Ионообменная хроматография спиртов

Растворы и проявители. Ионообменную хроматографию проводят в среде полярных растворителей, вызывающих диссоциацию исследуемых веществ на ионы. Однако ионообменный процесс можно проводить и в неводных растворителях спиртах, смесях спиртов с кето-нами и другими органическими соединениями, а такл е в смешанных растворителях органических и неорганических соединений. [c.179]

Ионообменная хроматография в спирте [1480]. [c.289]

Для тонкослойного разделения применяют адсорбционную, распределительную и ионообменную хроматографию. Выбор подходящего метода определяется в первую очередь строением анализируемых веществ. На практике чаще всего применяют адсорбционную хроматографию. Однако только в случае применения распределительной хроматографии оказалось возможным разделение гомологов высщих жирных спиртов, альдегидов и кислот. [c.115]

III. Хроматография спиртов на ионообменных смолах [c.27]

Для мясных продуктов дополнительной необходимой аминокислотой является оксипролин, который характеризует количество соединительных тканных белков в мясе. Его можно определять ионообменной хроматографией с помощью автоматических анализаторов или химическим колориметрическим методом [13, 15, 23]. Метод основан на нейтрализаиди кислотного гидролизата до pH 6,0, последующем окислении оксипролина с помощью 1,4% раствора хлорамина Т (или хлорамина Б) в смеси пропилового спирта и буфера и колориметрическом определении при 553 нм продуктов окисления оксипролина после реакщш с 10%-цым раствором шрд-диметиламинобензальдегида в смеси хлорной кислоты и пропилового спирта (1 2). [c.283]

Энергия сорбции фенолов на окиси алюминия и силикагеле является большей, чем энергия сорбции спиртов, вследствие более кислого характера фенолов по сравнению со спиртами. Важными факторами, во многом определяющими хроматографическое разделение, являются количество гидроксильных групп в молекуле фенолов, их взаимное расположение и наличие других функциональных групп. Эти свойства фенолов могут быть использованы не только в гель-хроматографии, но также в жидкостной и ионообменной хроматографии. [c.33]

Ионообменная хроматография позволила проводить адсорбцию органических катионов, нанример алкалоидов, разделение смесей кислых, нейтральных и основных аминокислот, анионов различных органических кислот, антибиотиков, очистку сахаров, углеводородов, многоатомных спиртов и антибиотиков от катионов и анионов, разделения пептидов и белковых веществ. [c.197]

В ионообменной хроматографии используются водные подвижные фазы, содержащие различные ионные компоненты, разрешение и время удерживания регулируются изменением pH и ионной силы. Чтобы снизить время удерживания сильно удерживаемых компонентов, в подвижную фазу можно добавлять небольшие количества спирта. Эффективность ионообменных колонок с поверхностно-пористыми или пленочными насадками (Я = 1—2 мм при линейной скорости подвижной фазы 1—2 м/с) меньше, чем на колонках [c.279]

В ионообменной хроматографии на катионитах в Н+-форме в большинстве случаев используют разбавленные водные растворы кислот (хлороводородной, муравьиной и др.) или кислотные буферные растворы (фосфатные, ацетатные, цитратные). Удерживание веществ при этом понижается с уменьшением pH подвижной фазы. В хроматографии на ионитах в ОН-форме, наоборот с возрастанием pH понижается удерживание подвижная фаза содержит основные буферы (фосфатные, боратные и т. п.). Если иониты используют в форме соли, что при аналитической ионообменной хроматографии бывает часто, то удерживание зависит от концентрации противоиона в подвижной фазе. Кроме буфера подвижная фаза содержит в этом случае и добавки нейтральной соли, в частности хлорида натрия или хлорида калия. Для подавления неионогенных взаимодействий разделяемых веществ с матрицей ионита иногда в подвижную фазу добавляют органические растворители, чаще всего алифатические спирты. [c.249]

Обработанную ацетоном смесь ( — 4,2 л) центрифугируют в полипропиленовых стаканах при 4500 и 2°С в течение 10 мин. Супернатант декантируют и к плотному аморфному осадку медленно приливают 525 мл холодной 4 н. бромистоводородной кислоты [5]. В процессе прибавления происходит выделение окиси азота. К раствору добавляют 6 г (18 ммоль) дигидрата бромистого бария и небольшой осадок отфильтровывают прн 0°С, после чего при той же самой температуре доводят pH фильтрата до 7,7, добавляя сухую гидроокись лития. Полученный раствор смешивают с 5 объемами холодного спирта, при этом бариевые соли выпадают в осадок. Через 1 ч их отделяют центрифугированием при 2°С и высушивают при — 25°С в вакууме над серной кислотой. Растворив сухой остаток в 100 мл 0,01 н. бромистоводородной кислоты, прибавляют 26 ммоль сульфата натрия. Осадок сульфата бария отделяют, промывают и объединенный раствор подвергают ионообменной хроматографии на колонке. [c.303]

Первыми ферментами полученными в кристаллическом виде, были уреаза (выделенная в 1926 г. Самнером) и пепсин (выделенный Нортропом в 1929 г.). Самнер и Нортроп получали ферменты в кристаллическом состоянии путем высаживания их из растворов сульфатом аммония, спиртом, ацетоном и другими химическими реагентами. В последние годы благодаря использованию новых эффективных методов очистки ферментов (электрофорез, ионообменная хроматография, противоточное распределение, гель-фильтрация) и модернизации уже известных методов их выделения и очистки удалось получить сотни химически однородных кристаллических препаратов ферментов. [c.199]

Наиболее трудоемким процессом является выделение нуклеотидов из гидролизатов и разделение смеси на индивидуальные компоненты. Для этой цели обычно применяют фракционирование металлических солей нуклеотидов (Са, Ва, Hg) экстракцию кипящей водой, кипящим этиловым спиртом, трихлоруксусной кислотой адсорбцию на животном угле ионообменную хроматографию 2,13,16-20 бумажную [c.363]

Метод ионообменной хроматографии в сочетании с электрофорезом применяется при разделении максимально очищенных смесей белков и гормонов из частично очищенных препаратов. На последней стадии очистки часто применяют метод кристаллизации. Для этого добавляют к концентрированному раствору фермента насыщенный раствор сернокислого аммония или спирт до заметного помутнения. Затем раствор оставляют стоять без помешивания несколько дней на холоде или при комнатной температуре до выпадения кристаллов. Выпавшие кристаллы отделяют и повторяют перекристаллизацию, каждый раз измеряя удельную активность фермента. Первоначально полагали, что кристаллические ферменты являются чистыми, свободными от примеси соединениями. Но вскоре было установлено, что степень чистоты многих кристаллических ферментов не превышала 50%, [c.128]

После перекристаллизации получается треонин, содержащий значительно меньше аллотреонина. Однако при проведении реакции с указанными количествами исходных веществ общий выход уменьшается до 50%. Ни этот химический метод, ни метод бумажной хроматографии не позволяет полностью разделить изомеры в случае малых количеств исходных веществ. Такие смеси можно разделить фракционированием натриевых солей [5] в растворе этилового спирта или при помощи хроматографического метода с использованием ионообменных смол (см. ниже). [c.198]

Из реакционного раствора смесь моно-, ди- и трифосфатов тиамина выделяют ацетоном или спиртом. В небольших количествах это осуществляется хроматографией на бумаге [352] ТДФ выделяется через фосфорновольфрамовую соль [337, 3401. Для больших количеств предложены методы разделения хроматографией иа крах.мале, электрофорезом на колонках с порошкообразной целлюлозой или на ионообменных смолах 1313, 314, 353—355]. [c.419]

Ч1ротеииы с помощью кислотного, основного или ферментативного гидролиза могут расщепляться на простейшие составляющие — а-ами-нокарбоновые кислоты, обычно называемые просто а-аминокислотами. Ка.чественный анализ получающихся при этом смесей аминокислот связан с относительно большими трудностями. Э. Фишер (1901 г.) обрабатывал такие смеси спиртом и разделял образующиеся в результате смеси сложных эфиров а-аминокислот дробной перегонкой. В настоящее время эти соединения разделяют и идентифицируют методами газовой хроматографии. Использование ионообменной хроматографии позволяет разделить подобные смеси без предварительной этерификации. Существуют приборы, которые автоматически проводят качественный и количественный анализ смесей такого рода. При этом первоначально а-аминокислоты разделяются на ионообменных смолах, элюаты обрабатываются нингидрином, а образующиеся синие окрашенные вещества анализируются колориметрически, кривые поглощения записываются с помоп ью самописца. [c.647]

Кислые мукогюлисахариды в соединительной ткани связаны с белка- ми (см. стр. 602), поэтому для их выделения, как правило, проводят предварительное разрушение белков протеолитическими ферментами или расщепление углевод-белковых связей щелочами, после чего полисахариды экстрагируют растворами солей . Белки, также переходящие при этом в раствор, удаляют с помощью денатурирования. Смеси мукополисахаридов можно разделить на компоненты фракционированным осаждением спиртом в виде солей с различными катионами , но лучшие результаты дает фракционированное осаждение цетавлоном или ионообменная хроматография . Особенности химического поведения мукополисахаридов сделали чрезвычайно сложной задачу установления их строения. Даже идентификация моносахаридов после полного кислотного гидролиза (обычно одна из самых простых операций) является в мукополисахаридах трудной проблемой. Наличие в одной молекуле уроновых кислот и аминосахаров приводит к тому, что полисахариды гидролизуются лишь в жестких условиях, при которых освобождающиеся уроновые кислоты подвергаются интенсивному разрушению. Поэтому в последнее время работу по установлению строения этих веществ проводят на модифицированных полисахаридах, в которых сульфатные группы удалены, а все карбоксильные группы уроновых кислот восстановлены в первичноспиртовые. Ряд других классических методов установления строения полисахаридов применим к мукополисахаридам с трудом это относится к перйодат ному окислению, вызывающему разрушение остатков уроновых кислот вследствие сверхокисления, к метилированию, в применении которого успехи достигнуты сравнительно недавно. Основными методами, позволившими выяснить строение мукополисахаридов, послужили методы частичного гидролиза и частичного ферментативного расщепления. [c.541]

Ионообменная хроматография имеет гораздо меньшее значение для разделения свободных спиртов по сравнению с другими методами хроматографии. Высаливаюш,ую хроматографию на колонке, наполненной дауэксом 1-Х8 (ЗО -), использовали для [c.27]

Альдегиды и кетоны можно разделить хроматографически, если они находятся в свободном состоянии или в виде производных. Хотя карбонильные соединения являются неионогенными, большинство исследователей для их разделения используют ионообменную хроматографию. Очень часто также необходимо решать задачи группового отделения альдегидов и кетонов от органических кислот и других веществ. Кислоты связываются количественно на колонке с сильноосновной анионообменной смолой амберлит IRA-400 (НСО ). Альдегиды и кетоны переходят в фильтрат, а кислоты затем десорбируются раствором карбоната натрия [1]. Для отделения кетонов от спиртов можно использовать количественную сорбцию кетонов на анионообменных смолах в бисульфитной форме, тогда как спирты переходят в элюат. Кетоны можно элюировать горячей водой или раствором, содержащим смесь карбоната и бикарбоната [2]. [c.49]

Большим преимуществом ионообменной хроматографии является ее доступность для любой лаборатории и сравнительная простота выполнения. Ионообменную хроматографию широко применяют в количественном анализе многих фармацевтических препаратов. В практику фармацевтического анализа вошел метод ионного обмена алкалоидов и других азотсодержащих оснований, разработанный проф. Г. А. Вайсманом и М. М. Ямпольской. Ими опубликована в 1959 году монография Применение ионообменных адсорбентов в фармацевтическом анализе . В Госфармакопее (IX издание) рекомендовано с помощью ионитов определять бромид аммония, хлорид аммония, бромид калия, иодид калия, бромид, хлорид и иодид натрия, цитрат и сульфат натрия, искусственную карловарскую соль. Количественно определяют соли алкалоидов. По Чехословацкой Фармакопеи, 80% алкалоидов рекомендовано определять с помощью анионитов. То же и для солей других органических оснований. Для анализа берут 0,1—0,2 г препарата и раствор пропускают через колонку с анионитом. Азотсодержащие основания рекомендуют элюировать 80° С этиловым спиртом. К элюату прибавляют смешанный индикатор (метиловый красныйметиловый синий) и титруют 0,1 н. раствором серной кислоты из микробюретки до появления красной окраски. [c.278]

Для разделения асфальтенов применяются коагуляционные [661, селективно-экстракционные [80], адсорбционные [81, 82] методы, гель-фильтрация [79, 83] и комбинирование последней с ионообменным разделением [Ш], ионообменная хроматография. Разделение асфальтенов на фракции, отличающиеся по молекулярной массе, содержанию гетероатомов и металлов, представляет собой трудную задачу. К настоящему времени эта задача не решена. Предложенные методы позволяют получить фракции, отличающиеся друг от друга только по одному параметру, который плохо коррелирует с другими. Так, при разделении асфальтенов, выделенных петролейиым эфиром, методом дробного осаждения смесями бензола и изооктана можно получить фракции, отличающиеся молекулярной массой и полярностью [66] с ростом концентрации изооктана осаждаются наиболее низкомолекулярные и неполярные фракции. Извлеченные нормальными углеводородами неполярные асфальтены можно в дальнейшем фракционировать неполярными растворителями [80]. Растворяющая способность в ряду петролейный эфир, н.-гептан, н.-нонан повышается, что также позволяет разделять асфальтены на ряд фракций. Диоксано-вый экстракт асфальтенов может быть разделен серным эфиром, ацетоном, этанолом и другими на ряд фракций с различным содержанием кислотных и сложноэфирных компонентов [80], причем с высокой концентрацией последних (с кислотным числом до 28 и эфирным числом до 87 мг КОН/г). При фракционировании вышеперечисленными растворителями в фракциях асфальтенов не наблюдается закономерностей в содержании кислорода, серы, азота. Аналогичные результаты были получены при осаждении фракций асфальтенов из бензольных растворов изопропиловым спиртом [84]. [c.31]

Первые препараты сывороточного трансферрина были получены по методу Кон [16], а также фракционированием с помощью сульфата аммония в сочетании с осаждением этанолом [1]. Впо--следствии стали использовать ионообменную хроматографию, которая проще и, вероятно, мягче, чем методы, в которых используется спирт [17]. Последнее замечание, по-видимому, имеет некоторое значение, так как Шэйд [18] указывал, что некоторые препараты трансферрина могут быть физиологически неактивны, хотя их способность связывать железо остается неизменной. Самой главной проблемой при очистке трансферрина было отделение его от связанного с гемом сывороточного белка, гемопексина. Кристаллизацию сывороточного трансферрина проводили следующим образом постепенно добавляли спирт к концентрированному раствору белка [19] с одновременной диффузией спирта в раствор белка во время его концентрирования в аппарате для ультрафильтрации [20] кристаллы были также выделены из концентрированных растворов при низкой ионной силе и низких значениях pH [13]. [c.333]

В ряде случаев, как, например, при обработке La toba illus arabinosus 17-5 [26], одновременно извлекаются и тейхоевая кислота И полисахарид. Тейхоевую кислоту очищают фракционным осаждением. При добавлении к экстракту двух объемов холодного спирта тейхоевая кислота осаждается в виде слизи, прилипающей к стенкам колбы. После декантации раствора добавляют спирт, что вызывает затвердевание осадка. Твердый продукт соскабливают со стенок колбы стеклянной палочкой. Тейхоевую кислоту можно также отделить от полисахарида, используя ионообменную хроматографию. При этом необходимость в осаждении спиртом отпадает. ТХУ удаляют экстракцией раствора эфиром, водный слой нейтрализуют и наносят на колонку (см. далее). [c.132]

Методы ионообменной хроматографии обеспечивают во многих случаях разделение сложных смесей биохимически важных веществ аминокислот, производных нуклеиновых кислот, сахаров, фосфатов сахаров, органических кислот, различных спиртов, очи стку антител, предотвращают свертывание крови. [c.274]

О, Ь-N-Meтилвaлин применяется в синтезах пептидов и депсипептидов. В литературе описан метод получения метил-валина из рацемической а-бромизовалернановой кислоты и метиламина в водном растворе [1] или в избытке жидкого метиламина [2]. В данной работе использован метод с жидким метиламином 2], а для выделения продукта применен метод ионообменной колоночной хроматографии, что позволило устранить на стадии очистки абсолютный спирт и получить ко нечный продукт без примеси брома. [c.118]

КИПЯТЯТ С обратным холодильником в течеиие 24 час. на паровой бане. Минеральную кислоту удаляют в вакууме, причем последние следы ее удаляют, добавляя к остатку четыре порции воды по 60 мл. Оставшуюся хлористоводородную соль кислоты (примечание 4) растворяют в нескольких миллилитрах воды, и равные порции пропускают через 2 колонки (200 X 15 мм), содержащие 60 мл ионообменной смолы дауэкс-50 в Н-форме. Колонки промывают 300 мл воды и затем элюируют 300 мл 2 н. раствора гидроокиси аммония и промывают 800 мл воды. Элюаты и промывные воды объединяют и упаривают досуха, а остаток перекристаллизовывают из водного спирта. Маточные жидкости после получения второй порции валина упаривают досуха, а остаток возгоняют в вакууме, получая в результате третью порцию валина. Выход очищенного вещества 1,196 г, что в расчете на цианистый калий составляет 51,4 /о. Анализы, проведенные методами двухмерной бумажной хроматографии и радиоаутографии, свидетельствуют о том, что полученное вещество гомогенно (примечание 5). [c.200]

В работе Гросса [5] описано получение S-этил-1-С -/-гомоци-стеина из йодистого этила-1- и 8-бензил-/-гомоцистеина. Исходное вещество (1,14 г), полученное из метионина через 8-бен-зил- /-гомоцистеин [6] и Ы-ацетил-5-бензил- /-гомоцистеин [7], восстанавливают металлическим натрием в жидком аммиаке, и образовавшийся меркаптид обрабатывают 0,63 г йодистого этила-ЬС Прибор для проведения реакции представляет собой модификацию прибора, о котором идет речь в примечании 2. Вещество, оставшееся после испарения аммиака, растворяют в воде, и полученный раствор подкисляют соляной кислотой до pH 1—2, затем этот раствор пропускают через колонку [8] (высота 2,5 м, диаметр 22 см), наполненную ионообменной смолой дауэкс-50 (степень сшивания 8%) с величиной зерен 200—400 меш. Фракции, содержащие продукт реакции, полученные при элюировании 2,5 н, соляной кислотой, объединяют и испаряют при пониженном давлении. Остаток растворяют в воде и с помощью раствора едкого натра создают среду с pH 6,2. Для очистки вещество сублимируют при температуре 180—200° и давлении 1 мм рт. ст. Выход 0,400 г (60%),[а]д + 23°, концентрация 1% в 2 н. растворе соляной кислоты. Методом бумажной хроматографии в системе бутиловый спирт — вода— уксусная кислота (10 5 2) или в системе третичный амиловый спирт — вода — пиридин (7 6 8) при температуре 22—25° на бумаге ватман № 4 показано, что вещество состоит из свободной аминокислоты и радиохимических примесей RjSi,61 и 0,61 соответственно. [c.218]

К 3 Л1У1 0,5 М эфирного раствора алюмогидрнда лития [I] прибавляют при перемешивании раствор 0,022 г амида пировино-градной-2- кислоты в 10 мл абсолютного эфира с такой скоростью, чтобы поддерживалось слабое кипение с обратным холодильником. Смесь нагревают с обратным холодильником в течение 4 час., выдерживают в течение ночи, концентрируют до объема 3—5 мл, затем обрабатывают 10 мл безводного хлороформа и вновь испаряют. Смесь нагревают с обратным холодильником в течение 4—5 час. с 0,6—0,7 мл хлорокиси фосфора в 10 мл хлороформа, затем выдерживают в течение ночи и разбавляют 15 Л1Л воды. Хлороформ испаряют на паровой бане, нагревают водный раствор при 100° в течение 2 час. (примечание 2), охлаждают и с помощью 10 н. раствора едкого кали доводят pH среды до 7. Раствор нагревают при перемешивании при 100° в течение 5 мин. с 12—14 мл 1 /М раствора ацетата бария (примечание 3). Фосфат бария отделяют центрифугированием и пять раз промывают водой (порциями по 25 Л1уг) (примечание 4). Промывные воды объединяют и пропускают раствор через колонку (высота 20 см, диаметр 2 см) с ионообменной смолой дауэкс-50 (Н-форма), которую затем пять раз промывают водой (порциями по 10 мл). Элюат объединяют и концентрируют в вакууме при комнатной температуре до объема 5 ма (примечание 5) и очищают продукт реакции методом двухмерной нисходящей хроматографии на бумаге (примечание 6), причем в качестве растворителей используют следующие смеси изопропиловый спирт — концентрированный раствор аммиака — насыщенный водный раствор версена (6 2) изопропиловый спирт — насыщенный водный раствор версена — 2 М раствор хлоруксусной кислоты (7 2 1). Общий выход продукта 25—39% в расчете на амид пировииоградной кислоты (примечание 7). [c.544]

Наиболее удобный и чаще всего использующийся метод концентрирования кобальта (а иногда одновременно и его отделения от мешающих элементов) заключается в извлечении дитизоната кобальта хлороформом или четыреххлористым углеродом [403, 422, 438, 491—493, 496, 652, 827, 1037, 1267, 1369, 1389, 1464] или эфиром [1092]. Применяется и экстракция диэтилдитиокарбамината [1185, 1186], пирролидиндитиокарбамината (637, 1365] или нитрозонафтолатов 428, 575, 1138] кобальта толуолом, изоамилацетатом и другими органическими растворителями. Роданидные комплексы кобальта экстрагируют амиловым спиртом и диэтиловым эфиром [538]. Кобальт осаждают 8-оксихинолином [1294] или рубеановодородной кислотой 184]. Из других методов концентрирования и разделения следует упомянуть ионообменные методы, основанные на поглощении хлоридного комплекса кобальта анионитом [796, 1378, 1407], и методы хроматографии на бумаге [491, 493, [c.209]