Агароза антигены

Гель-электрофорез. Электрофорез на геле и крахмале применяют для аналитических целей. Наиболее важным применением гель-электрофореза является иммуноэлектрофорез. Для этого вида анализа используют макропористые гели, в частности гели агара и агарозы. Метод иммуноэлектрофореза основан на том, что после разделения электрофорезом происходит диффузия разделенных веществ — антигенов — в направлении, перпендикулярном направлению электрофореза. Навстречу этим соединениям диффундируют антитела. При соединении антигенов и антител образуются характерные дуги осаждения. Метод иммуноэлектрофореза очень чувствителен при обнаружении антигенов, специфических для данных антител. В настоящее время применяют метод введения радиоактивной метки в антигены, благодаря чему радиоиммуноэлектрофорез является одним из самых чувствительных методов анализа биополимеров. [c.364]

Другой тип двумерного разделения с применением изоэлектрической фокусировки — это метод, в котором используется иммунодиффузия. В этом методе разделение проводят изоэлектрической фокусировкой на полиакриламидном геле, а затем фрагмент геля вводят в агарозу, содержащую антисыворотку. После этого проводят электрофорез в направлении, перпендикулярном первому разделению. Белки перемещаются в агарозу, и в ней появляются зоны миграции антигенов-антител [419]. [c.177]

В модифицированном методе [873] оба этапа электрофореза проводят на стеклянных пластинках размером 8ХЮ см. Для антигенов вырезают четыре круглые лунки. На первом этапе электрофореза, осуществляемом при напряжении 10—15 В/см, применяют охлаждение. После завершения электрофореза по краям пластинки удаляют слой геля шириной 10 мм, а остальной гель разрезают на четыре полоски, параллельно направлению электрофореза. Тонким лезвием бритвы каждую полоску переносят на стеклянную пластинку такого же размера, как и первая (рис. 90,5). Полоску геля помещают на край пластинки, а ее свободную поверхность заливают агарозой, содержащей антитела. После того, как второй гель застынет, проводят электрофорез во втором направлении чри низком напряжении (2— 2,5 В/см) в течение 18—22 ч. [c.256]

Аналогичный подход можно использовать для получения антисывороток ко многим антигенам, которые с целью очистки преципитируют в агарозе, например с помощью овечьих ан- [c.78]

В данных методах совмещены электрофоретическая миграция антигенов в агарозе с последующей иммунопреципитацией в геле. В результате первого процесса происходит частичное разделение смеси антигенов, поскольку скорость их миграции в геле зависит от суммарного заряда при данном рП буферного раствора. Кроме того, отрицательно заряженные молекулы быстро мигрируют в гель, содержащий антитела, что ускоряет преципитацию и сводит к минимуму латеральную диффузию. [c.215]

В пластине агарозного геля вырезают лунки и расположенные между ними канавки (рис. 6.10). В лунки вносят растворы антигенов и накладывают на агарозу с противоположных сто-- -ь рои фитили, соединяющие ее [c.216]

С помощью специфической антисыворотки можно идентифицировать полосу определенного антигена в геле, агарозы или ПААГ после обычного электрофореза или ИЭФ. Простейший подход здесь сводится к вымачиванию геля в антисыворотке или растворе очищенных антител. Связываясь с антигенами, антитела увеличивают интенсивность последующей окраски соответствующих полос по сравнению с необработанным контрольным гелем. Кроме того, они могут осаждать антигены путем образования пространственной сетки, в то время как остальные белки остаются в растворе, поэтому их можно вымыть из геля. Разумеется, в тех случаях, когда электрофорез ведут в присутствии ДДС-Na, последний надо предварительно диссоциировать от белков и удалить из геля, поскольку он, как уже упоминалось, препятствует образованию иммунных комплексов. При этом белки приходится фиксировать в геле осаждением кислотой и спиртом, что весьма затрудняет операцию их последующего вымывания из геля. [c.127]

Основные операции, используемые для получения иммобилизованных на NBr-агарозе антигенов или антител, приведены в табл. 5.1. [c.155]

Пористое стекло (диаметр пор 5 — 250 нм), как и наиболее широко применяемые носители иа основе агарозы, отличается низкой неспецифической сорбцией и высокой емкостью. Аффинная хроматография нашла широкое применение при разделении ферментов, полнпептидных и белковых гормонов, антител, антигенов, а также транспортных и рецепторных белков. [c.354]

Б. В Иммуноэлектродиффузия или ракетный иммуноэлектрофорез [66], Гель агарозы содержит равномерно распределенную иммунную сыворотку. В лунки внесены антигенные растворы разных концентрации. Электрофоре. проводится при pH, при котооом антитела не мигрируют либо мигрируют очень мало. Антигены под действием электрического поля мигрируют в геле, содержащем антитела. Комплексы при избытке антигенов вначале растворимы, продолжают мигрировать в ходе электрофореза, а также посредством диффузии, обогащаются антителами, н, когда соотношение антигенов и антител достигает точки эквивалентности, они осаждаются в форме ииков. [c.102]

Г. Перекрестный иммуноэлектрофоре.- (65, 94]. Данный метод сочетает электрофоретическое разделение антигенов в первом направлении в геле из агарозы с иммуноэлектродиффузией во втором направлении. [c.102]

Антисывороткн, ковалентно связанные с агарозой, целлюлозой и сефадексом, в системах радиоиммуноанализа белков и гаптенов исследовались Болтоном н Хантером [135], Показано, что ковалентное связывание с нерастворимой матрицей е оказывает неблагоприятного влияния на антисыворотку. Ухудшение чувствительности анализа обусловлено в большинстве случаев иространствен-ными затруднениями для высокомолекулярных антигенов. Богданов и Страш [131] указали на возможные ошибки радиоиммуно-анализа, возникающие из-за большого объема атома радиоактивного иода. [c.381]

Носителями в данном случае чаще всего служат ацетат целлюлозы [26] и гели агарозы [4]. Разрешающая способность таких систем очень низка из-за чрезмерного диффузионного размывания зон. Применение в качестве носителя крахмального или полиакриламидного геля значительно повышает разрешающую способность прежде всего благодаря молекулярно-ситовому эффекту. Иммуноэлектрофорез [56] является одной из разновидностей зонного электрофореза при постоянном значении pH после разделения белки диффундируют навстречу специфическим антителам и их взаимодействие приводит к образованию дуг иммунопреципитации. Полуколичественную оценку каждого антигенного компонента можно выполнить методом электроиммунодиффузии [57]. После разделения методом зонного электрофореза антигенные белки электрофоретически мигрируют в направлении, перпендикулярном прежнему пути, в гель, содержащий равномерно распределенные антитела. Высота образующихся пиков преципитации является мерой относительной концентрации белков в смеси. [c.120]

Рис. 4-46. Три типа матриксов, используемых для хроматографии. При ионообменной хроматографии (А) нерастворимый матрикс содержит ионы, задерживающие молекулы с противоположным зарядом. Для разделения молекул используются следующие матриксы диэтиламиноэтилцеллюлоза (ДЭАЭ-целлюлоза) - заряжена положительно карбоксиметилцеллюлоза (КМ-целлюлоза) и фосфоцеллюлоза - заряжены отрицательно. Силы взаимодействия между молекулами в растворе и ионообменником определяются ионной силой и pH элюирующего раствора, которые для достижения эффективного разделения можно варьировать определенным образом (как на рис. 4-47). При хроматографии по методу гель-фильтрапии (Б) матрикс инертен, но содержит поры. Низкомолекулярные соединения проникают внутрь частиц матрикса. Оказавшись при этом в относительно большем объеме, они проходят через колонку медленнее. В качестве матрикса можно использовать зерна поперечно-сшитого полисахарида (декстран или агароза). Поскольку в продаже имеются полисахариды с самым различным размером пор, их можно использовать для фракционирования молекул с молекулярной массой от 500 до 5 х 10 дальтон. При аффинной хроматографии (В) используется нерастворимый матрикс, ковалентно связанный со специфичными лигандами (антителами или субстратом ферментов), которые присоединяют определенный белок. Связываемые иммобилизованным субстратом молекулы фермента можно элюировать концентрированными растворами субстрата в свободной форме, а молекулы, связанные с иммобилизованными антителами, можно элюировать за счет диссоциации комплекса антитело антиген концентрированными растворами соли или растворами низкого или высокого pH. Однократная хроматография на такой колонке позволяет

Мы пришли к выводу, что для самых разнообразных иммунологических исследований необходимо получать максимально возможное количество нативного белка. Это легче всего достигается с помощью классических хроматографических методов, детально описанных в разд. 5.3.3.3, которые наиболее успешно работают при использовании экспрессирующих систем на основе плазмид pUR. Другие методы применяют, когда возникают сложности с выходом, растворимостью или стабильностью гибридного белка. Например, к выделению гибридных белков методом ДСН-электрофореза в ПААГ следует прибегать в последнюю очередь, а не использовать его сразу из-за его простоты, поскольку денатурированные ДСН белки меняют свои иммуно-генные свойства и с их помощью не всегда удается получить антисыворотку к нативному белку. Если антисыворотка в основном будет использоваться в вестерн-блот-анализе, то в этом случае денатурированные под действием ДСН иммуногены могут оказаться пригодными. Иммуноаффинные методы очистки можно эффективно использовать в ограниченном масштабе, поскольку, к сожалению, элюируемые белки, как правило, необратимо денатурированы реагентами, используемыми для разрушения комплексов антиген—антитело. С помощью хроматографии на АФТГ-агарозе можно получить чистый растворимый белок, но метод не очень эффективен и дает очень низкий выход белков, содержащихся в клетке в небольшом количестве или обладающих низкой стабильностью. Выбор того или иного метода поможет сделать анализ результатов прикидочного выделения и очистки. [c.155]

При активации лимфоцитов под влиянием митогенов или антигенов они выделяют в среду клеточные медиаторы — лимфокины, по выходу которых также можно оценивать функциональную активность Т-лимфоцитов. Из них наиболее изучен фактор, угнетающий миграцию макрофагов. Выявляют этот фактор в тесте угнетения миграции макрофагов. Можно, например, поместить макрофаги (моноциты) в лунки, вырезанные в слое агарозы. За 24 ч инкубации они образуют вокруг лунки равномерную зону миграции. В присутствии лимфокина миграция клеток резко заторможена и зона миграции уменьшена. [c.106]

Большинство преципитирующих антител относится к классу иммуноглобулинов О (1дО), обладающих лишь очень слабым отрицательным зарядом при pH 8—9. Поэтому электроосмоти-ческий поток смещает 1 0 к катоду. Электроэндосмос заметно уменьшается при замене агара агарозой. Путем подбора определенных соотношений агара и агарозы можно регулировать скорость эндосмоса, создавая тем самым оптимальные условия для электросинереза. Очевидно, что антитела следует помещать ближе к аноду, а антиген — ближе к катоду. Если расположить рядом несколько лунок с антигенами, то последние можно сравнивать между собой подобно тому, как это делается в методе двойной иммунодиффузии [186]. Видимые линии преципитации образуются в течение 1—2 ч. Избыток реагентов удаляют, продолжая электрофорез после образования преципитатов. При этом нет надобности отмывать гель перед окрашиванием, что позволяет в течение 3—4 ч получить полную картину окрашенных полос преципитации. [c.247]

Электроиммуноанализ проводится следующим образом. Готовят 0,8—1,5%-ный золь агарозы в соответствующем буфере. После охлаждения золя до 45—55 °С его смешивают с антисывороткой или с выделенными антителами и формируют слой геля толщиной 1 — 1,5 мм. С этой целью теплый золь агарозы выливают на стеклянную пластинку, установленную строго горизонтально, или заливают агарозу в форму, образованную двумя стеклянными пластинками и U-образной рамкой. Рамку оставляют между стеклами до завершения электрофореза, но ее можно удалить и залить освободившееся пространство агарозой. Как правило, требуется сравнительно небольшое количество антисыворотки, но оно, естественно, зависит от ее титра. Для количественного анализа наиболее удобны пики преципитации высотой 20—30 мм. Работать следует с самым большим разведением антисыворотки, при котором еще возможно образование видимого преципитата. Разведение антигена должно быть подобрано соответствующим образом. Если исследуют антигены с мол. массой более 200000, то в этом случае особенно важно разбавлять реагенты до такой степени, чтобы происходила лишь слабая преципитация, поскольку крупные комплексы таких антигенов с антителами могут забивать поры в геле, что [c.248]

Рис. 92. Сочетание линейного иммуноэлектрофореза [717] с перекрестным иммуноэлектрофорезом и методом промежуточного геля Г1257 . А. Промежуточный гель состоит только из забуференной агарозы. Б, Гель первого направления отсутствует, промежуточный гель содержит очищенный антиген (1 (линейный иммуноэлектрофорез). 5. Гель первого направления содержит антигены а—е, а промежуточный гель — очищенный антиген й (компонент смеси <1 образует пик, сливающийся с продольным преципитатом). Г, Промежуточный гель содержит моноспецифические антите ла к компоненту (1. Антисыворотку подвергали истощению растворимым антигеном а, избыток которого образовал

Как уже отмечалось, ацетат целлюлозы является вполне подходящей средой для иммунопреципитации, поэтому его можно использовать также для электроиммуноанализа и в меньшей степени для перекрестного иммуноэлектрофореза. Существенное различие между ацетатом целлюлозы и агарозой состоит в том, что в первом практически отсутствует электроэндосмос. В результате при pH 8,6 большинство антител будет двигаться в электрическом поле к аноду. При анализе антигенов, подвижность которых лишь ненамного превышает подвижность антител, последние будут мигрировать в сторону, противоположную от зоны нанесения антигенов, что приведет к образованию пиков преципитации, лишенных базовой линии. Чтобы свести к минимуму подвижность антител, необходимо снизить pH буферного раствора. Электроиммуноанализ альбумина был осуществлен при pH 6,5 [717], а лактоферрина — при pH 7,4 [1125]. Белки сыворотки крови, обладающие подвижностью ог и ог-глобули-нов, удалось успешно разделить при pH 8,6, но для разделения трансферрина и иммуноглобулинов пришлось снизить pH до 7,4. [c.262]

Реакция преципитации в геле Преиипитац11я комплекса антиг ен-антитело непосредственно в инертном геле (как правило, агаре или агарозе) нашла широкое применение для анализа антигенов. Совреме1шые модификации метода основаны на том, что взаимодействие антигена и антитела происходит непосредственно в толще геля, куда реагирующие соединения поступают за [c.253]

Рис. 2.2. Двумерный ИЭФ экстракта растворимых антигенов поверхностной мембраны взрослой особи 5. mansoni. А, Реакция в агарозе с полиспецифической антисывороткой, полученной при длительной иммунизации кроликов низкой дозой смеси антигенов в ПАФ. Б. Реакция в агарозе с моноспецифической антисывороткой, полученной в ответ на иммунизацию вырезанным пиком преципитации антигена 1 (положение антигена показано иа верхнем снимке)

Метод Ухтерлони проверяют антнсыворотку по отношению к иммуногену, стандартному антигену, смеси антигенов, родственным белкам и т. п. ИЭФ проверяют антисыворотку к разным антигенам, как в методе Ухтерлони (рис. 2.10). Двумерный ИЭФ аитисыворотка в агарозе реагирует со смесью антигенов, выбирают сыворотку, дающую один пик преципитации (рис. 2.2,5). ПГА, ЕЫЗА/ИРМА используют нагруженные антигеном эритроциты нлн лунки с адсорбированным антигеном (рис. 2.9). [c.94]

В некоторых случаях мы наблюдали утечку МКА с колонки при элюировании антигена. При этом МКА и антиген после элюирования отделялись друг от друга с помощью гель-фильт-рации. Иногда вместо гель-фильтрации элюат пропускали через аффинную колонку с антииммуноглобулиновыми антителами. В последнее время мы используем антитела, присоединенные к сефарозе L-4B, и совсем не наблюдаем утечки антител, вероятно, благодаря применению перекрестносшитого геля агарозы. Вообще в нашей практике утечка антител никогда не была серьезной проблемой. [c.180]

Количество вносимых в гель антител или антигенов определяют эмпирически, учитывая количество стандартного антигена (или контрольных антител) в лунках. Следует иметь иду, что хорошую антисыворотку можно добавлять в агарозу в концентрации 0,5% (объем на объем), а количество антигена (для ОРИД) примерно составляет 20 мкг на 1 мл агарозы (200 мкг на пластину). Стандартный антиген (для РИД) берут в концентрации 1 мг/мл — 5 мкг/мл (20 мкг—10 нм на лунку). Контрольную сыворотку (для ОРИД) разводят до соотношения 1 10. Исследуемые сыворотки вносят в лунки неразве-денными и в разведении 1 3. [c.210]

Рис. 6.10. Трафарет для лунок и канавок в случае проведения иммуноэлектрофореза на пластине 8X8 см. Показано расположение лунок для агарозы с низкой величиной электроэндосмоса, когда большинство аитигеиов мигрирует к аноду (например, белки сыворотки). Прн использовании гелей с высокой величиной электроэндосмоса для одновременного исследования анодных и катодных антигенов, лунки можно сместить к центру пластины

Индивидуальные антигены электрофоретически мигрируют из лунок, расположенных у основания геля, в агарозу, содержащую специфические антитела. С помощью специальных условий обеспечивается миграция антигена к аноду и неподвижность антител (IgG). По мере связывания антител мигрирующим антигеном образуются заостренные дуги преципитации (ракеты). Высота ракет пропорциональна концентрации антигена. Если на пластину нанесено несколько разведений стандартного антигена, то концентрации неизвестных (опытных) образцов легко определить, сравнивая их со стандартной кри- [c.222]

Данный метод совмещает в себе электрофоретическое разделение антигенов в одном направлении иа первой стадии и принцип ра1кетного ИЭФ в другом направлении (под углом 90°) на второй стадии. Разделенные антигены мигрируют в агарозу с полиспецифическими антителами и образуют узор из ракет. Метод имеет большое аналитическое значение для исследования состава антигенов и, кроме того, обладает некоторыми чертами количественных подходов. Он очень полезен для тестирования чистоты антигенов, мигрирующих к аноду, а также специфичности антисывороток. Любые белки, которые входят в гель, содержащий антитела, но не образуют пре- [c.225]

Немедленно переносят полоску с разделенными антигенами на другую, Стеклянную пластину. Пластина должна быть теплой. Полоску геля укладывают на. край пластины (можно использовать подложку Gelbond), а на остальную поверхность наносят 8,5 мл заранее подготовленной смеси агарозы с антителами при 56 °С. Новый гель должен плотно соединиться с пластиной первого. Эту стадию следует выполнять как можно быстрее, чтобы свести, к минимуму диффузию зон разделенных антигенов переносимой полоске геля. Полоску удобнее всего переносить на лезвии секционного ножа. [c.226]

На рис. 2 показан радиоавтограф аналитических ИЭФ-фореграмм последовательных фракций, полученных в препаративном ИЭФ. Аналитические ИЭФ-фореграммы были проявлены иодированным ( Ч) антигеном [полисахарид стрептококка группы А (вариант)]. Препаративному ИЭФ были подвергнуты 150 мг IgG, выделенного из антисыворотки кролика препаративным электрофорезом в блоке агарозы (Braun, Krause, 1968 см. также гл. 2). [c.139]

Реагентами для анализа служат глюкозо-6-фосфат—дегидрогеназа, иммобилизованная на гранулах агарозы совместно с антигеном (IgG человека), и антитела против IgG человека, меченные гексокиназой. При выполнении иммуноанализа эти реагенты смешивают с образцами. От конкуренции между антигеном из образца и иммобилизованным антигеном зависит количество антител, меченных гексокиназой, которое присоединится к твердой фазе. Активность пары ферментов, измеряемая по скорости образования NADH после добавления субстратов (глюкозы, АТР и NAD), уменьшается с ростом концентрации антигена в образце (рис. 8-11). IgG удалось определить при концентрации в конечной реакционной смеси 1 нг/мл. Чувствительность метода ограничена явлениями принципиального характера. При измерении ферментативной активности концентрация глюкозо-6-фосфата вначале ниже величины /См для глюкозо-б-фосфат—дегидрогеназы. Таким образом, по мере накопления глюкозо-6-фосфата скорость ферментативной реакции возрастает. Когда гексокиназа связывается с гранулами агарозы (в отсутствие антигена в образце), концентрация глюкозо-6-фосфата внутри гранул быстро повышается вследствие их малого объема и медленной диффузии. Напротив, когда гек- [c.115]

Для приготовления антигенных иммуносорбентов используют два способа. В первом из них достаточно концентрированный раствор антигена превращают в пространственную сетку, сшивая молекулы белка между собой глютаровым альдегидом или другим бифункциональным агентом. Второй способ состоит в ковалентном связывании антигена с гидрофильной водонерастворимой полимерной матрицей типа полиакриламида, агарозы или сефадекса. [c.110]

На строго горизонтальную поверхность пластины ПААГ быстро выливают расплавленный 0,5%-ный раствор агарозы в СФБ, чтобы получить слой толщиной 1 мм. Предварительно агарозу смешивают при 56° с разбавленной специфической антисывороткой. После застывания геля агарозы такую двуслойную пластину выдерживают при 37° во влажной камере 2—6 ч, в зависимости от размера молекул антигена, диффундирующих из ПААГ в агарозу. Затем, отметив на пленке агарозы положение лидирующего красителя в рабочем ПААГ, ее снимают, покачивая пластинку в СФБ. Пленка агарозного геля легко отделяется от ПААГ. Одновременно с диффузией в гель агарозы идет им-мунохимическая реакция антигенов с находящимися в геле антителами и образование преципитатов. Пленку вымачивают в течение 4 ч в том же буфере, удаляя из нее не прореагировавшие иммуноглобулины антисыворотки и белки неантигенной природы, перешедшие туда из ПААГ. Преципитировавшие иммунные комплексы с участием искомого антигена можно окрасить обычными способами или обнаружить методом авторадиографии, если антиген или антитела несут радиоактивную метку. Отметим, что преципитация здесь требует подбора концентраций и довольно значительного времени диффузии антигенов в агарозу для обеспечения эквивалентного соотношения концентраций антител и антигена. [c.129]

Для разделения антигенов вместо электрофореза можно воспользоваться ИЭФ. Такая замена описана еще в 1978 г. [Weiss et al., 1978]. В то время еще не выпускалась агароза со слабой способностью к эндосмосу, пригодная для ИЭФ. Авторы были вынуждены воспользоваться 4%-ным ПААГ, что приводило к значительному увеличению продолжительности иммунодиффузии (до 3 сут). Использование названных в части I специальных марок агарозы для ИЭФ делает иммуноэлектрофокусирование столь же доступным методом, как иммуноэлектрофорез. Впрочем, высокая разрешающая способность ИЭФ имеет в этом случае и оборотную сторону. Независимо от формы лунки белки будут фокусироваться в виде узких полос, поэтому дуги преципитации будут, очевидно, иметь менее удобную для расшифровки форму. [c.139]

Это — количественный метод определения концентрации антигена [Laurell, 1966]. Раствор белка-антигена заливают в лунку, вырезанную на краю пластины геля агарозы с введенной в него антисывороткой. Под действием электрического поля белок мигрирует в этом геле. В ходе миграции образуются иммунные комплексы, связывающие антиген. Миграция продолжается до полного исчерпания антигена — по расстоянию миграции можно судить о его количестве. Это расстояние доступно наблюдению [c.139]

Стеклянную пластину заливают расплавленным 1%-ным раствором агарозы в 0,075 М Na-барбитуратном буфере (pH 8,6), содержащем 0,2—0,6 мМ лактата кальция и 0,02% азида натрия, так чтобы получить слой геля толщиной 1 мм. Перед заливкой при 48—50° в раствор агарозы вносят антисыворотку до концентрации 0,5—10% по объему или соответственно меньшее количество очищенных антител и хорошо перемешивают. О подборе концентраций антисыворотки (и антигена) будет сказано ниже. Гель должен надежно пристать к стеклу, иначе антиген при электрофорезе будет мигрировать в слое свободной жидкости по зазору между стеклом и гелем. Ввиду этого имеет смысл предварительно нанести на подогретое стекло тонкий слой 1 % -ного водного раствора агарозы, дать ему затвердеть, а потом высушить при 70°. Фирма LKB предлагает пластины из специально обработанного пластика, с которым гель агарозы связывается прочнее, чем со стеклом. [c.140]

Концентрации исследуемых растворов антигена, как и исходное разбавление и" объемную концентрацию антисыворотки в геле агарозы, приходится подбирать опытным путем, чтобы ракеты были достаточно хорошо видны, а их высоты (после исчерпания запасов антигена во всех лунках) лежали в интервале 1—5 см. Такие высоты можно достаточно точно измерить вместе с тем, электрофорез не занимает слишком много времени. Очевидно, что чем больше отношение концентрации антигенов в лунках к концентрации антител в геле, тем выше будут ракеты Лорелла . Абсолютные же значения этих концентраций диктуются необходимостью получения четких линий преципитации. В качестве ориентировочных цифр можно рекомендовать загрузку 5 мкг антигена на лунку при внесении в гель неразбавленной антисыворотки до концентрации 2,5% по объему. Если гель предполагается окрашивать, то обе исходные цифры можно уменьшить в 10 раз. Опыты можно ставить в двух вариантах с полиспецифической антисывороткой для определения количества чистого антигена или с моноспецифической для определения количества данного антигена в смеси с другими. [c.142]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология