Цезия растворы, центрифугирование

Осторожным наслаиванием растворов сахарозы с последовательно уменьшающейся плотностью или центрифугированием растворов, содержащих кроме исследуемых веществ равномерно распределенные по объему пробирки соли цезия или рубидия, можно создать градиент плотности растворителя по высоте пробирки. Центрифугирование в ячейках с градиентом плотности приводит к накоплению вещества в очень узкой области, в которой плотность вещества совпадает с плотностью растворителя. Центрифугирование в градиенте плотности применяется, в частности, при изучении нуклеотидов. [c.157]

ДНК удалось разделить методом центрифугирования в концентрированном растворе хлористого цезия. Хлористый цезий использовали потому, что плотность его водного раствора может быть сделана достаточно близкой к плотности [c.895]

Аппараты для осаждения, кристаллизации и центрифугирования, используемые в операциях группового разделения раствора осколков, сделаны из нержавеющей стали и имеют объем от 1000 до 2000 л. Перемещение жидкости из одного аппарата в другой производится по трубопроводам, проложенным в бетонных траншеях, с помощью пароструйных инжекторов. Концентрированные растворы, образуемые при растворении осадков частично разделенных продуктов деления, переносятся в стеклянные сосуды небольшой емкости, служащие для проведения операций выделения чистых радиоактивных элементов и выпаривания конечных растворов. Приготовление источников излучения (прессование порошков в таблетки с помощью гидравлических прессов, отливка в формы расплавленного хлорида цезия, помещение в капсюли плоских и круглых источников, запаивание их, электроосаждение составление керамических смесей с уча- [c.709]

Точно взвешенное количество хлористого цезия (около 0,6 г) растворяют в 10 мл воды и добавляют раствор хлористого цезия-137 без носителя с активностью около 2 мккюри (при этом должны отсутствовать сульфат- и фосфат-ионы). Раствор хорошо перемешивают, точно измеряют объем, после чего отбирают 1 мл и разбавляют водой до 25 мл. 1 мл этого раствора переносят в жидкостный счетчик, разбавляют 96%-ным спиртом до достижения нормальной высоты наполнения и производят измерения. Из первоначального раствора осаждают плохо растворимый перхлорат цезия небольшим избытком 20%-ного раствора хлорной кислоты, раствор охлаждают, фильтруют, осадок тщательно промывают 50 мл воды (0—5°) и 100 мл спирта. Для удаления хлорной кислоты, захваченной кристаллами перхлората цезия, осадок растворяют в крайне малом количестве горячей воды, добавляют немного 96 % -ного раствора этилового спирта, охлаждают до 0° и фильтруют. После повторного промывания спиртом осадок перхлората цезия высушивают при 150°. Каждые 100 мг полученного таким образом меченого перхлората цезия интенсивно перемешивают в течение нескольких часов при температуре 25° (в термостате) с 25 мл соответствующего растворителя этиловый спирт, метиловый спирт, изобутиловый спирт, пропиловый спирт и уксусноэтиловый эфир). Насыщенный раствор тщательно центрифугируют. После центрифугирования отбирают 5 мл насыщенного раствора, переносят в трубку счетчика, добавляют спирт и производят измерения. При подобных измерениях растворимости в любых условиях следует избегать операции фильтрования. Адсорбция на фильтровальной бумаге вносит значительные ошибки, которые существенно искажают результаты измерений [11]. Так, например, при определении растворимости сульфата радия [c.353]

ВЫХ оснований или нуклеотидов, полученных после расщепления полимера (подробнее — см. стр. 58). С нуклеотидным составом ДНК однозначно связаны два физических свойства двухцепочечных комплексов, которые часто используются для характеристики полученных препаратов 2 . 2в Одно из них — так называемая температура плавления Гщ — это температура, при которой происходит распад двухцепочечного комплекса на одноцепочечные молекулы этот процесс легко наблюдать по изменению УФ-поглощения или оптического вращения раствора (подробнее см. в гл. 4). Другая характерная константа ДНК — плавучая плотность р — может быть определена из результатов равновесного ультрацентрифугирования Такое центрифугирование проводят обычно в растворах солей, обладающих высокой плотностью чаще всего применяют хлорид или сульфат цезия. При длительном центрифугировании устанавливается градиент плотности раствора, а ДНК собирается в узкой зоне, где существует равновесие между центробежной силой и выталкивающей силой, которая определяется разностью плотности осаждаемого вещества и применяемого солевого раствора в данной зоне. Равновесное центрифугирование в градиенте плотности Сз С1 может служить не только аналитическим методом для характеристики препарата ДНК, но и полезным препаративным методом для разделения ДНК, различающихся по нуклеотидному составу. Подобным же образом препаративное ультрацентрифугирование в градиенте плотности сахарозы используется для разделения молекул ДНК, различающихся по скорости седиментации. [c.31]

Такие роторы находят большое промышленное применение. Так, с помощью роторов типа К можно выделить препараты вируса гриппа, в 10 раз превосходящие по степени очистки те препараты вируса, которые удавалось выделить применением обычного центрифугирования. В роторе Андерсона производится и разделение по плотности. При этом для образования градиентов плотности используют либо растворы сахарозы, либо в титановых роторах растворы хлористого цезия. [c.189]

Смесь тяжелых (черные кружочки), гибридных (заштрихованные кружочки) и легких (белые кружочки) молекул ДНК растворяют в концентрированном растворе хлористого цезия (мелкие точки). При центрифугировании хлористый цезий образует градиент плотности концентрация раствора соли увеличивается по направлению ко дну пробирки. Каждый вид ДНК образует полосы в том месте раствора, где ее плотность совпадает с плотностью раствора. Когда процесс седиментации приближается к состоянию равновесия, центрифугу останавливают, прокалывают дно центрифужной пробирки, а ее содержимое собирают по каплям в коллектор. Затем в каждой капле анализируют радиоактивность с помощью счетчика, а также определяют на спектрофотометре поглощение ультрафиолетовых лучей. [c.200]

После удаления цезия из анализируемого раствора рубидий осаждается в виде хлороплатината, который затем разрушают восстановлением солянокислым гидразином. После отделения платины (центрифугированием) к раствору добавляют удерживающий носитель для цезия, раствор выпаривают досуха, и к остатку приливают 1 мл насыщенного раствора натриевой соли 5-нитро-6-хлорметилбензол-3-сульфокислоты. Нагретый до просветления раствор затем охлаждают до 0° при этом выпадает нерастворимая рубидиевая соль. Затем осадок растворяют и вновь переосаждают. Выход рубидия по носителю составляет -70% [13]. [c.567]

В фильтрате после центрифугирования в результате многократного оборота накапливаются едкие натр и кали, а также алюминаты натрия и калия. Поэтому этот оборотный раствор лериодически выводится из цикла и перерабатывается отдельно. В нем концентрируются рубидий и цезий. [c.128]

Используя соответствующую соль, можно создать устойчивый в условиях центрифугирования градиент ее концентрации, а тем самым и градиент плотности растворителя. Если природа соли и распределение ее концентрации таковы, что плавучая плотность биополимера выше, чем плотность растворителя на мениске, но ниже, чем у дна пробирки, то по мере перемещения к дну пробирки биополимер достигнет участка, где множитель 1 - / о/р станет равным нулю и дальнейшая седиментация прекратится, т.е. возникнет устойчивая зона нахождения биополимера. Наиболее широкое применение для этой цели нашли растворы солей цезия, которые позволяют получить растворы с плотностью, достаточной для остановки перемещения нуклеиновых кислот. Эксперименты подобного рода весьма дороги, так как требуют длительной, обычно на протяжении нескольких суток, работы ультрацентрифуг. Однако они открывают некоторые уникальные возможности. Например, удается разделить биополимеры, различающиеся лишь изотопным составом. Молекулы ДНК из одного вида микроорганизма, выращенные на средах, содержащих в качестве источника азота соли аммония и 15NH4, не отличаются по объему, но имеют разные массы и, следовательно, различные плавучие плотности. Поэтому при равновесном центрифугировании и градиенте плотности хлорида цезия они образуют отдельные зоны. Пример применения этого метода для доказательства полуконсервативного характера репликации ДНК приведен в 5.1. [c.244]

Второе физическое свойство ДНК, обусловленное соотношением пар 0=С и А=Т,-это плавучая плотность. Препарат ДНК с более высоким содержанием О С-пар обладает чуть большей плотностью, чем ДНК с повышенным содержанием А=Т-пар. Препараты ДНК центрифугируют при высоких скоростях в концентрированном растворе хлористого цезия (СзС ), плотаость которого лежит в том же диапазоне, что и плотность ДНК. При центрифугировании [c.867]

При центрифугировании небольшого количества ДНК в концентрированном растворе хлористого цезия вскоре достигается равновесие. Действующие при этом противоположные процессы седиментации и диффузии приводят к установлению стабильного градиента концентраций хлористого цезия с непрерывным повышением плотности в центробеишом направлении. Макромолекулы ДНК сдвигаются под действием центробежной силы в зону, где плотность раствора равна собственной плотности ДНК. Этой тенденции противостоит процесс диффузии, в результате чего в условиях равновесия определенный вид ДНК оказывается сосредоточенным в узком слое. При наличии нескольких видов ДНК с различной плотностью каждый из них образует определенный слой в том месте, где плотность раствора хлористого цезия равна плотности данного вида ДНК. [c.65]

По этому методу s-137 выделяют при 20—25° С из растворов, содержащих меньше 0,0001 моль1л цезия, на феррицианиде цинка с условной концентрацией 0,001—0,0004 моль1л. Носитель образуется при взаимодействии в растворе стехиометрических количеств Кз[Ре(СМ)б] или (ЫН4)з[Ре(СН)б] с 2п(МОз)2 или Zn lj. После промывания и центрифугирования осадок высушивают при 110° С и прокаливают при 500—600° С. Если цезий нужно отделить от носителя, то можно, например, растворить осадок в растворе аммиака и обработать анионитом. Выход цезия превышает 95% при коэффициенте очистки 10 . [c.81]

Полученный раствор содержит нитрат и сульфат уранила и незначительную примесь продуктов деления. Для доочистки от продуктов деления (в основном от цезия) дважды осаждают диура-пат аммония. С этой целью к нагретому раствору, объединенному со всеми промывными водами, постепенно добавляют (до запаха) концентрированный раствор аммиака, не содержащий СО2. Полученный осадок диураната аммония спустя 20—30 мин отделяют центрифугированием или фильтрованием и промывают 2—3 раза водой, содержащей несколько капель аммиака. Диуранат аммония растворяют в 1—2 М азотной кислоте, полученный раствор сдают на хранение. [c.498]

Синтез смешанных ферроцианидов с цезием производился [1651—1657] путем сливания титрованных растворов солей тяжелых металлов и хлористого цезия с раствором ферроцианида натрия, взятых в стехиометрических количествах. Образующиеся осадки ферроцианидов отделялись от растворов посредством центрифугирования. Простые и смешанные ферроцианиды индия выделялись [1053, 1162, 1635] нри изучении изотерм растворимости систем 1пС1з - [Ре(СН)в] - НаО при 25° С, где = Ы, К, Ка, НЬ и Сз. Состав ферроцианидов определялся [1635, 1651—1657] анализом на содержание всех компонентов, включая в ряде случаев и воду. [c.169]

Для выделения радиоактивного цезия отбирается точно определенный объем (не более 5 мл) исследуемого раствора в центрифужную пробирку. Если раствор имеет слабокислую или нейтральную реакцию, то к нему добавляют несколько капель концентрированной азотной кислоты. Затем в раствор вносят 1 мл раствора нитрата калия (10 мг калия и 0,5 мл фосфорновольфрамовой кислоты) при перемешивании тотчас же выпадает в осадок фосфорновольфрамат калия и цезия. Жидкость с осадком нагревается на водяной бане 5—10 мин при периодическом перемешивании. По охлаждению осадок отделяется от жидкости центрифугированием и 3 раза тщательно промывается при перемешивании осадка 5 /в-ным раствором азотной кислоты с последующим центрифугированием. [c.63]

Описанные до сих пор методы были в основном препаративными, причем градиент плотности устанавливали заранее. Как уже упоминалось, градиент плотности может быть получен с помощью самого поля центрифуги. Это имеет место при центрифугировании смеси двух или более жидкостей, отличающихся по плотности, молекулярному весу или по обоим показателям. При растворении макромолекулярного компонента в этой смеси растворителей он будет собираться в области, где плотность близка к плотности полимера в растворе. Мезельсон, Шталь и Виноград [8] первыми применили этот принцип к системе дезоксирибонуклеиновая кислота (ДИК)— водный раствор хлористого цезия. Они получили основные соотрюшения для распределения концентрации полимера в предположении об идеалыюсти раствора и показали, что для единичного полимерного ко.мпопента имеет место гауссово распределение концентрации (ср. нижеследующие разделы). Это предсказание теории было подтверждено опытами с ДНК, полученной из бактериофага Т4, что указывало на высокую степень монодисперсности этого полимера. Для других образцов ДНК были обнаружены несимметричные полосы вследствие композиционной неоднородности препаратов (см. раздел Ж)- [c.419]

В то же время существует ряд ограничений метода. Одно из них то, что молекулярный вес полимера не должен быть слишком низким, так как при этом ширина полосы будет сравнима или будет даже превышать длину ячейки. Это ограничение, однако, очень сильно зависит от экспериментальных условий. Например, Иффт и Виноград показали, что альбумин с молекулярным весом порядка 70 ООО может собраться в полосу внутри ячейки в 2,6 М растворе хлористого цезия при скорости центрифугирования 56 ООО об мин. [c.443]

Наномним, что нри центрифугировании в сахарозном градиенте разделение основано на различиях в скорости седиментации молекул, а не ни различиях в плавучей плотности. Это означает, что молекулы РНК, ДНК и белка при центрифугировании в сахарозном градиенте никогда не достигнут положения равновесия. Их плотность значительно выше плотности самых концентрированных растворов сахарозы, п при длительном центрифугировании все они оседают на дно центрифужной пробирки. Поэ/ому центрифугирование в сахарозном градиенте не следует путать с центрифуг гированием в градиенте солей цезия, которое широко иснользуется для разделения молекул по их плавучей плотпостп. [c.127]

Для того чтобы быстро достичь состояния равновесия и комненсиро-вать высокую плотность растворов солей цезия, Уэйк и Болдуин [2] и Инман и Болдуин [20] проводили центрифугирование нри очень высокой ско-[юсти (59 780 об1мин) в ячейках, заполненных наполовину. Это позволяло также избежать перегрузки ротора, хотя такая предосторожность может быть и излишней (Л. Гропнер, частное сообщение). [c.199]

Данная выше картина редупликации ДНК в ходе митоза была подтверждена применением меченых атомов. Мы приведем только опыт с меткой по азоту. Культура бактерий была выращена на среде, содержащей только Н, а затем была перенесена в среду с где и продолжала рост. Время от времени отбирались пробы биомассы, извлекалась оттуда ДНК и производилось центрифугирование ее макромолекул в растворе хлористого цезия такой плотности, чтобы она была средней между плотностью нитей ДНК с и Разделенные таким методом фракции ДНК, как оказалось, не имеют макромолекул с хаотически перемешанными атомами и Ы, а четко делятся иа три группы ДНК. полностью построенные на ДНК, содержащие только Н, и ДНК с 50% Ы и 50% Таким образом, одна цепь двойной спирали ДНК действительно целостно передается потомству, а вторая половина спирали набирается из подручного материала нуклеозидфос-фатов. [c.686]

Одна часть раствора гибридной ДНК, выделенной из меченных 15N бактерий Е. oli, выращиваемых в течение одной генерации в среде, содержащей N, денатурирована таким образом, чтобы произошло разделение двух комплементарных полинуклеотидных нитей. ДИК-свидетель, выделенная из культуры пневмококков, была добавлена как к неденатурированной (Л), так и к денатурированной (Б) гибридной ДНК . соН. Оба образца ДНК исследовали центрифугированием в градиенте плотности хлористого цезия. На оси ординат показано поглощение ультрафиолетовых лучей и, следовательно, концентрация ДНК в градиенте плотности. [c.197]

Раствор, содержащий равные количества ДНК, выделенной из культур В. subtilis. которые выращивались в средах NH4 I— НгО- и NHi l —Da, нагревали до температуры выше точки плавления ДНК и затем медленно охлаждали до 65 С для того, чтобы произошла ренатурация двойных спиралей. Раствор затем обрабатывали фосфодиэстеразой (ферментом, который расщепляет одноцепочечные, но не двухцепочечные полинуклеотидные цепи ДНК) и подвергали центрифугированию в градиенте плотности хлористого цезия. Обозначения на ординате и абсциссе соответствуют обозначениям иа фиг. 93. Поскольку на графике площадь каждой полосы пропорциональна количеству ДНК. [c.198]

Перед центрифугированием в градиенте плотности s l смесь меченных полностью легких и полутяжелых, полулегких контрольных молекул ДНК добавляли к каждому из трех экстрактов. содержащих меченную С ДНК. На оси ординат отложены количества > С-(черные кружочки) и Н-(крестики) радиоактивности, приходящейся на капли, полученные после центрифугирования и собран--ные по методу, показанному на фиг. 96. По оси абсцисс отложена плотность раствора хлористого цезия в поло сах, соответствующих каплям. [c.201]

Если требуется большое количество чистой ДНК, грубые экстракты ДНК могут быть очищены дифференциальным центрифугированием в градиенте плотности хлористого цезия, содержащего бромистый этидий (БЭ) (приложение 4[П]). Затем для удаления солей ДНК подвергают диализу, осаждают из, раствора и концентрируют с помощью этанола. На этой стадии удаляются и многие низкомолекуляраые примеси. ДНК, очи- [c.237]

Пробирки любого типа можно использовать для центрифугирования водно-солевых растворов, в том числе для градиентов солей цезия, KI, Nal, а также сахарозы, глицерина,. метризами-да, фиколла и перколла (см. главу 5). Вместе с тем следует проявлять осторожность при выборе материала пробирок для центрифугирования кислот, щелочей и органических растворителей. Так, поликарбонат не выдерживает контакта с этими веществами, а в нитроцеллюлозных пробирках можно использовать из органических растворителей лишь толуол и хлороформ. Полиалломерные и полипропиленовые пробирки устойчивы к действию 10%-ных растворов щелочей, 50%-ной Hj OOH, ТХУ, этанола, метанола, изопропанола, диметилформ амида и диметилсульфоксида, однако и их нельзя использовать для центрифугирования суспензий, содержащих фенол, толуол, хлороформ, ацетон или диоксан. Для этого пригодны лишь полиэтиленовые пробирки и стаканы с завинчивающимися крышками, которыми комплектуются низкоскоростные центрифуги. Впрочем, и полиэтилен плохо выдерживает контакт с хлороформом в этом случае, кроме стекла, пригодна только нитроцеллюлоза. Отметим также, что водные растворы гуанидинтиоцианата разрушают поликарбонатные пробирки, но безвредны для полипропиленовых. [c.185]

Другой подход связан с использованием концентрированных растворов солей. Они могут быть весьма плотными, не внося существенных изменений в вязкость среды. Na l и КС1 не годятся для этой цели, так как составляющие их элементы принадлежат к числу относительно легких и не могут обеспечить необходимой плотности растворов. Но уже Nal и KI отвечают поставленной задаче, также как s l, S2SO4 и некоторые другие (в том числе и органические) соли цезия и рубидия. Малая вязкость растворов солеи имеет и отрицательную сторону она настолько облегчает их собственную диффузию, что рассчитывать на сохранность в течение длительного времени искусственно сформированного градиента плотности не приходится. Зато при достаточно ]больших скоростях вращения ротора сами молекулы этих солей оседают под действием центробежной силы, создавая градиент плотности, нарастающий от мениска ко дну пробирки. Формированию такого градиента противодействует диффузия, идущая от более концентрированных слоев раствора к менее концентрированным. При достаточной продолжительности центрифугирования оба процесса приходят в равновесие и устанавливается стабильный для данной скорости вращения градиент плотности солевого раствора. Если начальную плотность раствора соли обозначить ро, то после сформирования градиента плотность раствора у дна пробирки будет больше Ро, а у мениска — меньше р . [c.242]

В рассматриваемом случае центрифугирование проводили в роторе MSE 10X10 Т1 при частоте вращения 45 тыс. об/мин и 25° в течение 68 ч. Вносили по 4,6 мл исходного раствора соли, содержащего 5—10 мкг меченной по Н смеси нуклеиновых кислот. Начальные плотности солевых растворов ро были выбраны так, чтобы в каждом случае разделить максимальное число различных классов нуклеиновых кислот. Например, для градиента sjSOi оно равно четырем от нативной ДНК до РНК. При центрифугировании в градиентах s l и Nal РНК оказывается в осадке на дне пробирки. Любопытно различие в относительном расположении пика гибрида ДНК —РНК для градиентов растворов солей цезия и Nal. Можно предполо- [c.248]

Для создания градиента плотности используют соли тяжелых металлов, например рубидия или цезия, а также растворы сахарозы. Образец, например, ДНК, смешивают с концентрированным раствором хлористого цезия. И растворенное вещество (ДНК), и растворитель сначала распределяются по всему объему равномерно. В ходе центрифугирования устанавливается равновесное распределение концентрации, а следовательно, и плотности s l, так как ионы цезия обладают большой массой. Под действием центробежного ускорения молекулы ДНК перераспределяются, собираясь в виде отдельной зоны в части пробирки с соответствующей им плотностью. Метод применяется главным образом в аналитическом центрифугировании и был использован Мезельсоном и Сталем для изучения механизма репликации ДНК Е. oli. Равновесное центрифугирование в градиенте плотности является также одним из методов разделения и изучения липопротеидов плазмы крови человека. [c.49]

До сих пор мы рассматривали случаи, когда плотность изучаемых молекул намного превышала плотность растворителя. В этом разделе будет описан важный метод седиментационного равновесия в градиенте плотности (его разработали Мэтью Мезелсон, Франклин Шталь и Джером Виноград), в котором плотность растворителя почти такая же, как и плотность изучаемой молекулы. Этот метод требует присутствия третьего компонента (обычно соли цезия) с низкой молекулярной массой и высокой плотностью. При центрифугировании раствора соль перераспределяется [в соответствии с уравнением (13)] с достижением равновесия, образуя тем самым градиент концентрации, который имеет меньшую плотность сверху и большую — у дна пробирки, т. е. градиент плотности. Макромолекулы при этом [c.329]

Обнаружение гибридизации с помощыо равновесного центрифугирования в растворе хлорида цезия [c.527]

Изоплотноетный градиент. При пользовании данным методом градиент образуется непосредственно в процессе центрифугирования. Для этого обычно применяют растворы солей тяжелых металлов цезия и рубидия. Возникновение градиента обусловлено перераспределением концентрации соли при ультрацентрифугировании. Величина установившегося перепада плотности между мениском раст [c.62]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология