Обнаружение аминокислот и пептидов

Наиболее общим методом определения концентрации пептидов является колориметрия продуктов реакции с нингидрином [2]. Это один из наиболее чувствительных колориметрических методов. Для обнаружения аминокислот и пептидов разработаны как обычный, так и полностью автоматизированный варианты, причем нингидриновый реагент не вызывает коррозии и его можно подавать обычным микронасосом. Реакция идет по свободным аминогруппам, но в некоторых случаях хромофор образуется с низким выходом. Данные по окрашиванию дипептидов можно найти в работе [3]. У всех дипептидов, содержащих в качестве Ы-концевой аминокислоты аргинин, треонин, серин, глутаминовую кислоту, глицин, фенилаланин, метионин, лейцин и тирозин, интенсивность окраски составляет 1,6-10 у лейцина эта величина составляет 1,7-10 . У дипептидов с М-концевым лизином и аспарагиновой кислотой интенсивность окраски несколько выше (на 20 и 29% соответственно), а дипептиды с Ы-концевым гистидином и триптофаном проявляются несколько слабее (42 и 67% соответственно от средней интенсивности). Дипептиды с М-концевым пролином, валином и изолейцином окрашиваются очень слабо [2,7 6,4 и 8,5% от средней (1,6- 10 ) интенсивности]. [c.391]

Для количественного определения аминокислот и пептидов по приведенным выше реакциям требуется колориметр или фотометр, с помощью которых обнаруживают изменения в свето-поглощении, связанные с протеканием реакций. Поскольку нингидрин наиболее широко используется для обнаружения аминокислот и белков, он послужит основой для дальнейшего обсуждения колориметра. [c.26]

Применение, В качестве реактива для флуорометрического определения первичных аминов, аминокислот, пептидов, белков [1—3] предел обнаружения составляет 1-10- моль/мл в пробе и порядка 10" моль в хроматографической системе. [c.416]

ОБНАРУЖЕНИЕ АМИНОКИСЛОТ И ПЕПТИДОВ [c.125]

Предел обнаружения от 4 до 80 нг аминокислот, пептидов и белков, от 20 до 200 нг альдегидов. [c.251]

По хим. св-вам А,-типичная алифатич. о.-аминокислота. L-A.-кодируемая аминокислота, встречается во всех организмах в своб. виде и в составе белков. D-A. обнаружен только в бактериях и в опиоидных пептидах, выделенных из кожи южноамериканских лягушек. Биосинтез L-A. происходит в результате аминирования и переаминирования пировиноградной к-ты или -декарбоксилирования аспарагиновой к-ты. [c.81]

Измерение количества выделившегося диоксида углерода служит основой количественного определения аминокислот [67, 68]. Кроме того, обнаружение и определение аминокислот, а также аминов и пептидов можно проводить по анализу окрашенного продукта [69]. [c.486]

Чувствительный метод обнаружения пептидов основан на интенсивной флуоресценции продукта конденсации первичной аминогруппы с нингидрином и фенилацетальдегидом [12]. Флуоресцентный метод в 10—100 раз чувствительнее по сравнению с колориметрическим. Важным преимуществом является также отсутствие реакции с аммиаком и более интенсивная флуоресценция пептидов по сравнению с аминокислотами при разных значениях pH. [c.395]

Ионообменная хроматография на колонках применяется в трех очень важных областях 1) для качественного и количественного аминокислотного анализа пептидов и белков, дающего ценную характеристику молекул его можно использовать Как средство обнаружения некоторых специфических различий среди белков 2) для определения аминокислотного состава биологических жидкостей, который дает не только существенную информацию о наличии свободных аминокислот, но и позволяет проследить за изменениями, происходящими в организме под воздействием многих факторов, таких, как окружающая среда, физиологическое состояние и генетическая конституция 3) для определения первичной структуры белков — чрезвычайно важной задачи биохимии сегодняшнего дня. Многие исследователи занимаются определением аминокислотной последовательности большого числа разнообразных белков. Это дает возможность установить их химическую структуру и изучить ее взаимосвязь с функцией. [c.8]

Из-за ВОЗМОЖНОСТИ протекания моноалкилирования реакция с высшими альдегидами не является достаточно общей для применения КО всем аминокислотам, несмотря на обнаруженную очень высокую летучесть N, N-диметил аминокисл от [12]. Все же упомянутая простая и специфическая реакция могла бы стать предпочтительной при выборе метода определения N-концевых аминокислот в пептидах с помощью ГХ. [c.91]

Для обнаружения аминокислот и пептидов применяют иингидрин. Сухую хроматограмму (рис. 8.40) пофужают в раствор нингидрина в ацетоне, обычно 0,2%-ный (при этом достагается однородное покрытие бумаги реагентом), сушат непродолжительное время. При комнатной температуре пятна аминокислот проявляются примерно через 1 ч, а их окраска достигает максимальной интенсивности примерно за 8 ч. Пятна пептидов обнаруживаются медленнее. Проявление ускоряется, если ф0мат0фамму нафевают при 50—60 С в сушильном шкафу. [c.336]

Масс спектры лазерной десорбционной ионизации были за регистрированы на этой системе для ряда нелетучих образ цов — аминокислот, пептидов нуклеозидов сахаридов В боль шинстве случаев предел обнаружения составлял 1 нг/ см и менее Основная трудность при работе с этой системой зак лючалась в отсутствии воспроизводимости как относительных интенсивностей пиков основных ионов так и их абсолютных интенсивностей Главный источник этих изменений — неодно родность покрытия поверхности ленты образцом примеси и фоновые загрязнения Непосредственное нанесение раствора образца на ленту с последующим испарением растворителя не дает удовлетворительных результатов так как степень смачи ва1шя ленты и движение жидкости по поверхности влияют на однородность слоя и как следствие на форму пиков [61] Для полного испарения растворителя при ограничении испаре ния образца необходим тщательный баланс между потоком растворителя и скоростью испарения [c.43]

Аминокислоты, пептиды, белки и ферменты образуют группу химически и биологически родственных соединений, которым принадлежит исключительная роль во многих жизненно важных процессах [1, 2]. Биогенная связь этих веществ подтверждается полным гидролизом белков и пептидов, которые распадаются на а-аминокарбоновые кислоты (HjN- HR- OOH). Все аминокислоты можно рассматривать как С-замещенные производные аминоуксусной кислоты. К настоящему времени из гидролизатов белков выделено более 20 аминокислот, которые по конфигурации асимметрического атома углерода принадлежат к 1-стерическому ряду, отличаясь друг от друга в основном остатками заместителей [3-5]. а-Аминокислоты, имеющие цвиттерионную природу, являются наиболее важными и многочисленными среди всех аминокислот, встречающихся в природе. Общее число а-аминокислот, идентифицированных в свободном или связанном виде из живых организмов, исчисляется сотнями, и число их увеличивается [1,2]. Все а-аминокислоты, обнаруженные в белках, за исключением глицина, хиральны [3, 6]. Больщинство других а-аминокислот, обнаруженных в природе, также имеют -конфигурацию а-углеродного атома, однако известны многие природные а-аминокислоты D-ряда [7]. D-ами-нокислоты выделены из микроорганизмов [8, 9], растений [7, 10, 11], грибов [12], насекомых [13] и морских беспозвоночных [14, 15]. Также эти кислоты найдены в белках животных [16] и в пептидах, выделенных из раковых новообразований [17]. Природные галогенированные а-аминокислоты и пептиды редко встречаются в природе, и их можно отнести к новой группе соединений [18-20]. [c.289]

Обнаружение. Просушенную, еще горячую пластинку опрыскивают 2%-ным раствором нингидрина в 95%-ном и. бутаноле, смешанном с 2 N уксусной кислотой в отношении 95 5. Отмечают пятна проявившихся при этом незамещенных аминокислот, Пептидов и хлоргидра-тов эфиров аминокислот. После этого пластинку нагревают до 120—150°Си опрыскивают насыщенным раствором бихромата калия в концентрированной серной кислоте при этом обнаруживают пятна КБО аминокислот, пептидов и пептидных эфиров (и вместе с ними — пептиды и аминокислоты с фенильными кольцами). [c.99]

Наиболее чувствительный метод обнаружения аминокислот и пептидов, ставший доступным лишь недавно, заключается в получении интенсивно флуоресцирующих производных взаимодействием с о-фталальдегидом и тиолом, в частности 2-меркаптоэтанолом [255]. Показано, что флуоресцирующее производное имеет структуру 1-алкилтио-2-замещенного изоиндола, например (217). Реак-SR 5К [c.576]

Примеры применения ТСЭ встречаются в литературе довольно редко, однако этим методом разделяли меченые аминокислоты, пептиды и нуклеотиды. В лаборатории автора методу ТСЭ отдают предпочтение перед методом электрофореза на бумаге из-за быстроты разделения и простоты проведения анализа и используют при обнаружении соединений с кислым и основным характером в смесях метаболитов пестицидов. Можно указать случай, когда без применения ТСЭ лабильную малонил-грунну в менаболитах растений обнаружить невозможно [20]. [c.138]

Чаще всего для обнаружения аминокислот и пептидов применяется нингидрин (гидрат трикетогидриндена), так как он образует окрашенные продукты. Самый простой метод обнаружения заключается в следующем. Сухую хроматограмму погружают в раствор нингидрина в ацетоне, чаще всего 0,2%-ный (при этом достигается однородное покрытие бумаги реагентом), сушат в течение непродолжительного времени и помещают в большой ящик, стенки которого опрыскивают спиртовым раствором лимонной кислоты, чтобы исключить попадание на них аммиака. При комнатной температуре пятна аминокислот обнаруживаются примерно через час, и их окраска достигает оптимальной интенсивности примерно за 8 ч. Пятна пептидов обнаруживаются медленнее, поэтому лучше всего выдержать хроматограмму в этом ящике до следующего дня. Появление цветных пятен ускоряется, если хроматограмму нагревают при 50—60 °С. [c.125]

Применение. Обнаружение первичных аминокислот, пептидов, белков [228]. Для обнаружения альдегидов наносят на пластинку пробу, сверху наносят 5 мкг анилина и элюируют соответствующнл растворителем. Детектируют разделенные компоненты, как описано выше [229]. Первичные амины дают пятна с аквамариновой или желтой флуоресценцией, для пятен вторичных аминов характерна яркая пурпурная флуоресценция с постепенным затуханием, переходящая в желтую, если обработать пластинку 5-диметиламинонафталин-1 -сульфонилхлори-дом [230]. [c.251]

Применение. Обнаружение аминокислот и пептидов. На силикагеле при комнатной температуре пятна через несколько минут исчезают, а на целлюлозе они сохраняются несколько дольше. Для обнаружения пролина пластинку нагревают при 100°С в течение часа (при этом все остальные пятна исчезают). Для обнаружения соединений с N-защищенными группами (грег-бутилокси-карбонильной, 2-фенилизопропилоксикарбоннльной и л-метоксибензоилоксикарбонильной) пластинку перед опрыскиванием сушат 2 ч при 100°С. При этом удается обнаруживать вещества, концентрация которых составляет 500 пмоль/л. [c.267]

Патаки [112, ИЗ] применил новый метод обнаружения аминокислот в систематическом анализе пептидов. Он разделял аминокислоты на силикагеле О, используя смесь н-пропапол— вода (7 3), после этого высушивал пластинки и опрыскивал их буферным раствором, содержавшим 8,4 г бикарбоната натрия и 2,5 мл 1 н. раствора гидроксида натрия в 100 мл раствора, и 10 %-ным (масса/объем) раствором динитрофторбензола в метаноле. Затем накрывал хроматограмму чистым стеклом, закреплял его двумя полосками полиэтилена, пропущенными по углам хроматограммы, очищенным от адсорбента, и нагревал ее в темноте при 40°С в течение 1 ч. Далее оп охлаждал хроматограмму и помещал ее в баню с эфиром на 10 мин. На обработанной таким образом и высушенной хроматограм. 1е можно размечать пятна. После разделения аминокислот в одном направлении и превращения их в диаминофенилпроизводпые их можно подвергнуть хроматографическому раздел.ению в другом направлении с одним из уже упоминавшихся растворителей. [c.500]

Повышенная реакционная способность нуклеотидопептидной связи, обнаруженная при гидролизе нуклеотидо-(P- -N)-аминокислот (пептидов), в условиях, когда может происходить протонизация амидного азота, указывает на то, что эти соединения могут претерпевать реакции нуклеофильного замещения у атома фосфора, связанного с аминокислотой, т. е. быть фосфорилирующими агентами. Следовательно, изучение реакционной способности нуклеотидо-(P- -N)-пептидов должно способствовать выявлению путей, по которым могут протекать превращения природных нуклеотидопептидов в химических процессах, протекающих на молекулярном уровне. [c.378]

Такой универсальный детектор, каким хотелось бы располагать исследователям, в настоящее время еще не разработан, и метод ВЭЖХ не располагает прибором, который по своим возможностям был бы эквивалентен применяемым в газовой хроматографии детекторам по теплопроводности и пламенноионизационным детекторам. В этом разделе будут описаны детекторы, наиболее широко используемые для обнаружения аминокислот и пептидов. Более подробную информацию о преимуществах, ограничениях и характеристиках различных систем обнаружения можно найти в работах [48, 49].. .... [c.43]

Для разделения смесей аминокислот, пептидов и белков Мартин и Синдж применили систему хлороформ — вода. В настоящее время большее значение имеют фенол, лг-крезол в смесях с водой и буферирующими веществами, такими, как фосфаты, аскорбиновая кислота и др. Применяют также органические основания в смесях со спиртами, водой и буферированные. Например, лутидин — этиловый спирт, лутидин — третичный амиловый спирт, лутидин — третичный амиловый спирт — вода, пиколин, коллидин, коллидин с буфером, пиридин — амиловый спирт и др. Бутиловый спирт применяют в смесях с уксусной кислотой, бензиловым спиртом, аммиаком, монохлоргидрином гликоля, третичным бутиловым спиртом и с другими веществами. Применяют также смесь метилоксида с муравьиной кислотой, смесь ацетона с водой и мочевиной. Для обнаружения аминокислот применяют обычный групповой реагент — нингидрин, позволяющий обнаруживать кроме аминокислот пептиды, белки и первичные амины. Применяют также индикаторы — органические красители, например, тропеолин 00 и орцин (реагент на сахара). [c.85]

Существенным и новым по сравнению с эмиссионными хемилюминесцентными спектрами является то, что этот метод выявляет, благодаря первичному фотовозбуждению, те элементы, которые в первом случае как бы остаются в тени. Именно так обстояло дело, как мы знаем, с обнаружением свободных радикалов при ферментативных реакциях, не обладающих без подсвечивания достаточной для митогенетического излучения энергией. Как показывает большой экспериментальный материал, селективные спектры делятся на два основных типа аддитивные и интегральные. Совокупность полос в первых является как бы суммой спектров отдельных, входящих в данную молекулу и связанных с ней функциональных групп — гидроксильной группы, карбонильной группы, аминогруппы. Аддитивные спектры характерны для открытых цепей — спиртов, жирных кислот, аминокислот, пептидов, белков. Интегральные спектры характеризуют молеьсулу как целое, они типичны для цикличесьсих и гетероциклических соединений и для некоторых простых молеьсул (гид роке ил амина, гидразина, формальдегида, муравьиной кислоты). [c.24]

Определение аминокислот всегда представляло исключительно важную задачу биохимии ввиду того, что эти соединения играют роль кирпичиков при построении пептидов и белков. Широко применяемый, основанный на ионной хроматографии и теперь уже ставший классическим метод Мура и Штейна [1] не позволяет провести различие между энантиомерами. Между тем в хиральном аминокислотном анализе ощущается явная потребность так, например, в пептидном синтезе решающее значение может иметь оптическая чистота исходного материала, а результаты стереохимического анализа могут искажаться из-за рацемизации. Другой областью применения дгырдльного аминокислотного анализа является определение строения многих микробиологических продуктов, таких как полипептидные антибиотики, в состав которых входят о-аминокислоты, не обнаруженные у млекопитающих [2]. [c.173]

Инсулин, получивший свое название от наименования панкреатических островков (лат. insula—островок), был первым белком, первичная структура которого была раскрыта в 1954 г. Ф. Сэнджером (см. главу 1). В чистом виде инсулин был получен в 1922 г. после его обнаружения в экстрактах панкреатических островков Ф. Бантингом и Ч. Бестом. Молекула инсулина, содержащая 51 аминокислотный остаток, состоит из двух полипептидных цепей, соединенных между собой в двух точках дисульфидными мостиками. Строение инсулина и его предшественника проинсулина приведено в главе 1 (см. рис. 1.14). В настоящее время принято обозначать цепью А инсулина 21-членный пептид и цепью В—пептид, содержащий 30 остатков аминокислот. Во многих лабораториях осуществлен, кроме того, химический синтез инсулина. Наиболее близким по своей структуре к инсулину человека является инсулин свиньи, у которого в цепи В вместо треонина в положении 30 содержится аланин. [c.268]

Галогенированные пептиды достаточно редки в природе. На сегодняшний день их известно не более 150 [1-3]. Ранее считалось, что пептиды, содержащие необычные аминокислоты (например, D-аминокислоты) [4-7], синтезируются исключительно микроорганизмами, однако ряд галогенированных пептидов, в составе которых присутствуют D-аминокислоты, обнаружен в некоторых морских организмах, и в частности, в г бках [1-3]. [c.308]

Белки дают ряд цветных реакций, обусловленных наличием определенных аминокислотных остатков нли общих химических группировок. Эти реакции широко используются для аналитических целей. Среди них широко известны нингидриновая реакция, позволяющая проводить количественное определение аминогрупп в белках, пептидах и аминокислотах, а также биуретовая реакция, применяемая для качественного и количественного определения белков и пептидов. (При нагревании белка или пептида, но не аминокислоты, с Си 01 в щелочном растворе образуется окрашенное в фиолетовый цвет комплексное соединение меди, количество которого можно определить спектрофотометрически.) Цветные реакции на отдельные аминокислоты используются для обнаружения пептидов, содержащих соответствующие аминокислотные остатки. Для идентификации гуанидиновой группы аргинина применяется реакция Сакагучи — при взаимодействии с а-нафтолом и гипохлоритом натрия гуанидины в щелочной среде дают красное окрашивание. Индольное кольцо триптофана может быть обнаружено реакцией Эрлиха — красно-фиолетовое окрашивание при реакции с п-диме-тиламинобенэальдегидом в Н 804. Реакция Паули позволяет выявить остатки гистидина и тирозина, которые в щелочных растворах реагируют с диазобеизолсульфокислотой, образуя производные, окрашенные в красный цвет. [c.32]

Исторический очерк. Первое производное пептида было получено синтетически в 1882 г. Т. Курциусом при обработке серебряной соли глицина бензоилхлоридом в продуктах ревкции наряду с другими соединениями был обнаружен кристаллический М-бензоилглицил-глицин. Одиако отцом пептидного синтеза считают Э. Фишера, впервые получившего в 1901 г. свободный глицилглицин при частичном гидролизе дикетопиперазинов (последние легко образуются из эфиров аминокислот). Э. Фишер первым понял значение пептидного синтеза как средства доказательства строения белка и необходимость разработки специфических методических приемов. [c.124]

По-видимому, встречающиеся в природе пептиды (но не из микроорганизмов) содержат аминокислотные остатки, принадлежащие к Ь-конфигу-рационному ряду. Так, окситоцин, который является гормоном задней Д0Ш1 гипофиза (стимулирует сокращение матки), состоит только из Ь-амино-кислотных остатков. Некоторые из аминокислотных групп, найденных в антибиотиках, имеют В-конфигурацию. Например, остаток В-фенилаланина обнаружен в грамицидине 3 (рис. 24.2). Пенициллин — второй пример пептидообразного вещества, состоящего из аминокислотных групп, среди которых имеются группы с В-конфигурацией. Это вещество можно рассматривать как производное аминокислоты, пеницилламина, который похож по структуре и на аланин, и на цистеин, но имеет В-конфигурацию. Пенициллин был первым открытым природным антибиотиком и до сих пор остается важнейшим. Это вещество в очень малых дозах тормозит рост разнообразных болезне- [c.539]

Удельное вращение плоскости поляризации света энантиоме-рами многих биологически активных молекул часто мало поляриметрические методы не всегда достаточно чувствительны, чтобы обнаружить следы изомера, сопутствующего большому избытку антипода. Такой анализ может иметь важное значение по нескольким причинам. При получении биологически активных пептидов влияние изомерных примесей кумулятивно присутствие 1% о-аминокислоты в каждой из аминокислот, вошедшей в 10-членный пептид, приведет к неактивному на 10% соединению. Другая область, представляющая значительный интерес, относится к обнаружению внеземной жизни. Уникальной особенностью макромолекул биологического происхождения является их способность различать и избирательно включать определенные оптические изомеры. Обнаружение преобладания одного оптического изомера на отдаленной планете может рассматриваться как указание на существование жизни [59]. Неудивительно, что, несмотря на трудность разделения оптических изомеров на обычных жидких фазах, ГХ уделялось значительное внимание как быстрому способу их разделения и идентификации. Особенно успешными оказались два следующих подхода (а) применение оптически активных жидких фаз и (б) введение в разделяемые соединения второго асимметрического центра. [c.96]

Пики минус 27 и 28 м. ед. обычно присутствуют в масс-спектрах а-пептидов. Их отсутствие можно использовать для обнаружения р-связи у аспарагилсодержащих пептидов и у связи у глутамилсодержащих пептидов, как это было показано Ван Хеенуртом и сотр. [25] для нескольких изомерных пар пептидных производных, содержащих дикарбоновые аминокислоты (а также р-аланиновые производные). [c.194]

Показано, что нротеолитические ферменты (трипсин, химотрипсин) могут синтезировать низкомолекулярные пептиды из эфиров аминокислот (Бреннер) или их амидов (Валей). В образовании высокомолекулярных полипептидов и белков важное значение имеет реакция энзиматического п е-репептидирования, обнаруженная Фрутоном в опытах с ка-тепсином и папаином, например [c.328]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология