Пептиды также

Для количественного определения может быть использована биурето-вая реакция, хотя в случае пептидов также наблюдается положительный результат. Реакция основана на образовании фиолетового медного комплекса, интенсивность окраски которого (540 — 560 нм) может быть измерена колориметрически. Гораздо более высокую чувствительность имеет метод Лаури [62], в котором при участии остатков Тгр, Туг и Су8 образуется комплекс белка с фосфомолибденовой кислотой и медью. Это наиболее часто применяемый колориметрический метод определения малых количеств белка. Образующийся голубой комплекс (максимум абсорбции при 750 нм) достаточно устойчив для количественного определения. В качестве стандартного белка служит сывороточный альбумин. Предел обнаруживания 5 — 10 мкг/мгл раствора. Определению по методу Лаури мешают трис- [c.355]

Нельзя не упомянуть, что при статистическом окислении двух различных цистеиновых пептидов также может получиться несимметричный цистиновый пептид. Этот путь был описан, например, при первом полном синтезе инсулина (разд. 2.3.1.8). [c.206]

Сами цистиновые пептиды также могут применяться в синтезе, причем в некоторых случаях для этого не требуется защиты тиольной группировки [60]. Успешно используют с этой целью также смешанные дисульфиды, например (67). [c.389]

Следует сразу же подчеркнуть, что как и в аминокислотах, в пептидах сосуществуют амино- и карбоксильные группы, поэтому пептиды также являются биполярными ионами со своей характеристичной величиной р1. Элементом, во многом определяющим строение пептидов, является пептидная связь, поскольку в общем виде пептид можно изобразить как регулярную структуру, основную нить которой составляют повторяющиеся участки с одинаковыми параметрами [c.54]

В связи со сказанным синтез полипептидных цепей с заданной первичной структурой представляет собой важнейшую задачу. Синтез пептидов также чрезвычайно важен не только для решения структурных задач оказалось, что пептиды обладают весьма широким спектром физиологического действия. [c.462]

Эта реакция широко используется в хроматографии и для количественного определения аминокислот (гл. 2, разд. 3,5). а-Аминокислоты реагируют в большинстве случаев легко, однако первичные амины и пептиды также образуют пурпурный краситель Руэманна. При этом из кетимина отщепляется не СОг, а протон. Если в реакцию вступает пиридоксамин, то на хроматограммах появляется ярко оранжевый продукт, вероятно альдимин. Вторичные амины, например пролин, дают желтую окраску. [c.213]

Методы хроматографического разделения гликопротеинов фактически не отличаются от методов, используемых в химии белков и пептидов. Также имеется ряд белков, которые в обычном смысле не считаются гликопротеинами, хотя они содержат один или несколько гликозидных остатков. Конечно, существует множество методов, с помощью которых могут разделяться различные гликопротеины. С точки зрения хроматографиста, здесь не следует детально их описывать. С другой стороны есть хроматографический метод, специфичный для структурных анализов гликопротеинов и гликопептидов. Специфичность основана на вы-боре подходящей системы детектирования, а не собственно метода разделения. Здесь будет кратко рассмотрен метод, описанный в работе [221- [c.145]

Можно надеяться, что другие детали механизма гидролиза пептидов также будут вскоре установлены. Гидролиз эфиров, таких, как ГФЛ, обнаруживает ряд особых черт. Ряд различий в гидролизе эфиров и пептидов сказывается на влиянии модификации тирозина, замещения металла и прибавления DgO, ингибиторов и активаторов. Было высказано предположение о том, что механизмы гидролиза эфиров и пептидов различны [128] и что центры присоединения двух типов субстратов полностью или частично не совпадают [100, 117]. Из известного несходства двух реакций действительно вытекает существование количественных различий в соответствующих им наборах констант скорости, из-за которых стадии, лимитирующие скорость, для гидролиза пептидов и эфиров могут не совпадать. Однако это можно объяснить не только с помощью гипотезы двух механизмов . Например, активность нитро-КПА, d-КПА и Hg-КПА при гидролизе ГФЛ можно объяснить, предположив, что некоторые эфиры могут превращаться без передачи протона от остатка тирозина [2, 3]. Узловой вопрос о возможности превращения некоторых субстратов по различным механизмам с участием различных каталитических групп заслуживает более тщательного изучения. [c.551]

Н. И. Гаврилову и Л. Н. Акимовой [2] удалось получить соединения, в которых осуществлена амидинная связь между ядром дикетопиперазина и пептидами (также дикетопиперазином и аминокислотами) тем самым впервые экспериментально показана возможность вхождения циклических структур в пептидные цепи. [c.319]

Автор описал [36] разделение метионина, лейцина, валина и аланина с применением 0,5 %-ного этилацетата в качестве вытесняющего раствора в интерферометрическом приборе, а таюке некоторые другие примеры разделения нейтральных аминокислот на угле. Пептиды также могут быть разделены (см. рис. 13). Возможности метода для этого класса веществ еще не полностью использованы. Из опыта лаборатории автора очевидно, однако, что различия между пептидами велики и что во многих случаях разделение возможно. Однако для пептидов с числом аминокислотных остатков больше двух или трех отклонения становятся значительными, воз- [c.160]

В то время как сг-аминогруппы аминокислот и концевые л-аминогруппы пептидов очень быстро реагируют с азотистой кислотой, Е-аминогруппы лизина реагируют очень медленно. Прн действии азотистой кислоты медленно разлагается с образованием азота также аммиак, который при гидролизе соляной кислотой отщепляется от амидных групп аспарагина и глутамина [18]. Объем образовавшегося азота можно измерить либо при атмосферном давлении, либо манометрически — при пониженном давлении [20]. Метод Ван-Слайка дает прекрасные результаты с большинством аминокислот и пептидов. Необходимо, однако, принимать в расчет, что сама азотистая кислота под действием сильно восстанавливающих веществ (например, цистеина) разлагается с образованием азота [21]. При определении азота глицина и его пептидов также получаются данные, превышающие теоретически вычисленные величины [22, 23]. [c.26]

Многие биологически активные пептиды природного происхождения отличаются структурно от пептидов, образующихся в результате процессинга белков. Зачастую в нх составе находятся небелковые аминокислоты, такие, как ( -алании, т-аминомасляная кислота, о-аминокислоты, N -anKH-лированные аминокислоты и др. Для многих низкомолекулярных пептидов также характерны ш-пептидные связи и кольцевые структуры. Такие структурные особенности, а также остатки пироглутаминовой кислоты образуют действенную защиту против атаки протеаз, обладающих обычно субстратной спеш1фичиостью к пептидам из а-аминокислот с нормальными пептидными связями. [c.231]

При изучении взаимодействий углеводов с другими биологически активными веществами в растворах, например с мочевиной, аминокислотами, пептидами, также используются вириальные разложения, подобные рассмотренным выше. В них кроме коэффициентов у 2 и у з (у = к, V...) появляются перекрестные коэффициенты типа У23<У233> У223 - отражающие взаимодействия молекул растворенных веществ и новые источники неидеальности в тройной системе. В частности, у23 учитывают не только парные взаимодействия второго и третьего компонентов, но и соответствующее ослабление взаимодействий "растворенное вещество-растворитель". [c.57]

Другой тип опиатных (обезболивающих) пептидов также был обнаружен в мозге - они названы эндорфинами. Эти более длинные пептиды (от 13 до 30 АК) получили свое название за аналгетическое действие, сходное с морфином. В отличие от энкефалинов, эндорфины имеют более сложное физиологическое действие и оказывают не только обезболивающий эффект, но влияют и на поведение. [c.21]

В к лассических работах 60-х — начала 70-х годов для расщепления белка использовались главным образом такие методы, которые позволяли получать большое число фрагментов небольшого размера. Структура их изучалась классическими методами анализа (ручной метод Эдмана. ДНС-Эдман, расщепление карбоксипепти-дазами и амииопептидазами). При этом для основного гидролиза применялся главным образом трипсин, а для получения перекрывающихся пептидов также использовались ферментативные методы гидролиза (химотрипсин, термолизин и пепсин). [c.76]

Однако путь (б) является, вероятно, более предпочтительным, поскольку Шиэн и Главка [2070] при реакциях конденсации с помощью этоксиацетилена выделили наряду с соответствующим пептидом также и этоксивиниловый эфир N-защищенной аминокислоты (62). Последний представляет собой активированное соединение и с высоким выходом реагирует с эфирами аминокислот с образованием соответствующих пептидов. На этом основании был предложен другой механизм реакции [1690], состоящий в присоединении аминокомпонента к виниловому эфиру (64). Конденсация, несомненно, протекает по иному пути, если аминокомпонент участвует в реакции в виде хлоргидрата [992, 1690]. В этом случае первой стадией реакции является присоединение хлористого водорода к тройной связи образовавшийся этилхлорвиниловый эфир (65) реагирует затем с карбоксильным компонентом с образованием хлорангидрида [c.160]

Синтез пептидов, содержащих фенилаланин, не представляет особых трудностей (см., например, [774, 775, 1114, 2368]). Фенилаланин наряду с глицином и аланином является именно той стандартной аминокислотой, на которой проверяли новые защитные группы, методы синтеза пептидов и степень рацемизации. С этой целью часто используют bo-Gly-L-Phe-Gly-OEt (см. главу X, А, 1, б). Фенилаланинсодержащие пептиды также неоднократно синтезировали для изучения специфического расщепления амидной связи фенилаланил—аминоацил химотрип-сином. Фенилаланин очень часто встречается в природных биологически активных полипептидах. Интересно, что о-изомер также входит в состав многих пептидных антибиотиков. Пептиды, содержащие один остаток фенилаланина, поглощают в ультрафиолетовой области с е=187 это иногда облегчает определение молекулярного веса пептидов [2389, 2393]. [c.194]

Линейный пептид, способный к циклизации, можно получить двумя путями активированием карбоксильной группы свободного пептида или отщеплением N-защитной группы после того, как карбоксильная группа уже активирована. Естественно, в любом случае оказывается необходимым высокое разбавление. На практике чаще применяют второй путь. Большинство синтетических циклопептидов получено методом активированных эфиров, т. е. путем отщепления N-защитной группы у активированного эфира N-защищенного пептида. При снятии аминозащитной группировки образуется соль по аминогруппе, которая временно предохраняет последнюю от немедленной реакции с активированной карбоксильной группой. Чаще всего применяли следующие комбинации цианметиловый эфир и тритильная группа [1341, 2018, 2030, 2031, 2517], п-нитрофениловый эфир и тритильная группа [2026, 2028, 2029], /г-нитрофениловый эфир и г/ ег-бутилоксикарбонильная группа [377, 2033] и п-нитрофениловый эфир и бензилоксикарбонильная группа [1341, 1871, 2010, 2031, 2106]. Выделение свободного эфира пептида из его соли осуществляли добавлением к реакционной смеси основания, обычно пиридина [377, 1341, 2010, 2018, 2031, 2106, 2517, 2533] или суспензии карбоната магния [1214, 1215]. Для циклизации использовали и азидный метод в этом случае исходным соединением служил азид карбобензоксипептида, причем карбобензоксигруппу после разбавления отщепляли каталитическим гидрогенолизом [2568]. Поскольку гидразиды реагируют с азотистой кислотой быстрее, чем амины, можно также непосредственно получить азид свободного пептида из соответствующего гидразида. В ходе этого превращения аминогруппу необходимо защищать солеобразованием, т. е. реакционная смесь должна быть в достаточной степени кислой. Свободный аминоазид выделяют добавлением водного раствора бикарбоната натрия [2003, 2072, 2615, 2623, 2624, 2634]. Получаемые из свободных пептидов хлор-гидраты хлорангидридов пептидов также пригодны для циклизации. В этом случае циклизацию обычно проводят, добавляя триэтиламин к раствору хлоргидрата хлорангидрида пептида в диметилформамиде [1870]. Хлорангидридный метод оказался очень полезным при синтезе циклических пептолидов. Худшие, результаты получаются при циклизации методом смешанных ангидридов [302], так как промежуточные соединения, как правило, плохо растворимы в органических растворителях. Напротив, [c.347]

Выяснение их строения облегчалось в значительной мере благодаря тому, что строение самого инсулина уже было установлено. При определении стрепогениновой активности выделенных пептидов оказалось, что активность H-Ser-His-Leu-Val-Glu-OH (фрагмент 9—13 цепи В инсулина) составляет 85 единиц/мг, H-Ser-His-Leu-Val-Glu-Ala-Leu-OH (фрагмент 9—15 цепи В инсулина) — 98 единиц/мг и H-Leu-Val- ys-Gly-Glu-Arg-ОН (фрагмент 17—22 цепи В инсулина) в окисленной форме — 200 единиц/мг. Другие пептиды, также обладающие стрепогениновой активностью, были выделены позднее из гидролизатов, полученных ферментативным расщеплением казеина [123, 124, 827, 1557], рибонуклеазы [1539] и гемоглобина [1155]. Довольно высокая стрепогениновая активность была обнаружена у биологически активных пептидов окситоцина и вазопрессина [2584], а также у нескольких фрагментов окситоцина [2587] (ср. табл. 14). [c.348]

К классу гомодетных циклических гомомерных пептидов принадлежит ряд антибиотиков, а именно грамицидин С (грамицидин советский), тироцидины, эволидин, фунгиспорин и микобациллин. Антибиотики группы бацитрацинов также относятся к гомомерным пептидам, содержащим, однако, тиазоли-новый цикл в пептидной боковой цепи. Грамицидины А, В и Со. для которых недавно установлено строение линейных пептидов, также будут рассмотрены в этой главе с точки зрения их происхождения и биологических свойств. [c.527]

Фрутон [505а, 513] значительно расширил значение этой реакции, показав, что не только аммиак, но и аминокислоты и пептиды также могут обмениваться In vitro (путем транспептидиро-вания) под влиянием папаина и кристаллического химотрипсина. Если присоединяемая группа обладает более длинной цепью, чем заменяемая,, то процесс приобретает действительно синтетический характер, так как суммарная длина цепи при этом возрастает. Ниже приводятся три характерные реакции, изученные Фрутоном [c.193]

В реакциях конденсации с дегидратацией можно использовать не только богатые энергией реагенты, но также сореагепты, способные химически реагировать с образующейся молекулой воды или связывать ее (фиг. 43). Мы уже говорили о существенной роли цианида в химической эволюции. Нитрилы, например, служат ключевыми промежуточными продуктами при синтезе аминокислот в экспериментах с пропусканием искровых разрядов через газовые смеси, имитирующие примитивную атмосферу [29]. Позднее в этой главе мы будем говорить о том, что пептиды также присутствуют в числе продуктов этой реакции. Мы отмечали, что при нагревании цианида аммония образуются полимеры аминокислот 30]. В типичном случае водный раствор, содержащий H N (1,5 моль/л) и аммиак (1,5 моль/л), нагревали до 90 °С. После экстракции реакционной смеси теплой водой получали черный аморфный (полимероиодобный) продукт. Гидролиз полимера приводит к появлению большого числа различных аминокислот эти аминокислоты оптически неактивны (рацематы). Если к исходным реагентам добавляли меченный радиоактивными изотопами глигшп, метионин или аланин, то в полимерном продукте обнаруживалась радиоактивность. Это свидетельствует о том, что полимер, по крайней мере частично, образуется после синтеза аминокислот и, следовательно, должен идти процесс дегидратации. С помощью инфракрасной спектрометрии продукта были обнаружены пентидные связи. В ходе этой реакции образуется также большое количество мочевины . Был сделан вывод, что цианид может выступать не только как промежуточный продукт в синтезе аминокислот, но может также служить сореагентом в реакции конденсации с отщеплением воды, т. е. при синтезе пептидной связи 131, 32] (фиг. 52). Преимущество этого метода (в смысле моделирования химической эволюции) заключается в [c.217]

С одной стороны, наличие общего гептапептидного ядра в структуре гипофизарных гормонов указывает на эволюционную взаимосвязь гормонов этой группы. С другой стороны, структурная организация этих гормонов и последовательное изменение функций по мере гидролитического отщепления определенного числа аминокислотных остатков позволяют увидеть, как экономно построены эти пептидные регуляторы. В том же кортикотропине часть аминокислотной цепи (остатки 7—38) способна ингибировать синтез кортикостероидов — один из главных процессов, для стимуляции которого предназначена целая молекула кортикотропина. Этот пептид также был выделен из гипофиза и назван кор-тикотропин-ингибирующим пептидом [c.67]

Фармакокинетика. Поскольку стрептокиназа имеет белковую структуру, при приёме внутрь она разрушается в ЖКТ. При внутривенном введении препарата составляет около 30 мин, Г,/2 комплекса стрептокиназа-плазминоген равен 80-90 мин. Стрептокиназа распределяется в системном кровотоке, наибольшее её количество определяют в органах и тканях, содержащих отложения фибрина в мелких тромбах. Часть её связывается с антистрептокина-зами (АТ, образовавшимися в результате предшествующей сенсибилизации стрептококками) с образованием комплексов, частично выводимых с мочой, а частично разрушающихся в печени и селезёнке до аминокислот и пептидов, также элиминируемых почками. [c.264]

Механизм катализа и структура промежуточных соединений, образующихся в ходе реакций с участием сериновых протеаз, определены с помощью более прямых экспериментов, чем в случае любого другого фермента или класса ферментов. Выяснить структуру сериновых протеаз удалось главным образом благодаря установлению кристаллической структуры сокристал-лизованных комплексов трипсина и некоторых природных поли-пептидов-ингибиторов, имитирующих субстраты (гл. 1, разд. Г). Из этих исследований известно, что активный центр фермента комплементарен переходному состоянию субстрата, которое структурно очень близко к тетраэдрическому аддукту остатка 5ег-195 и углеродного атома карбонильной группы субстрата. Более того, структура фермента при связывании субстрата не искажается. Исследование связывания небольших пептидов с помощью ЯМР-спектроскопии показывает, что при связывании эти пептиды также не деформируются. (Определение кристаллической структуры комплекса трипсина с панкреатическим ингибитором трипсина при высоком разрешении ясно показывает, что реакционноспособная пептидная связь деформируется таким образом, что ее конфигурация приближается к конфигурации пептидной связи в тетраэдрическом промежуточном соединении. Однако, поскольку эта связь уже деформирована до присоединения к ферменту, сконструированный ингибитор связывается очень прочно, т. е. является аналогом естественного переходного состояния.) [c.363]