Зоны на ацетате целлюлозы

Использование в качестве носителей ацетата целлюлозы и полиакриламидных гелей — более чистых и однородных хроматографических материалов, минимально адсорбирующих исследуемое вещество, привело к уменьшению размывания зон и возможности более быстрого разделения микроколичеств веществ. Описаны методики разделения кислых полисахаридов на ацетате целлюлозы [c.226]

Электрофоретические методы, отличные от описанных в данной книге, не нашли широкого применения для разделения меченых соединений. При разделениях смесей белков, пептидов и нуклеотидов в качестве носителя вместо бумаги лучше использовать ацетат целлюлозы, на котором указанные соединения практически не сорбируются. Такая замена позволяет получить четкие зоны при разделении, однако низкая емкость ацетата целлюлозы делает его пригодным лишь для аналитических разделений. [c.155]

Процесс получения ацетатов целлюлозы непрерывным способом (рис. 53) ведется на ленточном транспортере, представляющем собой стальную перфорированную ленту, заключенную в герметический кожух. Рабочая ветвь ленты проходит через несколько зон в последовательно установленных ваннах для активации целлюлозы и ее жидкостной обработки. Внутри каждой зоны, под лентой, установлены поддоны для сбора стекающей жидкости, которая через патрубки соответствующими насосами подается в емкости для последующего использования. [c.334]

Существенный недостаток этого процесса в отсутствии герметичности отдельных зон, что приводит к смешению паров различных компонентов и, как следствие, к ухудшению качества получаемых ацетатов целлюлозы и увеличению расхода сырья. Для ликвидации недостатка предложена усовершенствованная схема получения ацетатов целлюлозы по гетерогенному методу непрерывным способом. Суть этой схемы в том, что все стадии процесса проходят в самостоятельных аппаратах, расположенных последовательно и представляющих общий поток. Аппараты отделены друг от друга герметизирующими устройствами, которые представляют собой цилиндрическую камеру с перфорированными стенками и плунжером. Плунжерные герметизирующие устройства предназначены для отжатия жидкой фазы при переходе из одной зоны в другую. [c.334]

После электрофореза полоски пленки помещают во влажную камеру. Для этой цели удобно использовать плоскую пластмассовую коробку с плотно прилегающей крышкой. Пленку кладут на подложку из фильтровальной бумаги с прямоугольной прорезью так, чтобы с подложкой соприкасались только края пленки. Подложки можно изготавливать, например, из нескольких слоев фильтровальной бумаги ватман № 3. Крышку коробки следует выстлать поролоновой губкой, которую увлажняют, чтобы во время иммунодиффузии в камере поддерживалась влажная атмосфера. Подложки также смачивают раствором электролита, используемым для пропитывания пленок. Полоски фильтровальной бумаги (ватман № I) шириной 1—2 мм пропитывают антисывороткой, проводя по ним пастеровской пипеткой, которую держат в вертикальном положении. Оптимальное количество антисыворотки и расстояние между полоской с антисывороткой и образцом подбирают эмпирическим путем. Если полоска содержит только часть необходимого количества антисыворотки, то остальной объем наносят уже после того, как полоску помещают на пленку. Оптимальное время диффузии следует определять в предварительных опытах как правило, для этого требуется 18—48 ч. Линии преципитации не видны на пленках и обнаружить их можно только после окрашивания. С этой целью избыток белка удаляют путем промывания пленки солевым раствором в течение нескольких часов, после чего преципитаты можно окрасить так же, как зоны, получаемые при электрофорезе на ацетате целлюлозы. Лучше всего пользоваться водорастворимыми красителями (пунцовый 5 или нигрозин). [c.245]

Аналогичное уравнение было получено и в работе . Рассматривая зависимость газопроницаемости от молекулярной массы полимера, можно, по аналогии с температурой стеклования, предполагать, что в области высоких значений молекулярной массы, газопроницаемость не будет зависеть от молекулярной массы, так как область зоны активации при элементарном акте диффузии, или иначе размеры кинетического сегмента, значительно меньше длины молекулы полимера. Действител ьно, на примере пленок, изготовленных на основе фракционированного ацетата целлюлозы, было показано что изменение молекулярной массы ацетата целлюлозы в пределах 17 500—52 500 не сказывается на значении водородопроницаемости. В дальнейшем независимость коэффициентов газопроницаемости полимеров от молекулярной массы была подтверждена результатами испытаний пленок из фракций полистирола (9500—110 000) и полиизобутилена (35 000—274 000) . В последующем было отмечено что газопроницаемость высокополимеров, а также соответствующие энергии активации процесса проницаемости не зависят от молекулярной массы полимера. Так, Хейс и Парк установили, что при диффузии бензола в каучук, молекулярная масса которого изменяется в пределах 3,5-10 — 3,3 10 коэффициент диффузии сохраняет постоянное значение. [c.84]

При таком двумерном разделении фракция сывороточных белков дает не менее 12 зон. Их расположение на пластинке указывает на то, что при проведении электрофореза эффект молекулярных сит фактически отсутствует. Аномальная миграция при электрофорезе наблюдается лишь в случае а-макроглобу-лина, что может быть обусловлено тормозящим влиянием сетки геля. Вергани и сотр. [25] модифицировали методику путем проведения электрофореза на мембранах из ацетата целлюлозы. Таким способом удалось избежать тормозящего влияния геля на г-макроглобулин и другие высокомолекулярные белки. [c.269]

Из этой группы материалов наиболее распространены ацетат целлюлозы и ацетобутират целлюлозы, которые без особых сложностей перерабатываются на экструдерах обычной коиструкции с отношанием LjD, равным 15 1 или выше. Для их переработки применяются червяки, имеющие торпедообразный наконечник, а также червяки с короткой зоной сжатия. Трудности при экструзии возникают в связи с тем, что эти материалы, в частности ацетат целлюлозы, абсорбируют влагу из воздуха. Поэтому необходимо применять устройства для их предварительной подсушки или дегазирующие экст- [c.146]

Одним из недостатков бумаги является заметная адсорбция и денатурация белков на ней. Практически это явление всегда в той или иной мере имеет место. В этом отношении многообещающим является сравнительно новый листовой материал — пористая ацетат-целлюлозная пленка, применяемая обычно для изготовления мембранных фильтров. Начало применению этого материала было положено Коном в 1957 г. Сейчас некоторые фирмы производят листы довольно больших размеров (36x5 сж), хотя можно работать и с меньшими листками. Толщина листка такова (около 0,1 мм), что позволяет работать лишь с малыми количествами вещества (около 0,1—20 мкл раствора, содержащего 5— 500 мкг белка). Было показано, что адсорбция белка крайне мала, разделение обычно очень хорошее даже для тех белков, которые сильно адсорбируются на бумаге (инсулин, лизоцим). После окрашивания зон, погрузив листок в жидкость с показателем преломления, близким к 1,474, можно сделать его полностью прозрачным как для видимого света, так и для ультрафиолета, что облегчает количественный анализ. Подробное описание методики работы с ацетатом целлюлозы можно найти в работе [35]. [c.93]

Подача раствора ацетата целлюлозы к свечевым фильтрам каждого рабочего места осуществляется от общего вала индивидуальными шестеренчатыми насосами. Раствор подвергается последней фильтрации на свечевых фильтрах и подается в прядильную головку к фильерам. Вытекающий из фильер раствор в шахте превращается в волокна. Прядильные головки снабжены подогревателями раствора ацетилцеллюлозы, обогреваемыми горячей водой. Для подогрева воды на обслуживающих площадках на каждые 2 прядильные машины установлен 1 теплообменник и 2 центробежных насоса. В шахте машины предусматривается жесткий температурный режим формования волокна, для чего в нижнюю часть шахты подается горячий воздух противотоком движению нити. Нагрев воздуха осуществляется в калориферах, расположенных на обслугкивающих площадках прядильных машин. Испарившийся из волокна ацетон смешивается с горячим воздухом и в виде газовоздушной смеси отсасывается из верхней зоны шахты па установку рекуперации. Сформованная нить из шахты подвергается замасливанию безводным замасливателем, после чего подвергается крутке и намотке на конические бобины, насаженные на кольцевые электроверетена с частотой вращения 8000 об/мин. Масса нити на бобине — 850 г. [c.324]

Ацетилирование ведется ацетилирующей смесью, содержащей уксусный ангидрид, бензол, уксусную кислоту и хлорную кислоту. Смесь орошает активированную целлюлозу. Количество жидкости, уносимой с волокном из одной зоны в другую, регулируется отжимными приспособлениями 8. Температурный режим регулируется циркуляцией смеси при помощи насоса 7 через выносные теплообменники 6. В зоне 9 проходит нейтрализация хлорной кислоты раствором ацетата натрия или калия в водной уксусной кислоте. В зонах 10—13 отработанную ацетилирующую смесь удаляют промывкой бензолом, который затем удаляется в зоне 14 промывкой водой. В зоне 15 проводится частичное омыление триацетата целлюлозы раствором азотной кислоты. В зонах 16—20 проходит промывка омыленного ацетата целлюлозы водой, и отжатый продукт поступает на сушку. [c.334]

Оксид алюминия — ацетат целлюлозы (2 1) элюент, состоящий из циклогексана, насыщенного Н,Ы-диметилформами-дом и затем эфиром, разбавленным циклогексаном (первое направление) М,К-диметилформамид — вода (3 1), насыщенные эфиром (второе направление). С помощью этой методики можно выделить, а затем идентифицировать и количественно оценить на спектрофотофлуориметре содержание дибенз [а,е] пирена, встречающихся в воздухе городов. Методику, описанную в разд. 5.8.1.12, использовали для разделения фракции веществ, растворимых в бензоле, проводя определение со стандартом. Вещества из зон с соответствующими Rf экстрагировали и разделяли по методике, описанной в разд. 5.8.1.14. На рис. 5.4 представлена типичная хроматограмма, полученная по методике, описанной в разд. 5.8.1.13. Ее можно сравнить с хроматограммой на рис. 5.5, полученной в результате разделения, описанного в этом разделе. Насыщение элюента Н,Ы-диметилформамидом при разделении в первом направлении приводит к существенному изменению результатов [21]. [c.204]

Носителями в данном случае чаще всего служат ацетат целлюлозы [26] и гели агарозы [4]. Разрешающая способность таких систем очень низка из-за чрезмерного диффузионного размывания зон. Применение в качестве носителя крахмального или полиакриламидного геля значительно повышает разрешающую способность прежде всего благодаря молекулярно-ситовому эффекту. Иммуноэлектрофорез [56] является одной из разновидностей зонного электрофореза при постоянном значении pH после разделения белки диффундируют навстречу специфическим антителам и их взаимодействие приводит к образованию дуг иммунопреципитации. Полуколичественную оценку каждого антигенного компонента можно выполнить методом электроиммунодиффузии [57]. После разделения методом зонного электрофореза антигенные белки электрофоретически мигрируют в направлении, перпендикулярном прежнему пути, в гель, содержащий равномерно распределенные антитела. Высота образующихся пиков преципитации является мерой относительной концентрации белков в смеси. [c.120]

Зонный электрофорез предполагает использование неподвижного носителя, по поверхности или через объем которого осуществляется миграция ионов. Носители могут применяться в виде полос (например, бумаги), колонок, дисков, тонких слоев и т. д. Для зонного электрофореза чаще всего используют фильтровальные бумаги (Ватман № 1 и № ЗММ), а также ацетат целлюлозы, гели агара, крахмала и полиакриламида 24, 25]. Электрофорез осуществляется под действием электрических полей низкого (<1000 В) и высокого (от 1000 до 10000 В) напряжения. При непрерывном электрофорезе (препаративный метод с использованием низкого напряжении) образец непрерывно подается на носитель (чаще всего бумага Ватман № ЗММ или Шлейхер-Шюлль 2230). Электрофорез с высоким напряжением электрического поля проводят, как правило, на бумаге этот метод дает хорошие результаты при анализе аминокислот и других небольших молекул и непригоден для анализа больших молекул. [c.403]

Самый простой способ обеспечения стабильности электрофоретических зон заключается в том, что в среду для электрофореза вводят вещества, образующие капиллярную структуру. Ан-тиконвекционные свойства такой системы весьма высоки, если площадь поперечного сечения капилляров достаточно мала, так как в канале круглого сечения скорость потока снижается пропорционально четвертой степени радиуса. В качестве поддерживающей среды чаще всего используются фильтровальная бумага, пленки из ацетата целлюлозы, колонки или блоки целлюлозного порошка, гранулированный крахмал или гранулы поливиниловых полимеров, а также агаровый, агарозный, крахмальный или полиакриламидный гели. Зональный электрофорез в поддерживающей среде имеет ряд важных преимуществ. При его проведении можно использовать какой-либо простой и сравнительно недорогой прибор и анализировать одновременно несколько различных препаратов. Процедуры визуализации зон и выделения фракций осуществляются довольно легко. Вещества, обладающие биологической активностью, можно выявить непосредственно на электрофореграммах. Метод легко приспособить как для крупномасштабного разделения веществ, так и для микроразделения. Удается достигнуть очень высокой разрешающей силы, особенно в среде, характеризующейся одновременно антикон векционными свойствами и эффектом молекулярного сита. [c.34]

НОЙ пластинке подходящего размера помещают в электрофоретическую камеру. Концы блока соединяют с электродными сосудами при помощи фитилей из фильтровальной бумаги. Для получения стартовой зоны на поверхности блока по линейке выдавливают булавкой ряд канавок. Необходимо следить за тем, чтобы случайно не проткнуть блок насквозь. Кончик булавки следует погружать не глубже чем на 2 мм при толщине блока 2,5 мм. Если разделяемые вещества бесцветны, то положение полученных фракций определяют при помощи реплики, которую делают, осторожно прижимая к поверхности блока пропитанную буфером и наполовину высушенную полоску тонкого целлогеля или ацетата целлюлозы. Затем полоску быстро окрашивают, пока электрофорез в блоке еще продолжается. Если положение фракций на ней можно выявить, электрофоретическое разделение прекращают и блок разрезают на сегменты в соответствии с обнаруженной картиной. Разделенные вещества можно получить, отжимая эти сегменты в пресс-шприце (фирма СЬете1гоп, Италия) или в обычном шприце. Согласно проспекту фирмы-изготовителя, в бло ке целлогеля толщиной 2,5 мм можно фракционировать 0,25—0,4 мл сыворотки крови или 0,1 мл 3%-ного гемолизата эритроцитов. [c.45]

Как уже отмечалось, ацетат целлюлозы является вполне подходящей средой для иммунопреципитации, поэтому его можно использовать также для электроиммуноанализа и в меньшей степени для перекрестного иммуноэлектрофореза. Существенное различие между ацетатом целлюлозы и агарозой состоит в том, что в первом практически отсутствует электроэндосмос. В результате при pH 8,6 большинство антител будет двигаться в электрическом поле к аноду. При анализе антигенов, подвижность которых лишь ненамного превышает подвижность антител, последние будут мигрировать в сторону, противоположную от зоны нанесения антигенов, что приведет к образованию пиков преципитации, лишенных базовой линии. Чтобы свести к минимуму подвижность антител, необходимо снизить pH буферного раствора. Электроиммуноанализ альбумина был осуществлен при pH 6,5 [717], а лактоферрина — при pH 7,4 [1125]. Белки сыворотки крови, обладающие подвижностью ог и ог-глобули-нов, удалось успешно разделить при pH 8,6, но для разделения трансферрина и иммуноглобулинов пришлось снизить pH до 7,4. [c.262]

При количественной оценке разделенных фракций, окрашенных амидовым черным 10 В, возникает ряд трудностей. Различные белки связывают неодинаковые количества красителя [1240], поэтому калибровочные кривые приходится строить для каждого компонента разделяемой смеси. При использовании бумаги в качестве носителя адсорбция красителя на волокнах целлюлозы может приводить к неравномерному окрашиванию зон и возникновению более высокого фона [330]. После электрофореза на пленках из ацетата целлюлозы были обнаружены отклонения от линейной зависимости между площадью пиков на денситограмме и количеством нанесенного белка [367]. В случае электрофореза в гелях площадь пиков на денситограмме зависит не только от количества нанесенных белков, но и от длины пройденного ими пути [283, 383] (см. рис. 71). [c.267]

Белки после электрофореза на бумаге или ацетате целлюлозы окрашивают также бромкрезоловым зеленым (0,2%-ный раствор в этаноле, содержащем 2% ледяной уксусной кислоты). Обесцвечивание фона проводят в 2%-ной уксусной кислоте. После обесцвечивания и высушивания электрофореграммы помещают в пары аммиака. Синняя окраска медленно исчезает [336]. Уэбстер и др., [1381] исследовали возможность применения этого красителя для определения сывороточного альбумина после электрофореза на ацетате целлюлозы. Для количественной оценки окрашенную зону альбумина элюируют 3%-ным (объем/объем) раствором детергента Teepol 610. Элюция занимает всего несколько минут. Количество альбумина определяют по оптической плотности при 520 им. Было изучено также взаимодействие выделенных фракций глобулинов сыворотки с бромкрезоловым зеленым, [1381]. [c.272]

Пунцовый S также относится к широко распространенным красителям. Особенно часто его применяют после электрофореза на ацетате целлюлозы. Белки можно окрашивать 0,15— 0,20%-ным раствором пунцового S в 3%- Ной ТХУ. Для этой процедуры вполне достаточно 5 мин. После промывания электрофореграмм 5%-ной уксусной кислотой на светлом фоне проявляются четкие полосы, [251, 694]. Краситель экстрагируют из окрашенных зон 0,4 М NaOH или вероналовым буфером. [c.273]

Электрофорез на ацетате целлюлозы служит простым и вместе с тем чувствительным способом обнаружения аномальных видов гемоглобина. Наиболее подходящей буферной системой является смесь трис-борная кислота-ЭДТА (pH 8,4) [816, 1141, 1224]. Для качественных анализов можно использовать микрометоды. Электрофореграммы анализируют либо без применения красителей, либо после их окрашивания общими белковыми красителями или с помощью пероксидазы. Последний метод, очевидно, более специфичен, так как выявляет только те белки, которые содержат гем. Шнейдер [1141] рекомендует двукратное окрашивание сначала пунцовым S, а затем раствором бензидина, содержащим нитропруссид натрия (дает синюю окраску). Если при электрофорезе необходимо определить содержание минорного (т. е. имеющегося в незначительном количестве) компонента, например гемоглобина Аг, то наиболее надежный метод состоит в том, что на пленку наносят относительно большое (точно определенное) количество образца, элюируют соответствующие зоны электрофореграммы без ее предварительного окрашивания и проводят фотометрическое измерение [1141]. При денситометрическом сканировании окра- [c.321]

Дальнейшее повышение разрешения обеспечивает двухмерный электрофорез. Описано множество различных комбинаций, таких, например, как электрофорез на фильтровальной бумаге в первом направлении и электрофорез в крахмальном геле — во втором [1031] электрофорез на ацетате целлюлозы в первом направлении и ИЭФ — во втором [944] ИЭФ на первом этапе и электрофорез в полиакриламидном геле — на втором [270, 1127]. Самые лучшие результаты получают при использовании на первом этапе электрофореза в мягких полиакриламидных гелях или ИЭФ, а на втором — электрофореза в градиенте концентрации полиакриламидного геля. Таким путем Райт [1452] изучал белковый состав нормальных сывороток и сывороток больных с некоторыми видами злокачественных опухолей (рис. 103). Основные классы иммуноглобулинов давали при этом дискретные зоны. Постальбуминовая зона разделялась [c.333]

В случае гиперлипемий типа 1П при электрофорезе в полиакриламидном геле нельзя обнаружить выраженной зоны р-ли-попротеидов, тогда как при электрофорезе тех же образцов на бумаге, ацетате целлюлозы или в агарозном геле ясно видна [c.357]

Ньютон и др. [924] предложили следующий метод. После окончания электрофореза лист ацетата целлюлозы погружают в раствор, содержащий 0,2% алцианового синего, 0,05 М МдС1г и 0,025 М ацетат натрия (pH 5,8) в смеси равных объемов этанола и воды, и оставляют на 30 мин при комнатной температуре. Затем лист промывают три раза в том же растворе, но без красителя. Из еще влажной пленки вырезают окрашенные в синий цвет зоны и перед каждой зоной вырезают соответствующие контрольные участки ацетата целлюлозы. Вырезанные участки растворяют в диметилсульфоксиде, содержащем 0,025 М Mg l2 и 0,025 М ацетат натрия (pH 5,8), встряхивая их в течение 30 мин при 37 ""С. Оптическую плотность определяют при 678 нм. Чувствительность составляет 0,1—0,2 мкг. [c.399]

Описан метод окрашивания полосок ацетата целлюлозы 0,1%-ным водным раствором толуидинового синего (pH доводят до 6—7 с помощью 2 М МН40Н) [587]. Полоски окрашивали в течение 10 мин и затем отмывали в 90%-ном этаноле до тех пор, пока фон не становился бледно-голубым. Окрашенные зоны вырезали, элюировали I мл 0,1 мл СаСЬ и прогревали 5 мин при 70 °С. Затем добавляли 2 мл этанола и тщательно перемешивали раствор. После охлаждения раствора до комнатной температуры пленки удаляли и определяли оптическую плотность раствора при 635 нм. В случае минорных зон, содержащих менее 1 мкг гликозаминогликанов и потому окрашенных менее интенсивно, чувствительность метода можно повысить, если проводить элюцию смесью 0,3 мл 0,1 М СаС1г и 0,7 мл этанола. Минимальное определимое количество состав- [c.399]

Для количественных определении вырезают из ацетилцеллюлозной полосы окрашенные амидочерным фракции НЬАз и НЬА, помещают их в отдельные пробирки и добавляют 80% уксусную кислоту — по 4 мл в пробирку с НЬАг и в контрольную пробу —. и 20 мл в пробирку с НЬА. Контролем служит свободный от белка участок той же ацетилцеллюлозной полосы, по размеру соответствующей зоне НЬАг. Пленка из ацетата целлюлозы полностью растворяется в 80% уксусной кислоте. Содержимое пробирок тщательно перемешивают сначала стеклянной палочкой, потом опрокидывая пробирку, и затем фотометрируют против контроля на спектрофотометре СФ-4 при длине волны 610 нм. Расчет проводят по формуле [c.246]

В случае гетерозиготного носительства аномальных гемоглобинов, например при наличии гемоглобина 8, с по(мощью электрофореза на ацетате целлюлозы можно определить не только процентное содержание НЬАг, но и процентное содержание нормальной фракции (НЬА) и патологической (НЬЗ). В эиж случае зоны, соответствующие фракциям НЬАг, НЬЗ и НЬА, вырезают, помещают в отдельные пробирки, в пробирку с НЬАг и а контрольную наливают по 4 мл 80% уксусной кислоты, а [c.246]

Смотреть страницы где упоминается термин Зоны на ацетате целлюлозы: [c.244] [c.99] [c.320] [c.261] [c.447] [c.136] [c.222] [c.97] [c.60] [c.860] [c.189] [c.40] [c.50] [c.326] [c.331] [c.337] [c.344] [c.352] [c.354] [c.356] [c.360] [c.367] [c.399]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология