Восстановление белков

Соотношение масс воды и измельченных ядер равно 6 1, а оптимальные pH для экстрагирования и осаждения соответственно равны 8,0 и 4,0—4,5. Выход отдельных продуктов при восстановлении белков достигает 94 % и масла — 92 %. Изолят содержит 105 % N X 6,25 (т. е. 92 % белков, если учитывать переводной коэффициент 5, 46 для арахиса) и 6,2 % масла от сухой массы. [c.455]

Конформации с величинами (У сщ = О и 6,2 ккал/моль, а также некоторые другие представляют интерес в связи с результатами, полученными Крейтоном [7] при исследовании процесса укладки денатурированной белковой цепи и локализации у метастабильных промежуточных продуктов дисульфидных связей. На разных стадиях окисления восстановленного белка Крейтон обнаружил продукты с S-S-мостиками между ys и ys , ys и ys , ys и ys . В конформации с энергией 6,2 ккал/моль ос-татю ys и ys оказываются сближенными. Соответствующая конформация у фрагмента Arg - ys была глобальной (см. табл. IV.8), а структура, близкая к экспериментальной, проигрывала ей 2,8 ккал/моль. У свободного фрагмента Arg -Arg последняя оказалась уже на 3,1 ккал/моль более предпочтительной, а у фрагмента Arg -Tyr - на 4,1 ккал/моль. Поэтому можно полагать, что метастабильное конформационное состояние молекулы БПТИ с дисульфидным мостиком ys - ys характерно для ранней стадии ренатурации белка. Глобальная и близкие ей низкоэнергетические структуры могут при удлинении цепи привести к сближенности остатков ys и ys , ys и ys . В связи с этим обстоятельством низкоэнергетические структуры разных типов, энергии которых отмечены в табл. IV.9 звездочками, оставлены для дальнейшего анализа. [c.444]

Некоторые аминокислоты можно анализировать, не подвергая белки гидролизу. Например, содержание триптофана можно определить с помощью метода магнитного кругового дихроизма [4], спектрофотометрическими измерениями восстановленного белка [c.259]

Таким образом, электрохимическое восстановление белков на электродах представляет собой целый комплекс последовательных и параллельных процессов, многие из которых детально рассмотрены в работе [329], а также в обзоре по применению и новейшим успехам полярографии в биохимии и в исследованиях биологических макромолекул [И, с. 293]. [c.238]

Эксперименты по ренатурации белков показывают, что ненаправленная реконструкция дисульфидных мостиков восстановленных белков приводит в большинстве случаев к образованию структур, полностью идентичных структурам тех же белков в той форме, в которой их выделяют из природных источников. Поскольку ненаправленное восстановление третичной структуры должно, по-видимому, давать термодинамически наиболее стабильную конформацию, мы вправе, очевидно, сделать из этих опытов вывод, что нативная конформация есть конформация термодинамически наиболее стабильная. [c.114]

При восстановлении белков натрием в амиловом спирте были, выделены замещенные пиперазины [c.707]

В цитохроме с имеются четыре метильные группы, связанные с гемовым кольцом, и две из них в окисленном состоянии сдвигаются сильнее, чем остальные. Можно ожидать, что орбиталь, на которой находится неспаренный электрон в восстановленном белке, имеет симметрию второго порядка относительно оси симметрии гема [31]. Поэтому две наиболее сильно смещающиеся метильные группы располагаются по диагонали, и весьма вероятно, хотя это и не установлено с полной достоверностью, что перенос электрона в цитохроме с происходит именно в направлении, определяемом этими двумя метильными группами. Один из этих резонансных сигналов можно интерпретировать, исходя из необычно большого сдвига в восстановленном цитохроме, обусловленного кольцевым током в близлежащем триптофане, как это следует из рентгеноструктурных данных. [c.399]

Аминоспирты, присутствующие в кислотном гидролизате восстановленного белка, отделяют путем пропускания через колонку (1 X 10 ш) с дауэкс 2-Х 10, которую предварительно регенерируют [c.201]

Если сочетание пептидных цепей в нативном белке представляется менее стабильным, чем другие возможные сочетания, то денатурация будет необратимой и денатурированный белок будет сохранять то расположение пептидных цепей, которое возникло в связи с денатурацией. Поскольку каждый белок содержит сотни аминокислот, возможности для частичной денатурации и ренату-рации неисчислимы другими словами, сочетания пептидных цепей в денатурированном и в восстановленном белках представляют собой промежуточные варианты между сочетанием пептидных цепей в нативном белке и их сочетанием в различных белках, образующихся при более или менее полной денатурации. [c.157]

Контрольные опыты показали полное отсутствие в этих условиях гидролиза белка, параллельно восстановлению белка идет его деполимеризация 125. стр. 464]. [c.107]

Результаты измерений мессбауэровских спектров окисленной и восстановленной форм ферредоксина показаны на рис. 10.7, заимствованном из работы [48]. Анализ спектров позволил сделать существенно новые заключения об особенностях электронного строения активного центра этого фермента. Как видно из спектров рис. 10.7, приложение внешнего магнитного поля напряженностью 30 /сэ к окисленному ферредоксину при температурах 1,5 и 4,2° К вызывает лишь небольшое уширение линий. Из этого следует, что оба атома железа находятся в низкоспиновом двухвалентном состоянии. Однако воздействие магнитного поля на мессбауэровский спектр восстановленной формы ферредоксина таково, что не оставляет сомнений о наличии магнитных ионов железа. Измерения спектров ЭПР в ферредоксине [50] согласуются с этим результатом. Между тем мессбауэровские данные показывают, что при восстановлении белка только половина всех наличных ионов железа переходит в высокоспиновое состояние. При этом, что особенно важно подчеркнуть, валентное состояние ионов железа не изменяется. Полученные результаты не подтверждают модели активного центра ферредоксина, использующей низкоспиновое состояние трехвалентного железа [51], а также присутствие в белке связанных состояний Ре + — Ре " . Поэтому было выдвинуто предположение [48], что при восстановлении ферредоксина образуются свободные радикалы, электронный спин которых взаимодействует с электронной оболочкой железа. [c.430]

Меркаптогруппы восстановленного белка чувствительны к повторному окислению, которое может быть осуществлено как путем выдерживания [c.405]

Свертывание кооперативно. Как и переходы спираль— клубок (см. приложение), свертывание и развертывание белковой цепи — кооперативный процесс. Конкретизируем это общее положение для BPTI. Все промежуточные формы в этом случае нестабильны положение конформационного равновесия смещается от развернутого восстановленного белка до нативного состояния с тремя связями S—S. Как видно из рис. 8.2, молекулярная заселенность существен- [c.188]

Поскольку свободные SH-группы восстановленных белков очень реакционноспособны, для предотвращения реокисления их следует карбоксиметилировать иод- или бромацетатом. [c.166]

В настоящее время имеется определенная информация о поведении ферментов и белков на поверхности ртутного электрода. Полярография на ртутном электроде — достаточно развитый способ изучения белков [32—37]. При адсорбции на поверхности ртути происходят существенные конформационные изменения белков. Молекулы биополимеров расплющиваются и растекаются по поверхности ртути, образуя монослой толщиной в одну полипептидную цепь [38—40]. Возникающая структура содержит большое число пор, допускающих диффузию низкомолекулярных реагентов к поверхности электрода. В работах [34, 36] наблюдали электрохимическое восстановление белков, содержащих геминовую простетическую группу, однако, как было показано, эта реакция протекает с участием слоя денатурированного и поверхностно адсорбированного белка [40]. [c.75]

Такая гипотеза подтверждается детальным сравнением структур фрагментов Ре434 в окисленном ферредоксине и в окисленных и восстановленных белках с высоким ОВП, а также результатами исследования комплекса, где к фрагменту Ре454 присоединены [c.646]

При восстановлении метмиоглобина кашалота до дезоксимиоглобина [91 ] не наблюдается никаких изменений в положении атома железа относительно плоскости порфирина. Никаких изменений смещения железа из плоскости не наблюдается также при восстановлении иона Ре(П1) в метэритрокруорине [96]. Оба восстановленных белка, изученные дифракционными методами, содержат пентакоординацнонный гемовый комплекс. Эти результаты не противоречат стереохимическому рассмотрению Хорда [115, 116]. Смещение железа из плоскости на 70 пм, предсказанное для высокоспинового комплекса Ре(П) [116], представляет собой оценку верхней границы и не предполагает изменения положений координированных пиррольных атомов азота по отношению к [c.48]

ИМИ прием лучше всего можно продемонстрировать на примере сигналов при +3,3 м. д. в спектре восстановленного цитохрома и при +23,4 м. д. в спектре окисленного белка. Предполагается, что оба эти сигнала принадлежат метильной группе метионино-вого лиганда. Причины такого отнесения сигнала в восстановленном состоянии уже были рассмотрены, что же касается окисленного белка, то для него при отнесении указанного сигнала руководствовались следующими соображениями. Интенсивность сигнала соответствует трем эквивалентным протонам, а ширина достаточно велика, чтобы быть обусловленной релаксацией за счет близости атома железа. Кроме того, величина сдвига сигнала также соответствует ядрам, находящимся вблизи железа. Редфилд и Гупта взяли смесь восстановленного и окисленного цитохрома (1 1) и подвергли образец воздействию излучения при частоте, соответствующей сигналу +23,4 м. д., при мощности излучения, достаточной для насыщения сигнала в этом положении. Другими словами, они провели эксперимент по методике двойного резонанса таким образом, что сигнал при +23,4 м. д. исчез. Было замечено, что при этом уменьшился и сигнал при +3,3 м. д. Отсюда было сделано заключение, что электронный обмен между двумя формами белка идет быстрее, чем успевают релаксиро-вать метильные протоны метионина к своему равновесному состоянию в магнитном поле. Другими словами, насыщение резонансного сигнала метильных протонов в окисленном белке передается на резонансный сигнал тех же протонов в восстановленном белке. Эти эксперименты подтверждают, что указанные два сигнала действительно принадлежат одной и той же метильной группе. Следует отметить два обстоятельства. Во-первых, если насыщать сигнал, имеющий химический сдвиг 3,3 м. д., то это никак не влияет на сигнал при 23,4 м. д., поскольку последний очень быстро релаксирует. Во-вторых, два отдельных сигнала могут наблюдаться от смеси окисленного и восстановленного белка только в том случае, когда частота обмена между двумя состояниями окисления меньше, чем разность частот между двумя сигналами. Скорость переноса электрона между восстановленным и окисленным цитохромом с была оценена путем измерения степени уменьшения резонансного сигнала при 3,3 м. д. и времени спинрешеточной релаксации Т для этого сигнала с использованием некоторых теоретических построений [28, 29]. Было показано, что в отсутствие малых ионов транспорт электрона происходит быстрее при pH 10, т. е. в изоэлектрической точке цитохрома с, причем добавление солей при этом pH не влияет на скорость переноса электрона, тогда как уже при небольшом отклонении от изоэлектрической точки скорость обмена зависит от ионной силы [30]. [c.398]

Используя метод двойного резонанса (т. е. избирательного насыщения некоторых линий), удалось разрешить в спектре восстановленного цитохрома с 8 сигналов, соответствующих отдельным сигналам в спектре окисленного цитохрома с. Поэтому можно, используя эти сигналы, выяснить, каково возмущающее влияние окисления железа на его парамагнитное состояние. В совокупности с данными о положении этих сигналов в спектре ЯМР восстановленного белка это может существенно помочь в интерпретации спектра. Дальнейший шаг состоял в определении времен релаксации разрешенных резонансных сигналов в спектре окисленнЬго цитохрома с, что в принципе позволяет оценить расстояния между парамагнитным атомом железа и резонирующими ядрами, как описано выше в этой главе. Таким путем были получены дополнительные, а иногда и основные данные, необходимые для отнесения сигналов, а оценки расстояний оказались в хорошем соответствии с данными рентгеноструктурного анализа [28]. [c.399]

Полученный продукт промывали три раза растворителем и затем дважды — охлажденным эфиром. При титровании л-хлормер-курибензоатом найдено 8 SH-rpynn на 1 моль белка. Две дисульфид-ные связи, очевидно, расщепляются легко, но для расщепления двух других связей необходимо проводить реакцию в концентрированном растворе мочевины. Авторы описываемой работы наблюдали восстановление на 12—19% удельный активности нативной рибонуклеазы при пропускании воздуха в течение 68 час через раствор полностью восстановленного белка в 0,01 М фосфатном буфере при pH 7—8. Освобождаемые SH-группы легко блокируются путем обработки иодуксусной кислотой (700 молб) в течение 2 тс при pH 8,5. pH поддерживается на постоянном уровне добавлением 5%-ного раствора триметиламина при помощи прибора для автоматического титрования. [c.104]

Восстановительное расщепление при действии боргидрида лития носит избирательный характер. В молекуле инсулина расщепление особенно активно протекает по одному из остатков глицина, В некоторых белках лабильны, по-видимому, пептидные связи, образованные остатками глутамина и аспарагина. В табл. 29 приведен перечень остатков дикарбоновых кислот, амидов дикарбоновых кислот и С-концевых остатков, присутствующих в немодифи-цированном белке вместе с перечнем соответствующих продуктов, присутствующих в гидролизате этерифицированного и восстановленного белка. В табл. 30 приведен анализ продуктов, полученных из [c.196]

Абдергальден весьма старательно отводил все возможные возражения, которые могли быть выдвинуты против методов, используемых им для доказательства своих положений. Он провел со своими сотрудниками большую серию работ по изучению продуктов восстановления аминокислот и пептидов в условиях, аналогичных тем, при которых Фишер наблюдал восстановление белков или синтетических дикетопиперазинов. [c.99]

Но даже тогда, когда после восстановления белков удалось выделить и идентифицировать пиперазины- при восстановлении щелка [631, эти случаи не смогли служить убедительным доказательством наличия заметных количеств дикетопиперазинов в молекуле белка из-за малого выхода пиперазинов. Опыты, про-" веденные с желатиной, были тем более недоказательными, так как дикетопиперазины могли возникать еще в процессе ее приготовления (нагревание с водой). [c.99]

Метод электрохимического восстановления на ртутном катоде дал возможность судить о количестве дикетопиперазинов и пептидов в природном белке. Было доказано, что дикетопиперазиновые структуры входят в состав белковых молекул. Метод ионофореза позволял следить за поведением циклических структур при различных деструкциях белка [288]. Биуретовая реакция [269] оказалась надежным сродством для суждения о длине полипептидной цепочки в микромолекуле белка. Сущность биуретовой реакции сводится к образованию медных комплексов рядом азотсодержащих веществ (белки, пептоны, амиды, амины, аммиак). Определение медных чисел белка, спектрофотометрические кривые медных комплексов позволили установить, что пептидные цепочки в белке чаще всего построены из трех и во всяком случае не более чем из пяти остатков аминокислот. С другой стороны, относительное уменьшение аминного азота при гидролизе после восстановления белка дает ключ к выявлению относительного количества дикетопиперазинов. Результаты всех этих определений привели к таким выводам в молекуле желатины на каждое дикетопиперазиновое кольцо приходится четыре аминокислоты, у альбумина крови — пять. [c.268]

Интересно, что подвергнутые восстановлению белки (путем действия Na2S, амальгамы Na, тиогликолевой кислоты и пр.) гораздо интенсивнее атакуются ферментами и энергичнее окисляются, чем невосстановленные. Возможно, что переход белка в несколько более восстановленное состояние имеет определенное биологическое значение для реакционной способности белка в организме. [c.313]

Для определения С-концевых аминокислот используют также восстановление белка гидридами металлов и обработку изотиоцианатом аммония, в результате которой из С-концевой аминокислоты образуется тио-гидантоин Однако оба метода не свободны от существенных недостатков (побочные реакции, неясный механизм), а потому полученные с их помощью данные нуждаются в дополнительной проверке. [c.76]

Образующиеся при восстановлении лабильные SH-группы защищают от окисления превращением в S-карбоксиметильные производные действием иодуксусной кислоты Другой способ защиты SH-групп заключается в обработке восстановленного белка этиленимином, причем в этом случае происходит образование S-p-аминоэтилированного белка Для защиты SH-rpynn предложено также использовать способность тиолов присоединяться по винильной группе производных акриловой кислоты, при этом образуются S-карбоксиэтильные производные белков [c.78]

В недавно опубликованной работе Шоберль и Вагнер [299], изучая механизм рассматриваемой реакции, еще раз указали на важную роль в ней меркаптогрупп. Авторы восстанавливали шерсть тиогликолятом, а затем обрабатывали продукт алкилгалогенидами. После этих обработок шерсти в восстановленной форме добавляли акрилонитрил или метакри-ловую кислоту и инициировали полимеризацию сульфатом двухвалентного железа в присутствии перекиси или одной перекисью в соответствии с методом Липсона и Спикмена [291] или, наконец, персульфатом калия. Авторы нашли, что алкилирование групп НЗ в восстановленных белках препятствует прививке, как и можно было предполагать. На восстановленной (но не алкилированной) шерсти, представляющей собой содержащий меркаптогруппы белок, полимеризация протекает с гораздо большей скоростью, чем на немодифицированной шерсти. [c.419]

Пластоцианин может действовать в качестве окислителя в реакции Хилла. При инкубировании окисленного пластоцианина с хлоропластами на свету наблюдается уменьшение абсорбции при 597 нм. Добавление в конце реакции феррицианида (красной кровяной соли, КзРе(СЫ)б) возвращает белку синий цвет, указывая, что уменьшение абсорбции коррелирует с восстановлением белка. Восстановление так же, как и окисление пластоцианина, не происходит в темноте. Реакция полностью ингибируется 1Х10 М ДХММ, о-фенантролином и гидроксил амином. [c.177]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология