Плазма, получение сыворотки

Кровяная плазма, полученная по описанной выше методике, представляет собой жидкость, слегка окрашенную каротиноидамн, и содержит следующие белки альбумины (растворимы в 5%-ном солевом растворе), липопротеины, фибриноген и протромбин. Из цельной крови без защитных добавок при стоянии через несколько минут выделяются хлопья в результате превращения растворимого глобулярного фибриногена в н< растворимый нитевидный белок—фибрин, нити которого образуют ячеистую структуру сгустков. Это превращение происходит под влиянием протромбина и ионов кальция. Центрифугирование свернувшейся крови приводит к отделению смеси фибрина и красных кровяных тел. Надосадочная жидкость представляет собой кровяную сыворотку, которая отличается от плазмы тем, что не содержит фибриногена. Витамин К является антигеморрагическим агентом, так как он снижает концентрацию протромбина. Цитрат и гепарин предупреждают свертыванис крови, связывая ионы кальция. [c.670]

Первые попытки разделения белков плазмы были основаны на фракционном осаждении их сульфатом аммония или спиртом. Фибриноген легко может быть получен методом высаливания. Электрофоретический анализ кровяной сыворотки показывает наличие в ней четырех основных фракций, названных альбумином и а-, р- и Y- Глoбyл и нa-ми. С улучшением техники разделения было показано, что эти фракции являются не индивидуальными белками, а группами белков, обладающими одинаковылш подвижностями. Дальнейшие успехи, достигнутые в период второй мировой войны Коном и Эдсоллом , были стимулированы большим спросом на пла шу, необходимую для предотвращения шока, зависящего от поддержания осмотического давления белками сыворотки. Цельная плазма содержит протеолитические ферменты, которые в большой мере расщепляют белки плазмы, поэтому получение белковой фракции крови в сухом виде сулило большие преимущества. [c.670]

Кровь, лишенная клеточных элементов, называется плазмой. В плазме содержится фибриноген, приводящий к образованию во всем объеме пробирки сгустка фибрина, который осторожно удаляется центрифугированием при 1000—2000 об/мин в течение 15 мин. Плазма, лишенная фибрина, называется сывороткой. Для удаления белков системы комплемента сыворотку прогревают в течение, 30 мин при 56°С, при этом антитела сохраняют свою активность. Обработку крови и получение сыворотки надо проводить с максимальной осторожностью, избегая разрушения (гемолиза) эритроцитов. Наличие внутриклеточных белков и ферментов в сы-, воротке может приводить к появлению дополнительного фона в некоторых модификациях иммуноферментного анализа. Это замечание касается прежде всего использования антисывороток в гомогенных методах. [c.153]

Было изучено влияние на результаты анализа различных способов получения плазмы. Данные, полученные при анализе тироксина, приведены в табл. 20-5. Содержание тироксина определяли в образцах сыворотки и плазмы, полученных на основе четырех различных препаратов крови. При этом не было обнаружено существенных различий между результатами определения тироксина в сыворотке и различных вариантах [c.310]

Сравнение полученных кривых с калибровочной кривой в буфере показывает, что и плазма, и сыворотка обладают ингибирующим эффектом на связывание опиатов, однако у плазмы он выражен слабее. В этой связи для дальнейшего анализа использована плазма крови. [c.528]

Производные, полученные из экстрактов биоматериалов, имеют значительно меньшую полярность компонентов, что позволяет существенно изменить время их выхода и отделить от общей массы полярных соединений. Большинство реактивов, применяемых для модификации, реагирует с полярными группами образца, уменьшая его полярность. Уменьшение полярности полученных производных дает возможность применять адсорбционную хроматографию, а не обращенно-фазную, и легко отделить вещество от не вступивших в реакцию соединений. Полученные менее полярные производные экстрагируют и вводят в хроматограф. Таким образом очищают сложные загрязненные образцы фармацевтических или сельскохозяйственных препаратов, а также биохимические субстраты мочу, плазму, сыворотку, кровь. [c.68]

В данные подсубпозиции включаются "нормальные" сыворотки, плазма, фибриноген, фибрин и, при условии, что он приготовлен для терапевтических или профилактических целей, также включается альбумин крови (например, полученный разделением плазмы человеческой крови). [c.254]

Раствор наливают в пробирку и дают ему охладиться полученную цилиндрическую отливку разрезают на тонкие круглые пластинки, которые и служат в качестве ультрафильтров. Еще лучше готовить ультрафильтры, выливая раствор на кусок плоского стекла, плавающего на поверхности ртути, и вырезая круглые пластинки из полученной пленки. После сборки фильтра (или фильтров) с помощью пипетки с длинным концом вводят внутрь верхней трубки непосредственно на мембрану приблизительно 0,1 мл сыворотки или плазмы крови. Фильтровальную трубку, содержащую кровь, соединяют резиновой трубкой с большой плотно закрытой бутылью, которая сообщается с водопроводным краном и снабжена манометром. Наливают воду в бутыль до тех пор, пока давление, измеряемое манометром, не достигнет 150— 200 мм рт. ст. Если система герметична, то через некоторое время ниже мембраны можно собрать требуемое количество фильтрата. Иногда в месте соединения двух трубок, из которых состоит ультрафильтр, может иметь место небольшое подтекание воздуха. В этом случае место соединения следует замазать с наружной 12 [c.179]

Лабораторные животные являются донорами, у которых систематически берут кровь для получения сыворотки, плазмы, эритроцитов, лейкоцитов, необходимых при постановке многих серологических реакций п для приготовления кровяных питательных сред. Лабораторные животные служат также для диагностики некоторых инфекционнь х заболеваний, моделирования экспериментальных острых и хронических инфекционных процессов, установления вирулентности и токси-генности изучаемых штаммов микробов, определения активности приготовленных вакцин и исследования их на безвредность. [c.81]

Одним нз основных объектов хрОхматографии на бумаге явились с самого начала различные аминокислоты, пептиды и белки. На примере разделения аминокислот была разработана техника распределительной хроматографии отбор проб для анализа, получение и проявление хроматограммы, состав растворителей, и установлена определенная зависимость между структурой аминокислоты и их хроматографическими характеристиками при различном химическом составе и соотношении растворителей в их смеси. Было изучено разделение различных производственных аминокислот, комплексных соединений с катионами металлов, определение аминокислот в микробиологическом материале, после гидролиза, в растительном материале, в тканях животных, в крови, плазме, сыворотке крови, кровяных тельцах, моче, лимфе, эксудатах, спинномозговой жидкости, жидкости глазной камеры, желудочном соке, сперме, молоке, в органах, мускулах, в насекомых, животных, хромозомах, нуклеопротеинах, гисто-нах, протаминах, кератине, при различиях в группах крови и в других объектах. Хроматография помогла также при изучении энзиматических реакций и метаболизма аминокислот, галогени-рованных аминокислот и в других случаях. [c.202]

Белки кровяной плазмы. Получение и свойства белков сыворотки и плазмы. XXIX. Выделение из плазмы человеческой крови полисахаридов, пептидов и низкомолекулярных белков [503]. [c.270]

Автор данной статьи предпринял опыты с целью получения изотермы Фрейндлиха, отвечающей процессу удаления кальция из сыворотки. Было использовано несколько обменпиков, включая амберлит Ш-100, т. е. обменник, примененный в опытах Квика. Исследования показали, что невозможно полностью удалить кальций далее при больших количествах адсорбентов. Следовательно, в данные, полученные Квиком, следует ввести поправку на остаточное количество кальция в плазме, полученной в результате обмена. [c.296]

Получение сыворотки с низкими концентрациями TSH представляет собой сложную проблему, поскольку ее получают только от больных, страдающих определенными видами тиреоидной аденомы. В гораздо больших количествах такую сыворотку можно получить от здоровых людей, у которых их собственная тиреоидная функция была подавлена введением Тз в течение нескольких дней. Последние разработки предлагают еще более простой способ получения матрикса путем обработки уже непригодной для клинического применения плазмы из банка крови с помощью лектинов, которые адсорбируют эндогенный TSH. В настоящее время проводятся совместные эксперименты с первыми двумя типами сывороток. Полученные результаты и выводы будут представлены в Экспертный комитет ВОЗ по биологической стандартизации. [c.29]

Сбор плазмы позволяет получать большие объемы с меньшим гемолизом. Большие объемы плазмы у овец и других крупных животных лучше получать с помощью мешочков для переливания крови с антикоагулянтом, которые можно заполнять в асептических условиях. Для малых объемов крови цитрат (3,8%) или ЭДТА (2%) добавляют в шприц или бутыль в объеме 10%. Шприцы и флаконы с антикоагулянтом необходимо охладить на льду. Немедленно после взятия крови ее центрифугируют (2500 об/мин, 4 °С, 20 мин), предварительно охладив ротор. Для получения сыворотки к плазме добавляют 2 1мл 10%-ного безводного СаСЬ на каждые 10 мл цитрата или 1,6 >мл 2%)-ного раствора хлорида кальция на [c.91]

Исходным материалом для получения анти-1Шо(.0)-1д является сыворотка или плазма крови, содержащая неполные анти-НЬо(О)-антителав вы,соком>титре сыворотка ИЬ(-)лиЦ, сенсибилизированных К D-изоантигену во время предшествующих беременностей. Rh( + ) пл"одом или в резу тате переливания iUi( + ) крови. Однако более стабильные и высококачественные препараты получают в случае использования сыворотки или плазмы крови рт специально иммунизирование доноров (например, Rh-отрицательных женщин нёдеторрдйо р зраста)./ j Г [c.596]

Аналитическое применение катионоселективных стеклянных электродов поражает своим размахом и многогранностью. Эти электроды используют для потенциометрических титрований, исследования коэффициентов активности, измерений констант равновесия, непрерывного анализа и изучения кинетики процессов. Доступность стеклянных электродов и совершенство конструкции специальных миниатюрных и проточных электродов для определения натрия и калия, имеющих большую физиологическую важность, способствуют особо ценному применению этих электродов в медико-биологическом анализе. С их помощью можно измерять активности ионов натрия и калия в моче, сыворотке, спинномозговой жидкости, крови, плазме, желчи, коре головного мозга, почечных канальцах, мышечных тканях. Во многих случаях правильность результатов сравнима (если не лучше) с правильностью результатов, полученных методом пламенной фотометрии при этом измерения со стеклянным электродом подчас можно выполнить быстрее. Для экспрессного диагноза кистофиброза поджелудочной железы, для которого характерны аномально высокий уровень концентраций натрия в поту, определяют активность иона натрия на поверхности кожи. Можно привести многочисленные примеры применения натрий- или калийселектив-ных стеклянных электродов для анализа воды и экстрактов почв. Поскольку в будущем число катионоселективных стеклянных электродов будет, без сомнения, увеличиваться, следует ожидать и появления новых областей их применения. [c.382]

В этом методе, как и в приведенных выше методах, используется геометрический ряд разведений фермента. В качестве раствора тромбина служит свежая сыворотка крови, а раствором фибриногена служит инактивированная нагреванием свежая -магнезиальная плазма. Для получения такой плазмы 3 мл све-жевыпущенной крови смешивают с 1 мл 28%-ного раствора сернокислою магния и центрифугируют. Прозрачную плазму отбирают пипеткой и помещают на 30 мин в термостат при 50—60°С. Для определений употребляют такую плазму, разведенную в пять раз. [c.71]

П. получают по методу Пиллемера из сыворотки крови путем адсорбции его зимозаном. Другой снособ получения П. из плазмы крови разработан Ротштейном и Пеннелом (1957) П. выделяют из 1 фракции белков плазмы путем ее фракционирования. При этом получают высокоочищенный препарат с активностью до 2000 единиц на мг белка. [c.177]

При скорости протекамия 2 мл/см мин ионная сила сыворотки снижалась до 0,001 и осадок глобулина быстро пропускался через колонну осадок отделялся от этих протеинов при ионной силе 0,001 центрифугированием. Несомненно, что подбором объема ионита, скорости протекания или устройство.м специальных колонн можно добиться разделения глобулинов ионитами. 95—98%-ный выход протеина был получен при промывании ко-лонлы объемом жидкости, равным 10% объема сыворотки для извлечения 10% протеинов, адсорбированных ионитом. Работа с колоннами, видимо, будет иметь ряд преимуществ, заключающихся в легкости получения альбумина из сыворотки и минимальном количестве как ионообменных операций, так и центрифугирований. Электрофоретическим и серологическим испытанием, а также определением растворимости протеинов, выделенных фракционированием на ионитах, не обнаружено потери биологической активности. Фракционирование плазмы ионитами будет особенно применимо в лабораториях госпиталей, так как [c.617]

О п р е д е л е н и е предложено для сыворотки или плазмы. В 3 колбочкп ЭрлекМсйера прпбавляю о очереди в колбочку А — 1,0 мл сыворотки или плазмы и 10 мг порошка уриказы (осторожно встряхивая, добиваются равномерного распределения порошка в сыворотке), в колбочку Б — 1,0 мл сыворотки или плазмы, в колбочку В— 1,0 мл НгО и 10 мг уриказы. Последнее определение делается для внесения поправки на ури-казу. Для каждого образца уриказы делают несколько определений, а дальше пользуются полученной таким образом средней поправкой. Колбочки А я Б ставят в термостат при 37° на [c.141]

Хотя в табл. 10 эритроциты группы крови О обозначены как не имеющие антигена, это не совсем так. Они обладают антигенами, относящимися к другим системам групп крови, которые будут обсуждаться ниже, а также имеют антиген, связанный с системой ABO. В плазме человека ангглютинин к этому антигену содержится не всегда иногда он встречается в плазме лиц, кровь которых принадлежит к подгруппе AjB, и в нормальной сыворотке некоторых животных. Этот агглютинин обнаружен в сыворотке некоторых угрей, чаще европейских, чем американских, а также может быть получен при иммунизации коз бациллой Шига. Все эти источники мало доступны, а полученные таким путем агглютинины всегда слабы и ненадежны. Поэтому важную роль в дальнейшей разработке методики определения крови сыграло открытие того, что солевые экстракты семян некоторых растений (например, Ulex europeas, дикорастущее растение из Западной и Южной Европы и Северной Африки) содержат агглютинин, специфически реагирующий с антигеном эритроцитов группы О [4,9]. Этот растительный агглютинин заменил в данном случае все другие реактивы. [c.69]

Данные, полученные на сыворотке человека, нельзя целиком переносить на сыворотку других животных. У разных видов животных содержание в сыворотке альбуминов и различных типов глобулинов колеблется в широких пределах [45]. Отмечены также и возрастные особенности. Плазма новорожденных животных, как правило, содержит мало глобулинов так, например, в плазме новорожденного жеребенка содержится 3,7% белка, причем на долю альбумина приходится 65%, л-глобулина — 32%, Р-глобулина — 3%, у Глобулина — 0%. Плазма же 10-летней лошади содержит 7% белка, из которого на долю альбумина приходится 30%, -глобулина—11%, р-глобулина—12% и у-глобулина — 47%. Приведенные цифры показывают, что в плазме новорожденного жеребенка совершенно нет углобули-нов, а содержание а- и Р-глобулинов значительно меньше, чем в плазме взрослой лошади [46]. Плазма новорожденного кролика содержит только 0,2 /о глобулинов и 4,8% альбумина [47]. [c.180]

Иониты применяются для хроматографического разделения и очистки многих биологически активных протеинов. Однако для получения протеинов плазмы разработано только два основных способа, в которых разделение или очистка более или менее связаны с ионообменом и доведены до близкой к производству стадии. По методу Кона разделение протеинов ведется осаждением или экстракцией растворами ионов тяжелых металлов иониты применяются во вторичном цикле для удаления или замены ионов или адсорбции некоторых протеинов. По методу Рейда и Джонса [70] на ионитах осуществляется разделение групп протеинов, которые в дальнейшем выделяются или очищаются химическим способом. Иониты не являются существенным элементом, но могут быть использованы при работе по методу Кона, в котором осаждение тяжелыми металлами проводится в этаноловом растворителе. Гордон с сотрудниками [25] скомбинировали основные детали методов для успешного получения очищенного альбумина сыворотки человека из плардентарной ткани. [c.606]

Существуют различные методы выделения брадикинина из продуктов расщепления белков плазмы трипсином или змеиным ядом и его очистки, разработанные в различных лабораториях. Методика, применявшаяся Эллиоттом и сотр. [661, 666, 668, 669], заключалась в обработке фракционированной смеси белков из сыворотки быка 0,1 и. соляной кислотой при 37° (для инактивации ферментов, разрушающих брадикинин) и в последующей их инкубации с трипсином в течение 6 час. Полученную смесь осаждали спиртом, а из фракции, растворимой в 74%-ном спирте, чистый брадикинин удалось выделить с помощью противоточного распределения, хроматографии на, карбоксиметилцеллюлозе (ацетатно-аммониевый буферный раствор pH 6,5 и 5) и электрофореза. Сначала на основании неточных данных аминокислотного анализа считали, что брадикинин имеет следующий аминокислотный состав Ser Gly Pro Phe Arg= 1 1 2 2 2. Результаты кислотного гидролиза, расщепления химотрипсином и разложения по методу Эдмана позволили приписать бради-кинину следующую структуру [c.105]

Сыворотки являются жидкими фракциями, отделенными от крови после свертывания. Данная товарная позиция включает, inter alia, следующие препараты, полученные на основе крови "нормальные" сыворотки, человеческий нормальный иммуноглобулин, плазму, тромбин, фибриноген, фибрин и другие кровяные коагулирующие факторы, глобулины крови, сывороточные глобулины и гемоглобин. В эту товарную позицию также входит альбумин крови (например, человеческий альбумин, полученный фракционированием плазмы цельной человеческой крови), предназначенный для использования в терапевтических и профилактических целях. [c.252]

Ход определения. В пробирку с пришлифованной пробкой переносят 1 мл сыворотки или -плазмы, добавляют 5 мл экстрагирующей смеси, тщательно встряхивают I—2 минуты. При этом смесь осаждает белки, а гептам извлекает жирные кислоты. К полученной смеси добавляют еще 2 мл гептана и 3 мл дистиллированной воды и хорошо перемешивают, поворачивая пробирку то вниз, то вверх (3 минуты). После 10-минутного стояния ясно видна граница между нижним и верхним (гептановым) слоем, в котором растворены жирные кислоты. Пипеткой осторожно набирают 2 мл гептанового слоя в пробирку, содержащую 1 мл рабочего раствора индикатора тимолового синего. Пробу титруют 0,018 н. рас- [c.75]

Чрезвычайно трудно сравнивать данные, полученные в конце XIX и начале XX столетия, а также в течение последующих тридцати лет, с данными, полученными при исследовании (-кислого гликопротеина в настоящее время. Это объясняется различием в методах выделения гликопротеинов, так как в некоторых случаях даже трудно установить, какое количество чистого гликопротеипа содержали ранее изученные препараты. Некоторые из ранних работ были проведены с белками, которые не коагулировались нагреванием, в то время как другие исследователи имели дело с гликопротеинами, соосажденными с альбумином. Необходимо также помнить, что хотя из всех гликонротеинов сыворотки крови человека а -кис-лый гликопротеин имеет самое высокое содержание углеводов, входящие в него углеводы составляют только 5—10% общего количества углеводных компонентов, связанных с белками крови. Наиболее резкое различие между ранее выделенными фракциями гликонротеинов и тем веществом, которое мы теперь называем а -кислым гликопротеином, обнаруживается при обработке этих препаратов щелочью. Фракции, полученные ранее, легко расщеплялись щелочью на углеводную и белковую части, тогда как сс -кислый гликопротеин очень устойчив к нагреванию в растворе щелочи. В связи с тем что в болео поздних работах было показано сходство углеводных ком понентов всех гликонротеинов плазмы человека, сведения, касающиеся [c.67]

Уже в течение многих лет известно, что при фракционировании сыворотки крови сульфатом аммония выделяются фракции глобулинов с постепенно увеличивающимся содержанием углеводов [21]. Винцлеру и сотр. [3] с помощью осаждения белков сернокислым аммонием из фильтрата, полученного после обработки плазмы хлорной кислотой, удалось получить фракции, имеющие низкую изоэлектрическую точку, содержащие 15,1% углеводов (определено орциновым методом) и 11,9% гексозамина. Однако эти фракции были все еще гетерогенны. [c.70]

Полученные колебания объясняются неспецифическим действием электролитов на активность группировок железа и белка, а также специфическим химическим взаимодействием между белком и ионами среды. В плазме здоровых людей трансферрин насыщен железом примерно на одну треть, у больных гемохроматозом — полностью [32]. Средняя концентрация железа в сыворотке здоровых мужчин около 120 л1кз/100 мл, у женщин эта величина несколько ниже. Общая способность связывать железо у взрослых составляет примерно 315 лекз/ЮО мл, половые различия при этом не обнаружены. У новорожденных эта способность несколько ниже — 226 л4Кз/100 мл [33]. [c.121]

Скиталось, что многие фракции, выделенные из сыворотки, являлись результатом изменения сыворотки в процессе их выделе-ВИЯ. Хотя работы с ультрацентрифугой и дали много ценных сведений (см. т. II, гл. XX) относительно природы сыворотки и ее белков в нормальных и патологических условиях, лишь Тизелиусу удалось найти простой и точный метод разделения и отбора фракций сыворотки. Тизелиус обнаружил, что необработанная человеческая сыворотка без добавления осаждающих солей начинает разделяться в электрическом поле на четыре компонента. Было найдено, что наиболее быстрый из этих компонентов является альбумином, а три более медленных компонента соответственно а-, р- и 7- глобулинами. Фибриноген появляется в плазме между 8- и 7- глобулинами. Было обнаружено, что сыворотки ряда животных дают похожие, хотя и специфические, электрофоретические изображения [39, 40]. После электрофоретического выделения отдельные компоненты сыворотки при повторном измерении проявляют те же электрические подвижности, которые были обнаружены и в. цельной сыворотке. Это является важным доказательством того, что в сыворотке находятся индивидуальные компоненты и что сыворотка не является равновесной смесью компонентов. Невозможно, однако, переоценить значение состава буферного растворителя для получаемых электрофоретических изображений, так как число, относительная величина и подвижность компонентов, а также контуры и симметричность изображений возрастающих и убывающих границ являются функцией применяемого электролита. На рис. 168 представлены результаты электрофоретического анализа фракций, полученных из патологической и нормальной сывороток. Фильтрат после добавления 13,5% сульфата натрия представляет собой фракцию, полученную после удаления эуглобина, 17,4%-ный фильтрат—фракцию лосле удаления псевдоглобулина I, 21,5%-ный фильтрат—фракцию после удаления всех белков за исключением альбумина. Значительные количества а-и р-глобулина остаются с альбумином. Подобг яые же результаты были получены Коном и другими исследователями [42] при применении различных солей. Мур и Линн [43] определили соотношения альбумина и глобулина А С для 25 [c.375]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология