной хроматографии с использованием жидкостного детектора Пая. Окисление и полимеризация глицериновых эфирюв, происходящие во время их нагревания, особенно при жарении, часто изучаются после предварительного превращения их в жирные кислоты [45], так как растворимость последних лучше и более явно проявляются их различия к окислению. [c.203]

Некоторые смеси стероидов могут быть разделены (и были разделены) несколькими принципиально различными хроматографическими методами. В качестве иллюстрации достаточно привести высказывание из работы [1], в которой автор подчеркивает, что одинаковые результаты могут быть получены применением различных хроматографических методов. Авторы использовали колонку, заполненную кремневой кислотой (ср. рис. 28.2 и 28.3), и для элюирования применяли смесь диэтилового и петролейного эфиров переменного состава. Однако в этой же работе авторы утверждают В последней работе Фернандеса и сотр. [2 описано разделение прогестинов и эстрогенов с применением колоночной хроматографии на сефадексе ЬН-20 и смеси метанол—вода (85 15) в качестве элюирующей жидкости. Мы получили результаты, сравнимые с результатами этой работы, но в нашем методе разделение различных прогестинов оказалось лучшим . [c.211]

К наиболее часто применяемым гидрофильным гелям относятся DEAE-сефадекс А-25 в сочетании с градиентным элюированием раствором хлорида натрия и сефадекс G-25 с применением в качестве элюента дистиллированной воды. Эти гели применяют для разделения сопряженных экстрогенов (см. ниже) и связанных с белками тестостеронов [42, 43]. [c.223]

В работах [88, 89] использован метод гель-проникающей хроматографии на сефадексе 0-25 (колонка 38X1,8 см) с применением дистиллированной воды в качестве элюента для разделения растворимых в воде производных эстрогенов. [c.235]