Методы градиентного элюирования

Наиболее широко применяется метод элюентной хроматографии. Элюирование выполняют разбавленными водными или водно-органическими растворами минеральных кислот, главным образом соляной или азотной. Метод градиентного элюирования с повышающейся концентрацией элюента имеет ряд преимуществ. Разделение можно улучшить введением в элю- [c.155]

Разделение марганца, железа, кобальта, никеля, меди, цинка и кадмия методом хроматографии с обращенными фазами с использованием три-н-октиламина в качестве неподвижной фазы и применением метода градиентного элюирования. [c.555]

Теория и практические приемы использования градиентного проявления в ТСХ сложны, что уменьшает основное достоинство метода - его простоту. Разделения, для которых необходима получаемая при этом степень разрешения, можно проще и быстрее выполнить методом градиентного элюирования в высокоэффективной хроматографии в колонках, позволяющей более легко контролировать условия разделения. [c.152]

Поддерживать постоянное значение показателя преломления элюента довольно сложно, поэтому использовать методы градиентного элюирования при детектировании с помощью дифференциального рефрактометра очень сложно. Бомба и сотр. /19/ предложили использовать для градиентного элюирования такие смеси растворителей, компоненты которых имеют приблизительно одинаковые показатели преломления (табл. 7.5) в настоящее время такой подход является паи лучшим. [c.215]

Первый пример был опубликован недавно в работе [11]. Разбавленные растворы хинолина в додекане подвергались каталитическому гидрированию, и необходимо было определить, какие получились продукты. Основной интерес представляли ароматические азотсодержащие соединения. Общая концентрация азота в продуктах гидрирования колеблется в пределах от 1000 до менее чем 1 ч. на млн. На рис. 6.5 показаны основные интересующие нас продукты, хотя они не были известны в начале работы. Вначале был проведен качественный анализ основных продуктов образца. Начальное, поисковое разделение, цель которого—определить композиционный состав образца, целесообразно проводить методом градиентного элюирования. На рис. 6.6 показана хроматограмма, полученная при разделении типичных продуктов образца при градиентной подаче растворителя (ТЖХ). Основные компоненты (они перенумерованы) собираются в средней части хроматограммы, незначительное число углеводородов (т. е. соединений, не содержащих азота) вымывается в начале и незначительное количество более полярных соединений в конце хроматографирования. Основные [c.173]

Наиболее полное сравнение провели Шнайдер и сотр. [48], фракционируя полистирол с помощью обоих указанных методов. Эти авторы, как и многие другие, рассматривали метод градиентного элюирования в качестве одностадийного процесса, а метод Бейкера — Вильямса — в качестве многостадийного и предполагали, что последний метод позволит получить более высокое разрешение при фракционировании [36, 55]. Но данные, полученные ими, показали примерно одинаковую степень разрешения фракций для обоих методов. [c.82]

Ри с. 6.6. Разделение образца гидрированного хинолина методом градиентного элюирования на окиси алюминия [11]. [c.175]

Анализы рибонуклеотидов и дезоксирибонуклеотидов можно проводить на сильноосновных анионообменных смолах. Поскольку эти нуклеотиды имеют родственную структуру, но значительно меняются при ионизации, то, чтобы повысить разрешение колонки, рекомендуется использовать метод градиентного элюирования. [c.307]

При использовании метода градиентного элюирования можно для конкретного олигомера попытаться найти оптимальную программу типа в 2 = к + 12У, где /1 — определяет абсолютные значения удерживаемых объемов, а параметр /2 — расстояние между хроматографическими пиками. [c.242]

Последнее выражение отчетливо показывает, что при малых значениях Я, т. е. при последовательном растворении полимера в разбавленный раствор, избирательность фракционирования увеличивается. Из уравнения (3-5) можно сделать и другие выводы. Поскольку о зависит от Хь а последняя величина в свою очередь определяется значением степени полимеризации X, то необходимо варьировать величину Я в зависимости от х, чтобы фракционирование было оптимальным. Флори [1] предполагает, что максимальная концентрация полимерных молекул в выделившейся фазе должна изменяться пропорционально величине х / . Пеппер и Резерфорд [2] провели систематическое изучение фракционирования больших количеств полистирола методом градиентного элюирования. На основании полученных данных эти авторы предположили, что одним из наиболее важных факторов, определяющих эффективность фракционирования, является концентрация полимера в элюирующей жидкости. Шнайдер с сотр. [3], использовав эти данные, подтвердил (по крайней мере качественно) вышеуказанное предположение. [c.64]

Метод градиентного элюирования, по-видимому, не является строго одностадийным процессом. Порция свежего элюента, перемещаясь вдоль колонки, вытесняет находившийся уже в колонке более плохой растворитель из самого гелеобразного слоя (стационарного слоя на поверхности насадки) и из промежутков между частицами, заполняющими колонку. Эти эффекты могли бы привести к осаждению части полимера и последующему повторному растворению фракции при прохождении ее через колонку. Напротив, метод хроматографического фракционирования может и не иметь значительного числа стадий, которого следовало бы ожидать. Длительность эксперимента может оказаться недостаточной для осуществления нескольких стадий растворение — осаждение. Кроме того, было показано, что температурный градиент способствует возникновению обратной диффузии уже элюированного полимера [53] и тем самым может резко снизить число эффективных стадий фракционирования. Решить эти проблемы мон но будет лишь после дальнейших исследований. [c.82]

Сравнивая метод градиентного элюирования с методом хроматографического фракционирования, можно было бы ожидать, что последний приведет к гораздо лучшему разрешению фракций. Некоторые опубликованные данные свидетельствуют о преимуществе метода хроматографического фракционирования в отношении более узкого распределения по молекулярным весам во фракциях. Но величина этого эффекта отличается от он идаемой. Принимая во внимание известные экспериментальные факты, кажется маловероятным, чтобы градиентное элюирование было исключительно односта- [c.82]

Рис. 1.10. Разделение методом градиентного элюирования.

На рис. 2.3 приведены хроматограммы, полученные для смесей с использованием метода градиентного элюирования и без него. [c.26]

МЕТОДЫ ГРАДИЕНТНОГО ЭЛЮИРОВАНИЯ [c.293]

Подвижную фазу с постоянным значением pH можно применять лишь в случае ионита, обладающего различными селективными свойствами по отношению к разным ионам. Это бывает редко, поэтому обычно применяют метод, аналогичный методу градиентного элюирования, т. е. ступенчато или непрерывно повышают концентрацию ионов водорода в растворе. Часто применяют и добавку комплексантов для повышения селективности подвижной фазы. Действенность этих методов можно показать на примере разделения ионов калия и натрия. Ионы натрия при pH 9 образуют устойчивый комплекс с диацетоурамилом в отличие от ионов калия. Раствор анализируемой пробы вместе с комплексантом в буферном растворе пропускают через катионит и промывают раствором комплёксанта. В результате происходит четкое разделение ионов натрия и калия при проведении обмена в небольших колонках с небольшим количеством элюата [54]. [c.381]

У ф. Детектор работает при одной и той же длине волны, соответствующей наиболее интенсивной линии ртутной лампы низкого давления Я = 253,7 им. Флуоресцентная приставка позволяет возбуждать излучение с X = 280 нм. УФ-Детектор наиболее чувствителен, если молярные коэффициенты светопоглощения компонентов высоки, а элюент не поглощает в ультрафиолетовой области спектра. В последнем случае можно использовать метод градиентного элюирования. Объем проточной кюветы этого детектора меньше 10 мкл. При Я = 254 нм можно отфеделять шобые ароматические соединения, большинство кетонов и альдегидов ( = 20 -10 ). УФ-Детектор [c.330]

Рис 7-13 Разделение эпоксидной смолы Epikote 1001 с применением метода градиентного элюирования Колонка 0 5 м х О 22 мм (внутр диам ) непод вижная фаза силикагель модифицированный ОДС (5 мкм) подвижная фаза а - ацетонитрил/вода (85/15) б - ацетонитрил/ТГФ (90 10) изменение со става элюента в процессе разделения показано иа рисунке объемная скорость [c.170]

Рис 7-14 Разделение ком понентов эпоксидной смолы Epikote 1004 с использованием метода градиентного элюирования Условия опыга те же что и на рис 7-13 Изменение состава элюента в процессе разделения показа но на рисунке Масса пробы О 2 мкг [c.171]

В работе Уайта и Лоуфера [28] описано разделение антибиотиков группы цефалоспорина на колонке из нержавеющей стали внутренним диаметром 1,0 мм, покрытой изнутри стеклом и заполненной силикагелем, модифицированным группами С18 Таким способом были разделены пять антибиотиков данного класса (см рис 7-41) Этими же авторами проведено определение цефалоспорина в ферментативных бульонах Благодаря высокой чувствительности полумикро-ЖХ авторам удалось предварительную обработку пробы свести к простому ее разбавлению Уайт и Лоуфер осуществили также определение Примесей в антибиотиках класса цефалоспорина с использованием метода градиентного элюирования [c.197]

Опубликовано несколько работ, посвященных методу градиентного элюирования со смешиванием при высоком давлении при помошд двух насосов [28, 32-35] Скотт и Кучера [341 исследовали основные характеристики такой системы и описали ряд примеров ее применения Так, на рис 7-49 представлена хроматограмма, полученная при анализе проб сыворотки крови на длинной открытой капиллярной колонке внутренним диаметром 1 мм, изготовленной из нержавеющей стали Шварц и сотр [35] применили градиентное элюирование со смешивани- [c.206]

Экстракционно-хроматографическое разделение лантаноидов проводили с помощью зкстрагентов всех основных классов. Во всех случаях для разделения следовых и больших количеств эле- ментов использовался элютивный метод. Для. разделения всех лантаноидов за одну операцию применялся также метод градиентного элюирования. В большинстве случаев разделение проводили при повышенной температуре на колонках, высота упаковки которых колебалась от нескольких сантиметров до нескольких десятков сантиметров в зависимости от эффективности колонки и количества разделяемых лантаноидов. [c.312]

Распределительная хроматография на фторопласте-4. I. Разделеиие легких редкоземельных элементов методом градиентного элюирования. [c.553]

Другим недостатком детекторов по теплоте адсорбши является то, что при использовании метода градиентного элюирования из-за адсорбции некоторых компонентов градиентных элюентов неизбежно возникает дрейф нулевой пинии. [c.218]

Майер и Фрейлинг [55 ] установили, что аналитическое разделение иттрия, тербия, европия и самария легче осуществить в лактат-ном растворе, чем в цитратном (см. также [22, 62]). Катионный обмен в лактатных растворах изучали также другие авторы [2, 12, 28, 62, 69, 70, 98, 104]. Чтобы сократить продолжительность элюирования, Нервик [61] применил метод градиентного элюирования лактатными растворами с непрерывно повышающейся величиной pH. Разделение следовых количеств радиоактивных элементов происходит лучше, чем разделение миллиграммовых количеств. Метод градиентного элюирования оказался более совершенным по сравнению с другими ранее известными методами разделения смесей редкоземельных элементов, не содержащих носителя. В. К. Преображенский, А. В. Калямин и О. М. Лилова [68] также применили метод градиентного элюирования и добились успешного и [c.322]

По методике, описанной Фрейлингом и Баннеем [20], 20 мг смеси редкоземельных элементов было эффективно разделено путем ступенчатого элюирования молочной кислотой с повышающейся концентрацией. Количественное разделение достигается также элюированием IM молочной кислотой при ступенчатом увеличении pH элюента температура элюирования 75° С [1 ]. Сообщаются следующие оптимальные значения pH для скандия, лютеция и иттрия — 3,00, а для тулия, эрбия и гольмия — 3,05. Описанным методом ступенчатого элюирования получаются лучшие результаты, чем методом градиентного элюирования, который, однако, отнимает меньше времени (см. также [13, 105]). [c.323]

Книга представляет большой интерес прежде всего для хро-матографистов-практиков, перед которыми возникают проблемы разделения сложных смесей соединений на индивидуальные компоненты или оптимизации рутинных анализов, когда требуется за предельно короткое время надежно определить лишь ограниченное число компонентов. Книга столь же полезна и для методистов, развивающих, например, методы градиентного элюирования, многомерной хроматографии, препаративных разделений и т. д. [c.5]

Дальнейшим важным шагом в развитии метода градиентного элюирования явилась разработка новых типов кранов для мгновенного соединения, управляемых электронным модулем. Такие разработки используются в жидкостном хроматографе фирмы Du Pont. В формирователе Varipump фирмы Phoenix результирующий градиент фиксируется на вертикально вращающемся барабане. Он служит для установления ионной силы и градиента pH. Аналогичная система также установлена и в хро- [c.56]

В следующем порядке монофосфаты цитозина, уридина, аденозина и гуанозина. В каждом случае 2 -изомер элюируется раньше, чем З -изомер. Общее время анализа меньше 70 мин, и каждый пик соответствует компоненту, содержание которого менее микрограмма. Итак, используя эту систему, можно достичь высокой скорости, высокого разрешения и высокой чувствительности. Разделение проводится на колонках, заполненных пленочными анионообменными смолами. Объемная скорость потока подвижной фазы составляет 12 см /ч при этих условиях на входе обеспечивалось давление в 35 атм. Разделение проводилось методом градиентного элюирования, в качестве стартового элюента использовался 0,01 М однозаме-щенный фосфат калия с pH 3,35. Для установления градиента 1,0 М раствор однозамещенного фосфата калия (pH 4,3) смешивали с стартовым раствором при объемной скорости потока 6 мл/ч. Начальный стартовый объем фосфатного бу( )ера низкой концентрации составлял 50 мл, и ввод градиента осуществлялся через 7,5 мин после начала анализа (с момента ввода пробы). По окончании [c.307]

Как указано в ранних обзорах ЦО], примерно до 1946 г. фракционирование полимеров последовательным растворением проводили методом прямого экстрагирования. После опубликования работ Деро и сотр. [11—13], в которых впервые был предложен метод градиентного элюирования в колонке, прямое экстрагирование лишь иногда применяют для фракционирования по мо.текулярным весам. Трудность метода прямого экстрагирования заключалась в том, что полимерные частицы сильно набухают в процессе экстрагирования и приблизиться к равновесным условиям чрезвычайно трудно [9, 14]. Позже, однако, открытие методов стереоспецифического синтеза полимеров Натта и его сотрудниками вновь резко увеличило значение метода прямого экстрагирования как мощного средства предварительного фракционирования таких образцов по строению для последующего разделения уже однородного но строению образца на фракции в соответствии с их молекулярными весами. Методика проведения фракционирования рассматриваемым методом проста и состоит в экстрагировании тщательно измельченного полимера в колбе или экстракторе/ при соответствующей температуре. Кригбаум с сотр. [15] осуществил выделение атактической фракции полибутена-1 путем экстрагирования исходного образца кипящим этиловым эфиром (изотактическая часть образца не растворялась в таких условиях). Обе полученные таким способом фракции фракционировали затем уже по молекулярным весам. Ваншутен и сотр. [16] провели фракционирование большого количества полипропилена (1000 г), разделив образец на фракцию, растворимую в кипящем эфире, и фракцию, растворимую в кипящем гептане. Последняя фракция вместе с нерастворимым в гептане остатком разделялась затем для последующих исследований физических и механических свойств полимера. Для исследования полипропилена методом инфракрасной спектроскопии Луонго [17] получил атактический полимер путем экстрагирования ацетоном образца, синтезированного в присутствии [c.67]

Данные по адсорбции полимера из растворов суммированы Пататом с сотр. [47], однако роль адсорбции полимера на насадке в процессе фракционирования до сих пор остается неясной. Можно предполагать, что адсорбция полиолефинов на песке или стекле вообще не происходит или происходит в незначительной степени. При исследовании более полярного полистирола Кригбаум и Курц [45] показали, что для элюирования высокомолекулярных фракций (>3-10 ) с песчаной насадки иногда необходимо работать при температуре выше критической температуры смешения. Авторы объяснили этот факт адсорбцией, степень которой возрастает как при увеличении молекулярного веса полимера, так и при уменьшении размера частиц насадки. Тот факт, что при фракционировании полистирола методом градиентного элюирования и методами хроматографии эффективности разделения оказываются весьма близкими, Шнайдер и сотр. [48] объяснили адсорбцией. Протекание адсорбции можно заранее предполагать в случае сильно полярных полимеров и насадок. Деро и От [13] рассмотрели работу Брукса и Бадгера [49[, которые провели фракционирование нитроцеллюлозы по молекулярному весу и по степени замещения путем адсорбции полимера на крахмале. [c.77]

Большее число работ посвящено сравнению методов градиентного элюирования (метод Деро) и хроматографии (метод Бейкера — Вильямса). Гиллет с сотр. [38] провел сравнение первоначального варианта метода Деро и Шнигельса [12] для полиэтилена (элюент — толуол при увеличивающихся температурах) и хроматографического метода (градиенты растворителя и температуры). Данные исследования фракций в ультрацентрифуге показали, что полученные последним методом фракции обладают более узким распределением но молекулярным весам [54[. [c.81]

Шнайдер [41[ провел критическое рассмотрение различных параметров, играющих важную роль как в методе градиентного элюирования, так и в методе хроматографии. Данные, получаемые обоими методами, весьма сходны между собой, за исключением того факта (обнаруженного при последующих сравнительных исследованиях на полистироле), что метод Бейкера — 13ильям-са позволяет получить более высокомолекулярную фракцию в конце фракционирования. Отмеченное сходство результатов фракционирования методами хроматографии и градиентного элюирования весьма удивительно, если исходить из положения, что градиентное элюирование представляет собой одностадийный процесс, а хроматографическое фракционирование — многостадийный процесс, так как в этом случае при перемещении через колонку фракция подвергается многократным последовательным осаждениям и растворениям под влиянием градиента температуры и градиента концентрации растворителя. Очевидно, избирательное осаждение, обычно применяемое при фракционировании методом градиентного элюирования, но, как правило, не используемое при хроматографическом фракционировании, играет значительную роль и может оказаться одной из причин близости результатов, полученных обоими методами. [c.82]

За период времени, прошедший с момента введения метода осадительной хроматографии в практику фракционирования, возникли существенные противоречия относительно того, действительно ли наличие температурного градиента улучшает фракционирование по сравнению с методами градиентного элюирования при постоянной температуре, рассмотренными в гл. 3, или, напротив, уменьшает эффективность фракционирования. Для объяснения механизма разделения нолимерпого образца на фракции с различными молекулярными весами было предложено громадное количество [c.86]

Джонс [88] подробно описал установку для хроматографического анализа пептидов, пригодную как для препаративного (/ 100 мг), так и для аналитического (0,1—1 мг смеси пептидов) разделения. При работе на этой установке щелочной гидролиз не проводится. Эту методику называют прямым методом нингидриновой колориметрии , поскольку в ней используется модифицированный [67, 150] аминокислотный анализатор Спакмана с сотр. [186], который можно непосредственно применять для автоматической хроматографии пептидов [89]. В установке можно использовать блоки различных автоматических анализаторов заводского изготовления. Разделение ведется методом градиентного элюирования. Элюат делится на две части, большая часть направляется в сборник фракций, а [c.313]

Необходимость использования небольших проб в высокоэффективной жидкостной хроматографии может являться и недостатком. При сборе фракций количество каждого выделенного компонента очень мало. Однако, в общем случае, этого количества достаточно для проведения идентификации спектральными методами. Многократное использование колонок. В высокоэффективной жидкостной хроматографии колонки используются многократно. Компоненты смеси, попавшие на колонку, элюируются из нее до начала следующего анализа. В качестве подвижных фаз выбирают такие жидкости, которые не изменяют характеристик колонок. При использовании метода градиентного элюирования регенерирование колонок производят путем промывания их не- , колькими объемами подвижной жидкой фазы первона-чального состава. [c.17]

Рис. 7-13. Разделение эпоксидной смолы Epikote 1001 с применением метода градиентного элюирования. Колонка 0,5 м х 0,22 мм (внутр. диам.) неподвижная фаза силикагель, модифицированный ОДС (5 мкм) подвижная фаза а - ацетонитрил/вода (85/15), б - ацетонитрил/ТГФ (90 10) изменение состава элюента в процессе разделения показано на рисунке объемная скорость 1,4 мкл/мин масса пробы 0,16 мкг детектор УФ, длина волны 225 нм.

Справочник химика 21

Химия и химическая технология