Окрашивание после электрофореза

Анализ гелей после извлечения их из трубок. Извлеченные из трубок гели можно сканировать, не подвергая их никакой дальнейшей обработке или после окрашивания. Окрашенные гели можно также разрезать на сегменты и проанализировать материал, полученный путем элюирования. Кроме того, гели можно солюбилизировать, например для определения в них радиоактивности. Гели извлекают из трубок и окрашивают сразу же после электрофореза во избежание диффузии полос. Извлечение гелей связано с трудностями, и для того, чтобы успешно провести эту процедуру, не повредив поверхности гелей, необходим определенный опыт. Один из возможных способов заключается в том, что в пространство между стенкой трубки и гелем медленно вводят вращательным движением иглу шприца длиной около 8 см, выдавливая из шприца воду или 50%-ный глицерин. Иглу вынимают после того, как гель начинает свободно перемещаться в трубке или когда его можно вытеснить под давлением с помощью медицинской капельницы с грушей, заполненной водой. Это следует делать над лотком с водой или в самом лотке. [c.268]

Вард [1373] предложил еще одно приспособление для поперечного электрофоретического обесцвечивания, очень сходное с аппаратом Швабе [1151], но отличающееся от него конструкцией поддерживающей стойки для столбиков геля. После электрофореза гели помещают в эту стойку и в ней осуществляют все последовательные операции — окрашивание, быстрое обесцвечивание и фотографирование гелей. [c.189]

После электрофореза полоски пленки помещают во влажную камеру. Для этой цели удобно использовать плоскую пластмассовую коробку с плотно прилегающей крышкой. Пленку кладут на подложку из фильтровальной бумаги с прямоугольной прорезью так, чтобы с подложкой соприкасались только края пленки. Подложки можно изготавливать, например, из нескольких слоев фильтровальной бумаги ватман № 3. Крышку коробки следует выстлать поролоновой губкой, которую увлажняют, чтобы во время иммунодиффузии в камере поддерживалась влажная атмосфера. Подложки также смачивают раствором электролита, используемым для пропитывания пленок. Полоски фильтровальной бумаги (ватман № I) шириной 1—2 мм пропитывают антисывороткой, проводя по ним пастеровской пипеткой, которую держат в вертикальном положении. Оптимальное количество антисыворотки и расстояние между полоской с антисывороткой и образцом подбирают эмпирическим путем. Если полоска содержит только часть необходимого количества антисыворотки, то остальной объем наносят уже после того, как полоску помещают на пленку. Оптимальное время диффузии следует определять в предварительных опытах как правило, для этого требуется 18—48 ч. Линии преципитации не видны на пленках и обнаружить их можно только после окрашивания. С этой целью избыток белка удаляют путем промывания пленки солевым раствором в течение нескольких часов, после чего преципитаты можно окрасить так же, как зоны, получаемые при электрофорезе на ацетате целлюлозы. Лучше всего пользоваться водорастворимыми красителями (пунцовый 5 или нигрозин). [c.245]

Белки после электрофореза чаще всего выявляют, окрашивая электрофореграммы теми или иными красителями. Общие принципы методов окрашивания приведены в разд. 1.15.2, а здесь будут рассмотрены лишь некоторые белковые красители и отдельные примеры их применения. [c.266]

Описанные в настоящей главе методы можно использовать для обнаружения, а в некоторых случаях и для количественного определения белков после их разделения с помощью электрофореза в средах, содержащих обычные буферные растворы. В присутствии высоких концентраций таких добавочных агентов, как ДСН или мочевина, следует уделять особое внимание правильной фиксации белков. Амфолиты-носители, применяемые при изоэлектрофокусировании, создают дополнительные трудности, так как образуют со многими белковыми красителями нерастворимые комплексы. Поэтому при наличии в растворах указанных добавок необходимо применять модифицированные методы окрашивания. Некоторые примеры окрашивания белков после электрофореза в присутствии ДСН или амфолитов-носителей приведены в главах, посвященных соответствующим методам разделения. [c.278]

Метод включения в гель субстрата или затравки. При использовании высокомолекулярного субстрата или затравки инкубация геля в растворе субстрата дает лишь весьма посредственные результаты, поскольку субстрат плохо проникает в гель и реакция происходит только на его поверхности. Проблема может быть решена путем включения субстрата в гель перед проведением электрофореза. В этом случае гели после электрофореза инкубируют в буферном растворе с подходящим значением pH или во влажной камере, а затем проводят окрашивание макромолекулярного субстрата. После обесцвечивания гелей в местах локализации фермента выявляются бесцветные или менее интенсивно окрашенные полосы. При использовании техники включения субстрата в гель должны выполняться два [c.280]

Природные субстраты протеаз также пригодны для выявления этих ферментов после электрофореза. Гели инкубируют с белками, а затем окрашивают и обесцвечивают обычными для белков методами. Бесцветные или слабо окрашенные полосы появляются в местах действия протеолитических ферментов. Во многих случаях применяют окрашенные белки, что позволяет избежать трудоемких процедур окрашивания и обесцвечивания. [c.303]

Описаны приемы локализации протеолитической активности после электрофореза в крахмальном [655, 1120] и полиакриламидном гелях [57] с использованием методики включения субстрата в гель. Возможность применения этой методики для указанной цели была недавно изучена [37]. Чтобы предотвратить миграцию белкового субстрата вовремя электрофореза, эти авторы использовали в качестве субстрата казеин, осажденный кислотой. Нерастворимый казеин обрабатывали ультразвуком и образовавшиеся мельчайшие частицы смешивали с гелеобразующим раствором. Конечная концентрация казеина в геле составляла 0,1% (масса/объем). После электрофореза гель инкубировали в течение 2—12 ч при 37°С в 0,1 М буфере трис-НС1 (pH 7,5). Казеин пригоден только при электрофорезе в кислой среде, поскольку в щелочной среде он мигрирует. В этом случае вместо казеина можно использовать препарат гемоглобина, приготовленный путем осаждения и обработки ультразвуком. Окрашивание гелей белковым красителем (напри-, мер, нигрозином) увеличивало контрастность полос. [c.303]

Для обнаружения рибосомных белков после электрофореза можно использовать любой применяемый после электрофореза в геле метод выявления белков (например, окрашивание амидовым черным 10 В, кумасси ярким синим К-250 или 0-250, а в случае радиоактивных белков -радиоавтографию). Недавно [c.314]

После электрофореза в агарозном геле, так же как после электрофореза в других гелях, разделенные компоненты обнаруживают путем окрашивания различными красителями или методами денситометрии в УФ-свете. Поскольку высушивание агаровых гелей не представляет трудности, в УФ-свете можно получать контактные отпечатки с высушенных пленок геля. [c.370]

Если нуклеиновую кислоту фракционируют в отсутствие БЭ, окрашивание можно провести после электрофореза, поместив гель иа 30 мин в раствор, содержащий 5 мкг/мл БЭ. Для снижения фонового свечения, вызванного присутствием несвязавшегося БЭ, следует промыть гель в течение 30 мин в буфере для электрофореза или в дистиллированной воде. Примечание длительная промывка может привести к исчезновению слабых зон. [c.286]

В настоящей главе описаны методы иммунодиффузии и иммуноэлектрофореза (ИЭФ) 1В агаровых и агарозных гелях, а также иммунохимическое окрашивание реплик, полученных методом Вестерн-блоттинга после электрофореза в полиакриламидном геле. [c.197]

После электрофореза можно хранить гель на том же стекле, обернув его целлофаном, или предварительно перенести на металлическую фольгу. Можно положить на гель фильтровальную бумагу, которая хорошо к нему прилипает, и снять стекло. На этой же бумаге (после фиксации и окрашивания) гель можно и высушить. [c.35]

Во всех описанных способах белки перед окрашиванием или в его процессе фиксируют осаждением кислотой и спиртом. Однако некоторые основные белки (например, рибонуклеаза и протамин), а также низкомолекулярные пептиды и гормоны при такой обработке не осаждаются, а, наоборот, растворяются и вымываются из геля. Недавно был предложен принципиально иной подход к фиксации белков и пептидов в геле после электрофореза. Гель в течение 1 ч вымачивают в 5%-ном растворе формальдегида в 25%-НОМ этаноле с добавлением СВВ R-250 до 0,11%. В этих условиях формальдегид ковалентно сшивает пептиды с матрицей геля за счет образования метиленовых мостиков между аминогруппами аминокислот и первичными аминами ПААГ. На приведенных в работе фотографиях можно видеть разительный эффект обнаружения щелочных и низкомолекулярных белков гели, кажущиеся пустыми при обычном окрашивании, на самом деле содержат множество белковых полос. Гели с ДДС-Na красят более продолжительное время (до 3 ч) в 3,5%-ном рас- [c.93]

ОКРАШИВАНИЕ НУКЛЕИНОВЫХ КИСЛОТ ПОСЛЕ ЭЛЕКТРОФОРЕЗА [c.150]

В подавляющем больщинстве случаев для окрашивания ДНК и РНК после электрофореза в ПААГ или гелях агарозы используют бромистый этидий — фенантреновый краситель, несущий положительный заряд и обладающий способностью внедряться в двунитевые участки нуклеиновых кислот между плоскостями соседних пар оснований. [c.150]

Для зонного электрофореза ацетатцеллюлозную мембрану (САМ) первым использовал Кон [51]. По мнению Кона, преимущества этого носителя — его однородность и строго определенная пористость. САМ содержит пренебрежимо малое число ОН-групп, загрязненность органическими и неорганическими примесями также весьма мала. В тех случаях, когда сильная сорбция может приводить к образованию на бумаге полосок сзади зон (как, например, при электрофорезе биополимеров) важным преимуществом становится пониженная сорбционная активность САМ. В отличие от бумаги САМ позволяет получить хорошее разделение агфракции сывороточного альбумина, а также инсулина, фибриногена, гистонов, лизоцимов, глико- и липопротеинов и нуклеиновых кислот. После электрофореза меченых соединений остаточная радиоактивность между зонами и стартом исключительно мала. Обесцвечивание фона, если обнаружение проводится путем окрашивания и последующего обесцвечивания, происходит достаточно быстро. [c.293]

Определить количество копий плазмиды в клетках трансформированного штамма можно разными методами, но все эти. методы предполагают выделение суммарной дрожжевой ДНК с последуюш,им определением соотношения плазмидной и геномной ДНК. Относительно простой способ оценить число копий высококопийной плазмиды — сравнение интенсивности окрашивания бромидом этидия рестрикционных фрагментов, соответствующих плазмидной ДНК и ДНК рибосомных повторов в суммарной геномной ДНК. Если суммарную ДНК из трансформированных дрожжей обработать рестриктазой, расщепляющей плазмиду и выщепляющей рибосомный повтор, соответствующие рестрикционные фрагменты можно визуализировать, окрашивая бромидом этидкя агарозный гель после электрофореза. В УФ-свете эти полосы отчетливо высвечиваются над фоновым свечением всех остальных окрашенных бромидом этидия гетерогенных по длине рестрикционных фрагментов. В ДНК гаплоидной дрожжевой клетки содержится приблизительно 140 копий рибосомных последовательностей, содержание же плазмидной ДНК может быть оценено количественно при помощи денситометриче-ск го сканирования фотонегативов, полученных при съемке геля. Интенсивность окрашивания нормализуют относительно длины [c.232]

Препаративное электрофоретическое разделение веществ можно проводить и на пластинах геля. Но так как слой агарового геля с толщиной больше 0,5 см невозможно достаточно эффективно охлаждать и так как при увеличении толщины ге-v я качество, разделения ухудшается, Виме [1419] рекомендует делать длинные канавки для нанесения пробы вместо увеличения толщины пластины. После электрофореза разделенные компоненты можно обнаружить либо одним из оптических методов— сканированием или фотографированием в ультрафио-чяетовом свете [1076, 1077, 1307], либо окрашиванием реплики — фильтровальной бумаги, предварительно прижатой к ге-члю [451], либо окрашиванием небольшой полооки, отрезанной от основного геля. В последнем случае полоску геля прикладывают к соответствующей прокладке, пропитанной водным раствором алцианового синего [736]. [c.66]

После завершения иммунодиффузии иммуноэлектрофорег-рамму можно сразу же сфотографировать без всякой обработки геля, причем лучше в рассеянном свете (при темнопольном освещении [952]). Кроме того, линии преципитации можно окрасить каким-либо белковым красителем. Перед окрашиванием непрореагировавшие белки необходимо отмыть солевым раствором. Для этого пластины геля вымачивают в течение 24—48 ч в солевом растворе, который несколько раз меняют. В последний раз гель промывают дистиллированной водой. Во время промывания слой геля может отделиться от стеклянной пластинки. Чтобы этого не произошло, стеклянную пластинку перед нанесением на нее горячего агарового золя следует покрыть тонкой. пленкой агара (на пластинку наливают разбавленный золь агара и дают ему высохнуть). После промывания гель накрывают полоской влажной фильтровальной бумаги, размеры которой на несколько сантиметров должны превышать размеры геля. Гель вместе с бумагой высушивают под вентилятором, а затем отделяют бумагу от высушенного слоя агара. Линии преципитации можно окрашивать практически любым красителем, применяемым для окрашивания белков после электрофореза в агаровом или агарозном гелях. [c.239]

Пожалуй, наиболее широко для окрашивания белков используют амидовый черный 10 В (современные фирменные названия нафталиновый черный 12 В 200, нафталовый сине-черный б В, буффало черный, понтациловый сине-черный 8С или 5Х, С. I. 20,470). Этот краситель применяют для окрашивания белков после электрофореза на бумаге или в различных гелях. Его обычно растворяют в 7%-ной уксусной кислоте или в смеси уксусной кислоты, метанола и воды. В обоих случаях раствор перед употреблением обязательно следует профильтровать, поскольку крупинки нерастворившегося красителя могут давать ложное окрашивание. [c.266]

Белки на бумажных электрофореграммах обычно фиксируют, высушивая последние при 100—120 °С, а затем бумагу погружают на 10 мин в ванночку с раствором, содержащем не более 1% красителя. Грассманн и Ханниг [468] предложили использовать насыщенный раствор амидового черного в смеси, состоящей из 9 частей метанола и 1 части уксусной кислоты. Обесцвечивание фона на электрофореграммах осуществляют, промывая их несколько раз той же смесью метанола и уксусной кислоты. Таким же способом обнаруживают белки и после электрофореза на ацетате целлюлозы, причем пленки можно сразу же погружать в раствор красителя для окрашивания вполне достаточно 5 мин. [c.266]

При количественной оценке разделенных фракций, окрашенных амидовым черным 10 В, возникает ряд трудностей. Различные белки связывают неодинаковые количества красителя [1240], поэтому калибровочные кривые приходится строить для каждого компонента разделяемой смеси. При использовании бумаги в качестве носителя адсорбция красителя на волокнах целлюлозы может приводить к неравномерному окрашиванию зон и возникновению более высокого фона [330]. После электрофореза на пленках из ацетата целлюлозы были обнаружены отклонения от линейной зависимости между площадью пиков на денситограмме и количеством нанесенного белка [367]. В случае электрофореза в гелях площадь пиков на денситограмме зависит не только от количества нанесенных белков, но и от длины пройденного ими пути [283, 383] (см. рис. 71). [c.267]

В 1963 г. Фазекас де Грот и др. [367] предложили использовать для окрашивания белков после электрофореза на ацёта-те целлюлозы трифенилметановый краситель — кумасси яркий синий К-250 (синонимы кислый голубой 83, супранолцианин 6В экстра, С. I. 42660). С тех пор этот краситель широко используется во многих видах электрофоретического разделения. Молекула кумасси яркого синего К-250 содержит две группы ЗОзН и в слабо кислой среде- связывается с основными группами белков. В связывании принимают участие и вандерваальсовы силы. Белок и краситель образуют прочный комплекс, который, однако, полностью диссоциирует в результате разбавления раствора при соотйетствующнх значениях pH [367]. [c.268]

Кумасси яркий синий G-250 (ксилоловый яркий цианин G, С. I. 42 665) по своей структуре сходен с кумасси ярким синим R-250, но содержит две дополнительные метильные группы. Ди-зел и др., [302] предложили использовать его для окрашивания белков в полиакриламидном геле. Гели погружают на 5 мин в. 12,5%-ную ТХУ, затем к 40 мл этого фиксатора добавляют 2 мл 0,25 уЬ-ного (масса/объем) водного раствора кумасси яркого синего G-250 и тщательно все перемешивают. С помощью данного метода белковые полосы хорошо прокрашиваются, и уже через 30 мин после электрофореза электрофореграммы можно фотографировать, не проводя их обесцвечивания, поскольку этот краситель еще менее, чем R-250, растворим в воде и почти не проникает в гель. При хранении гелей в 5%-ной уксусной кислоте интенсивность окраски белковых зон значительно увеличивается, по всей вероятности, вследствие диффузии красителя внутрь белковой зоны. Гели можно хранить в течение 8—10 нед без существенного снижения интенсивности окраски. [c.270]

Для окрашивания белков часто применяют кислотно-основный индикатор бромфеноловый синий. Так как в условиях электрофореза этот краситель непрочно связывается с белками, его часто используют в качестве окрашенного маркера при электрофорезе в полиакриламидном геле в щелочных системах. Кун-кель и Тнзелиус [728] применяли для окрашивания белков после электрофореза на бумаге водный раствор, содержавший 1% хлористой ртути, 0,05% бромфенолового синего и 2% уксусной кислоты. [c.271]

Для окрашивания белков после электрофореза на бумаге можно использовать азокармин В по методике, описанной для амидового черного 10 В. Полоски электрофореграмм помещают на 10 мин в раствор азокармина В в смеси 90%-ного метанола и 10%-ной уксусной кислоты. Фон обесцвечивают той же смесью растворителей [711]. Белки в агаровом геле окрашивают 0,05%-ным раствором азокармина в смеси, состоящей из 20 мл ледяной уксусной кислоты, 150 мл глицерина и 830 мл воды [1329]. [c.272]

Арагансилло и др. [49] изучали влияние различных условий на окрашивание протеолипидов (называемых в указанной работе белками СМ) эндосперма пшеницы и глиадинов после электрофореза в крахмальном геле. При сравнении эффективности [c.272]

Описан чувствительный метод окрашивания белков с помощью одного из производных ремазолового яркого синего R, [276,. 277], позволяющий проводить полуколичественный анализ результатов после электрофореза в полиакриламидном геле. [c.275]

Гликопротеиды можно выявить путем окрашивания как белковой, так и углеводной части молекулы. Для обнаружения гликопротеидов после электрофореза используют такие белковые красители, как амидовый черный 10 В i[473], быстрый зеленый 883] или кумасси яркий синий R-250 [839]. Методы, основанные на реакциях углеводной части молекулы, обсуждаются в последующих разделах. [c.277]

Дезоксирибонуклеазы можно обнаруживать так же, как и рибонуклеазы. Бойд и Митчелл, [156] добавляли к акриламиду субстрат (нативную или денатурированную ДНК) перед полимеризацией геля. После электрофореза гели инкубировали и окрашивали присутствующую в них ДНК метиловым зеленым. Этот метод позволяет обнаружить 250 пг панкреатической ДНКазы. При сканировании гелей на денситометре при длине волны 260—265 нм окрашивание гелей можно не проводить [155]. [c.294]

Окрашивание ПАА-гелей в течение ночи кумасси R250 (0,2% масс./об.) в смеси 45%-ньтй метанол — 10%-ная уксусная кислота, обесцвечивание раствором Ю7о-ный метанол — 7%-ная уксусная кислота [317]. После электрофореза агарозные гели смачивались дистиллированной водой, обертывались фильтровальной бумагой и выдерживались 30 мин при 37 °С. Окраска проявлялась через 15 мин после обработки кумасси R250 (0,1%, масс./об.) в смеси 45%-ный этанол— 10%-ная уксусная кислота. Обесцвечивание той же смесью растворителей. [c.304]

Рис. 5.1. Рестрицированная ДНК из различных источников после электрофореза в агарозном геле и окрашивания бромистым этидием. Дорожка 1 —калибровочные фрагменты ДНК бактериофага X, обработанной Hindlll. 2 — при обработке рестриктазой ДНК плазмиды образуются хорошо различимые фрагменты. 3 — тотальная ДНК агробактерий, обработанная рестриктазой. 4 — тотальная ДНК растения, обработанная рестриктазой.

Молекулы, разделенные с помощью электрофореза в полиакриламидном геле, можно электрофоретически перенести на нитроцеллюлозную мембрану, с которой они свяжутся, воспроизведя картину элекрофоретического разделения. Этот процесс называют Вестерн-блоттингом или электроблоттингом [10, 17]. После блоттинга треки стандартного антигена и маркеров мол. массы окрашивают белковым или углеводным красителем, а остальные. инкубируют с образцами антител 9, 18]. С помощью меченых антител выявляют отдельные антигенные полосы (после электрофореза в. восстанавливающих условиях — субъединицы сложных молекул антигенов). Эту стадию называют иммунохимическим окрашиванием. В полном варианте метода используют как исключительную способность электрофореза в ПААГ разделять молекулы, концентрации которых очень малы, так и свойство антител выявлять специфические антигенные компоненты. Таким образом, метод чаще всего применяют для определения состава и молекулярных размеров антигенов, но, кроме того, он очень эффективен для определения специфичности антител (в частности, МКА) и поиска антигенно родственных молекул в однотипных или раз-лич.ных антигенных препаратах (например, различные виды бактерий, вирусные мутанты, клеточные экстракты и т. д.). [c.230]

Во втором направлении белки разделяли ступенчатым электрофорезом в пластине ПААГ размером 13X14 см и толщиной 0,8 мм. В качестве рабочего геля до уровня на 2,5 см ниже верхнего края пластины полимеризовали экспоненциальный градиент (5—22,5%) ПААГ в 0,375 М Трис-НС1 (pH 8,8) с добавлением 0,1% ДДС-Na, стабилизированный глицерином. Формирующий гель представлял собой 4,75%-ный ПААГ, полимеризованный в 0,125 М Трис-НС1 (pH 6,8) с 0,1% ДДС-Na. Клиновидную полость над пластиной для помещения в нее цилиндри-, ка геля первого направления формировали так, как это принято делать при двумерном электрофорезе [Остерман, 1981]. Эту полость заполняли расплавленным 1%-ным раствором агарозы в том же буфере, а затем закладывали в нее цилиндрик геля. В качестве верхнего электродного буфера использовали, как обычно при электрофорезе по Лэммли, раствор, содержащий 0,025 М Трис, 0,192 М глицин и 0,1 % ДДС-Na (pH 8,3) с добавлением бромфенолового синего в качестве лидирующего красителя. Электрофорез длился 5 ч при силе тока 20 мА. За это время полоса красителя достигала нижнего края пластины. Для окрашивания белков после электрофореза использовали 0,1%-ный раствор СВВ R-250 в 50%-ной ТХУ. Перед авторадиографией гель высушивали и экспонировали с рентгеновской пленкой от суток до месяца в зависимости от исходной радиоактивности препарата и необходимости выявления слабых пятен. Прн этом следует иметь в виду, что при увеличении продолжительности экспозиции увеличивается и размер каждого пятна — примерно вдвое при 10-кратном удлинении экспозиции. Соответственно может ухудшаться разрешение близко лежащих пятен. [c.47]

После электрофореза в присутствии ДДС-Ыа гель окрашивают, как обычно, например, в 0,25%-ном растворе СВВ К-250 (см. ниже) в 9%-ной уксусной кислоте, содержащей 45% метанола, в течение нескольких часов при комнатной температуре, а затем отмывают в 7,5%-ной уксусной кислоте с 5% метанола и добавкой ионообменника АО 501x8 для связывания красителя. Фиксация белков идет одновременно с их окрашиванием. Однако следует иметь в виду, что ДДС-Ыа является эффективным детергентом и препятствует осаждению, а следовательно, и фиксации белков. Д я малых белков фиксация при окрашивании может оказаться ненадежной. Их лучше фиксировать предварительно, вымачивая гель в 10%-ной трихлоруксусной кисло-,те (ТХУ). ДДС-Ыа, находясь в комплексе с белком, еще и препятствует в некоторой мере самому процессу окрашивания. 10%-ная ТХУ частично отмывает белок от ДДС-Ыа. Еще лучше это можно делать, вымачивая гель в 50%-ном растворе ТХУ (в течение ночи). Изопропанол ускоряет вымывание ДДС-Ыа, поэтому его целесообразно включить в фиксирующий белки раствор. [c.64]

Если примириться с некоторой диффузией полос во время окрашивания и не осаждать белки, то их можно красить в водных буферах кислыми или щелочными красителями (в зависимости от заряда белка). Связь между красителем и белком в этих случаях осуществляется в основном за счет сил кулоновского взаимодействия. В области нейтральных pH такие кислые красители, как СВВ, бромфеноловый синий и Fast green , заряжены отрицательно. Их изоэлектрическая точка лежит ниже pH 3,5. Щелочные красители (метиленовый синий, толуидиновый синий и пиронин) в нейтральных буферах несут положительный заряд (р/>9,5). Таким образом, кислые белки в мягких условиях можно красить щелочными красителями, а щелочные — кислыми. Красители растворяют в воде до концентрации 0,02% и нейтрализуют раствор добавлением 0,2 М фосфатного буфера (pH 7) до концентрации 5 мМ. Гель после электрофореза для удаления избытка рабочего буфера вымачивают в воде в течение 5 мин, затем окрашивают 10 мин при комнатной температуре. Отмыть фон можно в течение часа в деионизованной воде или смеси метанол—вода (1 2), что стабилизирует окраску. Окрашенные гели хранят в разбавленных водных растворах красителей во избежание их десорбции. В воду добавляют в качестве антисептика азид натрия до концентрации 0,01% [Ru hel et al., 1978]. [c.95]

Недавно был предложен принципиально новый способ окраски белков после электрофореза в ПААГ, обеспечивающий, по утверждению авторов, на два порядка более высокую чувствительность, чем СВВ R-250 [Merril et al., 1979]. Белки окрашивают ионами серебра в присутствии небольшой добавки ионов меди. Эти ионы вносят в составе нитратов серебра и меди, растворенных в воде с добавлением пиридина и этанола. Гель предварительно обрабатывают формальдегидом. После первой обработки этими ионами гель еще раз споласкивают довольно концентрированным (11%) щелочным раствором нитрата серебра и, наконец, восстанавливают серебро обработкой смесью формальдегида и лимонной кислоты в 10%-ном этаноле. Механизм окрашивания неясен. По-видимому, он сходен с восстановлением серебра в фотографическом процессе, так как передержанный гель можно ослабить обычным ослабителем для фотографии. [c.95]

Полноразмерный член семейства Ь1МЕ-1 человека (ееерху) аналогичен членам, обнаруженным у всех млекопитающих. Указано несколько характерных для приматов рестрикционных сайтов. Например, Крп1-фраг-менты длиной 1,5 и 1,2 т.п.н., образующиеся после эндонуклеазного расщепления геномной ДНК, присутствуют в гидролизате в достаточно большом количестве, чтобы их можно было обнаружить после электрофореза и окрашивания геля бромистым этидием. Учас- [c.204]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология