Чувствительность к рибонуклеазе

Нативная рибонуклеаза не чувствительна к действию трипсина и химотрипсина. Поэтому сначала проводили окисление рибонуклеазы (остатки цистина при. этом окислялись до остатков цистеиновой кислоты) и окисленный препарат подвергали затем действию протеолитических ферментов. При помош,и хроматографии на дауэкс 50-Х-2 [82] из триптического гидролизата было выделено 15 пептидных фрагментов [82], а из гидролизата после действия химотрипсина — 32 фрагмента [83]. Для количественного определения аминокислотного состава выделенных пептидов и для достижения их чистоты необходимо использовать достаточное количество исходного материала (200 мг). Фракции, содержащие более одного компонента, подвергают повторному фракционированию в несколько измененных условиях. Расщепление с помощью пепсина [6], хотя оно и не столь селективно, позволяет, однако, получить другие пептиды, которые помогают воссоздать полную структуру рибонуклеазы. [c.415]

Препараты рибонуклеазы, полученные из разных сырьевых источников, мо гут иметь различные свойства [1, 2], Большинство из них специфически расщепляет фосфодиэфирные связи, образованные пиримидиновыми нуклеотидами, и не действует на связи между пуриновыми нуклеотидами. Препараты рибонуклеазы отличаются различной чувствительностью к активаторам, ингибиторам и субстратной специфичностью. Ингибиторами рибонуклеазы. из поджелудочной железы крупного рогатого скота являются Са +, Мп +, Си +, а активатором — Mg2+. [c.338]

В результате изучения взаимодействия ферментов с субстратами и ингибиторами удалось выяснить ряд важных вопросов, касающихся механизма ферментативных реакций. Детальное рассмотрение всех этих исследований увело бы нас слишком в сторону. Поэтому мы остановимся только на некоторых выводах, имеющих непосредственное отношение к предмету этой книги. Прежде всего рассмотрим свойства самого фермента. Активность фермента, как правило, зависит от целостности его третичной структуры. Под действием денатурирующих агентов, изменяющих конформацию фермента, его активность либо уменьшается, либо исчезает полностью. По меньшей мере в одном случае — для рибонуклеазы — установлено, что связывание фермента с субстратом способствует сохранению его конформации даже в присутствии агентов, которые в отсутствие субстрата вызывают денатурацию. Вместе с тем не вся первичная структура необходима для обеспечения активности. Например, фермент папаин, по своим свойствам подобный протеолитическим ферментам, сохраняет свою активность при отщеплении 3/5 его молекулы. Активный фрагмент папаина сохраняет чувствительность к действию денатурирующих агентов, и это свидетельствует о том, что для обеспечения активности необходима определенная третичная структура. В свете этих данных вЪз-никает вопрос почему молекулы ферментов так велики [c.395]

ДЛЯ одноцепочечной РНК фага М12. В случае РНК весьма удобным критерием может служить чувствительность к рибонуклеазе (в 0,05 М солевом растворе). [c.110]

Прежде всего, можно более или менее определенно локализовать на первичной структуре РНК те нуклеотидные остатки или олигонук-леотидные районы, которые не участвуют в комплементарном спаривании и вероятнее всего представляют собой однотяжевые секции цепи. Эти районы особенно чувствительны к таким рибонуклеазам, как панкреатическая пиримидил-РНКаза А, грибная гуанил-РНКаза Tt, бактериальная РНКаза Si, и к модификации их оснований такими [c.71]

Свойственная полипептидам и белкам, содержащим остатки тирозина и триптофана, естественная флуоресценция чувствительна к окружению этих остатков. Это обстоятельство можно в ряде случаев использовать, чтобы получить информацию о конформационной подвижности боковых радикалов остатков тирозина п триптофана в отношении близлежащих группировок в полипептидной цепи. Один пример — это истолкование изменений флуоресценции а-химотрипсина, возникающих при изменении состава растворителя, откуда следует достаточно близкое для протекания взаимодействия с переносом заряда расположение группировки — ONH— к остаткам тирозина и триптофана [59]. Доступность такого рода остатков тирозина в рибонуклеазе установлена в результате в основном качественного изучения флуоресценции [60] три обращенных наружу остатка тирозина в ферменте теряют флуоресценцию после 0-ацетилирования, в то время как боковые группировки трех других остатков тирозина скрыты . Этот вывод подкрепляется увеличением флуоресценции после денатурации трис (0-ацетил) фермента [60]. [c.441]

Получены четкие доказательства (см. стр. 161 и 250) того, что репликация РНК вирусов сопровождается образованием дв х-ценочечной репликативной формы РНК. В качестве примера можно назвать репликативную форму РНК, образующуюся нри действии РНК-зависимой РНК-полимеразы (РНК-синтетазы) в клетках Е. oli, инфицированных РНК бактериофага MS2 (стр. 250). Эта РНК устойчива к рибонуклеазе, но нри нагревании до высоких температур (от 102 до 104°) наступают резкие изменения. При быстром охлаждении образуется чувствительное к действию рибонуклеазы вещество устойчивость к рибонуклеазе восстанавливается, если это вещество охладить до температуры ниже ее температуры плавления [79—84, 94]. При градиентном центрифугировании двухцепочечная форма характеризуется несколько меньшей плотностью, чем соответствующая одноценочечная. [c.59]

Фермент рибонуклеаза из поджелудочной н<елезы быка — хорошо охарактеризованный белок, полная структура которого теперь уже известна (см. стр. 94)— расщепляет нолинуклеотидную цепь аналогичным способом. Этот фермент представляет собой эндонуклеазу, т. е. он атакует внутри-нуклеотидные связи. При этом для действия его необходимо, чтобы фосфатная группа, участвующая в образовании чувствительной к расщеплению Р — 0-связи, была присоединена в положении 3 пиримидинового нуклеозида. Первая стадия расщепления, т. е. образование циклических фосфатов из полинуклеотидов, по-видимому, обратима. Того же типа расщепление (по положению Ь) вызывают фосфодиэстеразы, выделенные из различных источников растительного происхождения (например, из растений гороха, табака или райграса). Все эти фосфодиэстеразы относительно неспецифичны в том смысле, что для их действия безразлична природа оснований, входящих в состав чувствительных нуклеотидов. Известен, однако, фермент, выделенный из Ba illus subtilis, который, по-видимому, обладает специфичностью, дополняющей специфичность панкреатического фермента (т. е. рибонуклеазы, выделенной из поджелудочной железы). Он катализирует по преимуществу гидролитическое отщепление остатков, соседних с З -пурино-выми остатками. Еще более высокой специфичностью обладают ферменты, выделенные из неочищенных препаратов такадиастазы. Один из них — рибонуклеаза Т1 — катализирует расщепление только тех межнуклеотидных связей, в образовании которых участвуют З -гуаниловые нуклеотиды, а второй — рибонуклеаза Т2 — расщепляет только связи, образованные с участием З -адениловых нуклеотидов. [c.129]

Процесс установления равновесия иногда занимает день или больше. Поскольку при таких больших сроках возможны денатурация или бактериальное загрязнение, искажающие результаты эксперимента, разработан ряд приемов, позволяющих ускорить установление равновесия. Длительность этого процесса прямо пропорциональна квадрату высоты столба жидкости. Если оиа равна 1—3 мм, процесс установления равновесия длится в течение нескольких часов. Для ячеек с высотой столба жидкости 0,8 мм это время при седиментации сахарозы, рибонуклеазы и бычьего сывороточного альбумина равно соответственно 15, 45 и 70 мин. Однако при таких размерах снижается точность и чувствительность к гетерогенности, хотя в этом случае можно работать при больших угловых скоростях. С помощью многоканальных ячеек производится одновременное определение нескольких концентраций при одинаковой температуре. К уменьшению времени достижения равновесия приводит также такой режим вращения ротора, при котором начальное значение скорости выбирается несколько завышенным и затем постепенно снижается. Концентрацию можно измерять с помощью интерференционного метода Релея, а молекулярный вес рассчитывать, используя значение градиента концентрации в точке перегиба (т. е. средней точке на фиг. 35, Л). Для обеспечения постоянства скорости, необходимого в некоторых экспериментах по седиментационному равновесию, лучше всего использовать магнитную подвеску стального р тора в высоком вакууме. В этих условиях скорость уменьшается всего на 1 об1мин за сутки. [c.194]

Описано несколько других систем, которые катализируют включение концевых рибонуклеотидов в РНК- Они, возможно, и не имеют отношения к специфическому синтезу РНК de novo, так как рибонуклеиновые кислоты, вероятно, образуются путем постепенного присоединения нуклеотидов и концевые фрагменты, по-видимому, должны быть более чувствительны к обратимому пирофосфоро-лизу, чем внутренние нуклеотиды. Однако важным фактором при включении в концевые группы может быть отсутствие подходящего рибонуклеозид-5 -трифосфата. В различных рибонуклеиновых кислотах было идентифицировано около тринадцати различных нуклеозидов при попытке вызвать ферментативную полимеризацию-четырех основных нуклеотидов встретились затруднения, препятствующие образованию полинуклеотида с достаточно высокой длиной цепи. Тем не менее существуют прямые доказательства синтеза полирибонуклеотидов из рибонуклеозид-5 -трифосфатов в животных системах. Например, экстракты из ядер зобной железы теленка после фракционирования дают ферментные препараты, которые катализируют образование полиадениловой кислоты (длиной 25—100 нуклеотидов) из аденозин-5 -трифосфатов. В присутствии затравочной РНК цитидин-5 -трифосфат превращается в по-лицитидиловую кислоту частично очищенным ферментом (в отличие от фермента, специфичного для АТФ) из того же самого источника. В случае других систем животных (ядра печени крысы) моно-нуклеотидный остаток цитидин-5 -трифосфата (а-Р ) включается во внутренние участки, а не в конец цепи. Включение заметно стимулируется АТФ, ГТФ и УТФ, в то время как рибонуклеаза и дезоксирибонуклеаза заметно понижают включение. [c.318]

Из табл. 26 следует, что действие фермента наиболее эффективно в отношении субстратов, содержащих более крупные боковые цепи. Ароматические остатки меиее чувствительны относительно медленно гидролизуются амиды аминокислот, имеющих полярные боковые группы. Скорости гидролиза пептидов зависят также от природы аминокислот, примыкающих к N-концевому остатку. В ряде случаев оказалось возможным частично выяснить N-концевую последовательность при подМощи лейцинаминонептидазы. Окисленные А и В-цепи инсулина легко гидролизуются ферментом до свободных аминокислот. Путем кинетического исследования удалось установить последовательность первых шести N-коицевых аминокислот В-цепи инсулина. При помощи лейцинаминопептидазы были получены важные данные об N-концевой последовательности ряда природных пептидов и пептидных фрагментов, полученных из белков. Некоторые белки, например рибонуклеаза, лизоцим, Zn-инсулин и сывороточный альбумин, устойчивы к действию фермента, но легко гидролизуются после окисления надмуравьиной кислотой или после удаления Zn (в случае инсулина). Полное расщепление пептида или белка до аминокислот указывает на L-конфигурацию всех входящих в его состав аминокислот. f [c.183]

Собственно говоря, в опыте Спигелмана все естественное ни РНК, ни полимераза, ни нуклеотиды не были синтезированы в лаборатории все они были получены из живых клеток или из бактериофага Рр. Лишь условия опыта были искусственными , т. е. имитируюш,ими природные условия. Описанная бесклеточная система отличается большой чувствительностью достаточно малейшего изменения концентрации компонентов или появления загрязнений (скажем, примеси рибонуклеазы)— и она перестает работать. Приходится только удивляться, что такую систему удалось собрать вне клетки, что точное копирование генома вообще может происходить в пробирке. Но тот факт, что эта столь лабильная система, за которой необходимо так заботливо следить вне клетки, может функционировать и в клетке, причем несравненно надежнее, граничит с чудом. Ведь в клетке — это означает (помимо всего прочего) в присутствии тысяч промежуточных продуктов обмена и тысяч ферментов (в том числе рибонуклеазы), в присутствии рибосом и РНК, всевозможных ионов и т. д. Почти каждый из этих компонентов в отдельности мог бы разрушить нашу систему в реторте . Напротив, в клетке они, по-видимому, не вредят синтезу, точно так же как, скажем, удвоение генома не нарушает других клеточных процессов. [c.398]

По наклону получающихся прямых определяют значения ко и, следовательно, Мо. В данном случае для нас важно то, что эти зависимости, вычисленные из соответствующих разностей, оказываются очень чувствительными к полидисперсности. На фиг. 44 приведены два примера построений, выполненных методом П1, для вы-сокоочищенного препарата рибонуклеазы и для частично агрегировавшего лизоцима. Во втором случае хорошо видна нелинейность, связанная с гетерогенностью препарата. [c.208]

Хороших способов препаративного разделения смесей различных молекул ДНК и РНК пока не существует. Да и получать эти вещества в нативном состоянии, не повреждая их, научились лишь в самые последние годы. При выделении нуклеиновых кислот имеется целый ряд технических препятствий. Самое бо.льшое препятствие — это ферменты рибонуклеаза и дезоксирибонуклеаза, расщепляющие их с огромной скоростью и трудно поддающиеся инактивации. Второе осложнение — чрезвычайная чувствительность макромолекул этих полимеров к гидродинамическим возмущениям. Как указывалось вьппе, достаточно иногда струи, возникающей при быстром выдувании раствора ДНК из пипетки, чтобы вызвать заметную деполимеризацию. Поэтому некоторые из применявшихся до сих пор методов разделения нуклеиновых кислот, дававших пестрые и неясные результаты, были скорее методами разделения частично фрагментированных молекул друг от друга. Это относится, например, к хроматографии препаратов ДНК на колонках с целлюлозным сорбентом EGTEOLA или с глиноземом, покрытым гистоном. Тот факт, что фракционирование ДНК с трансформирующей активностью дало ряд активных фракций, показывает, что здесь имело место не разделение различных молекул ДНК (нет сомнений, что трансформирующая активность по определенному локусу присуща одному типу молекул ДНК), а разделение фрагментов молекул, несущих локус с данной трансформирующей активностью (этот локус может занимать всего 0,1 длины молекулы). То обстоятельство, что при хроматографии осколки разного молекулярного веса будут основательно делиться, не вызывает удивления. Однако это не решает методической задачи фракционирования ДНК на химически индивидуальные вещества. [c.257]

Изучены хироптические свойства, обусловленные активными дисульфидными хромофорами (разд. 2.21), а также КД некоторых специфичных белков, таких, как миоглобин, гемоглобин, инсулин, рибонуклеаза, сывороточный альбумин и лизоцим [433, 563, 587, 593, 594]. Кроме того, хироптические методы использованы для того, чтобы получить данные о структуре нуклеогисто-нов, о стабилизации рибонуклеиновых кислот природными или синтетическими полиоснованиями, а также о действии мочевины и додецилсульфата натрия на структуру яичного альбумина. Недавние исследования показывают, что в глобулярных белках эффекты Коттона часто имеют значительную величину и наблюдаются вблизи УФ-полос поглощения тирозина и триптофана. Исследование оптической активности триптофана, тирозина и производных фенилаланина, в частности, в связи с изучением рибонуклеазы показало наличие значительного эффекта Коттона, обусловленного полосой поглощения шести тирозиновых остатков. Сделана попытка систематического анализа этих эффектов [595]. Ряд простых производных, исследованных в растворителях, замерзающих при температуре жидкого азота, обнаруживают тонкую структуру как УФ-, так и КД-полос, что делает возможным анализ их колебательной структуры. Фенольный хромофор имеет два перехода в близкой ультрафиолетовой области. Исследованы соответствующие колебательные прогрессии, одна сильная и одна слабая. Их положение очень чувствительно к природе растворителя, и поэтому следовало ожидать, что в рибонуклеазе, которая имеет три защищенных и три незащищенных тп-розиновых звена, будут прогрессии, возникающие из обоих типов звеньев, если оба они обладают повышен- [c.94]

Однако в экстрактах, приготовленных спустя несколько минут, меченая родительская РНК обнаруживается в составе двухцепочечной формы, устойчивой к рибонуклеазе, которая благодаря своей жесткой спиральной конформации имеет более низкую константу седиментации — 145. В экстрактах, приготовленных через 10 мин после начала внутриклеточного развития фага, меченая родительская РНК обнаруживается в составе частично двухцепочечной формы, которая частично чувствительна к рибонуклеазе до обработки рибонуклеазой такая РНК имеет константу седиментации около 305, а после обработки — 148. На основании этих результатов была предложена схема репликации РНК фага 2 (фиг. 233), напэмянаю цая в принципе механизм репликации ДНК фага 0X174. Согласно этой схеме, в начале репликации одноцепочечная родительская РНК ( плюс -цепь) используется в качестве матрицы для синтеза комплементарной минус -цепи в результате образуется двухцепочечная РФ-РНК. Образовавшаяся минус -цепь репликативной формы служит затем в качестве матрицы для синтеза комплементарной плюс -цепи дочерней РНК- Однако задолго до того, как закончится синтез первой дочерней плюс -цепи, на репликативной форме инициируется синтез второй, [c.471]

Фракцию клеточных стенок суспендируют в 100 мл насыщенного хлороформом трис-буфера. Добавляют дезоксирибонуклеазу (0,5 мл раствора с концентрацией 1 мг/мл) и рибонуклеазу (1,0 мл раствора с концентрацией 5 мг/мл) и инкубируют суспензию при 37 °С 30 мин. Добавляют 100 мкг кристаллического трипсина и продолжают инкубацию при той же температуре еще б ч. Клеточные стенки осаждают центрифугированием и промывают, как описано выше. Осаждение и промывание повторяют до получения гомогенного слоя. Для удаления денатурированных белков добавляют трипсин. Этот фермент вызывает автолиз пептидогликана некоторых бактерий. В этом случае при центрифугировании осадка не образуется. Если это наблюдается, обработку трипсином проводить не следует. Выделение пептидогликана из большинства грамотрицательных бактерий требует большого количества клеточного материала (20—30 г) из-за низкого содержания этого полимера в бактериях и его повышенной чувствительности к автолизу. Методика получения 150 мг пептидогликана из клеток Е. oli описана Вейделем и др. [56], [c.330]

Модифицирующее действие кислорода. В экспериментах с сухими препаратами ферментов было установлено, что их радио-чувствительность значительно возрастает, если облучение проводится в атмосфере кислорода, а не в вакууме. На рис. П1-19 представлены результаты эксперимента по сопоставлению эффективности инактивации сухой РНКазы -улучами в вакууме и в атмосфере кислорода. Значение дозы )з7 для инактивации рибонуклеазы в вакууме примерно вдвое выше, чем в атмосфере Оз. [c.89]

Полную последовательность 5-го сегмента РНК получили для двух штаммов — A/PR/8/34 [276, 294 и неопубликованные данные W. Min Jou, 1981] и A/NT/60/68 [107]. Сегмент 5 РНК состоит из 1565 нуклеотидов, включая в случае мРНК некодирующий 5 -участок из 45 нуклеотидов и некодирующий З -участок из 20 нуклеотидов. Кодирующая область из 1494 нуклеотидов кодирует 498 аминокислот, которые дают предсказанную м.м. 56 101 для NP, что очень близко по значению к молекулярной массе, рассчитанной по поведению NP в электрофорезе [58, 150, 204, 257]. Белок богат аргинином и имеет положительный заряд -Ы4 при pH 6,5. У него нет групп основных остатков, наличие которых можно было предположить для взаимодействия кислотных фосфатных остатков РНК с молекулами NP, и, следовательно, РНК ассоциирована со многими з частками молекулы NP, нейтрализуя заряды. На основании общей длины генома вируса гриппа. (13 588 нуклеотидов) и количества молекул NP, ассоциированных с одной вирусной частицей [54], можно рассчитать, что приблизительно 20 нуклеотидов взаимодействуют с одной белковой субъединицей. Можно также предположить, что РНК связана с наружной частью рибонуклеопротеидной структуры, так как она может замещаться поливинилсульфатом (84, 204] и чувствительна к расщеплению рибонуклеазой без разрушения структуры РНП [68.., [c.49]

Например, на рис. 2.12 показан полипептидный скелет бычьей рибонуклеазы А. Химическое исследование белка показывает, что 1,5-дифтор-2,4-динитробензол сшивает остатки лизина 7 и 41. Неожиданная чувствительность белка к модификации иодуксусной кислотой приводит к любопытному заключению гистидины 12 и 119 модифицируются по приншту или-или это можно объяснить тем, что они располагаются в активном центре фермента недалеко друг от друга. Сопоставляя сведения о последовательности и обе группы химических данных, легко видеть, что плоское расположение пептидной цепи исключается. Молекула должна быть уложена в пространстве более сложным образом, и результаты рентгеноструктурного анализа действительно подтверждают это. [c.70]

Одна из наиболее трудных и интересных задач биохимии — это выяснение физических основ строения белковых молекул, отличающихся тонкой организацией и высокой специфичностью. Эта задача приобретает особое значение из-за того, что биологическая активность таких макромолекул чувствительна к изменениям их пространственной конформации. Так как биологические полимеры способны разворачиваться (например, при нагревании или обработке мочевиной) и затем снова сворачиваться, возвращаясь в исходное состояние, разумно предположить, что в основном конформации, принимаемые различными биополимерами, наиболее выгодны термодинамически. Некоторые данные, подтверждающие эту гипотезу, были получены в серин экспернмеитов, выполненных Анфинсеном и др. (1961 г.). Эти исследования показали, что даже при разрыве всех четырех дисульфидных связей рибонуклеазы и полной ее денатурации мочевиной после удаления мочевины и реокисления дисульфидных мостиков белок снова приобретает правильную нативную конформацию [c.237]

Как же связаны изложеннные соображения со структурой нативного белка Иметь представление о структуре растворителя и о природе его взаимодействия с белком необходимо для того, чтобы понять, какое огромное влияние может оказывать растворитель на конформацию белковых молекул. То обстоятельство, что относительно низких концентраций мочевины или гуанидинхлорида (например, 1 молекула мочевины на 5 -s- 10 молекул HjO) часто оказывается достаточно для полного разрушения нативной структуры белка и перехода его в неупорядоченную конформацию, хорошо иллюстрирует чувствительность структуры белковых молекул к составу раствора. С другой стороны, растворитель может вызывать структурные изменения, приводящие к формированию иного, уникального, высокоупорядоченного состояния. Для этой цели, например, может быть ис- пользован 2-хлорэтанол. Белки растворимы в нем, и хотя это полярный растворитель, он обладает гораздо более слабой, чем вода, способностью образовывать водородные связи. Например, рибонуклеаза в 2-хлорэтаноле принимает другую, как полагают, значительно более совершенную спиральную конформацию, чем в воде (см. Doty, 1960). Сходные результаты были получены и для других белков. Их можно объяснить тем, что в бедных водородными связями растворителях легче образуются внутримолекулярные водородные связи. Все это еще раз подчеркивает, как велико влияние растворителя на конформацию. [c.261]

Геном пикорнавирусов представлен одноцепочечной РНК, выполняющей функцию мРНК. Удельная инфекционность изолированной РНК составляет примерно одну миллионную часть от инфекционности вириона. О том, что эта инфекционность действительно связана со свободной РНК, а не со следовыми количествами интактных вирионов, свидетельствует ее чрезвычайно высокая чувствительность к рибонуклеазе (<0,01 мкг/мл). В связи с этим при выделении инфекционной РНК работают Б хирургических перчатках, чтобы предотвратить загрязнение препарата микроскопическими частичками, содержащими нук-леазы, которые могут попасть с кожи. Напротив, инфекционность интактных вирионов, где РНК защищена белковой оболочкой, совершенно не изменяется при воздействии рибонуклеа-зой, даже когда ее концентрация в миллион раз превышает упомянутую выше величину. Для утраты инфекционности достаточно, чтобы в РНК был внесен одиночный разрыв, незави симо от того, изолирована ли РНК или находится в составе вирусной частицы. [c.194]

II. Действие ферментов. Одноцепочечная вирусная РНК Крайне чувствительна к действию рибонуклеаз. Поскольку достаточно только одного разрыва в молекуле РНК, чтобы она потеряла инфекционность, крайне важно избежать действия фермента в процессе выделения РНК. В очищенных вирусных препаратах часто присутствуют следы рибонуклеаз из листьев. Они должны быть удалены либо из интактного вирусного препарата, либо во время выделения РНК, либо, наконец, в ходе этого процесса следует использовать ингибиторы рибонуклеаз. Деградация под действием нуклеаз может быть также сведена к минимуму, если использовать условия, при которых аетивность фермента минимальна — низкая температура (0—4 °С), соответствующие значения pH и ионной силы. [c.54]

Была предпринята попытка прямым путем определить длительность процесса депротеииизации вируса после заражения листьев табака интактным ВТМ, меченным Р [1409]. В этих опытах регистрировалось время появления РНК, чувствительной к деградации РНКазой. Около 1% РНК деградировало немедленно после инокуляции (в нулевое время). Значительный подъем чувствительности к РНКазе (до 2,5%) наблходался чер(зз 3 ч после инокуляции и через 6 ч (до 5%), носле чего нарастание чувствительности прекращалось. Размер РНК, чувствительной к рибонуклеазе, ие определяли. Таким образом, в этих экспериментах не было получено данных о том, какой вклад в чувствительность вирусной РНК к РНКазе вносит существование частично депротеинизированных частиц. [c.146]

Фиг. 27- Повышение и спия мгио содержания чувствительного к рибонуклеазе материала и зараженных ВТМ листьях таба1 а н течение 72 ч после заражения [1475].

Экстракты из листьев, полутенгше на 2-ж или 3-й день после заражения, обнаруживали значительную инфекциоииость в зоне градиента, соответствующей иуклеиновой кислоте если же экстракты получали через 3 педели после заражения, то инфекционность в этой зоне оказывалась очень низкой. На основании ряда контрольных опытов было сделано заключение, что инфекционность в зоне, соответствующей нуклеиновой кислоте, следует приписать либо РНК, которая имелась в листе в свободном виде, либо некой лабильной форме ВТМ, которую можно обнаружить лишь на очень ранней стадии инфекции. Эти результаты были затем подтверждены с применением несколько иного метода экстракции. При этом исследовалось так ке влияние времени, прошедшего после заражения, на содержание материала, чувствительного к рибонуклеазе (фиг. 27) [1475]. [c.160]

Количество такого материала быстро увеличивалось между 12 и 36 ч (считая с момента заран ения), а затем быстро падало, начиная с 48 ч, т. е. в то время, когда скорость синтеза вируса заметно снижалась. Примерио такой и должна быть картина, если материал, чувствительный к рибонуклеазе, является предшественником вируса. Небольшое количество свободной РНК вируса было обнаружено с помощью электрофореза в сырых экстрактах из листьев табака, зараженных Х-вирусом картофеля [1204]. Однако инфекционный материал в этих опытах имел разную электрофоретическую подвижность и ие был достаточно хорошо охарактеризован. [c.160]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология