Белки, определение общего азота

Определение общего азота методом дистилляции. Общий азот в таких сложных веществах, как белки, можно определить нагреванием с серной кислотой в присутствии сульфата ртути в качестве катализатора, последующей дистилляцией с паром и определением аммиака реактивом Несслера. Ион двухвалентной ртути восстанавливают до ртути добавлением цинковой пыли перед дистилляцией при этом разрушается ртутно-аммонийный комплекс и освобождается весь аммиак. [c.109]

Б. Определение общего азота и влажности в белке [c.212]

Метод. Образец белка оставляют на воздухе в весовой комнате в течение 12 час., чтобы установилось равновесие с окружающей атмосферой. Затем отбираются две пробы, одна для определения влажности и другая для определения общего азота. [c.213]

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОБЩЕГО АЗОТА БЕЛКА [c.213]

Для количественного определения белка используют колориметрические и спектрофотометрические методы, в некоторых случаях пользуются определением белка по содержанию общего азота в препарате. [c.29]

III. Определение белка по содержанию общего азота [c.33]

Определение белка по содержанию общего азота основано на том, что содержание азота в большинстве белков практически одинаково и может быть принято равным 16 %. В том случае, если лекарственный препарат, кроме белка, содержит другие вещества, в состав которых входит азот, белок предварительно осаждают трихлоруксусной или хлорной кислотой. При нагревании органического соединения с концентрированной серной кислотой происходит его минерализация, азот превращается в аммония сульфат, и его можно определить количественно. [c.33]

Боллинг и Блок советуют, наряду с определением каждой аминокислоты, проводить контрольный анализ. Контроль проводится на смеси диаминокислот, гликоколя, других аминокислот и углеводов. Смесь составлена приблизительно в том же соотношении оснований к общему азоту, как и в исследуемом белке. Это позволяет установить общие потери применительно к каждому препарату белка. Некоторые полученные при этом данные суммированы ниже. [c.35]

Определение количества каждого из этих азотистых веществ в отдельности весьма важно при изучении обмена белков. Однако ввиду сложности подобного анализа в клинике ограничиваются обычно определением общего и остаточного азота в сыворотке крови. [c.166]

Определение общего количества белков в молоке сводится к определению в точно взятой навеске молока азота по Кьельдалю (стр. 167). Полученную цифру общего азота умножают на коэфициент 6,45 (принимая содержание азота в белках молока равным 15,5% и считая весь азот принадлежащим белку) и в итоге получают количество белков [c.319]

Анализ белков.— Белки обычно гидролизуют кипячением с 20%-ной соляной кислотой или 35%-иой серной кислотой. Щелочной гидролиз сопровождается глубокой рацемизацией и применяется только при определении триптофана и тирозина, чувствительных к минеральным кислотам. Ферментативный гидролиз протекает медленно и, вероятно, не полностью, однако он не осложняется деструкцией лабильных продуктов, образующихся при гидролизе. Если аспарагиновая и глутаминовая кислоты присутствуют в белке в виде амидов, то кислотный гидролиз превращает амидный азот в соответствующие аммонийные соли. Методом Кьельдаля определяют количество общего азота содержание амидного азота устанавливают подщелачиванием аликвотной порции и отгонкой аммиака в отмеренный объем титрованной кислоты. В этом случае количество аммиака соответствует количеству присутствующих в белке амидов дикарбоновых аминокислот. [c.640]

Образцы муки весом 10—20 г (в зависимости от содержания белков) насыпают в коническую колбу, заливают 100—200 мл боратного буфера (pH 10,0), в который добавляют 0,2% бисульфита натрия, колбу взбалтывают на механической мешалке в течение 1 часа и затем выдерживают 15—18 часов в холодильнике при 0°. Далее содержимое колбы центрифугируют в течение 5— 10 минут при 3—4 тыс. об/мин, жидкость над осадком сливают в мерную колбу емкостью 500 мл, осадок из пробирок переносят в коническую колбу, пробирки смывают буферным раствором, содержащим бисульфит, и в колбу добавляют этот же раствор до объема 100— 120 мл. Колбу взбалтывают в течение 30—40 минут и снова центрифугируют. Раствор белков сливают в ту же мерную колбу. Такую экстракцию повторяют 4—5 раз до исчезновения реакции на белок с реактивом Фолина. Раствор в колбе доводят до 500 мл и из нее берут 20 мл для определения содержания общего азота. При анализах семян злаков в экстракт должно переходить не менее 85%) азота муки, а при анализах семян бобовых и масличных культур — не менее 90—95%. [c.48]

Содержание сырого протеина (общего белка) в дрожжах во всех странах определяют по методу Кьельдаля или по одной из многих его модификаций. Наиболее распространенная пропись метода Кьельдаля приводится ниже. Метод основан на определении количества азота, содержащегося в белке дрожжей. Дрожжи обрабатывают серной кислотой при нагревании в присутствии сернокислой меди в качестве катализатора и сернокислого натрия как водоотнимающего вещества. Органические вещества окисляются до углекислого газа и воды. Азот, освобождающийся при разрушении органических веществ, восстанавливается до аммиака, который связывается серной кислотой в сернокислый аммоний. Реакции продолжаются более 16 ч. Образовавшийся сернокислый аммоний разлагают щелочью, выделяется аммиак, который отгоняют в титрованный раствор серной кислоты (или в раствор борной кислоты), и ее избыток оттитровывают раствором щелочи. Содержание сырого протеина в дрожжах находят как произведение количества азота, найденного в аммиаке, умноженное на эмпирический коэффициент 6,25. [c.227]

Определение общего количества белка, альбумина и глобулина в сыворотке крови [7]. Прежде всего определяется общее содержание белка, так как для определения альбумина и глобулина используется определенным образом разбавленный раствор. Осаждение общего белка производится смесью насыщенного раствора сульфата калия и натрия и раствора таннина, содержащего уксусную кислоту. В осадке определяют азот по Кьельдалю. Глобулин осаждают в отдельной пробе сульфатом аммония, а в фильтрате от осадка глобулина—альбумин смесью сульфата калия-натрия и таннина. Последний осадок взвешивают и количество глобулина вычисляют по разности между весом общего белка и альбумина. [c.357]

Между содержанием белкового, общего азота и углеводами существует определенная зависимость. Начиная с фазы трех пар листьев до фазы цветения содержание углеводов резко возрастает, а количество белкового азота снижается. Однако по некоторым формам азотных удобрений такой зависимости между белками и углеводами не наблюдается. [c.152]

Осн. работы относятся к теории р-ров. Разработал (1903) общий метод синтеза аминокислот и метод колич. определения аминного азота. Выполнил цикл работ по определению концентрации водородных ионов в водных р-рах. Ввел (1909) понятие водородного показателя (pH). Показал (1909) зависимость активности ферментов от величины pH. Разработал стандартные р-ры для приготовления буферных смесей с известными pH. Изучал природу р-ров белков как системы [c.406]

В случае преобладания углеводных компонентов разложение аминокислот нри гидролизе происходит в большей степени. Некоторые группоспецифические гликопептиды крови, содержащие 7—15% белка, были гидролизованы перед аминокислотным анализом в кипящей 6 н. соляной кислоте при не указанном, но, вероятно, низком разбавлении [73]. Расчет выхода азота показал, что только 69—91% азота, определенного по методу Кьельдаля, обнаруживается в аминокислотах и гексозаминах. Амидный азот не определяли, но даже если принять, что все кислотные группировки боковых аминокислотных цепей существуют в виде амидных групп, выход общего азота был бы лишь немного больше (71—94%). Хотя не исключено, что в веществах присутствовали неизвестные азотистые составляющие (сиаловые кислоты не обнару кены), весьма вероятно, что в условиях гидролиза произошло значительное разложение аминокислот. [c.134]

Принцип метода. Методы определения белкового азота включают выделение белка из общей растительной массы. Для этого белок [c.362]

Определение общего азота в различных биологических объектах. Метод Коха — Мак-Микина был применен для определения азота в разнообразных биологических материалах, например аминокислотах, пиримидинах, пуринах, нуклеиновой кислоте, креатине, витаминах и аналогичных веществах, в экстрактах из нормальной мышцы и опухоли, а также в очищенных диализом белках. [c.113]

Количественное определение белков производят, как правило, определением общего азота по Кьельдалю. Исходным веществом в этом анализе могут служить осадки белков, полученные при номощи описанных выше осаждающих реактивов. Свободные ННа-группы белка определяются методом Ван-Слейка (см. Аминокислоты ). [c.442]

Обычно начинают с определения общего азота, т. е. всей суммы азота, содержащегося во всех азотистых веществах. Затем в другой порции сыворотки тем или иным способом осаждают белки. В безбелковомфиль-трате вновь определяют азот, содержащийся в небелковых азотистых веществах. В отличие от общего азота этот азот называют остаточным азотом , т. е. азотом веществ, оставшихся в растворе после осаждения белков. [c.166]

Прямые методы. 1. Сырую биомассу определяют после осаждения клеток центрифугированием. После центрифугирования отмытых клеток можно определить сухую массу. Оба метода не свободны от довольно больших систематических ошибок. 2. Гораздо большую точность обеспечивает определение общего азота (метод микро-Кьельдаля и микродиффузионный метод определения аммиака), а также определение общего содержания углерода (по ван Слай-ку-Фолчу). 3. В повседневной практике часто определяют содержание бактериального белка. Хорошие результаты дают модификации биуретового метода и другж колориметрические методы. Микрометоды основаны на измерении количества характерных компонентов белка тирозина, триптофана (по Лоури или Фолину). [c.192]

В моче, не содержащей белка или освобожденной от него обработкой по одному из указанных способов, или же если можно (нужно) определить азот, не разделяя его на белковый и безбелковый, определение общего азота производится либо по способу Къельдаля, либо по полумикрометоду Къельдаля. Последний, как более удобный, здесь и приводится. [c.172]

Для определения общего азота в белке предлагалось большое число способов, основанных на применении в качестве катализаторов меди, селена или ртути. Повторные исследования были проведены Тристрамом и Троттером [316], которые установили следующее [c.213]

Методы, основанные на анализе составных частей молекул белка, включают определение элементов азота и углерода, некоторых аминокислот, например тирозина, биуретовой и фор1-мольной группировок. Отдельные белки могут быть иногда определены по специальным группам, например по железу в гемоглобине [2, 3] или иоду в тиро-глобулине. Все эти методы требуют, чтобы определяемая составная часть находилась в испытуемом образце исключительно в белковой части. Поэтому белок должен быть отделен от всех других органических веществ и карбонатов, если он определяется по углеродному составу, и от всех других азотсодержащих составных частей, если основой анализа является метод Кьельдаля. Обычная практика анализа кормов и овощей на белки на основании определения общего азота в этом отношении всегда внушает сомнения. Наличие алкалоидов, аминокислот или других азотсодержащих веществ в таких веществах достаточно вероятно, хотя, как правило, их количества малы по сравнению с содержанием белка. Вследствие изменчивости свойств различных белков нет общих методов их выделения из сложных смесей. В хорошо изученных системах могут применяться специальные методы выделения. [c.15]

В аффинной хроматографии и твердофазном секвенсировании часто бывает необходимо определить количество белка, связанного с инертной матрицей, такой, как агароза, декстраны и целлюлоза. В принципе это может быть сделано гидролизом образца с последующим определением общего азота, но в матрицу может быть включен небелковый азот, например когда исполь- [c.313]

Существенным моментом при проведении полного гидролиза белков является определение его конца. Обычно конец гидролиза устанавливают по прекращению нарастания аминного азота (определяемого методом ван Сляйка) и выражают его в процентах от количества общего азота. Эта величина не достигает 100%, если белок содержит аминокислоты, в которых азот находится не только в виде а-аминного, например, содержит аргинин, гистидин, пролин и т. д. [c.478]

О больших возможностях применения автоанализаторов в хроматографическом лабораторном анализе свидетельствует также сообщение фирмы Техникон [49], описывающее автоанализатор, который может применяться для определения 1) общего азота, по Кьельдалю 2) общего белка с помощью биуретовой реакции 3) общего белка, по Фолину (Лоури) 4) аминогрупп с нингидрином 5) тирозина, по Фолину 6) гистидина, по Паули [c.179]

О больших возможностях применения автоанализаторов в хроматографическом лабораторном анализе свидетельствует также сообщение фирмы Техникон [49], описывающее автоанализатор, который может применяться для определения 1) общего азота, по Кьельдалю 2) общего белка с помощью биуретовой реакции 3) общего белка, по Фолину (Лоури) 4) аминогрупп с ниигидрином 5) тирозина, по Фолипу 6) гистидина, по Паули 7) аргинина, но Сакагучи 8) глутаминовой кислоты с декарбоксилазой 9) лизина с декарбоксилазой 10) альбумина с помощью 2(4 -оксифенил) бензойной кислоты. В сообщении указывается, что эти виды анализа могут быть сменены один на другой в течение 20 мин и при добавлении в автоанализатор стандартных модулей (блоков) могут одновременно проводиться несколько видов анализа. [c.179]

Далее была разработана методика количественного определения дикетопиперазинов в нативных белках [13]. При этом было установлено, что желатина содержит наибольшее количество циклических форм. В табл. 18 приведены данные об относительном количестве циклических и цепочечных форм связи в процентах к общему азоту белка для желатины. [c.86]

В связи с переводом на тетраплоидный уровень многих форм гороха небезынтересно было выяснить наличие возможности и перспектив для селекции тетраплоидов на повышенное содержание белка. Определение содержания общего азота у 22 форм, относящихся к трем хозяйственно-ценным видам, показало, что во всех без исключения случаях у полиплоидов наблюдается возрастание процентного содержания общего белка от незначительного (0,57) до существенного (4,47) (табл. 4). Причем во всех случаях наблюдается достаточно высокая и достоверная степень различий между диплоидами и тетраплоидами по содержанию сырого протеина. Эти различия еще бопее существенны при ont>-ставлении диплоидного и тетраплоидного линейного материала. Некого рые линии тетраплоидов превосходили лучшие дшхлоидные тех же исходных форм на 5,0-5,5 и даже 6,1% сырого белка. [c.205]

Для определения баланса азота какой-либо экосистемы приведенных данных недостаточно. Необходимо учитывать также импортируемое или экспортируемое количество азота. Так, Европа импортирует белок в виде растениеводческой продукции в количестве, превышающем общее потребление растительных белков в таких районах, как Индия или Африка. Следовательно, нарушение экологического равновесия в Европе возможно значительно саньше, чем в других районах. Поэтому усилия на- [c.12]

Тогда в случае необходимости можно было бы просто выразить остатки аминокислоты (а-аминоазот) в виде доли от общего количества аминокислотных остатков белка (общий а-аминоазот). Последний может быть определен с помощью метода нингидрин — СОг (исправленного на аспарагиновую кислоту) или методом Чибнела [176] (по разности определяемого общего азота и не-а-аминоазота), или другими подходящими методами (формольное титрование с поправкой и пр.). [c.61]

Точное вычисление результатов анализа и их выражение в подходящих единицах не менее важны, чем тщательный выбор и выполнение самого экспериментального метода. Контроль полноты возврата общего азота, исходя из известного содержания азота в разных компонентах (см. стр. 133), как описано в классической работе Чибнелла [115], все еще остается лучшей гарантией правильности выполнения анализа белка в целом [6]. Несмотря на это, результаты определения отдельных аминокислот, выраженные в единицах азота, весьма неудобны и могут вводить в заблуждение в случае основных аминокислот. [c.150]

Общее количество азота гликопротеина представляет собой несколько более определенный способ оценки содержания в нем белка, чем реакция с нингидрином. Неопределенность, связанная с количеством общего азота самого белка, несколько меньше, чем в нингидриновом методе. Для белков часто принимают значение 16% азота, что соответствует коэффициенту пересчета азота в белок, равному 6,25. Хотя содержание азота в белках, не связанных с углеводами и липидами, существенно отклоняется от этой средней величины как в одну, так и в другую сторону, крайними значениями, вероятно, являются 15,0 и 18,6% (см. также [118]). Хашимото и Пигман [122] для белковых частей гликопротеинов подчелюстной и нодъязыч- [c.151]

Точные данные о содержании амидного азота в белках необходимы при определении в них общего азота и при изучении вопроса о том, не являются ли различия в содержании амидного азота причиной электрофоретической гетерогенности белков, как это показано для желатина [1] и предполагается для у-глобулина [2]. Для установления тонкой структуры гликопротеинов [3] очень существенно точное онределение амидного азота, но при выполнении такого анализа в этой группе веществ встречаются значительные трудности. Во-первых, при действии кислот, применяемых для освобождения амидного азота в виде аммиака из остатков аспарагиновой и глутаминовой кислот белковой части, будут образовываться, по крайней мере частично, 2-ацетамидо-2-дезоксигексозы. Свободные гексозамины, образующиеся при деацетилпровапии, являются потенциальным источником аммиака в условиях его отгонки из щелочного раствора. Во-вторых, известно, что сиаловые кислоты, обычные компоненты гетеросахаридов гликонротеинов, даже в мягких кислотных условиях расщепляются с выделением части их азота в виде аммиака [4]. [c.159]

Определение общего белка. В настоящем справочнике под словом белок понимается количество общего азота, определенного по Кьель-далю, умноженное на соответствующий коэффициент пересчета, указанный в таблицах. Следует иметь в виду, что метод Кьельдаля позволяет вьщелять азот в виде аммиака только из аминов и их производных. Некоторые азотсодержащие соединения (нитро-, нитрозо-, азо-соеди-нения и др.) в этих условиях образуют наряду с аммиаком также молекулярный азот, что приводит к получению заниженных данных [22]. Действительно, определение азота по методу Дюма, который не обладает подобным недостатком в некоторых пищевых продуктах, даст завышенные на 1—5% данные по общему азоту по сравнению с методом Кьельдаля. [c.281]

Следует, однако, принять во внимание, что оценка степени очистки вируса по отношению к общему азоту или белку не всегда достоверна. Так, при опредеяении азота по методу Кьельдаля гетероциклические азотсодержащие вещества трудно минерализуются. Ошибка при определении азота увеличится если на одном из этапов очистки применяли высаливание сульфатом аммония даже с последующим диализом препарата. Метод определения белка по Лоури 513] также имеет свои недостатки, так как для построения калибровочного графика должен быть использован белок данного вируса, а не какой-либо другой. [c.149]