Аминокислоты ферментативное определение

При определении С-концевых аминокислот ферментативным путем используют карбоксипептидазы А, В, С и Y. Карбоксипептидаза А при pH 8,0 отщепляет все аминокислоты кроме лизина, аргинина и пролина карбоксипептидаза В при pH 8,0 отщепляет только лизин и аргинин карбоксипептидаза С при pH 3,5 отщепляет кислые, нейтральные и основные аминокислоты, включая пролин карбоксипептидаза Y при pH 6,0 отщепляет все С-концевые аминокислоты, включая пролин. [c.154]

После трансляции многие полипептиды подвергаются различным модификациям. У большинства из них отщепляется N-концевой метионин, так что N-концевым остатком становится вторая аминокислота. У эукариот происходит так называемый процессинг некоторых белков, когда полипептидная цепь расщепляется в определенных сайтах с образованием более коротких белковых молекул со специфическими функциями. В некоторых случаях, особенно в эукариотических клетках, к определенным аминокислотам ферментативным путем присоединяются фосфатные группы, липиды, углеводы или другие низкомолекулярные соединения. В результате этих химических модификаций образуются белки, выполняющие в клетке специфические функции. [c.40]

Точность определения отношения энантиомеров аминокислот ферментативным методом [c.273]

Особенно тщательно изучается рацемизация аминокислот, представляющая определенный практический интерес. При крупномасштабном расщеплении рацемических аминокислот (чаще всего ферментативным методом), проводимом с целью получения природного -энантиомера, второй антипод накапливается как бесполезный отход. Подвергая О-изо-мер рацемизации, можно затем снова вовлечь его в производство нужного -изомера. [c.70]

Более поздние взгляды Д. Грина наиболее полно изложены в работе [60], в которой развивается концепция парности . В основе концепции лежит идея, что для преодоления высокого термодинамического барьера при химических изменениях должен происходить разрыв пары связей с одновременным образованием новой пары связей. В таком случае ферменты можно рассматривать как машины, реализующие этот принцип. При переходе от классической энзимологии к энергетическому сопряжению, мышечному сокращению и т. д. будут добавляться новые возможности к основной ферментативной машине, при полном сохранении принципа парности. Сама по себе идея преемственности в развитии биоэнергетических механизмов, безусловно, рациональна. Однако при всей оригинальности и универсальном подходе, данная концепция лишена как структурно-функциональной основы (связи с надмолекулярной организацией ферментов и других структур), так и молекулярной конкретности. Приводимые в работе [60] тетраэдрические диаграммы практически никак не соотносятся с реальными функциональными группами аминокислот, организованными определенным образом в белковых структурах. [c.44]

С-концевые аминокислоты пептидов или белков можно определить при помощи химических или ферментативных методов. Химические методы включают гидразинолиз, селективное введение трития, избирательное восстановление, образование альдегидов, алкоголиз оксазолов в кислой среде, тиоцианатное или цианамидное расщепление. При ферментативном определении используют карбоксипептидазы. Этот подход в последние годы [c.487]

Измерение спектров дисперсии оптического вращения (ДОВ) и кругового дихроизма (КД) получило широкое распространение как метод конформационного анализа оптически активных соединений. Особенно методы ДОВ и КД используются в органической химии, биохимии, энзимологии и молекулярной биологии. Данными методами исследуются белки, аминокислоты, нуклеиновые кислоты, стероиды, углеводы и полисахариды, вирусы, митохондрии, рибосомы, фармакологические средства, синтетические полимеры, координационные соединения, неорганические и редкоземельные комплексы, кристаллы, суопензии и пленки и т. п. и решаются следующие задачи 1) определение по эмпирическим пра вилам конформации и ее изменений под действием различных физико-химических воздействий 2) изучение механизма и кинетики химических реакций (особенно ферментативных) 3) получение стереохимических характеристик 4) измерение концентраций оптически активных веществ 5) определение спиральности макромолекул 6) получение электронных характеристик молекул 7) исследование влияния низких температур на конформацию соединений 8) влияние фазовых переходов типа твердое тело — жидкость — газ на изменение структуры. [c.32]

Ферментативный метод определения оптической чистоты основан на использовании высокой стереоспецифичности ферментов. Так, например, фермент, окисляющий аминокислоты,— оксидаза аминокислот — обладает высокой стереоспецифичностью -аминокислоты окисляются этим ферментом в 1000 раз быстрее, чем О-аминокислоты. Таким образом, если взять О-аминокислоту, оптическую чистоту которой необходимо проверить, то отсутствие реакции с оксидазой аминокислот укажет на практически полную оптическую чистоту (не менее 99,9%). Если же ферментативное окисление якобы чистой О-аминокислоты идет с заметной скоростью, то это следует считать признаком того, что она содержит примесь -аминокислоты. [c.161]

Каталитические ферментативные методы анализа используют преимущественно для определения многих органических соединений, п частности таких, которые содержатся в биологических объектах (в крови, моче, тканях и др.). Таким способом можно определять мочевину, мочевую кислоту, аминокислоты и другие органические кислоты, глюкозу и другие сахара, антибиотики и т. д. [c.450]

Для определения С-концевых аминокислот в белках и пептидах используют как химические, так и ферментативные методы. [c.154]

Для аналитического определения аминокислот разработано множество методов, из которых здесь рассматриваются только методы бумажной, тонкослойной, ионообменной и газовой хроматографии, а также ферментативные н изотопные методы. [c.55]

Известны ферментативные методы определения Ы-и С-концевых остатков. Преимуществом этих методов является возможность осуществления реакции в мягких условиях и использования небольших количеств белков, так как отщепленные аминокислоты можно определять в микроколичествах [c.229]

Для пищевых и медицинских целей смесь аминокислот получают в результате ферментативного гидролиза. Для этого применяют ферменты, специфически расщепляющие только определенные пептидные связи. Полученный гидролизат может содержать не все белковые АК, но может быть обогащен определенной аминокислотой или группой АК. Например, если для гидролиза используют химотрипсин, то в гидролизате будет относительно много ароматических аминокислот, так как именно между их остатками химотрипсин разрывает пептидные связи. [c.17]

Многие ферментативные реакции высокоселективны, и многие ферменты, особенно в реакциях с аминокислотами, различают энантиомеры с полной селективностью [12]. Следовательно, методы, основанные на ферментативных каталитических реакциях аминокислот, особенно полезны для точного определения высокой степени энантиомерной чистоты путем изучения реакции примесного [c.36]

По хим. св-вам Г,-типичная алифатич. а-аминокислота. Количеств, определение основано на образовании окрашенных продуктов с о-фталевым альдегидом (р-ция Циммермана). В составе белков встречается чаще, чем др. аминокислоты. Служит предшественником в биосинтезе пор-фириновых соед. и пуриновых оснований. Г.-кодируемая аминокислота, заменимая его биосинтез осуществляется переамииированием глиоксиловой к-ты, ферментативным расщеплением серина и треонина. Синтезируют Г, из хлоруксусной к-ты и NH3. В спектре ЯМР в DjO хим. сдвиг протонов группы [c.587]

При определении аминокислот с помощью формольного титрования используется реакция аминокислот с формальдегидом, приводящая к увеличению кажущейся кислотности [171, 176]. Одним из самых старых методов определения степени гидролиза является газометрический метод Ван-Слайка, основанный на определении азота, выделяющегося нри взаимодействии аминокислоты с азотистой кислотой [171, 184]. В литературе описаны [171] различные модификации этого метода и оцениваются другие возможньге методы определения аминокислот, включая титриметрические, газометрические, спектрофотометрические и т. д. Использовалось также ферментативное декарбоксилирование специфических аминокислот при определении молекулярного веса полипептида и степени его гидролиза [16]. [c.401]

Для ферментативного определения Ы-концевых групп иногда применяют и аминопептидазы — ферменты, которые последовательно отщепляют аминокислоты с Ы-конца полипептидной цепи. Наиболее хорошо изученным и часто применяемым ферментом является лейцинаминопептидаза, выделяемая из почек свиньи. Этот энзим был использован для изучения Ы-концевой последовательности инсулина и рибонуклеазы. В опытах на синтетических пептидах и амидах аминокислот было показано, что весьма медленно отщепляются те Ы-концевые аминокислоты, рядом с которыми стоят лизин, аргинин И ароматические аминокислоты. Эта относительно узкая специфичность действия энзима затрудняет его применение специфичность действия других аминопеп-тидаз изучена недостаточно. [c.75]

Цитохром с из сердечной мышцы лошади был первым цитохромом, для которого установили полную аминокислотную последовательность. Гидролиз цитохрома с химотрипсином дал тринадцать больших пептидов, которые были разделены хроматографией на ионообменных смолах и очищены далее при помощи электрофореза и хроматографии на бумаге. Аминокислотная последовательность пептидов была установлена при помощи химических и ферментативных методов. Химические методы включали динитрофенилирование по Сэнджеру и деградацию по Эд-ману для идентификации N-концевых аминокислот, ферментативные — гидролиз лейцинаминопептидазой для определения N-концевых и карбоксипептидазой А для определения С-концевых аминокислот оба фермента использовались также для определения коротких аминокислотных последовательностей. [c.160]

Грамицидин. A. 1. Определение состава и конфигурации аминокислот ферментативным методом и методом газовой хроматографии. (Метиловые эфиры динитрофенилпроизводных АК до 1—8 мк молей.) [c.81]

Вопросам динамического состояния белков и других составных частей клеток посвящена специальная глава книги (стр. 573). Здесь же следует отметить, что использование в исследованиях, наряду с радиоактивными и стабильными изотопами также отдельных элементов клеток гранул, митохондрий, микросом и ферментных экстрактов из клеток позволило весьма детально разобраться в ферментативных процессах, обеспечивающих обновление аминокислотного состава белков тканей. Установлено, что обновление ами1юкислотного состава белков происходит при определенных условиях. Аминокислоты, участвующие в этом процессе, как это имеет место в случае синтеза белковых молекул, подвергаются активированию. Активирование аминокислот происходит в присутствии кислорода, или же при добавлении к среде аденозинтрифосфорной кислоты. Продукта.ми активирования являются аденилаты аминокислот. Ферментативные процессы активирования аминокислот сосредоточены преимущественно в митохондриях, обновление же белков интенсивно происходит в лшкросомах клеток. В процессах обновления а.минокислотного состава белков участвуют нуклеиновые кислоты. [c.431]

Пример 10-И. Определение мутантных белков или белковых фрагментов при помощи перекрестных реакций. Белки из мутантных генов содержат либо новую аминокислоту вместо определенной аминокислоты, присутствующей в белке дикого типа, либо фрагменты нормального белка, если мутация вызывает терминирование цепи. В обоих случаях активность белка (например, ферментативная) теряется, в результате чего биохимический анализ оказывается несостоятельным. Если измененный белок или фрагмент продолжает содержать ту же антигенную детерминанту (например, аминокислотную последовательность), что и белок [c.267]

В заключение следует отметить, что два фермента достаточно строго ориентированы в пространстве, чтобы узнавать нужные аминокислоты и соединять их в процессе синтеза определенной асимметричной циклической молекулы. Именно наличие специфических белок-белковых взаимодействий обеспечивает эффективный полииеитидный синтез. Другими словами, вся информация, необходимая для синтеза грамицидина 5, позволяющая узнать аминокислоты и осуществить синтез пептидных связей, содержится в макромолекулярном ферментативном комплексе. [c.65]

Триптофан входит в состав многих белков, но обычно лишь в незначительных количествах. Определение его облегчается применением различных цветных реакций, характерных для этой аминокислоты. При кислом гидролизе протеинов он разлагается, но при ферментативном расщеплении белка может быть выделен в лсвовращающей форме. [c.990]

В природе в условиях ферментативного катализа осуществляется АС с исключительно высокой стереоселективиостью. Являясь асимметрическими продуктами, ферменты способствуют синтезу веществ строго определенного строения. Например, при действии ( >ермента химотрипсина па рацемические эфиры окси- и аминокислот идет АС пептидов. [c.226]

Для определения С-концевых остатков чаще всего используют ферментативный гидролиз карбоксипептидазами, к-рые специфически расщепляют пептидные связи, образованные С-коицевыми остатками. Поскольку после отщепления концевых остатков фермент атакует послед, пептидные связи, измерение скорости отщепления отдельных аминокислот позволяет анализировать также и С-концевую аминокислотную последовательность. [c.250]

ИСКУССТВЕННАЯ ПИЩА, пищ. продукты, к-рые олуча -ют из разл. пищ. в-в (белков, аминокислот, липидов, углеводов), предварительно выделенных из прир. сырья или полученных направленны.м синтезом из минер, сырья, с добавлением пищевых добавок, а также витаминов, минер, к-т, микроэлементов и т. д. В качестве прир. сырья используют вторичное сырье мясной и молочной пром-сти, семена зерновых, зернобобовых и масличных культур и продукты их переработки, зеленую массу растений, гидро-бионты, биомассу микроорганизмов и низших растений прн этом выделяют высокомол. в-ва (белки, полисахариды) и иизкомолекулярные (липиды, сахара, аминокислоты и др ) Низкомол. пищ. в-ва м. б. получены также микробиол. синтезом из глюкозы, сахарозы, уксусной к-ты, метанола, углеводородов, ферментативным синтезом из предшественников и орг. синтезом (вкл очая асимметрич. синтез для оптически активных соед ). Высокомол. в-ва должны обладать определенными функциональными св-вамн, такими, как р-римость, набухание, вязкость, поверхностная активность, способность к прядению (образованию волокон) и гелеобразованию, а также необходимым составом и способностью перевариваться в желудочно-кишечном тракте. Низкомол. в-ва химически индивидуальны или являются смесями в-в одного класса в чистом состоянии их св-ва не зависят от метода получения. [c.273]

Как MALDI, так и ионизацию электрораспылением можно легко сочетать с ферментативным расщеплением белков для последующего определения их параметров. После расщепления белка полученная смесь целиком помещается в MALDI-спектрометр и анализируется. В наиболее благоприятных случаях можно определить массу более чем 90% пептидных фрагментов. Этот подход можно использовать для определения изменений в белке, например при определении параметров рекомбинантных белков или для идентификации ковалентно-связанных модификаторов белка. Масс-спектрометрия с ионизацией электрораспылением, вследствие того, что она легко сочетается как с ЖХ-МС, так и тандемной масс-спектрометрией, может быть источником еще и дополнительной информации о последовательности аминокислот в белке. При химической ионизации пептид фрагментируется на два комплементарных ряда ионов, которые имеют последовательности аминокислот, начиная с С- и N-терминальных атомов пептида. Тандемная масс-спектрометрия с ионизацией электрораспылением оказывается более экспрессной и находит более разнообразное применение, чем традиционные биохимические методы, такие, как последовательное отщепление аминокислот по методу Эдмана. [c.308]

В настоящее время определение абсолютной конфигуращ1И аминокислот проводят как с помощью рентгеноструктурного анализа и ферментативных методов, так и с помощью исследования спектров КД и ДОВ [28]. Оптически активный А — 1г -переход карбоксильной группы (X = 210 нм) положителен для ь-аминокислот и отрицателен для о-аминокислот [29, 30]. Для таких исследований часто применяются производные аминокислот. N-Aл-килтиотиокарбоиильные и дансильные производные ь-аминокислот обнаруживают положительный эффект Коттона, гидантоины — отрицательный. [c.29]

Ферментативные методы аминокислотного анализа основаны на определении продуктов реакции, которые образуются при биохимическом расщеплении аминокислот. Из-за их сравнительно низкой чувствительности (10 — 10 моль/л) зти методы применяют только при серийных анализах определенных аминокислот. К анализируемой смеси аминокислот добавляют специфическую декарбоксилазу (или же производяшле эту декарбоксилазу микроорганизмы), и получающуюся при декарбоксилировании углекислоту определяют манометрически в аппарате Варбурга. [c.67]

Все большее значение приобретает определение аминокислот с помощью ферментативных электродов [197 — 200], в которых стереоселек-тивное расщепление катализируется иммобилизованными ферментами например, в случае оксидазного электрода, специфичного к ь-аминокислотам, расщепление протекает по схеме [c.67]

Установление первичной структуры начинается с определения аминокислотного состава и молекулярной массы выделенного и очищенного белка. Белки, состоящие из нескольких полнпептидных цепей, разделяются с помощью денатурирующих реагентов (концентрированный раствор мочевины или ДСН) на мономеры. Дисульфидные мостики расщепляют восстановлением меркаптоэтанолом. Для предотвращения дисульфидного обмена и окисления образующихся свободных меркаптогрупп их блокируют каким-либо методом, например алкилированием иодуксусной кислотой с образованием 8-карбоксиметильного производного или цианэтилированием акрилонитрилом. После определения Ы- и С-концевых аминокислот полипептидная цепь расщепляется химически или ферментативно (в нескольких вариантах) на меньшие перекрывающиеся фрагменты. Для каждого фрагмента устанавливается аминокислотная последовательность. И наконец, комбинируя отдельные последователькости, приходят к полной последовательности исходной полипептидной цепи. [c.364]

Расщепление пептидной цепи, необходимое для определения последовательности аминокислот, осуществляют с помощью частичного химического или ферментативного гидролиза. При ферментативном расщеплении чаще всего используют протеазы трипсин, химотрипсин, пепсин, папаин, субтилизин, зластазу и термолизин [84]. [c.365]

По данным исследований Шеффнера и соавторов [60], аминокислотный состав пепсинового гидролизата способен выявить различия между белками, которые не проявляются ни при анализе общего содержания незаменимых аминокислот, ни при анализе, проводимом после полного ферментативного гидролиза. Это наблюдение использовано для определения ППО (показатель пепсинового переваривания остатка). [c.576]

Для структурного соответствия в мультиплетной теории важно определенное взаимное расположение атомов в каталитически активном центре, в который входит небольшое число атомов, и обычно не обязательно, чтобы в окрестности этого центра миллионы раз повторялось определенное расположение атомов (хотя такое повторение и может влиять на свойства активных центров). Поэтому активными центрами могут быть не только кристаллы, но и определенные небольшие части больших молекул, например высокополимерных аминокислот в ферментативном каталцзе, и отдельные рентгеноаморфные осколки кристаллической решетки, со- [c.13]

Гидролиз белков ЗМ /г-толуолсульфокислотой или АМ метан-сульфокислотой [7,8], содержащей 0,2% триптамина, в вакууме при 110°С, в течение 3 суток с хорощим выходом приводит к аминокислотам, включая триптофан, однако углеводы могут мешать. Триптофан можно определять также после щелочного гидролиза, но при этом разрушаются полностью аргинин, цист(е)ин, серин и треонин. Общее содержание амидов, обусловленное наличием аспарагина и глутамина, можно определить после гидролиза 10 М НС1 при 37°С в течение 10 суток и последующего анализа на аммиак с помощью микродиффузионной техники. Раздельное определение аспарагина и глутамина можно провести с помощью предварительной этерификации (метанол-уксусный ангидрид) свободных карбоксильных групп, последующего восстановления (борогидрид лития) образовавшихся сложноэфирных групп и определения аспарагиновой и глутаминовой кислоты после кислотного гидролиза соответственно в виде v-гидрокси-а-аминомасляной кислоты и б-гидрокси-а-аминовалериановой кислоты. Содержание аспарагина и глутамина получают путем вычитания этих величин из содержания аспарагиновой и глутаминовой кислот после полного гидролиза немодифицированного белка. Полный ферментативный гидролиз белков без деструкции аминокислот можно осуществить, используя смешанные конъюгаты Сефарозы с трипсином, химотрипсином, пролидазой и аминопептидазой М [9] [c.260]

Поскольку здесь рассматриьаются общие химические черты ферментативного катализа, мы в большинстве случаев будем избегать подобных осложнений и ограничимся, где это возможно, только простейшим типом мономерного фермента. Белок этого типа — обычно большая молекула, состоящая из одной полипептидной цепи, содержащей, возможно, несколько сот аминокислот и свободно существующая в растворе внутри клетки. Такой белок можно очистить до степени гомогенности (по нескольким различным критериям), используя хроматографические и электрофоретические методы, пригодные для разделения заряженных макромолекул в водной среде [5]. На этой стадии очистки при благоприятных условиях белок можно закристаллизовать. Многие ферменты, таким образом, становятся доступными в качестве вполне определенных органических соединений, удовлетворяющих обычным критериям чистоты, и они, естественно, могут быть синтезированы 6]. Они также могут быть получены в значительных количествах, i e хорошо изученные ферменты — например, трипсин, химотрипсин, лизоцим и рибонуклеаза — доступны в граммовых количествах. Значительное число других доступны коммерчески в миллиграммовых количествах. [c.450]

Белки синтезируются на рибосомах из отдельных аминокислот, образуемых самими микроорганизмами. Исключение составляют некоторые ауксотрофные мутанты, для которых необходимо присутствие в среде определенных аминокислот. Биосинтез аминокислот в клетке идет ферментативно из неорганического азота и различных соединений углерода, например продуктов аэробного или анаэробного разложения углеводов. Многие аминокислоты образуются из промежуточных продуктов цикла Кребса из а-кетоглутаровой кислоты — глутаминовая кислота, орнитин, аргинин, пролин из щавелевоуксусной кислоты — Ь-ас-парагиновая кислота, гомосерин, метионин, треонин, диаминопимелиновая кислота, лизин, изолейцин из пировиноградной кислоты — аланин, валин, лейцин, серии, глицин, цистеин (рис. 17). [c.41]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология