Белки спектрофотометрическими методами

Определение белка. Для определения белка используют метод Лоури (с. 81). При спектрофотометрическом измерении определяют оптическую плотность при 280 нм и рассчитывают концентрацию с помощью коэффициента Л им =9,0. [c.217]

Спектрофотометрический метод количественного определения белка основан на их свойстве поглощать свет в УФ-области при [c.531]

Спектрофотометрический метод определения белка основан на способности ароматических аминокислот (триптофан, тирозин и в меньшей степени фенилаланин) поглощать ультрафиолетовый свет с максимумом поглощения при 280 нм. [c.33]

Для количественного определения белка используют колориметрические и спектрофотометрические методы, в некоторых случаях пользуются определением белка по содержанию общего азота в препарате. [c.29]

Определение белка спектрофотометрическим методом [c.361]

L5. Спектрофотометрические методы. Спектрофотометрические методы определения белков имеют ряд преимуществ по сравнению с другими методами и могут быть рекомендованы во многих случаях. Они просты, быстры и не вызывают структурных разрушений в исследуемом материале. Один из наиболее ранних прочно утвердившийся метод Варбурга и Христиана [388] основан на определении соотношения величин поглощения при 280 и 260 нм и позволяет определять белок в присутствии нуклеиновых кислот. В нескольких методах, предложенных позднее, для измерений используются другие длины волн. [c.292]

Работа 13. Спектрофотометрический метод определения белка [c.22]

Определение концентрации белка проводят методом Лоури (с. 81). При спектрофотометрическом определении для расчета используют коэффициент Л ° 1см=10,2 при 280 нм. [c.240]

Широкое распространение получили спектрофотометрические методы количественного определения веществ, имеющих характерные максимумы поглощения белков (с. 83), нуклеиновых кислот (с. 162), нуклеотидов (с. 180). [c.7]

Отобранные фракции анализируют спектрофотометрическим методом (см. гл. 35), определяя оптическую плотность при длинах волн 254 нм (максимум поглощения белка) и 295 нм (максимум поглощения метиленового синего). [c.237]

Недостаток спектрофотометрического метода определения белков состоит, очевидно, в том, что содержание тирозина и триптофана (от которого зависит величина е) в разных белках варьирует. Этот метод дает хорошие результаты с гетерогенной смесью белков, а также с достаточно чистыми препаратами индивидуального белка, коэффициент поглощения которого может быть точно измерен или вычислен исходя из аминокислотного состава (при условии, что последний известен). [c.56]

Из различных спектрофотометрических методов, которые могут быть использованы для определения количества белка, входящего в состав веществ биологического происхождения, наиболее подходящим является биуретовый метод [25]. Этот метод не очень чувствителен и, как показывает опыт, его применение связано с рядом ограничений. Белок обладает способностью осаждаться совместно с гидратом окиси меди. На этом основан классический метод определения белка [26], согласно которому раствор белка [c.315]

Метод Лоури приблизительно в 100 раз чувствительнее биуретового метода и в 10—20 раз спектрофотометрического метода измерения концентрации белка по поглощению света с длиной волны около 280 нм (ультрафиолетовая область). С помощью метода Лоури можно определить количество белка в растворе, если его содержание составляет 10—20 мкг в 1 мл, [c.20]

В наших работах для определения растворимости жидких углеводородов в растворах белков применяли методы равновесного диализа, спектрофотометрический, рефрактометрический, весовой. [c.21]

Так как тирозин и триптофан частично разрушаются при кислотном гидролизе, был разработан спектрофотометрический метод их определения в нативном белке [7]. [c.402]

Электронные спектры поглощения находят широкое применение для решения разнообразных аналитических и исследовательских задач органической и неорганической химии, биологии и медицины. В таких областях, как химия красителей, биохимия белков и жиров, химия лекарственных веществ, уже с давних пор используются спектрофотометрические методы исследования и анализа. В последнее время электронные спектры поглощения широко и с большим успехом используются в химии редкоземельных и актинидных элементов, при получении веществ в особо чистом состоянии и в других областях науки и техники. [c.350]

Реакция (3) замечательна тем, что в процессе модификации белка высвобождается нитрофенолят-ион (рКа — 7), удобная хромофорная метка для строгого контроля за ходом реакции спектрофотометрическим методом. [c.87]

Спектрофотометрический метод. Содержание белков можно определить на любом отечественном спектрофотометре. Описание спектрофотометра СФ-26 и приемы работы на нем даны в работе 39. [c.177]

ЛИТЬ спектрофотометрическими методами. Глутамин и аспарагин превращаются в соответствующие дикарбоновые кислоты однако амиды могут быть определены после исчерпывающего гидролиза протеолитическими ферментами или непосредственно при установлении аминокислотной последовательности. Содержание цистеина и цистина в белках трудно оценивать количественно при исследовании гидролизатов обычными методами, поскольку эти остатки частично разрушаются при кислотном гидролизе, плохо разделяются в ходе ионообменной хроматографии и слабо окрашиваются нингидрином. Суммарное содержание цистеина и цистина можно точно определить двумя методами. Ниже приведены соответствующие схемы реакций [c.167]

НЫХ клетках и клеточных органеллах. В гл. 5 приводятся некоторые спектрофотометрические методы количественного определения белков В тех случаях, когда таких уникальных свойств у соединения нет, перед проведением количественного анализа это соединение необходимо выделить и очистить. [c.139]

Замечание. При количественном определенш 12 белков спектрофотометрическим методом найдено 28о = 0,50- 2,65 и F205 = 29,0н-36,4. Лишь в случае необычно высокого содержания Plie в образце ошибка измерения достигала более 2% [335]. [c.302]

Определение качественного и количественного аминокислотного состава белков и пептидов проводят после их гидролиза кислотой или щелочью. Оба вида гидролиза разрушают некоторые аминокислоты. При щелочном гидролизе частично разрушаются цистеин, серии, треонин и происходит частичная рацемизация некоторых аминокислот. При гидролизе соляной кислотой (5,7 н., 105—110° С), которая обычно используется при кислотном гидролизе пептидных связей, практически полностью разрушается триптофан. В связи с этим содержание триптофана в пробах обычно определяют после щелочного гидролиза или спектрофотометрическим методом Кроме того, наблюдаются значительные потери оксиаминокислот (серина, треонина, тирозина), се-русодержащих аминокислот (цистеина, метионина) и частично пролива. При этом степень разрушения аминокислот зависит от чистоты и концентрации НС1, используемой для гидролиза, а также длительности и температуры гидролиза. Следует отметить, что примеси альдегидов при кислотном гидролизе приводят к значительной потере тирозина, а также цистеина, гистидина, глутаминовой кислоты и лизина, а примеси углеводов в больших концентрациях — к разрушению аргинина. [c.123]

Исследования влияния углеводородов на конформационное состояние макромолекул глобулярных белков проводились методами оптического вращения и его дисперсии, вискозиметрически, спектрофотометрически и по изучению кинетических параметров ферментативной активности, Вращение плоскости поляризации чрезвычайно чувствительно к изменению конформации белковых молекул. Правда, между оптической активностью и структурой белка нет простой и ясной зависимости, но значение оптической активности как характеристики степени конформационного изменения белков общеизвестно и играет большую роль при изучении процессов денатурации. [c.29]

Тирозин. Ханке [2811 утверждает, что при правильном проведении диазореакции Паулн она не уступает методу Миллона. С другой стороны, Холидэй [302 и Девайн [1951 нашли, что метод Миллон-Фолина и спектрофотометрический метод дают совпадающие результаты при определении тирозина в казеине, белках крови и т. д. [c.130]

Применение спектрофотометрического метода для определения содержания НК в растениях, однако, связано с большими трудностями из-за наличия в них вeшJe тв, которые, так же как и НК, обладают свойством поглощать ультрафиолетовые лучи (особенно мешают пигменты, белки и пептиды). [c.33]

По мнению Поллистера [179], при использовании обычных методов выделения ядер происходит значительная потеря белка, поскольку содержание белка, определяемое количественными спектрофотометрическими методами, значительно выше, чем в изолированных ядрах [146]. Поллистер считает, что ядро клетки печени млекопитающих в состоянии интерфазы содержит 9% ДНК, 1% РНК, 11% гистона, 14% остаточного белка (стр. 143) и 65% других негистонных белков. [c.140]

Значение реакции дипитрофенилирования состоит прежде всего в том, что она приводит к количественному образованию кристаллических соединений желтого цвета, которые легко отделяются при хроматографировании и могут быть количественно определены спектрофотометрическим методом. Кроме того, связь ДНФ — аминокислота в продуктах реакции динитрофенилиро-вания не гидролизуется кислотой, что позволяет использовать эту реакцию для определения N-концевых аминокислот в белках (см. гл. IV). [c.48]

Спектрофотометрический метод особенно ценен в тех случаях, когда необходимо различить присутствующие в растворе группы с очень близкими значениями константы диссоциации, причем только диссоциация групп одного определенного типа приводит к изменению спектра поглощения. Этим методом удалось различить диссоциацию аммонийной и сульфгидрильной групп (в цистеине) обе они диссоциируют при одинаковых значениях pH, но только диссоциация SH-rpynn влечет за собой изменение поглощения. Аналогичным образом можно отличить диссоциацию аммонийной группы от диссоциации в фенольной группе тирозина и найти каждую из констант, используя тот факт, что к заметному изменению поглощения приводит только диссоциация в фенольной группе. Позднее мы увидим, как с помощью этого метода удается проследить за ионизацией определенных групп в белках, несмотря на то что при тех же значениях pH ионизируются также и другие группы. [c.81]

Спектроскопический метод был успешно применен для анализа смеси амино- и окси-производных сижл-триазина [268], определения триметилкарбинола в изобутилене [269], для анализа смесей фармацевтических препаратов и полупродуктов их синтеза [270]. Спектрофотометрический метод успешно также применялся для изучения а-и Ь-форм хлорофилла [280], для определения тирозина и триптофана в белках [281], для анализа смесей углеводородов, содержащих до шести компопентов [282[, определения стирола и полистирола в смеси [283], анализа смесей линолеповой, линолевой и элестеариновой кислот [284], для определения витамина А в сливочном масле [285] и других целей. [c.73]

В клинических лабораториях. Так как ни гемоглобин, ни оксигемоглобин не являются стойкими соединениями, они не могут быть использованы в качестве стандартов. Часто в качестве стандарта применяют раствор кислого гематина, имеющий коричневую окраску. Исследуемая кровь при этом методе предварительно смешивается с разведенной соляной кислотой. Необходимо, однако, отметить, что указанный метод дает часто ошибочные данные в связи с помутнением растворов вследствие постепенной флокуляции пигмента. Это помутнение означает, что падающий на раствор свет не только поглощается, но и рассеивается [209]. Помутнение растворов может быть обусловлено также липидами крови [210] или флокуляцией белков плазмы [211]. Более надежные результаты получаются при колориметри-ровании щелочных растворов, наилучшим же методом является колориметрическое или фотометрическое определение цианида метгемоглобина [212], образующегося при прибавлении к крови соляной кислоты и цианистого калия [213]. Этот метод был испытан в различных лабораториях, и полученные результаты оказались очень хорошими [214]. Большим преимуществом этого метода является также то, что можно использовать в качестве стандарта циангематин, который имеет такую же окраску и такой же спектр поглощения, как и цианид метгемоглобина. Хорошие результаты при определении гемоглобина дает также газовый метод Ван-Слайка. Содержание гемоглобина в крови нормальных людей при определении указанными методами оказалось равным 15,7—16,1% [215]. Метгемоглобин в присутствии гемоглобина может быть определен путем насыщения крови кислородом или окисью углерода до и после восстановления крови дитионитом (Ыа23204) [216]. Эта соль является одним из немногих восстановителей, которые могут быть использованы для превращения оксигемоглобина или метгемоглобина в гемоглобин, так как большинство других восстановителей одновременно необратимо денатурируют глобин. Однако некоторым недочетом этого метода является то, что небольшие количества неактивного пигмента , не способного присоединять кислород, также превращаются при действии N328204 в гемоглобин [217]. Очень малые количества кислорода и оксигемоглобина могут быть определены полярографическим методом [218]. Карбоксигемоглобин и метгемоглобин можно определять также путем спектрофотометрии в инфракрасном свете [219]. Спектрофотометрические методы применяются и тогда, когда необходимо определить какое-либо производное гемоглобина, находящееся в смеси с другими его производными [171, 220]. [c.255]

По аминокислотному составу лактоферрин человека и коровий лактоферрин заметно отличаются от соответствующих сывороточных белков. По-видимому, лактоферрин человека должен содержать мало или совсем не содержать триптофана, который благодаря его свойствам можно обнаружить спектрофотометрическим методом (см. ниже). Один Ы-концевой остаток аланина был обнаружен в коровьем лактоферрине [29]. Еще никак не объяснено отсутствие аминокислотного остатка со свободной аминогруппой в лактоферрине человека [31]. [c.334]

Метод электрохимического восстановления на ртутном катоде дал возможность судить о количестве дикетопиперазинов и пептидов в природном белке. Было доказано, что дикетопиперазиновые структуры входят в состав белковых молекул. Метод ионофореза позволял следить за поведением циклических структур при различных деструкциях белка [288]. Биуретовая реакция [269] оказалась надежным сродством для суждения о длине полипептидной цепочки в микромолекуле белка. Сущность биуретовой реакции сводится к образованию медных комплексов рядом азотсодержащих веществ (белки, пептоны, амиды, амины, аммиак). Определение медных чисел белка, спектрофотометрические кривые медных комплексов позволили установить, что пептидные цепочки в белке чаще всего построены из трех и во всяком случае не более чем из пяти остатков аминокислот. С другой стороны, относительное уменьшение аминного азота при гидролизе после восстановления белка дает ключ к выявлению относительного количества дикетопиперазинов. Результаты всех этих определений привели к таким выводам в молекуле желатины на каждое дикетопиперазиновое кольцо приходится четыре аминокислоты, у альбумина крови — пять. [c.268]

Спектрофотометрическим методом определяют количество пептидов в исследуемом образце биологической жидкости после осаждения белков ТХУ (по Н.Г. Габриэлян, В.И. Липатовой и др.). Условно выделяют два фонда среднемолекулярных молекул. Первый — фонд среднемолекулярных пептидов, содержащих ароматические аминокислоты и имеющих максимум поглощения при X 280 нм второй — фонд средних молекул , не содержащих ароматические аминокислоты и имеющих максимум поглощения при X 254 нм (фрагменты нуклеиновых кислот, производные олигоспиртов и др.). [c.494]

В статьях настоящего сборника представлены основные современные методы анализа белков и аминокислот. Сводные обзоры этих методов даны в статьях П. Кирка Химическое определение белков и особенно А. Мартина и Р. Синджа Аналитическая химия белков . Последующие три статьи Э. Снелла Микробиологические методы анализа аминокислот , А. Тизелиуса Адсорбционный анализ смесей аминокислот и Г. Свенссона Препаративньи электрофорез и ионофорез , специально посвящены трем группам методов, получившим за последние годы особенно большое значение. Необходимо, однако, отметить, что теория хроматографических и электрофоретических методов анализа разобрана в этих статьях недостаточно. Кроме того, в статьях сборника неполно представлены изотопный и спектрофотометрические методы анализа. В статье С. Фокса Конечные аминокислоты в пептидах и белках рассматривается весьма важный для изучения структуры белков, но, как видно из материала статьи, еще очень слабо изученный вопрос о конечных группировках полипептидных цепей. Две заключительные статьи сбор- [c.10]

Поскольку образующийся анион /г-нитротиофенола имеет сильное поглощение даже выше 400 нм (где белки поглощают незначительно), степень протекания реакции дисульфидного обмена, аналогичной реакции (16), можно определить простым спектрофотометрическим методом. Основная функция нитрозаместителей заключается в том, чтобы изменить тиофенола и вызвать его ионизацию, поскольку ионизированный фенол поглощает в удобной области видимого спектра. Кроме того, реагент Эльмана имеет карбоксильную группу, которая повышает его растворимость в водном растворе. Реакции сульфгидрил-дисульфидного обмена в химических и биологических системах изучены достаточно хорошо [586]. Интересно, что л4-динитрофепилдисульфид (105) применяется в ветеринарии для лечения кокцидиоза. [c.201]

Ароматические аминокислоты — тирозин, фенилаланин и триптофан — обусловливают наличие максимумов в электронных спектрах поглощения белков в УФ-области (Я ах 260 - 280 нм), на чем основан спектрофотометрический метод определения белка в растворах и биологических жидкостях. Цистин — диаминодикарбоновая кислота, образующаяся при окислении цистеина [c.48]

Тирозин и триптофан (в незначительной степени также и фенилаланин) поглощают ультрафиолетовое излучение с максимумом поглощения при 280 нм. На этом основан спектрофотометрический метод измерения концентрации белков в растворах. Белки можно определять также колориметрически с помощью цветных реакций. В щелочной среде ионы двухвалентной меди образуют с пептидными группами комплексы, окрашенные в фиолетовый цвет (биуретовая реакция). Но чаще всего применяют более точный метод Лоури. Он основан на комбинации би-уретового реактива со специальным реактивом на ароматические аминокислоты. [c.53]

В настоящее время метод остановленной струи широко приме-ляется для решения многих задач химической кинетики установление механизмов химической реакции, определение стадий, лимитирующих протекание реакции обнаружение промежуточных комплексов, определение кинетики ферментативных реакций, установление числа и концентрации активных центров фермента, изучение быстрых конформационны5( переходов в белках и нуклеиновых кислотах. Метод требует быстрой регистрации это единственное существенное ограничение его применимости. Особое внимание при применении метода остановленной струи необходимо уделять тер-мостатированию, так как разница в температурах в кювете наблюдения и растворе смеси реагентов может привести к большим оптическим ошибкам, затрудняющим установление механизма наблюдаемой реакции. Точность определения констант скоростей данным методом примерно такая, как и при обычных спектрофотометрических измерениях кинетики химических реакций. [c.28]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология