Экстракция липидов из тканей

Экстракция липидов из мозговой ткани. В небольшую коническую колбу с притертой пробкой помещают 300—400 мг мозговой ткани. Ткань растирают стеклянной палочкой и заливают 25 мл свежеприготовленной смеси хлороформа и метилового спирта (2 1). Содержимое колбы энергично встряхивают в течение 3—5 мин и оставляют на 10 мин при комнатной температуре. Затем фильтруют через маленький бумажный складчатый фильтр в фарфоровую чашку и упаривают досуха на бане при температуре не выше 80°С. Осадок растворяют в [c.72]

Экстракция липидов. Печеночную ткань 100 крыс промывают физиологическим раствором, просушивают на фильтровальной бумаге, взвешивают и измельчают ножницами на холоде. Порции по 5 г ткани гомогенизируют в смеси хлороформ-метанол (2 1) в течение 1 — [c.75]

РЗ. Затем из осадка удаляют липиды, про.мывая фильтр при 40—45° по два раза 70%-ным этанолом и смесью этанол — серный эфир (1 1) и один раз серным эфиром. При анализе некоторых тканей для экстракции липидов целесообразно применять обработку хлороформом. Эта процедура в основном рекомендуется для удаления липидов, содержащих значительное количество сфингомиелинов [2, 3]. [c.140]

В тканях ганглиозиды ассоциированы с белками, поэтому во всех обычных методиках их выделения используются сильно полярные растворители чаще всего применяют смесь хлороформ — метанол [3]. В качестве растворителя был также предложен тетрагидрофуран [4], однако он не нашел широкого ирименения. Ранние методы выделения были основаны на фракционировании липидов при экстракции тканей растворителями с возрастающей полярностью. С появлением распределительного метода [5] старые методы были забыты. Первая стадия распределительного метода включает исчерпывающую экстракцию липидов из ткани смесью хлороформ — метанол. При диализе полученного экстракта против воды (процедура распределения) ганглиозиды переходят в верхний водный слой, в то время как основная масса других липидов остается в нижнем хлороформном слое. В модифицированном варианте распределения вместо воды используется слабый солевой раствор. [c.349]

Экстракция липидов из тканей [c.131]

Экстракция липидов из тканей, их очистка и выделение. Навеска ткани (мозга 200—250 мг, пеЧени 300— 400 мг) помещается в мерную колбу на 25 мл с притертой проб- кой, в которую предварительно наливается свеже приготовленная смесь метанола и хлороформа (1 2). Содержимое колбы энергично перемешивае гся в течение 5 мин., доводится хлороформно- [c.81]

Аналогичным образом можно проводить экстракцию липидов из других тканей. Если же выделение липидов проводят из фракций мембран, то стадия гомогенизации исключается, а применяемая смесь хлороформа с метанолом должна содержать более высокий процент хлороформа. [c.278]

Липиды образуют группу органических соединений, широко распространенных в растительном и животном мире. Липидами называют природные соединения, которые получают из растительных или животных тканей экстракцией неполярными растворителями (например, бензолом, трихлорэтиленом и т. д.). Они не растворяются в воде. [c.195]

Современные методы измельчения тканей обычно сочетают с одновременной экстракцией белков из гомогенатов тканей. Большинство белков тканей хорошо растворимо в 8—10% растворах солей. При экстракции белков широко применяют различные буферные смеси с определенными значениями pH среды, органические растворители, а также неионные детергенты — вещества, разрушающие гидрофобные взаимодействия между белками и липидами и между белковыми молекулами. [c.24]

Один из трех важнейших типов пиш евых веществ — жиры — относится к группе соединений, в которую входят, в частности, воска. Эти соединения не растворяются в воде. Общее название таких веществ — липиды. В них присутствуют молекулы жирных кислот и их производных они растворимы в ацетоне, спирте, эфире и хлороформе. Липиды — важная составная часть практически всех растительных и животных клеток. В организме человека значительное количество их содержится в клеточных мембранах, а также в мозговых и нервных тканях. При экстракции тканей животных горячими растворителями жиров всегда получают смесь липидов. Как пищевые продукты жиры дают организму особенно много энергии запас энергии в них, их калорийность почти вдвое превышают запас энергии, калорийность углеводов или белков. Хорошо упитанный организм может откладывать н ир про запас, в качестве резервного источника энергии. [c.303]

Находящиеся на поверхности эритроцитов и клеток различных тканей А- и В-антигены не экстрагируются водой или солевыми растворами. Они могут диссоциировать при экстракции мембран эритроцитов органическими растворителями [28, 29]. Ранее было показано, что групповые антигены крови существуют в двух формах растворимой в спирте, связанной с мембранами эритроцитов и клетками тканей, и растворимой в воде, находящейся в биологических жидкостях и секретах [30, 31]. При повторной экстракции и последующем фракционировании вещества, выделенного из клеток с помощью органических растворителей, вещества А и В эритроцитов моншо получить в водорастворимой форме. Однако предположение о существовании двух форм А- и В-антигенов, очевидно, справедливо, так как последними работами было убедительно показано, что групповые вещества эритроцитов представляют собой глико липиды, содержащие жирные кислоты, сфингозин и углеводные компоненты [32—36]. С другой стороны, уже давно установлено, что выделяющиеся групповые вещества состоят из углеводных и аминокислотных остатков [37, 38]. В настоящем обзоре рассматри- [c.168]

Белки и липиды различаются по многим физическим и биохимическим свойствам, что дает возможность простыми методами определить принадлежность изучаемого антигена к тому или иному классу соединений. Белковые антигены быстро разрушаются при мягкой обработке проназой, в то время как липидные антигены не подвержены действию протеолитических ферментов. В отличие от большинства белковых антигенов антигены липидной природы устойчивы к фиксации формальдегидом с последующим нагреванием до 80 °С. Эту процедуру можно проводить как с суспензиями отдельных клеток, так и со срезами тканей. Экстракция нативных или фиксированных формальдегидом клеток кипящим метанолом в течение 1 мин приводит к растворению части клеточных липидов, и метанольный экстракт в ряде случаев можно использовать без дальнейшей очистки для твердофазного радиоиммунологического анализа (РИА). Использование РИА описано в разд. IV. [c.160]

При экстракции липидов принимают во внимание то, что они способны не только к гидрофобным взаимодействиям, но и к образованию водородных, электростатических и ковалентных связей (сложно-эфирнь х, амидных, гликозидных). Относительно неполярные растворители (хлороформ, бензол, диэтиловый эфир) разрушают комплексы, образованные гидрофобными взаимодействиями в жировой ткани, хи-ломикроны, комплексы альбумина с жирными кислотами. Полярные растворители (этанол, метанол) разрушают водородные и электростатические связи. Их применяют в смеси со слабополярными растворителями при экстракции липидов из плазматических мембран, митохондрий, эндоплазматического ретикулума. Липиды, находящиеся в комплексах, образованных ковалентными связями, растворителями не экстрагируются. Их можно выделить только после гидролиза ком- [c.67]

Наиболее распространенным методом экстракции липидов является метод Фолча. Экстракцию проводят смесью хлороформ—метанол (2 1) из расчета 20 частей экстрагирующей смеси на одну часть ткани. Метод позволяет выделить 90—95% всех клеточных липидов. Смеси растворителей, содержащие спирт, экстрагируют также нелипидные вещества (сахара, аминокислоты, соли и т. д.) Для удаления нели-пидных примесей экстракт липидов промывают водон или слабыми солевыми растворами. Однако это приводит к частичной потере кислых липидов. Очистку экстракта можно провести также гель-фильтрацией на сефадексе. [c.68]

Для экстракции липидов и углеводородов ткань мозга крыс гомогенизировали с помощью аппарата Политрон 5 раз по 30 с в системе гексан изопропанол (3 2) из расчета 25 мл смеси на 1 г мозга [352]. Пробы помещали в пробирки с притертыми пробками и периодически встряхивали на протяжении нескольких часов. После фильтрации проб сухой остаток с фильтра дополнительно экстрагировали системой хлороформ метанол (7 1) с последующей фильт- [c.115]

Для определения, пероксидных соединений в жирах [4], маслах, липидах, тканях [5] использована же-лезороданидная методика. При исследовании биологических тканей рекомендуется предварительная экстракция жиров бензолом [б]. [c.70]

Применимость методов экстракции липидов для газо-жидкостной хроматографии. (Анализ метиловых эфиров жирных к-т ткани печени НФ ПЭГС на газхроме Р т-ра 180°.) [c.186]

Филлипс и Приветт [36] описали новый метод количественной экстракции липидов из ткани мозга смесью хлороформ — метанол, который исключает этап вторичной очистки липидного экстракта с помощью хроматографии на декстра-новых гелях или промывку водой органического экстракта. Нелипидные вещества, которые обычно загрязняют метанольно-хлороформный экстракт, предварительно экстрагируют разбавленной 0,25%-нон уксусной кислотой. В результате последующей экстракции обработанной таким образом ткани 40 объемами смеси хлороформ — [c.132]

Результатом действия линолитических ферментов, высвобождающихся после гибели клеток 41, 42] или их разрушения замораживанием [43], является повышение количества свободных жирных кислот и лизофосфолипидов в экстракте ткани. Замораживание и размельчение ткани при температуре сухого льда [41, 44], по-видимому, снижают скорость липолиза и образования свободных жирных кислот. Тем не менее предложенная Филлипсом и Приветтом [40] обработка растительных тканей разбавленной уксусной кислотой может оказаться весьма полезной и при экстракции липидов из животных тканей. [c.133]

Экстракция липидов из ткани мозга. В колбочку с притертой пробкой вносят 0,5 г ткани мозга, крторую растирают стеклянной палочкой, добавляя 25 мл смеси хлороформ—спирт. Через 10 мин гомогенат фильтруют через бумажный фильтр, а экстракт упаривают досуха под тягой при температуре не выше 80 °С. Остаток растворяют в 1 мл хлороформа в пробирке с притертой пробкой. [c.473]

При определении перекисей в липидах печени облученных животных мы попытались исключить влияние химических осушителей и спиртов. Для этого предприняли сушку гомогената печени в вак -ум-сублимационной установке при температуре от —20 до —25°. Последнее дало возможность экстрагировать большие количества жира диэтиловым эфиром, не обладающим антиокислительным действием. Перекисные числа определяли иодометрическим титрованием в навесках жира по 0,1—0,5 г. Следует отметить, что при длительной экстракции сухих тканей эфиром в аппарате Сокслет-та возможно окисление жира и некоторое увеличение абсолютных значений перекисных чисел. При одинаковых условиях экстракпд-1и это увеличение пройдет во всех образках, и оби1ая закономерность изменения перекисных соединений под влиянием облучения будет сохранена. Мы облучали крыс [c.57]

Для проверки полноты экстракции липидов рекомендуется повторное экстрагирование. Для этого остаток ткани на фильтре обрабатьшается дополнительно 5 мл хлороформ-метаноловой смеси. Обычно при повторной экстракции в хлороформ-метаноловой смеси не удается обнаружить присутствие липидов. Как правило, уже при первом экстрагировании происходит полное извлечение липидов. [c.82]

Экстракция липидов по Кейлиг разработана для изолированных липидов. При работе с тканями, в которых, как правило, липиды находятся в виде смесей, этот метод не позволяет получать надежных результатов. В качестве вспомогательных процедур можно использовать экстрак-ц 1(Ю%-ным холодным ацетоном и горячим хлороформ — метанолом(1 1). [c.147]

Сущность метода заключается в ступенчатой экстракции липидов из мозговой ткани смесью растворителей с увеличивающейся полярностью. Метод незначительно отличается от предложенного Мюллером и сотрудниками, в свою очередь модифицировавших методику Фолча. [c.276]

В первом случае продуктами реакции являются фосфатидная кислота и остаток спирта (например, холин). Во втором случае фосфати-дильный остаток молекулы глицерофосфолипида переносится на другой вид спирта. Физиологическое значение такой реакции не совсем понятно. Однако реакция трансфосфатидилирования обусловливает возникновение артефактов, таких, как образование фосфатидилмета-нола при экстракции липидов из тканей путем гомогенизации в метано льных растворителях. [c.77]

С негативным влиянием липидов сталкиваются при работе с кровью, тканями печени, мозга и женским молоком В этом случае трудности связаны с образованием эмульсий в присутствии липидов. Мини1 ал1.ного содержания последних добиваются с помощью различных приемов экстракции-реэкстракции, вымораживания, сорбции и др 115 . [c.205]

Неомыляемые липиды. — При омылении ткани мозга жиры, белки, фосфолипиды и сложные липиды в значительной степени превращаются в водорастворимые, но нерастворимые в эфире вещества. Экстракция эфиром щелочной смеси, образующейся в результате омыления, дает неомыляемую липидную фракцию, содержащую холестерин (строение и конформацию — см. том I 5.12) и небольшое количество сопутствующих стероидов. Холестерин образуется при омылении всех тканей тела, включая и кровь, в 100 которой обычно содержится около 200 м.г холестерина. Около 27% холестерина в крови находится в свободном состоянии, остальное количество этерифици-ровано жирными кислотами ie и ie. Общее количество холестерина, содержащегося в организме человека весом 65 кг, составляет около 250 г. Он образуется в организме в результате биосинтеза, а также (у плотоядных животных) постушает с пищей. [c.639]

Из тканей липиды вьаделяют путем экстракции органически ми растворителями. [c.60]

Как видно из формулы, в молекуле доминируют углеводородные цепи, поэтому маслообразные и твердые жиры нерастворимы в воде. Присутствие длинных углеводородных цепей придает жирам сходство с гексаном, бензолом и эфиром, в которых жиры легко растворяются. Жиры, а также другие компоненты растительных и животных тканей, нерастворимые в воде и растворимые в эфире или в гексане, называются липидами. Обычно их выделяют из ткани путем экстракции этими растворителями например, целлюлоза при этом не растворяется вовсе, а нелипидные органические компоненты оказываются в водной фазе. Низкокипящий растворитель (эфир, т. кип. 34,6 °С) и н-гексан (т. кип. 68,7 °С) отгоняют из высушенного экстракта нагреванием на паровой бане (температура около 87°С), получая в остатке липид или смесь липидов. [c.33]

Фольч с сотр. [16] предложил метод извлечения липидов из животных тканей смесью хлороформа и метанола в соотношении 2 1. Этим методом экстрагируют не только липиды, но и вешества нелипидной природы, растворимые в спирте. Липиды очишают от этих примесей с помощью фазового расслоения слабыми водными растворами сильных электролитов (например, 0,87%-ным раствором КС1). Метод получил широкое распространение. Блай и Дайер [12] внесли модификацию в метод, сократившую время экстракции и давшую возможность получать больший выход липидов. [c.212]

В целом процессы экстракции пестицидов из биологических объектов изучены недостаточно. О степени экстракции часто судят на основании процента обнаружения добавок. По извлечение добавок из объекта и извлечение остаточных количеств — два совершенно различных процесса. Экстракция остаточных количеств осложняется тем, что пестицид, проникая в организм, включается в процессы обмена. Образуются конъюгированные соединения с низкомолекулярными веществами. Возможно образование компонентов с белками, липопротеидами и липидами. В частности, Мат-сумара и О Врайн указывали на образование комплексов ДДТ с протеидами нервной ткани [333, 334]. При хранении биологических объектов возможно перераспределение пестицидов между белками и жирами [318]. Мы в своих опытах отмечали, что количество ГХЦГ и ДДТ, извлекаемое из мышц посредством кислотного или ферментативного гидролиза ткани и перегонки с парами воды, было значительно выше, чем при способах экстракции, которые не сопровождались кислотным гидролизом. [c.98]

Экстракция растворимых белков из тканей может происходить только после разрушения клеточных оболочек, так как последние непроницаемы для больших белковых молекул. Разрушения клеток можно достичь механическим путем, растирая их с песком или с кизельгуром однако при этом наблюдается некоторая потеря белка за счет денатурации, вызываемой адсорбцией белка на силикате. По этой причине лучше разрушать клетки такими приборами, как мясорубка Латапи или гомогенизаторы. Структура клетки разрушается также при действии органических растворителей, например спирта, ацетона или глицерина. Если концентрация глицерина не превышает 85%, то в глицериновый экстракт переходит значительная часть растворимого белка. Этим способом можно экстрагировать гидролитические ферменты из поджелудочной железы и из других органов. Глицериновые экстракты при комнатной температуре относительно стабильны. Повидимому, рыхлая ассоциация белка с полярными гидроксильными группами глицерина уменьшает скорость его денатурации. Однако эти же полярные группы в молекуле глицерина обусловливают взаимное притяжение его молекул и высокую вязкость этого растворителя. Из глицериновых экстрактов очень трудно поэтому получить чистые препараты белков. В связи с этим глицерин в настоящее время редко применяется для разрушения клеточных оболочек. Вильштеттер и его сотрудники для разрушения клеток пользовались ацетоном. Этот метод основан на том, что многие белки при концентрации ацетона выше 80—90% денатурируются очень медленно. Для экстракции размельченный или пропущенный через мясорубку орган помещают в ацетон. Преимущество этой процедуры заключается в том, что ацетон не только разрушает клеточные оболочки, но одновременно экстрагирует из клеток и большинство липидов. Липиды можно затем удалить количественно при последующей обработке эфиром. Остаток после удаления липидов высушивается на листе фильтровальной бумаги и экстрагируется водой, разведенными растворами солей или буферов. Хотя большинство белков, в том числе много важных ферментов, можно получить из ацетоновых вытяжек в нативном состоянии, однако надо помнить, что некоторые лабильные белки при действии этого растворителя денатурируются. [c.10]

Широко распространенный способ выделения липидов из животных тканей смесью хлороформа с метанолом использован рядом исследователей для экстракции хлорорганических соединений из тканей животных. J. L. Radomski и А. Rey (1969) сравнивали эффективность многих экстрагентов и пришли к выводу, что из всех органов и тканей, кроме жира и крови, пестициды лучше всего экстрагируются смесью хлороформа и метанола в отношении 2 1. [c.186]

В наиболее популярном методе, предложенном Фолчем и др. 19], экстракцию проводят смесью хлороформ — метанол (2 1) из расчета двадцать частей экстрагирующей смеси на одну часть ткани. Этот метод позволяет получить достаточно высокий выход нейтральных липидов, диацилглицерофосфолипидов и сфинголипидов. Лизофосфолипиды переходят в раствор лишь частично, а более полярные кислые фосфолипиды могут теряться при промывках экстракта растворами солей и водой [20]. Однако путем проведения повторных экстракций и ограничения промывок выход лизолипидов можно повысить до количественного [21, 22]. [c.131]

В настоящее время не существует простых и надежных способов выделения ганглиозидов из экстрактов тканей, а в основе большинства существующих лежит методика Фолча и сотрудников, в соответствии с которой все липиды экстрагируют смесью хлороформ — метанол, затем ганглиозиды переводят в водную фазу и полученный водный раствор диализуют. Ранделл и Пеннок [35] рассмотрели множество модификаций подобных рутинных процедур и предложили усовершенствованную простую методику экстракции ганглиозидов. Она основана на существующих способах экстракции и включает стадию диализа против карбовакса или использование фильтров фирмы М11И-роге. [c.132]

Легкую фазу липидного экстракта, полученного по методу Фолша. можно использовать в качестве антигена при твердофазном РИА без очистки или с дальнейшей очисткой. Его очистка состоит в освобождении от солей и низкомолекулярных примесей диализом или, что быстрее, адсорбцией липидов на патроне для обратнофазовой хроматографии с последующей элюцией их органическим растворителем. Освобождение экстракта от солей и низкомолекулярных примесей является обязательным этапом, если материал будет использован для ТСХ. Фиксированные формальдегидом клетки можно экстрагировать так же, как и нативные. Однако образцы тканей следует гомогенизировать перед экстракцией, поскольку после фиксации эта процедура существенно осложняется. Лучше измельчить ткань в десятикратном объеме воды в небольшом электрическом блендере и перед экстракцией гомогенат лиофилизовать. [c.161]

Используалые в гистохимии липидов методы экстракции основаны на законах растворимости, известных из аналитической органической химии. Трудности гистохимического выявления заключаются в том, что липиды в тканях находятся обычно в виде смесей и часто связаны с белками и углеводами. Это нередко сказывается на раст-= воримости. И наконец, не следует забывать, что экстрагнн руемость жиров может меняться в процессе предваритеяь [c.146]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология