Хроматография высаливания

Хроматография высаливания является устаревшим методом выделения белков путем их осаждения на ионообменниках. Неионные соединения можно отделить от ионов с помощью методов запаздывания ионов или исключения ионов. В первом методе используются иониты, содержащие одновременно катионные >и анионные группировки (так называемые структуры типа змея в клетке ), а во втором —носители, адсорбирующие только неионные соединения. [c.20]

Приготовление пробы. Обычно препаративный электрофорез в полиакриламидном геле не используют в качестве одного из начальных этапов в очистке белков и нуклеиновых кислот. Для предварительного грубого фракционирования компонентов омесей применяют методы хроматографии, высаливания или осаждения. Чтобы провести электрофоретическое разделение, пробу необходимо сконцентрировать до 5 мл для однородной системы и до 10—20 мл для неоднородной. От избытка солей можно избавиться при помощи диализа или гель-фильтрации. Концентрация солей в исследуемом растворе должна быть такой же, как в буфере концентрирующего геля. Если же этот гель не попользуется, то пробу диализуют против буфера разделяющего геля, разведенного в 5 раз. Медленное вхождение пробы в гель во время электрофореза свидетельствует о слишком высокой концентрации солей. Любой осадок, присутствующий в пробе, следует удалять центрифугированием или фильтрованием через миллипоровый фильтр, так как он может закупорить разделяющий гель. [c.117]

Распределительная хроматография с высаливанием. В настоящее время в литературе появился ряд сообщений о новом варианте распределительной хроматографии с высаливанием, осуществляемой на ионитах. [c.78]

Р а б о т а 2. Разделение веществ методом распределительной хроматографии с высаливанием [15] [c.107]

Цель работы ознакомление с новым вариантом распределительной хроматографии с применением высаливания на примере разделения галогенатов натрия. [c.107]

Рис. 37. Характер выходных кривых для разделения галогенатов натрия методом распределительной хроматографии с высаливанием

Поскольку природа разделяемых веществ различна, то неодинаково будет и их отношение к иониту в водноорганической среде. Поэтому в случае распределительной хроматографии с высаливанием для вымывания компонентов применяют последовательно разные подвижные растворители, содержащие различные соотношения водного и органического компонентов, обеспечивающие наиболее полное вымывание электролитов при наименьшей затрате подвижного растворителя. Это соотношение определяют экспериментально по коэффициенту распределения вещества в водно-органическом растворителе при различных соотношениях его составных частей 18, 17]. [c.108]

Метод получения тяжелого меромиозина (ТММ) основан на частичном протеолитическом расщеплении миозина под действием трипсина. Отделение тяжелого меромиозина от миозина и от фрагмента хвостовой части миозиновой молекулы (легкого меромиозина) основано на его хорошей растворимости при низкой ионной силе, когда легкий меромиозин и миозин выпадают в осадок. Для последующей очистки полученного препарата можно воспользоваться колоночной хроматографией или высаливанием сернокислым аммонием. [c.394]

В этом разделе будут в широком аспекте рассмотрены два опубликованных обзора [119, 75]. Совокупность, которую принято называть растворимыми белками, оказывается разнородной, даже если альбумины и глобулины рассматривать по отдельности. Их можно фракционировать, а некоторые компоненты — очищать методами, традиционно применяемыми для белков, среди которых наиболее популярными являются высаливание сульфатом аммония, ионообменная хроматография и препаративный электрофорез. [c.181]

После достижения полной экстракции белков, т.е. перевода белков в растворенное состояние, приступают к разделению —фракционированию смеси белков на индивидуальные белки. Для этого применяют разнообразные методы высаливание, тепловую денатурацию, осаждение органическими растворителями, хроматографию, электрофорез, распределение в двухфазных системах, кристаллизацию и др. [c.26]

Многие методики предполагают установление равновесного распределения спирта между жидкостью и газом при комнатной температуре (25—30°С), что позволяет определять только концентрации, превышающие 100 мг/л [32]. Такой предел обнаружения значительно уступает достигаемому при прямом введении образца крови в хроматограф. Это связано с высокими коэффициентами распределения этилового спирта в водных растворах (табл. 3.2). Для увеличения чувствительности определения спирта используются высаливание и нагревание образца в процессе установления равновесия до 60—85 °С [28], приводящие к снижению коэффициентов распределения. [c.125]

Применение повышенных температур в сочетании с высаливанием позволяет уверенно определять этиловый спирт в крови на уровне биологических концентраций, однако может снижать воспроизводимость и точность анализа [34,40] из-за быстрого окисления этилового спирта в ацетальдегид, катализируемого гемоглобином [43,44]. Ухудшение воспроизводимости могут вызывать также конденсация и сорбция на стенках и утечки при введении в испаритель хроматографа равновесного газа обычными шприцами. [c.125]

Разделение белков методом электрофореза на бумаге. В последнее время при исследовании белков, кроме фракционирования высаливанием, широко начали применять электрофоретическое разделение белкового комплекса, а также количественное определение отдельных фракций белков. Нередко электрофорез объединяют с хроматографией. В настоящее время есть множество приемов электрофоретического и хроматографического анализа белковых веществ, в связи с чем разработано много различных аппаратов для электрофоретического разделения белков. [c.44]

Бумажная хроматография может быть применена для разделения смесей органических и неорганических веществ. Иногда требуется предварительная пропитка бумаги солями, например нитратом аммония, для высаливания органического растворителя. В методах осадочной хроматографии бумагу пропитывают предварительно растворами осадителей (оксихинолином, иодидом калия и т. п.), при этом изменяется состав дифференцирующего растворителя, а также состав проявителя и конечная стадия определения. [c.70]

В экстракционной колоночной хроматографии неорганических веществ программирование состава подвижной фазы предполагает элюирование колонки элюентами, содержащими переменные концентрации реагентов, что и приводит к изменению коэффициента распределения экстрагируемого соединения. Изменения в коэффициентах распределения могут быть вызваны высаливанием, реагентами, которые взаимодействуют с экстрагентами, входящими в состав неподвижной фазы, окислительно-восстановительными и комплексообразующими реагентами. [c.89]

Все упомянутые выше хроматографические методы основаны на поглощении и элюировании веществ, находящихся в ионной форме. Однако некоторые важные для органической химии хроматографические разделения основаны на явлениях, не связанных с обменом. Для аналитической химии представляют известный интерес хроматографические методы, основанные на явлениях высаливания, и распределительная хроматография в смешанных растворителях. Эти методы в настоящей книге не рассматриваются. [c.25]

Добавление электролита к раствору существенно влияет на распределение неэлектролита ]114]. Это явление было использовано Риманом и сотрудниками [12, 62, 110] для хроматографического разделения спиртов и других неэлектролитов. Примененный этими авторами метод, названный ими высаливающей хроматографией , основан на избирательном высаливании органических веществ из растворов электролитов в фазу ионита. Метод может быть использован для разделения некоторых полярных неэлектролитов. [c.49]

Для того чтобы увеличить чувствительность, прибегают к динамическому парофазному анализу, в ходе которого фазовое равновесие постоянно нарушается вследствие продувки сосуда с образцом инертным газом. Выдуваемые компоненты собирают на адсорбенте (например, на тенаксе) или улавливают в криогенной ловушке и затем вводят в газовый хроматограф после термодесорбции. Если статический ПФА применяется при анализе образцов, содержащих летучие примеси на уровне ppm, то динамический ПФА позволяет производить определение этих веществ на уровне ppb. Предварительная обработка пробы зачастую может помочь увеличить чувствительность и воспроизводимость результатов анализа. Наиболее известные методы такой обработки включают высаливание примесей сульфатом натрия или изменение pH пробы при этом органические кислоты или основания переходят в газовую фазу. [c.23]

Б гель-хроматографии групповым разделением называют такой процесс, в ходе которого высокомолекулярные соединения хорошо отделяются в виде одной группы от другой группы — низкомолекулярных соединений, более тонкое разделение внутри обеих этих групп при этом не требуется. Высокомолекулярные соединения, например белки, нуклеиновые кислоты и т. д., выходят из колонки со свободным объемом элюента (Kav равно или близко нулю), а низкомолекулярные соединения прочнее удерживаются (их Kav близко к единице). Если низкомолекулярные соединения представляют собой неорганические соли или другие диссоциирующие продукты, то процесс называется высаливанием. Высаливанием часто неправильно называют разделение таких низкомолекулярных соединений, которые не являются солями, например мочевины, сахаров идр. [c.381]

Далее, на колонке аналогичной смолы, но уже с низкой степенью сшивки, адсорбируют фермент. Для этого лучше всего применять Какен С-1 (SP-3) , но можно и дуолит С-10 или S-30. Ферментный белок затем очищают вытеснительной хроматографией, высаливанием сульфатом аммония и осаждением ацетоном, после чего, в случае надобности, кристаллизуют. Выход фермента по активности 5—15%. Он расщепляет в казеине — 75% пептидных связей, в клейковине пшеницы —80%, а в яичном альбумине— 87%. Большое значение для стабильности протеазы имеет присутствие в растворах иона Са, обычно прибавляемого в виде Са-ацетата. [c.208]

Некоторые специальные методы, основанные на принципах, отличающихся от указанных выше, также называются хроматографическими. Это, например, методы исключения ионов, запаздывания ионов, электронного обмена или окислительно-восстановительной хроматографии, лигандной хроматографии и со-любилизационной хроматографии, их мы рассмотрим в гл. 5 ( Ионообменная хроматография ). Перечислим еще ряд методов хроматографического разделения. Хроматография высаливания и хроматография связывания в соли, где играет сущест- [c.27]

Высаливательной хроматографией называется процесс разделения растворимых в воде неэлектролитов [13] при помощи ионитов, применяемых в качестве носителей неподвижной фазы, и водных растворов солей, применяемых в качестве подвижной фазы. Разделение электролитов при помощи ионитов и водно-органических смесей предлагается называть распределительной хроматографией с высаливанием [14]. Как и высаливательная хроматография, этот метод является своеобразным вариантом распределительной хроматографии и может быть применен как для разделения катионов при использовании в качестве носителей стационарных фаз анионитов, так и для разделения анионов при использовании в качестве носителей стационарных фаз катионитов. Метод был успешно применен для разделения галидов натрия на колонке с катионитом СБС в натриевой форме, а также для разделения ионов галогенатов и галогенидов [15, 16]. [c.78]

Ионит в этом методе в отличие от обычной распределительной хроматографии не является пассивным носи телем смешанной водно-органической фазы, обогащенной водой. Это следует хотя бы из того, что по мере изменения содержания воды в фазе ионита происходит ее перераспределение между ионами электролита и подвижными ионами ионита, которое влияет на эффект высаливания электролита. Поэтому, прежде чем проводить разде- [c.78]

НОЧНОЙ хроматографии. Привитые и обращенные фазы не являются новинкой упомянем использование бумаги и слоев на основе ацетилированной целлюлозы, сефадекс Ш-20, хроматографию с высаливанием на ионообменной бумаге и слоях, применение полиамидных слоев [121]. К сожалению, все эти методы и теоретические обоснования протекающих процессов разработаны в основном специалистами, занимающимися ВЭЖХ, и тонкослойная хроматография буквально плетется в хвосте. Полезно было бы обратиться к старым публикациям, посвященным этим вопросам. [c.83]

В любом случае полз чение экзо- и эндоферментов на определенных этапах как бы унифицируется, когда все стадии выделения и очистки будут определяться лишь их физико-химическими характеристиками Так, при выделении экзофермента клетки продуцента становятся отходом, а культуральная жидкость или, в другом случае, желудочный сок - целевым продуктом-сырцом Если речь идет о необходимости получения эндоферментов, то содержащие их клетки и ткани измельчают (дезинтегрируют) и экстрагируют подходящим растворителем Полученный раствор также представляет собой полупродукт — сырец И если речь здесь идет об одном и том же ферменте, но разного происхождения и топологии (экзо-и эндо-), то, начиная с сырца, технологические схемы их выделенйя будут во многом тождественными В этом случае можно использовать такие подходы, как высаливание, сепарирование в градиентах плотности каких-либо веществ, мембранную фильтрацию, гель-хроматографию, афинную хроматографию, ионный обмен и дру- [c.48]

При выделении суммарньк имм шоглобулинов можно использовать два подхода. Один из них базируется на высаливании Ig-ов насыщенным раствором аммония сульфата (3,9 М при 0°С или 4,06 М при 20°С) с последующей хроматографией растворенного осадка антилимфоцитарного Ig в подходящем буфере (налример, фосфатном — 0,01 М с pH 6,5). Хроматографию проводят на ионообмен-никах — ДЭАЭ-сефадексе или ДЭАЭ-целлюлозе. [c.595]

Высшие спирты были разделены на колонке, наполненной дауэксом 50-Х8 (Н+) (200—400 меш), путем постепенного элюирования уксусной кислотой возрастающей концентрации (1—Зн.) [7] (табл. 18.3). Шерма и сотр. [8] также изучали возможность, разделения высших спиртов на дауэксе 1 (СНзСОО ) при элюировании водноорганическими солевыми растворами. При этих разделениях важное значение имеет как высаливание, так и растворимость, и, следовательно, зависимость логарифма коэффициента распределения выделенного вещества относительно концентрации электролита не всегда линейна. Эти работы показывают, что возможно неполное разделение высших спиртов (к-гексанола, н-гептанола и н-октанола) с использованием в качестве элюента 4 М раствора ЫС1 в метаноле. Однако наблюдалось существенное расширение кривых элюирования. Шерма и Лаури [9] изучили хроматографию на основе солюбилизации на макропористых ионообменных смолах. Разделение гомологического ряда алифатических спиртов с помощью хроматографии на основе солюбилизации на макропористых ионообменных смолах амберлист 15 было проведено не так успешно, как на гелях обычных смол. [c.27]

Физико-химические свойства ферментов обусловлены их белковой природой. Ферменты не диализируют сквозь полупроницаемые мембраны, способны высаливаться и дают характерные для белка цветные реакции и реакции осаждения. При выделении ферментов методами высаливания, фракцио-нировйния ацетоном и колоночной хроматографии они не теряют каталитических свойств, что позволяет выделять активные ферментные препараты для практических целей (пепсин, трипсин, амилаза, липаза и др.). [c.99]

Сточные воды производства стирола и уксусной кислоты Альдегиды, кетоны, спирты, эфиры углеводороды в концентрациях до 10 мг/л Анализ РПФ с высаливанием сульфатом натрия нри 60 С объем пробы 2 мл Хроматограф Хром-Ь колонка 1,7 м X 6 мм ИФ — ПЭГ-600 (10%) ТН — 110рис1Ы кирпич Г= 70 и 100° С ГН — азот (60 мл/мин) [371] [c.142]

Разделение неэлектролитов (или слабых электролитов) посредством вымывания водным раствором соли, обычно умеренной или высокой концентрации, называется высаливающей хроматографией. Проведенное Секи [5] разделение фенола и трех крезолов с применением разбавленного карбонатного буфера не является примером метода высаливающей хроматографии, так как концентрация карбоната была слишком низка для э( ектив-ного высаливания кроме того, разделение зависело от буферного действия смешанных карбонатов. [c.238]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология