Хроматография на бумаге полисахаридов

ХРОМАТОГРАФИЯ НА БУМАГЕ ПОЛИСАХАРИДОВ [c.292]

Бумага, применяемая как носитель (суппорт) в распределительной хроматографии, должна удовлетворять определенным требованиям. а-Целлюлозы должно быть в бумаге 95—99%. Бумага должна быть чистой и однородной по составу и строению волокон с их длиной 0,5—3 мм. В такой бумаге дистиллированная вода поднимается за 10 мин на 60—80 мм, смесь бутилового спирта с уксусной кислотой за 6 ч на 15—25 см при комнатной температуре. Для хроматографии наиболее подходит линтерная бумага , не содержащая веществ, растворимых в органических растворителях (например, клеящих веществ), т. е. непроклеенная бумага. Линтерная целлюлоза — это высокомолекулярный полисахарид, содержащий 2500—3000 остатков глюкозы в макромолекуле. Текстура такой бумаги должна быть всюду одинаковой. Поры или пространства между волокнами должны иметь размеры 1—12 мк. [c.520]

Для установления качественного и количественного состава компонентов гидролизата метилированного полисахарида применяют хроматографию на бумаге, разделение на колонках с адсорбентами, электрофорез на бумаге или газожидкостную хроматографию. [c.94]

При гидролизе нейтральных полисахаридов в мягких условиях образуется ряд нейтральных олигосахаридов. Для разделения их применяют хроматографию на колонках с углем, а также хроматографию на бумаге. [c.125]

Для установления химического строения выделенных индивидуальных полисахаридов используется ряд химических методов, основанных на реакциях деструкции с изучением ее продую-ов метилирование с последующим гидролизом периодатное окисление частичный кислотный гидролиз контролируемый ацетолиз ферментативный гидролиз щелочная деполимеризация. Для разделения и идентификации продуктов деструкции используют хроматографические методы (хроматография на бумаге, тонкослойная хроматография и газо-жидкостная), в том числе в комбинации с масс-спектроскопией и др. [c.282]

С лучшими результатами была использована распределительная хроматография в системе фенол—бутанол—вода [417], хроматография на бумаге 387], колоночный электрофорез [4181, разделение на полисахарид-геле сефадексе [403] и хроматография на порошке целлюлозы [419]. Для идентификации флавиновых соединений использовалась хроматография на бумаге в различных системах растворителей [420]. [c.558]

Из раствора культур были выделены полисахариды, которые после гидролиза дали при определении хроматографией на бумаге d-галактозу d-глюкозу d-маннозу d-рибозу -рамнозу [c.695]

Идентификация продуктов гидролиза полисахаридов (см. гл. 14) начинается с исследования полученной смеси моносахаридов методом хроматографии на бумаге. В результате такого исследования могут быть получены очень цепные сведения о природе образовавшихся моносахаридов в ряде случаев с успехом применяются и другие виды хроматографии (тонкослойная, газо-жидкостная). Необходимо отметить, что идентификация только с помощью хроматографических методов в настоящее время невозможна, так как, во-первых, неизвестный или редко встречающийся моносахарид может быть подобен по хроматографическому поведению в избранных условиях какому-либо более распространенному представителю моносахаридов во-вторых, по данным хроматографии нельзя пока отнести моносахарид к О- или -ряду. Все это вынуждает полученные при гидролизе моносахариды после хроматографического разделения выделять в кристаллическом состоянии или переводить в кристаллические производные. [c.493]

Д. K. при восстановлении сахарами и аскорбиновой кислотой образует краситель, который можно использовать для микроопределения сахара после разделения гидролизатов полисахаридов с помощью хроматографии на бумаге ill. [c.368]

За процессом гидролиза полисахарида можно следить по уменьшению вязкости, по увеличению восстанавливающей способности, определяемой по восстановлению ионов меди [194] или окислением гипоиодитом [39, 91], по изменению оптического вращения растворов или, что еще лучше, по измепепию набора сахаров, обнаруживаемых путем хроматографии на бумаге [97] проб нейтрализованного гидролизата. [c.295]

Полный гидролиз полисахарида проводят для установления природы и соотношения составляющих его моносахаридных остатков. Качественный анализ гидролизата в настоящее время неизменно выполняют с помощью распределительной хроматографии на бумаге, что требует лишь микроколичеств сахаров и вместе с тем дает возможность идентифицировать присутствующие нейтральные, основные и кислые моносахариды. По хроматографии углеводов существует обширная литература [91, 97, 127, 131, 162]. Было испытано множество систем растворителей и много обнаруживающих реагентов как специфических, так и неспецифических, и составлены таблицы относительных скоростей движения сахаров на бумажных хроматограммах [131]. Для окончательной идентификации определенного сахара не достаточно одного только хроматографического анализа. [c.303]

Частичный гидролиз полисахаридов проводят для получения олигосахаридов, важных для установления структуры. Олигосахариды можно исследовать с помощью хроматографии на бумаге образцы, необходимые для идентификации или структурного анализа, могут быть получены после хроматографического разделения на бумаге или на колонках, заполненных целлюлозой [55, 99], а также градиентным элюированием водным спиртом из колонки, заполненной смесью уголь — целит [8, 17, 56]. Было показано [114], что смеси олигосахаридов легко разделить в нейтральной среде на колонках со смолой дауэкс 50 (2% диви-нилбензола, величина частиц 40—80 мк, Ь1+) при элюировании водой. Элюирование протекает в порядке уменьшения размера молекул, и первыми вымываются из колонки олигосахариды с более высоким молекулярным весом. [c.304]

ПРИМЕНЕНИЕ МЕТОДА ХРОМАТОГРАФИИ НА БУМАГЕ ПРИ ИЗУЧЕНИИ СТРУКТУРЫ ПОЛИСАХАРИДОВ [c.122]

Разделение рацематов с помощью хроматографии на бумаге получило распространение только в самое последнее время. Многочисленные попытки 2 разделить рацемические кислоты и амины на целлюлозе бумаги или деацетилированном хитине , представляющем собой полисахарид, оставались безуспешными. [c.185]

Все методы анализа сырья с целью установления состава, строения и свойств полисахаридов основаны на определении отдельных компонентов, содержащихся в гидролизатах полисахаридов, полученных при различных условиях гидролиза. Наиболее полную информацию о составе моносахаридов, олигосахаридов и уроновых кислот, присутствующих в гидролизатах, получают тогда, когда делают анализ хроматографическим методом на бумаге. Этим методом сахара и другие вещества разделяют и выделяют из смеси с различными веществами в том виде в каком они присутствуют в гидролизатах без изменений, а затем определяют их количество. При анализе смесей углеводов ч помощью газожидкостной хроматографии сахара необходимо сначала превратить в летучие производные, а затем провести их разделение и определение. Без потерь перевести сахара в летучие производные невозможно, поэтому результаты анализов менее точны, но время, затрачиваемое на анализ этим методом, значительно меньше [14]. [c.24]

Содержание пентозанов в растительных материалах можно определить двумя способами. По одному из них пентозаны вместе с другими полисахаридами, входящими в состав волокнистого материала, гидролизуются до простых сахаров, которые затем можно разделить с помощью хроматографии на бумаге. Этот способ приобретает в последнее время все большее значение. По другому, наиболее старому способу, пентозаны прп действии на них кипящей разбавленной минеральной кислоты (в основном 12—13%-ной соляной кислоты) гидролизуются до пентоз с последующим превращением последних в гетероциклический альдегид — фурфурол [c.97]

Полисахариды и другие сложные углеводороды также анализируют методом хроматографии на бумаге. Для количественного анализа хроматографических фракций сахаров применяют титрование, колориметрию и другие методы определения. [c.145]

Инулин очищают перекристаллизацией из воды. Образец полисахарида с [а]в —35° растворяют в горячей воде, при охлаждении раствора из него выпадает инулин. Полисахарид отделяют фильтрованием, процесс повторяют 7 раз. Полученный инулин ([а]с —40°) сушат, промывая ацетоном. Хроматография на бумаге гидролизата образца полисахарида, для гидролиза которого применяют 2%-ный раствор щавелевой кислоты, показывает присутствие в нем фруктозы и небольших количеств глюкозы. [c.371]

На полоску хроматографической бумаги размером 1X1,5 см наносят 0,005— 0,1 мл 1—2%-ного раствора исследуемых полисахаридов в боратном. буфере (pH 9,3). Полоски подсушивают на воздухе н помещают в широкий бюкс. Полоски картона (картон для электрофореза) размером 2.5X40 см смачивают боратным буферным раствором и помещают в камеру прибора для Эотектро-фореза. Для этой цели можно использовать прибор ЭФА-1. Полоски бумаги с исследуемым раствором кладут на ленты картона, лежащие на рамке камеры прибора так, чтобы они были вблизи катода и на расстоянии 4—5 см от сгиба картона. Электрофорез проводят в боратном буферном растворе при pH 9,3. Электрофореграммы высушивают- и разрезают на отдельные участки длиной по 2 см. Полисахариды с каждого отрезка элюируют водой или раствором щеоючи. Элюаты гидролизуют с 2%-ным раствором НС1 в течение 3 ч при слабом кипении и затем исследуют хроматографией на бумаге или газожидкостной хроматографией. Качественная и количественная хроматография компонентов в гидролизатах элюатов позволяет установить порядок распределения полисахаридов на электрофореграммах и их химический состав. [c.51]

К диализованному раствору, содержащему окисленный полисахарид добавляют 1,1 г боргидрида натрия и оставляют стоять при комнатной температуре в течение 10 ч. Затем к смеси добавляют по каплям 1 н. раствор соляной кислоты для разрушения избытка боргидрида и нейтральный раствор концентрируют в вакууме при 40° С до 150 м.л. К полученному нейтральному раствору полиола добавляют соляную кислоту до 0,5 и. концентрации и подкисленный раствор оставляют при комнатной температуре на 8 ч. Для удаления ионов хлора и натрия гидролизат последовательно обрабатывают анионитом А-4 (ОН -форма) и катионитом Щ-120 (Н+-форма), а затем упаривают досуха в вакууме при 40° С. Остаток трижды упаривают со 150 мл метанола для удаления борной кислоты в виде летучего метилбората. Исследование нейтрального гидролизата методом хроматографии на бумаге в системе пиридин — этилацетат—вода (2 5 7 по объему) показывает наличие в нем эритрита и ряда менее подвижных гликозидов эритрита. Для идентификации разделенных хроматографией веществ вырезают участки хроматограммы, соответствующие отдельным соединениям, элюируют водой, элюаты фильтруют и упаривают в вакууме досуха. В табл- 16 приведена характеристика очищенных продуктов. [c.115]

Для щелочного расщепления раство"ряют полисахарид при 25— 38° С в известковой воде, не содержащей кислорода. Реакция протекает в течение нескольких недель или месяцев. Ионы кальция после расщепления полисахарида удаляют с помощью катионообменной смолы. Оставшийся нерасщепленный полисахарид выделяют осаж дением этанолом. Продукты распада разделяют фракционированным осаждением их кальциевых солей. Сахараты исследуют распределительной хроматографией на бумаге с растворителем этилацетат— уксусная кислота — вода 10 1,3 1). [c.121]

Для анализа электрофореграммы разрезают на отрезки по 2 см, полисахариды с полученных отрезков элюируют водой, элюаты гидролизуют и углеводный состав гидролизатов определяют хроматографией на бумаге с растворителем пиридин— этилацетат—вода (1 5 5). Состав углеводов на хроматограммах, соответствующих отрезкам —6 электрофореграмм (рис. 26), дает возможность представитв распределение на электрофореграммах 4-0-метилглюкуроноарабоксилана и галактуроноарабогалактана. Наличие только двух пиков на электрофореграмме свидетельствует об однородности разделенных полисахаридов. [c.177]

Гидролизаты легко- и трудногидролизуемых полисахаридов исследовались хроматографией иа узких (5X250 мм) лентах хроматографической бумаги с растворителем этилацетат—пиридин—вода (5 1 5). Количество углеводов определялось по соотношению площадей пиков, полученных при записи на денситометре и проявленных анилинфталатом исследуемых хроматограмм и хроматограмм с известным количеством моносахаридов. [c.326]

Электрофорез не заменяет хроматографию, но дает очень ценную дополнительную информацию, так как разделение при электрофорезе основано на других свойствах молекул (заряд, размер, форма). Высоковольтный электрофорез на бумаге применен для разделения не только моно-, но и олигосахаридов. Этот метод может быть использован не только для производных углеводов, содержащих заряженную группу (как, например, гексуроновые кислоты, аминомоносахариды, сульфаты и фосфаты моносахаридов), но и для нейтральных соединений, способных образовывать заряженные комплексы с такими электролитами, как борат, арсе-нит или молибдат натрия. Относительные подвижности углеводов зависят от природы комплексообразователя [57]. Правильный выбор электролита часто позволяет идентифицировать углевод. Разделение кислых полисахаридов [58] проводят с помощью высоковольтного электрофореза на бумаге, нейтральные полисахариды предварительно превращают в боратные производные [59]. [c.226]

Количественные соотношения между компонентами в гидролизата полисахаридов определяются чаще всего количественной хроматографие на бумаге (см. гл. 14). [c.493]

Теория. Механизм хроматографии на бумаге явился предметом длительной дискуссии. Консден, Гордон и Мартин рассматривали хроматографию на бумаге как простую форму жидкостной распределительной хроматографии, в которой фильтровальная бумага является инертным носителем неподвижной водной фазы. Позже авторы сами раскритиковали эту точку зрения, поскольку во многих случаях разделение достигается при использовании водорастворимых растворителей — этанола и пропано-ла, ацетона, пиридина или даже чистой воды. Однако Мартин пришел к выводу, что удерживаемая целлюлозой вода скорее сравнима с концентрированным раствором глюкозы или полисахаридов, чем с водой, насыщенной органической фазой. Аналогичным образом Гейнс и Ишервуд рассматривают неподвижную фазу как комплекс воды с целлюлозой. Этот вопрос был критически проанализирован Муром и Стейно.м По-видимому, в хроматографии на бумаге имеют значение как адсорбция, так и процессы распределения, во всяком случае Штамм и Цолин-гер определенно установили это в случае азокрасителей. [c.562]

Меркаптолиз обычно проводят путем растворения полисахарида в концентрированной соляной кислоте при 0° С с последующим медленным добавлением этилмеркаптана. После нескольких часов стояния при 0° С смеси дают нагреться до комнатной температуры и реакцию продолжают (от 6 ч до 7 дней) до тех пор, пока не будет достигнута необходимая степень деполимеризации. Холодный раствор нейтрализуют добавлением суспензии карбоната свинца в метаноле. Отфильтрованную реакционную смесь концентрируют при пониженном давлении. Продукты меркаптолиза можно исследовать с помощью хроматографии на бумаге и разделить хроматографией на колонке с целлюлозой. В некоторых случаях продукты меркаптолиза можно выделить прямой кристаллизацией из концентрированного раствора. [c.306]

Такая система позволяет получить более четкое разделение. При нанесении образца (в объеме 40 л) элюат, не содержащий аминокислот, сливают в трап. После впитывания всех 40 л отсоединяют первую колонку и оставшиеся три промывают 0,15 н. водным раствором аммиака со скоростью 20 мл/мин, собирая элюат по фракциям объемом 250 мл. Анализ ведут методом бумажной хроматографии. Первую колонку, содержащую основные аминокислоты, соединяют с двумя небольшими колонками (2,5x20 см и 1,7x13,6 см), также заполненными полистиролом. Вытеснение ведут 0,075 н. раствором едкого натрия со скоростью подачи 6 мл/мин (объем фракций равен 250 мл). Профиль элюирования строят по данным хроматографии на бумаге. Объединяют фракции, характеризующиеся наиболее простым составом и максимальным содержанием аминокислот. Эти уже обогащенные смеси вновь фракционируют на сульфокатионите (Zeo-Karb-215) в различных условиях или на дауэксе-2 до получения чистых аминокислот. Не представляющие интереса промежуточные фракции отбрасывают. Условия рехроматографии выбирают с учетом состава смеси. Выход аминокислот составляет около 50% от веса исходного белка. В качестве источника аминокислот используют белковые гидролизаты например, яичного альбумина) или гидролизаты микроорганизмов (например, дрожжей) и даже биологические экстракты [90]. Важно лишь, чтобы смесь не содержала большого количества полисахаридов. [c.356]

Кроме описанных выше повсеместно распространенных глюкозанов — целлюлозы, крахмала и гликогена, в природе встречаются в самых разнообразных формах многие другие полисахариды. Строение большинства из них было установлено методами, сходными с методами, применяемыми в случае целлюлозы и крахмала. Для выделения и идентификации моносахаридов, полученных в результате гидролиза этих полисахаридов, очень успешно применялся метод распределительной хроматографии на колонках с различными абсорбентами или на бумаге. [c.322]

Много работ опубликовано по хроматографии углеводов, особенно В. В. Рачинским, Б. Н. Степаненко. Установив зависимость между структурой и величиной Rf, можно оценить степень полимеризации олигосахаридов, влияние положения оксигрупп. На бумаге из стеклянных волокон, предварительно забуференной, можно четко разделять различные монозы, биозы, триозы, галактуровую и глюкуроновую кислоты. В микроорганизмах можно определять связанные углеводы, свободные MOHO- и дисахариды в растительном материале, также свободные олигосахариды, свободные углеводы в крови и моче, молоке, наблюдать гидролиз и синтез олиго- и полисахаридов, энзиматические превращения моносахаридов в связи с процессами окисления, восстановления, изомеризации, реакции углеводов с азотсодержащими соединениями, контролировать чистоту углеводов и идентифицировать их, определять кислоты и ла-ктоны, уроновые кислоты, кетокислоты, метилированные сахара, дезоксисахара, аминосахара, полисахариды, инозит, сорбит, эфиры фосфорной кислоты, структуру галактоманнана, эремурана, новых галактозидов, проследить превращение сахарозы, синтез олигосахаридов в растущей культуре. Бумажная хроматография применяется в сахарной промышленности, в пивоварении. Мало еще разработана теория распределительной хроматографии углеводов, мало изучены возможности разделения оптических изомеров и антиподов. [c.201]

Диметиловые эфиры фосфатидов (- СНз), полученные из образца кефалина животного происхождения, удалось разделить хроматографически на три фракции соединений. Хроматография эфиров фосфатидов проводилась па бумаге, обработанной А1(0Н)з в системе растворителей ацетон — метанол (1 1). Разработка методов количественной хроматографии фосфатидов представляет большой интерес для биохимии, так как фосфатидам принадлежит важная роль в энергетическом и пластическом обмене животных и растительных организмов. Метод радиоактивного диазометанолиза в сочетании с хроматографией можно также использовать для анализа ряда других фосфорных эфиров и нуклеиновых кислот. Метилированию радиоактивным диазометаном могут быть также подвергнуты фенолы и полисахариды. [c.442]

Ранее упоминалось, что применение лишь хроматографических методов для анализа свободных сахаров в гидролизатах полисахаридов. недостаточно, необходимы препаративное выделение компонентов и их идентификация. То же относится и к анализу смесей метилированных сахаров. При препаративном разделении метилированных моносахаридов также пользуются хроматографическими методами, используя в качестве сорбентов целлюлозу, уголь и силикагель. Завершают очистку препаративной хроматографией на бумаге (картон, блоки из бумаги). [c.69]

При гидролизе крахмала слабой кислотой и гидролитическими ферментами образуются большие количества соответственно глюкозы и мальтозы. Это указывает на то, что крахмал представляет собой полимер глюкозы, что и было подтверждено результатами элементарного анализа, согласно которым структурная формула крахмала следующая СвНюОд. О сложности структуры крахмала говорит обнаружение Мейером и сотр. [119] в крахмале кукурузы двух фракций — амилозы и амилопектина. Мейер и сотр. доказали присутствие в крахмале этих двух химически, физически и энзимологически различающихся между собой молекул. С развитием таких хроматографических методов, как распределительная хроматография на бумаге, а также адсорбционная и ионообменная хроматография, появилась возможность фракционировать продукты гидролиза и расщепления крахмала и других полисахаридов [29, 143, 172]. Особенно полезными [c.140]

Нами исследованы полисахариды, выделенные И. Л. Тыдель-ской по методу Фуллера [12] из следующих штаммов стрептококков группы А, группы Д и атипичного штамма, выделенного от больного. Этот штамм по ряду свойств относится к группе Д. Проведен качественный анализ состава сахаров, входящих в полисахариды, выделенные из перечисленных штаммов. Анализ проводили методом хроматографии на бумаге, растворитель пиридин — бутанол — вода (3 2 1,5) [2], проявитель — анилингидрогенфталат [13]. Хроматограммы гидролизатов полисахаридов, выделенных из стрептококков, представлены на рис. 1—3. Во всех полисахаридах был найден гексозамин, определенный по методу Элсона и Моргана. [c.291]

Химический состав а-, р-, уфракций целлюлозы зависит от породы древесины, от расположения гемицеллюлоз в клеточных стенках, от способа получения целлюлозы [И]. Полагают, что в сульфитных целлюлозах гемицеллюлозы находятся в наружных слоях клеточной стенки волокон, а в сульфатных — они распределены по всей клеточной стенке, С помощью хроматографии на бумаге и других методов исследования показано [11, 12], что наибольшую часть гидролизата а-целлюлозы как беленых, так и небеленых целлюлоз составляет )-глюкоза. В небольших количествах были найдены /)-ксилоза и )-манноза. р-Целлюлоза отличается от а-целлюлозы несколько более высоким содержанием полисахаридов неглюкозного характера. В гидролизатах у-цел-люлозы в основном были найдены 1)-ксилоза и /)-манноза. [c.188]

Проведенные исследования подтвердили это предположение. После ацетилирования 2,3-ангидропроизводных 6-0-тритилцеллюлозы, последующего омыления ацетильных групп и полного гидролиза полисахарида в продуктах гидролиза, исследованных методом хроматографии на бумаге, обнаружено только два сахара — глюкоза и альтроза . Это однозначно доказывает образование сте-реоизомерного целлюлозе полисахарида при раскрытии а-окисного цикла в кислой среде — гетерополисахарида, содержащего элементарные звенья глюкозы и ее стереоизомера — альтрозы. [c.30]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология