Разделение липидов на фракции

И. РАЗДЕЛЕНИЕ ЛИПИДОВ НА ФРАКЦИИ [c.450]

Разделение полярных и неполярных липидов обычно выполняют методом адсорбционной или распределительной хроматографии. При этом, как правило, фосфолипиды отделяют от нейтральных липидов и свободных жирных кислот. Если в исходной смеси присутствуют гликолипиды, их обнаруживают во фракциях, содержащих липиды промежуточной полярности. [c.135]

И неполярные липиды (содержание последних довольно велико). Далее эфиром и смесями эфира с ацетоном (с возрастающей долей ацетона) вымывают гликозиды каротиноидов. В этих условиях фосфолипиды остаются адсорбированными в колонке. Гликозиды каротиноидов, выделенные из микобактерий, обычна этерифицируются различными жирными кислотами по одной из гидроксильных групп ГЛЮКОЗЫ. Поэтому эти эфиры необходимо омылить этанольным раствором гидроксида калия. Очень важной стадией является ацетилирование гликозидов уксусным ан-гидридом и пиридином. При этом сахарная, т. е. гидрофильная, часть молекулы становится липофильной и образующиеся ацетилированные гликозиды лучше поддаются дальнейшему разделению. Выделенные фракции повторно хроматографируют на силикагеле, однако полученные в результате фракции все-таки представляют собой смеси трех или более компонентов. Получить фракции индивидуальных компонентов можно, хроматографируя эти смеси на оксиде магния (колоночная или тонкослойная хроматография). В табл. 4.12 приведены все идентифицированные гликозиды каротиноидов, выделенные из микобактерий, а также их величины полученные на тонких слоях оксида магния элюированием смесью петролейный эфир (т. кип. 60—70 °С)—бензол — метанол (40 10 1). Подобную же смесь используют и в колоночной хроматографии. Колонку заполняют смесью (1 1) оксида магния и кизельгура (фирмы Мегск, Дармштадт, ФРГ). Как видно из табл. 4.12, каждая дополнительная сопряженная двойная связь в молекуле уменьшает Я), а циклизация молекулы увеличивает ее. Соединения В, Д и 3, перемещающиеся при хроматографии на силикагеле, как одна зона, легко разделяются этим методом. Различные типы ацетилированных гидроксильных групп (в соединениях А, В, Г я Ж) или карбонильная группа приводят к различному по величине замедлению движения хроматографируемого вещества. Очевидно, характер гликозидной связи также существенно влияет на величину [c.209]

И. Коэффициент распределения предельных органических кислот с длинной углеводородной цепью между гексаном и водным буферным раствором с рН=10 составляет около 0,1. Коэффициент распределения некоторых полярных липидов в той же самой системе растворителей приблизительно равен 25. а) Определите, при каком соотношении объемов гексана и буферного раствора разделение липидов и кислот будет оптимальным, б) Необходимо выделить фракцию предельных органических кислот, свободную от полярных липидов. Как можно повысить степень чистоты кислотной фракции после ее извлечения из гексана [c.522]

Глицериды и соли жирных кислот составляют основную часть относительно нерастворимых органических веществ в сточных водах. Основными компонентами жирнокислотной фракции являются насыщенные и ненасыщенные жирные кислоты с длинной цепью — лауриновая, миристиновая, пальмитиновая, стеариновая, олеиновая и линолевая [88, 89]. Значительную часть нерастворимых органических загрязнений составляют липидоподобные вещества, в том числе стерины и углеводороды. Липиды и липидоподобные вещества нерастворимы в воде и труднее разлагаются при обработке сточных вод, чем углеводы и белки. Поэтому значительные количества липидов минуют водоочистные сооружения и вносят заметный вклад в состав органических загрязнений поверхностных вод. Имеются весьма скудные сведения о превращениях относительно малорастворимых органических веществ (таких как липиды и липидоподобные вещества или жиры ), которые попадают в поверхностные воды частично из городских и промышленных стоков. Для лучшего понимания процессов разложения липидов и путей их удаления в установках для обработки сточных вод и природной воды нужно иметь аналитические методы для разделения липидов на классы и идентификации отдельных соединений в загрязненной воде. Такой подход отличается от обычного взгляда на липиды как на один широкий класс, включающий жиры, воска, масла и любые другие нелетучие вещества, экстрагируемые гексаном из подкисленной пробы канализационных или промышленных сточных вод [74]. [c.410]

Учитывая это, нами предложена технология комплексной переработки плодов шиповника, которая предусматривае разделение плодов в самом начале процесса на две фракции- околоплодные оболочки и семена и дальнейшую их переработку раздельно оболочку- на обогащенный пектиновыми веществами сироп, семена- на масло шиповника, а шрот (остаток после извлечения липидов)- на кормовую добавку в рационы пушных зверей. [c.170]

Если этот процесс обеспечивает лущение в фазе гексана, то другой экспериментальный метод, разрабатываемый исследователями Южного регионального научно-исследовательского центра министерства сельского хозяйства США, предусматривает во время обезжиривания разделение белков на две фракции с высоким и низким содержанием белков. Этот метод технологии, названный жидкостно-циклонным процессом, объединяет экстрагирование масла с удалением других соединений и позволяет получать освобожденную от токсичных примесей муку из семян с высоким содержанием липидов. Процедура обработки, применяемая в отнощении семян хлопчатника для удаления госсипола, схематически показана ниже [123]. [c.388]

Такой способ фракционирования можно сочетать с выделением пробы. Например, при исследовании липидных фракций одноклеточных организмов первой стадией является деструкция клетки, обычно выполняемая под давлением или с помощью ультразвука. В любом случае разрушаемые клетки помещают в метанольный или водный раствор. Раствор сильно подщелачивают (10%-ный раствор гидроксида натрия) и оставляют на ночь. На этой стадии большинство эфирных связей (триглицериды) гидролизуются, а свободные кислоты, конечно, полностью нейтрализуются сильным основанием. Экстракция таким неполярным растворителем, как -гептан, приводит к удалению только так называемых не омыляемых липидов (стеринов), не затрагивая заметную часть основы клеточного вещества. Большие массы остатков органического вещества клетки могут создавать затруднения при экстракции, особенно после гидролиза. Поэтому перед экстракцией удобно проводить чисто механическое разделение — удалять остатки органических веществ центрифугированием. Фракция, содержащая жирные кислоты, может быть получена подкислением водной фазы с последующей второй экстракцией гептаном. [c.516]

Для количественного определения отдельных фракций адсорбционную хроматографию в тонких слоях силикагеля используют вместе с другими чувствительными методами анализа, например колориметрическими или спектрофотометрическими. После хроматографического разделения, обнаружения и идентификации компоненты элюируют растворителями из участков силикагеля, соответствующих отдельным фракциям [2], и определяют подходящим способом. Необходимо иметь в виду, что проведение хроматографического разделения таким способом всегда сопряжено с возможностью потерь вещества на отдельных этапах. Поэтому необходимы тщательный контроль всех операций и, если возможно, сопоставление результатов определения индивидуальных соединений как по фракциям, так и по суммарным липидам. [c.213]

За последние несколько лет появилось много работ, посвященных конструкции ионизационных детекторов и их использованию в сочетании с капиллярными колонками, но сравнительно мало материала опубликовано по биохимическому применению их, в особенности в области исследования липидов. Вероятно, это обусловлено тем, что до последнего времени не было метода смачивания поверхности капиллярных трубок, который обеспечил бы воспроизводимость результатов от колонки к колонке. Кроме того, небольшие количества веществ, с которыми приходилось работать, не позволяли проводить отбор и анализ фракций стандартными методами. Липский и др. [53, 54] описали разделение смесей метиловых эфиров жирных кислот [c.511]

Метод Роузера с сотр. [74] до сих пор широко используется для разделения на фракции фосфолипидов. Незначительные изменения были позднее предложены для разделения окисленных фосфолипидов [75]. Ряд исследователей [76, 77] разделяли фосфолипиды на 13 фракций на целлюлозе, обработанной хлороформом, используя элюирование хлороформом, содержащим увеличивающиеся количества метанола [76, 77]. Ренконен [78] разделил липиды, содержащиеся в сыворотке, на нейтральные липиды, цефалины, лецитины, сфингомиелины и лизолецитин с помощью хроматографии на колонках с силикагелем. Затем эти фракции были разделены на индивидуальные компоненты методом колоночной хроматографии, например, на DEAE-целлюлозе или нейтральной окиси алюминия. Колоночная хроматография на силикагеле может сочетаться с другими методами, например с ультрацентрифугированием при исследовании липо-протеинов [79]. Подобный метод разделения на колонках, заполненных силикагелем, был применен для анализов фосфолипидов, содержащихся в молоке [80]. [c.207]

На незакрепленном слое силикагеля липиды разделяются ацетоном на фосфатиды, не сходящие с линии старта, и нефосфатидную фракцию, идущую за фронтом растворителя (собственные наблюдения). Такое же распределение отмечается при разделении липидов эфиром на слое силикагель — гипс [175, 176]. [c.83]

Наиболее эффективным и широко применяемым методом фракционирования сложных смесей липидов является хроматография. Главную роль при аналитическом фракционировании играет адсорбционная хроматография в тонком слое сорбента. Этот метод также применяется в препаративных целях, когда разделению подвергается небольшое количество липидов (50—300 мг). Если масса липидов превышает 300 мг, используют колоночную хроматографию, хотя по разделяющей способности и времени разделения этот метод часто уступает тонкослойной и газовой хроматографии. Однократного хроматографирования обычно бывает недостаточно для выделения индивидуальных веществ, в связи с этим полученные фракции подвергают препаративной тонкослойной хроматографии или колоночной хроматографии другого типа. При колоночрюй хроматографии липидов используют не только принцип адсорбции, но и принцип распределения между двумя несмеши-вающимися жидкостями, гель-фильтрации, ионного обмена. [c.69]

При исследовании образца липида можно определить (качественно (i количественно) природу жирных кислот (или спиртов, или альдегидов), содерл-сащихся во всем исследуемом образце или в его отдельных фракциях. Кроме того, с помощью с )ерментов мол-сно определить жирные кислоты, содержащиеся в кал-сдом положении триглицерида или фосфоглицерида, и, наконец, путем сочетания хроматографического разделения с ферментативным деаци-лированием иногда можно идентифицировать индивидуальные соединения. [c.79]

Туна, Камерек и Мангольд [62], применив индикаторный анализ, показали, что фракции природных липидов, разделенные методом ХТС, не загрязняют друг друга. Небольшие количества горячего трипальмитина были смешаны с жиром печени акулы и затем разделены методом адсорбционной ХТС. Радиоавтограф хроматограммы показал, что вся ра иоактивность находится во фракции триглицеридов. Весьма близкие по структуре к триглицеридам алкоксидиглицериды не были ими загрязнены (см. рис. 72, стр. 152). [c.74]

Усовершенствованный Хиршем и Аренсом [34] метод хроматографического фракционирования сложных липидных экстрактов на колонках с силикагелем, по мнению этих авторов, не пригоден для разделения алкоксиди-глицеридов и триглицеридов. Однако анализ методом ХТС фракций элюата таких колонн доказывает отчетливое фракционирование этих двух классов липидов. На рис. 75 приведена хроматограмма фракций триглицеридного элюата из человеческого жира. На пластинке видно обогащение двух менее полярных классов липидов в первых фракциях триглицеридного элюата, однако оно отсутствует на соответствующей весовой кривой. [c.155]

Среди нейтральных липидов триацилглицерины являются наиболее трудными для четкого разделения, поскольку они очень близки по физическим свойствам. Силанизированный целит оказался удовлетворительным адсорбентом для разделения глицериновых эфиров насыщенных кислот и разделения масла кокосовой пальмы на фракции, если использовать в качестве элюента смеси, состоящие из ацетона, -гептана и воды [34]. Метод может быть полезен в сочетании с современными детекторами непрерывного действия. Эванс с сотр. [35] применил метод колоночной хроматографии на силикагеле с использованием в качестве элюентов смесей метанола с бензолом, который они ранее разработали для разделения глицериновых эфиров насыщенных кислот, для выделения триацилглицеринов из масел, которые содержат окси- и кетокислоты, такие, как isano, ойтиковое, касторовое и kamala seed масла. [c.201]

Часто в.место такого полного разделения фракции липидов определяют просто петролейноэфирную фракцию и спиртовую фракцию, т. е. просто все петролейиоэфирное извлечение выпаривают с прибавлением 1%-ной щелочи и дальше без дальнейшего разделения обрабатывают бихромато,м и так же поступают со всем спиртовым извлечением. [c.224]

Количество холестерина определяют в исходном веще- 4 стве, в первой и третьей фракции — после омыления. Выделение фосфолипидов контролируют по фосфору. Метод позволяет разделять от 1 до 10 мг липидов. Параллельное разделение на микро- и макроколонках (пропускная спо-собность 250 мг) показало одни и те же результаты. [c.76]

В настоящее время трудно еще интерпретировать результаты, получаемые при фракционированном осаждении белков плазмы. Мы не можем еще с достаточной уверенностью сказать, существуют ли все эти фракции как таковые в самой плазме крови, а также решить вопрос о возможности их дальнейшего разделения. Всего вероятнее, что белки плазмы находятся в плазме в виде соединений с липидами, у1 леводами, а также друг с другом . Так, например, можно думать, что -глобулины, изоэлектрическая точка которых лежи г около pH 7,0, дают солеобразного тина соединения с альбуминами, изоэлектрическая точка которых находится вблизи pH 4,7. Возможно также, что белковые компоненты липопротеинов и глюкопротеидов плазмы идентичны [c.177]

Литчфилд [43] использовал для разделения триглицеридов силанизованный силикагель, пропитанный 8 %-ным раствором гексадекана. Применявшийся как растворитель нитроэтан также насыщали гексадеканом. Перед анализом методом ГХ полученные фракции подвергали гидрогенизации. В результате были получены 30 различных групп триглицеридов. Объединив адсорбционную хроматографию и хроматографию с обращенными фазами, Кауфман и Вессельс [44] исследовали триглицериды, содержащиеся в подсолнечном масле, проводя элюирование вдоль хроматографических пластинок размером 10x40 см. Для адсорбционного разделения эти авторы использовали в качестве адсорбента силикагель, пропитанный нитратом серебра, а в качестве растворителя — смесь бензола и эфира (4 1). Предварительное разделение, необходимое для наработки достаточного количества материала, проводилось на адсорбционных слоях толщиной 0,7 мм в процессе его образцы выделялись в виде полос, а не пятен, так что таким способом можно было разделить до 80 мг липидов. Затем полосы удаляли с пластинок, с тем чтобы провести дальнейшее разделение на отдельные соединения,— на этот раз методом распределительной хроматографии. [c.61]

Липиды представляют собой неоднородную группу различных соединений, присутствующих в биологических системах липиды растворимы в органических растворителях и нерастворимы в воде. Прежде чем подвергнуть хроматографическому анализу при помощи вспомогательных методов, их разделяют на фракции составных компонентов. Липиды являются относительно высокомолекулярными соединениями, обладающими низкими упругостями паров. Поэтому перед хроматографическим разделением их часто превращают в более летучие производные. Перед вводом в колонку структурно модифицируют следующие липиды глицериды, фосфолипиды, стери-новые эфиры, высшие жирные кислоты, 0-алкилглицерины и высшие альдегиды жирного ряда. Стерины и высшие спирты жирного ряда можно хроматографически разделять и как таковые и в виде их производных. Углеводороды хроматографически разделяют, не подвергая каким-либо вспомогательным превращениям. Амины и высшие нитрилы жирного ряда в природе не встречаются, однако члены обоих указанных гомологических рядов готовят из природных липидов. [c.447]

Экстракт, содержащий фракцию общих липидов, омыляют, разрывая эфирные связи. Выделившиеся таким образом свободные жирные кислоты затем отделяют от неомыляемых липидов, например углеводородов, высших жирных спиртов и стеринов. Липиды неомыляемой части можно фракционировать далее методом жидкостно-адсорбционной хроматографиии или путем образования клатратов мочевины с последующим хроматографическим разделением. [c.450]

Неомыляемые липиды также можно разделить по группам, используя хроматографию в тонком слоена силикагеле [59]. Роль активного твердого вещества выполняет силикагель с зернами размером 250 жш, содержащий 1% гипса, нанесенный на стекло толщина слоя 250—275 мк. Смесь помещают на край хроматографической пластинки и проявляют смесью петролейного эфира (температура кипения 60—70°), диэтилового эфира и уксусной кислоты, взятых в отношении 90 10 1 (по объему). Для разделения требуется около 40 мин. Положения фракций липидов определяют, опрыскивая пластинки 0,2-процентным раствором 2, 7 -дихлорофлуоресцина в этаноле. При такой обработке все липиды образуют яркие желто-зеленые флуоресцирующие пятна, заметные при рассматривании в ультрафиолетовом свете. Высокополярные соединения, например моноглицериды, глицериновые эфиры и фосфолипиды, при этих условиях не перемещаются по пластинке. Их можно отделять друг от друга, проявляя хроматограмму смесью петролейного эфира, диэтилового эфира и уксусной кислоты, взятых в отношении 30 70 1 (по объему). Соединения внутри гомологических рядов (например, триглицериды) также отделяются друг от друга, однако не настолько сильно, чтобы помешать разделению смеси на отдельные группы. После разделе- [c.450]

Ступенчатое разделение фракций [8]. Фосфолипиды отделяют от фракции липидов диализом, свободные жирные кислоты — экстрагирова- [c.451]

Спирты жирного ряда выделяют из неомыляемой фракции липидов путем образования комплексных соединений с мочевиной или же путем жидкостноадсорбционной хроматографии на окиси алюминия. Спирты жирного ряда можно разделять методом ГЖХ, как таковые, или в виде ацетатов, или в виде исходных углеводородов. Наилучшее разделение насыщенных и ненасыщенных соединений с 18 атомами углерода достигается при хроматографическом разделении ацетатов на колонках, заполненных полиэфиром. Двуатомные спирты и спирты с числом атомов углерода более 20 лучше разделять, предварительно превращая их в соответствующие углеводороды. [c.468]

Стероиды обнаружены в неомыляемой фракции тканевых липидов. Их отделяют от других неомыляемых липидов, например углеводородов и высших спиртов, жидкостно-адсорбционной хроматографией на окиси алюминия. Стероиды, элюируемые с колонки, заполненной окисью алюминия, подвергают газохроматографическому разделению только после дальнейшей очистки путем осаждения в виде дигитонидов стеринов [9]. Их можно также выделить из общей фракции липидов методом жидкостной адсорбционной хроматографии на силикагеле (см. раздел А,П,а,1). [c.474]

При анализе молочных продуктов следует применять более эффектив-1ную методику очистки, так как большинство пестицидов извлекается совместно с липидной фракцией, которая сравнительно велика. Молоко, содержащее 2,4-дихлорфеноксиуксусную кислоту, подвергают ферментативному гидролизу, а полученный продукт экстрагируют диэтиловым эфиром [4]. Растворитель упаривают и остаток распределяют между гексаном и ацетонитг рилом. 2,4-Дихлорфеноксиуксусная кислота и другие полярные соединения переходят в ацетонитрил, а липиды — в слой гексана. Ацетонитрил отгоняют, остаток метилируют и определенный объем пробы метилированных продуктов вводят в хроматограф. Метиловые эфиры 4-хлорфеноксиуксусной кислоты, 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислоты (2,4-Д) и 2,4,5-трихлорфено-ксиуксусной кислоты (2,4,5-Т) легко разделяются на колонке с силиконом при 201°. Поэтому этот метод можно применять при разделении смесей гербицидов. [c.581]

Для качественного и количественного анализа высших жирных спиртов, являющихся составной частью липидов, применяют различные методы. Большая часть из них основана на выделении алкиловых эфиров глицерина при помощи щелочного гидролиза или восстановления Ь1АШ4 фракции нейтральных или сложных липидов и последующего разделения полученной смеси алкиловых и алкен-1-иловых эфиров глицерина либо тонкослойной хроматографией на силикагеле, пропитанном А ЫОз, либо расщеплением алкен-1-иловых эфиров глицерина кислотным гидролизом. [c.215]

ГЛИЦЕРИДЫ — сложные эфиры глицерина по числу кислотных остатков в молекуле делятся на MOHO-, ди- и триглицериды по числу различных кислотных остатков — на одно- (все кислотные остатки одинаковые), дву- и трехкислотные Г. (кислотные остатки разные). Изомерия Г. связана с расположением кислотных остатков. Среди Г. неорганич. кислот большое значение имеет триглицерид азотной к-ты, неправильно называемый нитроглицерином. Г. высших и нек-рых низших жирных к-т широко распространены в природе, т. к. являются основной составной частью липидов, к-рые служат источником получения индивидуальных Г. Фпзич. и химич. свойства последних очень сходны, поэтому выделение их в чистом виде весьма сложно оно достигается ректификацией, дробной пизкотемп-рной (до —75°) кристаллизацией из растворите.яей (ацетон, метанол, эфир и т. д.), через соединения включения (комплексы) с мочевиной, противоточным распределением, различными видами хро.матографии и т. д. Таким путем удастся получить несколько фракций Г., различающихся размерами кислотных остатков или числом кратных связей в них. Эти фракции вновь подвергают разделению, получая в конце концов чистые Г. [c.485]

Холин и этаноламин выделяли из исходной фракции липидов кислотным гидролизом. Перед разделением на бумаге необходимо удалить из гидролизата нелипидные азотсодержащие соединения [c.314]

Уанг с сотр. [23] предприняли широкое исследование липидов почвы. Пробу обрабатывали в течение 48 ч смесью 1,25%-ных растворов фтористоводородной и хлористоводородной кислоты (1 1) и экстрагировали смесью хлороформа и метанола (2 1), а затем раствором NaOH в метаноле с рН=11. Выделенную таким образом фракцию липидов подразделяли на классы с помощью тех. Высшие жирные кислоты подвергали метилированию и вновь разделяли на слое силикагеля, содержащего 10% НагСОз. Дальнейшее разделение и идентификацию проводили методами ГЖХ. [c.358]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология