Вирус выделение и очистка

Баромембранные процессы используются во мн. отраслях народного хозяйства и в лаб. практике для опреснения соленых и очистки сточных вод, напр, разделения азеотропных и термолабильных смесей, концентрирования р-ров и т.п. (обратный осмос) для очистки сточных вод от высокомол. соединений, концентрирования тонких суспензий, напр, латексов, выделения и очистки биологически активных в-в, вакцин, вирусов, очистки крови, концентрирования молока, фруктовых и овощных соков и др. (ультрафильтра-цюг) для очистки технол. р-ров и воды от тонкодисперсных в-в, разделения эмульсий, предварительной подготовки жидкостей, напр, морской и солоноватых вод перед опреснением, и т.д. (микрофильтрация). [c.25]

Наконец, следует указать, что если количество оседаю--щего вещества достаточно велико, седиментометры и специальные препаративные ультра центрифуги могут быть использованы для препаративного разделения и выделения фракций с различными размерами частиц или молекул. В последние годы препаративные ультрацентрифуги широко применяются при выделении и очистке вирусов и входящих в их состав нуклеиновых кислот и белков. [c.47]

Сделаны попытки выделения и очистки вирусов с помощью ионитов. Внедрен в производство метод деионизации и нейтрализации антитоксичных сывороток с помощью катионитов и анионитов, [c.126]

Мембранные фильтры используют для анализа воды и очистки ее от микроорганизмов, выделения и концентрирования специфической микрофлоры, в том числе и вирусов, медицинских и клинических анализов, анализа воздуха и др. Исследования последних лет [369] показали, что метод ультрафильтрования непригоден для концентрирования бактерий из воды с целью последующего изучения их физиологических и биохимических свойств, так как последние изменяются в процессе фильтрования. Кроме того, значительное количество микроорганизмов связывается с мембранами. Следовательно, после концентрирования с помощью ультрафильтрования микроорганизмы ни количественно, ни функционально не эквивалентны тем, которые обитают в воде. Мембранные фильтры применяются также в промышленности, где существует острая необходимость бактериально чистой воды, главным образом в медицинской и пищевой [365, [c.197]

Производство антибиотиков, алкалоидов, витаминов (пенициллин, стрептомицин, биомицин, морфин, кофеин, кодеин и др.) получение ферментов и иммобилизованных ферментов консервирование кро-вИ извлечение токсических веществ (искусственная почка, очистка крови) выделение и очистка вирусов производство антитоксических сывороток медицинская диагностика и др. [c.254]

При выделении вирусов из насекомых обычно пользуются следующей методикой. Из тела зараженного насекомого выделяют пораженные органы, которые размалывают и после гомогенизации в миксере или в стеклянном гомогенизаторе оставляют в избытке воды на короткий срок для бактериального разложения. Этим достигается распад клеточных стенок и освобождение вирусных полиэдров или гранул. После удаления остатков тканей с помощью сита или отстаиванием производится очистка материала промывкой в избытке воды с повторным центрифугированием. Конечный чистый концентрат образует белый тонкий осадок на дне, который можно отделить от жидкости центрифугированием при 3000 об/мин. Когда речь идет об однородном заболевании многочисленной популяции насекомых, целесообразно использовать для выделения вируса большое число гусениц, так как в этом случае при равных затратах труда на очистку и промывку можно полу- [c.78]

МЕТОДЫ ВЫДЕЛЕНИЯ И очистки ВИРУСОВ [c.24]

МЕТОДЫ ВЫДЕЛЕНИЯ И ОЧИСТКИ ВИРУСОВ 33 [c.33]

Б, ОБЩИЕ МЕТОДЫ ОЧИСТКИ ИЛИ ВЫДЕЛЕНИЯ ВИРУСОВ [c.33]

НОЙ концентрации соли, и поэтому некоторые методы очистки для работы с такими вирусами непригодны. Под влиянием крайних значений pH и высоких температур разрушаются все вирусы, но при этом они сильно различаются между собой по стабильности в различных пределах значений pH и по чувствительности к температуре. Примером может служить, с одной стороны, высокая чувствительность к низким pH вируса ящура, который теряет свою инфекционность при pH ниже 6,5. С другой стороны, вирус мозаики костра разбухает при нейтральных pH и устойчив только при pH 4—6. Таким образом, при выделении вирусов часто можно подобрать такие условия pH и температуры, которые, оказывая неблагоприятное и денатурирующее воздействие на примеси, не влияют на выделяемый вирус. [c.34]

Выше отмечалось, что обнаружение энтеровирусов во внешней среде, в частности в воде, связано со значительными трудностями, что обусловлено малой концентрацией вирусов в воде и губительным влиянием на них условий выделения. В то же время изучение роли воды в распространении вирусных заболеваний, поиски оптимальных решений технологических схем очистки и обеззараживания воды неизбежно сталкиваются с практически ограниченными возможностями методов изоляции вирусов. Необходимы чувствительные методы точного количественного и качественного определения вирусов в воде. [c.67]

При групповом разделении методом гель-фильтрации удается в значительной мере избежать разбавления, если учитывать объемные соотношения, подробно рассмотренные в разделе Обессоливание . При очистке суспензии вируса (выделенного из столовой свеклы) от сопутствующих пигментов путем гель-фильтрации на 4—6-кратном (по отнощению к объему образца) объеме сефадекса 0-75 разделение составляло лишь 20—30% [14]. Свободные от белков катехоламины — адреналин и норадреналин — были выделены без разбавления из 20 мл сыворотки (27% объема колонки) гель-фильтрацией на сефадексе 0-25 (2X25 сж, 78 мл) [15]. Кислюк [16] показал, что с помощью гель-фильтрации на сефадексе 0-50 удается гораздо легче отделить фермент от его кофакторов, чем с помощью диализа. Таким путем удается получить кофакторы в сравнительно небольшом объеме и изучить эффект их вторичного присоединения к ферменту. После гель-фильтрации был выделен совершенно неактивный белок, активность которого вновь восстанавливалась (до 86% исходной) после добавления низкомолекулярной фракции. При диализе активность фермента снижалась только до 38% [16]. Групповое разделение гель-фильтрацией оказалось чрезвычайно удобным методом отделения низкомолекулярных антигенов от антител. Диссоциацию комплекса антиген — антитело часто осуществляют, добавляя избыток гаптена, который затем можно легко отделить от белка гель-фильтрацией [17]. В бактериологии гель-фильтрация на сефадексе 0-75 или биогеле Р-100 может служить для удобного выделения экстрацеллюлярных токсинов. Перед засевом культуральную среду освобождают от высокомолекулярных примесей гель-фильтрацией. Затем на той же колонке после удаления бактерий можно вновь отделить высокомолекулярные токсины от культуральной среды [18]. [c.142]

В настоящее время идет интенсивная работа по выделению, очистке и изучению ИРНК в бактериях, не зараженных вирусом. Основной прием, которым пользуются Гро, Уотсон, Шпигельман и другие, — радиоактивный импульс урацила С или фосфата Оптимальное время импульса зависит от времени генерации культуры. Нри времени генерации порядка часа время импульса выбирается порядка 20 сек. При больших временах генерации импульс пропорционально растягивается. [c.468]

Настоящий раздел посвящен достижениям рентгеноструктурного анализа белков, знание пространственного строения которых представляет для человека поистине жизненный интерес. Речь пойдет об аспартатных протеиназах, прежде всего протеиназе вируса иммунодефицита человека (HIV) и ренине, одних из главных участников системы регуляции тонуса стенок кровеносных сосудов, скселетных мышц и других тканей. Ниже показано, что поиск радикальных терапевтических средств борьбы с синдромом приобретенного иммунодефицита (AIDS), другими видами вирусных заболеваний, гипертонией, т.е. решение сугубо прикладных задач экстраординарной важности, требует высокого уровня развития теоретической молекулярной биологии. Необходимой, хотя и не в полной мере достаточной, предпосылкой для его достижения является информация о трехмерных структурах соответствующих белковых молекул. В отличие от структурных исследований мембранных рецепторов, сдерживающим моментом здесь служат не трудности выделения, очистки и кристаллизации белков, а сложности более принципиального порядка. [c.80]

Вирусы гриппа — это содержащие однонитевую РНК оболочечные вирусы, вызывающие серьезные эпидемические заболевания человека и многих видов животных, в частности лошадей, свиней, тюленей и домашней птицы. Известны три типа данных вирусов, выделенные на основании различий между нуклеокап-сидами в реакции связывания комплемента они отличаются также по биохимическим и биологическим свойствам. Вирусы типа А, способные к быстрым и резким изменениям антигенных свойств (антигенный дрейф), являются главной причиной пандемий гриппа человека поэтому они исследованы наиболее подробно. Большинство методов выращивания, очистки и титрования вирусов гриппа разработаны именно для вирусов этого типа. Вирусы типа В, хотя и не способны к антигенному дрейфу, по всем остальным биохимическим и биологическим свойствам очень близки к вирусам типа А поэтому их, как правило, можно выращивать и титровать, пользуясь теми же методами. С другой стороны, вирусы типа С по своим биохимическим свойствам весьма далеки от вирусов типов А и В соответственно они имеют и другие ростовые свойства. Поскольку вирусы этого типа изучены намного хуже, чем другие, в настоящей главе основное внимание уделено методам, разработанным для вирусов типов А и В, в особенности тем, с которыми авторы знакомы по собственному опыту. Тем не менее большинство этих методов применимы и к вирусам типа С. Данная глава представляет собой практическое руководство, и соответственно теоретические основы методов, как правило, не рассматриваются. При необходимости упоминаются некоторые биологические особенности вирусов и даются ссылки на соответствующую литературу однако полное описание этих свойств можно найти в недавно опубликованных подробных обзорах [1—3]. [c.161]

Препаративные центрифуги, В настоящее время имеется большое количество превосходных препаративных ультрацентрифуг, способных развивать ускорение до 420 ООО . Они применяются для выделения, очистки и концентрирования вирусов и субклеточных частиц, фракционирования белков, нуклеиновых кислот, линопро-Т0ИДОВ и других макромолекул. Наиболее популярны следующие ультрацентрифуги Спинко модель Л и Л2 (США) Судер-Спид-40 ж 50 (Англия), ВАК-40 и ВАК-60 (ГДР) и Хитачи 55Р (Япония). В нашей стране выпускаются препаративная ультрацентрифуга типа УЦП. [c.192]

Молекулярные клонирующие векторы играют ключевую роль в постановке генно-инженерных экспериментов на выбранной системе клеток. В системе клеток прокариот и низших эукариот в качестве векторных молекул используют плазмиды или ДНК вирусов. В культивируемых клетках млекопитающих эндогенные плазмиды не найдены, поэтому внимание исследователей сконцентрировалось на ДНК-со-держащих вирусах. К моменту появления генно-инженерной методологии наиболее хорошо изученным в генетическом и биохимическом плане был вирус SV40. Имелись методы наработки и очистки данного вируса, выделения его ДНК и трансфекщ1и ею чувствительных культур клеток. Поэтому именно на основе ДНК вируса SV40 бьши созданы первые клонирующие векторы культивируемых клеток млекопитающих. [c.354]

Исключительно важное значение химия поверхности адсорбентов и носителей имеет в газовой и жидкостной хроматографии для анализа сложных смесей, препаративного выделения чистых веществ и управления технологическими процессами. Химия поверхности играет важную роль и в процессах, протекающих в биологических системах. К ним относится, в частности, взаимодействие биологически активных веществ, в том числе лекарственных препаратов, с рецепторами — местами их фиксации в организме. Изучение модифицирования поверхности необходимо для решения вопросов совместимости искусственных материалов с биологическими. Химическое модифицирование адсорбентов применяется при разработке эффективных методов вывода из крови разного рода токсинов (гемосорбция). Прививка к поверхности крупнопористых адсорбентов и носителей соединений с определенными химическими свойствами необходима для иммобилизации ферментов, их хроматографического выделения и очистки, а также для иммобилизации клеток. Иммобилизованные ферменты и клетки эффективно используются в промышленном биокатализе, обеспечивая высокую избирательность сложных реакций в мягких условиях. Очистка и концентрирование вирусов гриппа, ящура, клещевого энцефалита и других для получения эффективных вакцин требует применения крупнопористых адсорбентов с химически модифицированной поверхностью. [c.6]

Применеиие. Ж х важнейший физ -хим метод исследования в химии, биологии, биохимии, медицине, биотехнологии Ее используют для анализа, разделения, очистки и выделения аминокислот, пептидов белков ферментов, вирусов, нуклеотидов, нуклеиновых к-т, углеводов, липидов, гормонов и т д, изучения процессов метаболизма в живых организмах лек препаратов, диагностики в медицине, анализа продуктов хим и нефтехим синтеза попупродуктов, красителей, топлив, смазок, нефтей, сточных вод, изучения изотерм сорбции из р-ра, кинетики и селективности хим [c.153]

Применяя ряд коллодийных мембран с градуированной по Илфорду и все уменьшающейся пористостью, Грабар измерял наименьший размер пор, при котором через мембрану в процессе ультрафильтрацни проходил раствор белков- или вирусов, и определял таким путем их размеры. Этот метод применялся для выделения и изучения размеров ряда вирусов. Использование диализа и ультрафильтрации для очистки коллоидных систем описывалось во второй главе. [c.215]

Об очистке нейраминидазы, выделенной из вируса гриппа, см. . Природным субстратом нейраминидаз являются сложные углеводсодержащие биополимеры или олигосахариды при действии этих ферментов отщепляются концевые остатки N-ацетил-, N-гликолил- или Ы,0-диаЦетил-нейраминовой кислот, присоединенные а-гликозидной связью. Простые гликозиды нейраминовой кислоты устойчивы к действию фермента. [c.402]

Шведский ученый Пер-Оке Альбертсон предложил использовать для разделения бактерий, вирусов, фрагментов клеток, мембран, ядер, белков, нуклеиновых кислот и любых других частиц биологического происхождения двухфазные водные растворы полимеров — иолиэтиленгликоля, декстрана и их производных [2, 279, 280]. Фракционирование в двухфазной водной системе основывается на избирательном распределении частиц между этими фазами, аналогичном распределению растворимых веществ. Метод Альбертсона получил широкое распространение и используется во многих биохимических и микробиологических лабораториях, так как позволяет в мягких условиях, без нарушения структурной целостности и изменения нативных свойств осуществлять выделение и очистку лабильных биологических объектов, а также дать определенную информацию о их строении. Реализация этого метода в промышленном масштабе, например, для выделения вирусов или получения чистых ферментов, не встречает, по мнению автора, принципиальных трудностей, однако в очистке воды он не может быть использован. Очевидно, и любая другая модификация экстракции жидкость — жидкость неприменима при микробной очистке промышленных сточных вод и, конечно, такой метод совершенно непригоден для водоподготовки. [c.194]

Выделение и очистку S, М. и L вариантов вируса Mengo проводили на колонке с гидроксиапатитом [6]. Обогащенную вирусом фракцию, полученную осаждением метанолом, обрабатывают в ультразвуковом дезинтеграторе, а затем инкубируют с а-химотрипсином (при концентрации фермента 0,8 мг/мл и температуре 37°С в течение 45 мин). Далее добавляют рибо- [c.314]

Для очистки выделенных штаммов вирусов от материалов клеток хозяина используют чаще других методов адсорбцию на фор-малинизироваиных куриных эритроцитах с последующим элюированием физиологическим раствором хлористого натрия [1] и метод дифференциального центрифугирования при низких и высоких скоростях вращения [2]. Однако оба метода трудоемки и не обеспечивают ПОЛНО очнст1- и вируса от сонутству ощнх веществ. [c.80]

Борьба с переносчиками вируса — тлями, а также сорными растениями — резерваторами вируса. Раздельный сбор хлопка-сырца с больных и здоровых растений и последующая раздельная их очистка. Выделение на семена участков, не содержащих вирусных растений. Ранние посевы хлончапшка, предотвращение изрежнвания посевов, внесение фосфорных удобрений. [c.177]

Ядерные фильтры разрешены к использованию в фармацевтической промышленности, медицине и в любых процессах химической, пищевой и биологической технологий. Ядерные мембраны и их аналоги Нуклепоры стойки к воздействию кислот, слабых щелочей и различных окислителей. В последние годы ядерные фильтры находят все более разнообразное применение, например для анализа загрязнений окружающей среды, очистки жидкостей и газов, выделения и изучения размеров и формы клеток, очистки белков и вирусов и т. д. [c.305]

Особые преимущества и.меет выделение рибонуклеиновых кислот из гомогенатов тканей млекопитающих, микроорганизмов и вирусов экстракцией фенолом и водой при комнатной температуре, так как при этом белки и дезоксирибонуклеиновые кислоты выпадают в осадок, активность рибонуклеазы подавляется и высокополимерные продукты могут быть получены с хорощими выходами [11—14]. Прямая экстракция дрожжей водным раствором фенола была применена для препаративного получения транспортных РНК [15]. В примененных условиях экстракции высокомолекулярный материал почти не экстрагировался. Комбинирование экстракции с быстрой очисткой РНК на анионитах ЭКТЕОЛА- [16] или ДЭАЭ-целлюлозе [17, 18] дает возможность получать относительно чистую транспортную нуклеиновую кислоту в больших количествах. [c.365]

Книга, посвященная мембранным методам разделения ясидких систем, выходит в нашей стране впервые. В ней излагаются основы теории обратного осмоса, ультрафиль-гсрации в испарения через мембрану. Рассматривается практическое применение этих методов в химической, нефтеперерабатывающей и нефтехимической, пищевой, медицинской, микробиологической и других отраслях промышленности для разделения и концентрирования растворов, очистки промышленных стоков, опреснения морских и солоноватых вод, разделения азеотропных, близкокипящих ж нетермостойких смесей, смещения равновесия в химических реакторах, обезвоживания фруктовых и овощвых соков, молока при производстве и выделении биологически активных веществ, вакцин, вирусов, ферментов и т. д. [c.2]

Книга принадлежит перу одного из создателей современной вирусологии. Чрезвычайно сжато, но вместе с тем очень шиво и интересно автор рассматривает на основе новейших данных все аспекты науки о вирусах методы выделения и очистки вирусов и их отдельных компонентов, свойства вирусных белков и нуклеиновых кислот, связь структуры вирусных частиц и их функций, природу инфекционности вирусов, их биологию и классификацию и т. д. Книга очень хорошо иллюстрирована многочисленными микрофотографиями, схемами и графиками. [c.4]

Но в книге X. Френкель-Конрата нас привлекла прежде всего ясность, оригинальность и свежесть изложения тех вопросов, которым уделено сравнительно мало места в большинстве других, близких по теме монографий. Это вопросы выявления, выделения и очистки вирусов, химического состава и структуры целых вирионов и их компонентов, взаимного расположения этих компонентов (гл. II—VIII), а также сборки и искусственного воссоздания вирусов (гл. X). Эти главы, которые составляют большую часть книги и материал которых наиболее близок личным научным интересам автора, являются, несмотря на компактность изложения, прекрасным и почти исчерпывающим введением в общую и структурную химию вирусов. Они дают полное представление не только о составе вирусных частиц, но и о современных методах их химического, биохимического и физико-химического исследования. Многочисленные указания на возможные методические ошибки и практику проведения экспериментов делают книгу особенно ценной для начинающих научных работников. [c.6]

Для очистки вирусов используют общие методы выделения белков. Методы отделения вирусов от клеточных белков основаны, во-первых, на том, что вирусы по своей природе представляют собой обособленные частицы, а во-вторых,— на более высокой плавучей плотности вирусных частиц, обусловленной присутствием в них нуклеиновой кислоты. Однако для отделения вирусов от нуклеопротеидных частиц самой клетки, имеющих такой же состав и размеры, как и вирусная частица, требуются специальные методы. [c.33]

Получение ультрафиолетовых спектров поглощения вирусов — метод в наши дни весьма доступный, так как регистрирующие спектрофотометры имеются сейчас почти во всех лабораториях. Для регистрации спектра требуется всего лишь 0,05—0,2 мг вируса, причем материал этот может быть использован повторно. По характеру кривой поглощения можно судить о содержании в вирусе белков и нуклеиновых кислот. Отношение величины поглощения при 260 и 280 нм ( 260/ 280)1 а также отношение ыакс/ мин характеризует относительное содержание нуклеиновых кислот и белков в пробе, а отсутствие изменений в характере спектра после дальнейшей очистки и фракционирования препаратов вируса служит дополнительным указанием на чистоту выделенного вируса (см. гл. IV, разд. В). [c.48]

К числу наиболее распространенных процессов водоподготовки относится удаление взвешенных и коллоидных примесей воды. В соответствии с принципом классификации примесей воды, разработанным в Институте коллоидной химии и химии воды АН УССР, для удаления разнообразных загрязнений часто оказывается рациональным использовать приемы и способы, позволяющие трансформировать эти вещества в коллоидное или взвешенное состояние с последующим выделением их методами, характерными для гетерогенных примесей. Даже такие виды загрязнений, для которых уже сложились традиционные методы очистки, могут быть удалены более эффективно, если нх перевести в другое фазово-дисперсное состояние. Речь идет, в частности, об устойчивых формах болезнетворных организмов, а именно, о вирусах, споровых формах бактерий, тем более, что обычно применяемые способы обеззараживания воды (воздействие окислителей, излучений, ионов тяжелых металлов и др.) по отношению к ним недостаточно эффективны. [c.3]