Аминокислоты определение азота

ОПРЕДЕЛЕНИЕ АЗОТА АМИНОКИСЛОТ [c.140]

Определение азота аминокислот медным способом. ()писано ниже, в работе Гидролитическое расщепление белка ферментами поджелудочной железы (см. с. 146). [c.143]

Существующие химические методы определения азота в аминокислотах (по Кьельдалю, Ван-Слайку и др.) [1] продолжительны, трудоемки, недостаточно специфичны и точны. В настоящее время приобрели большое значение как визуальные, так и инструментальные (потенциометрические, кондуктометрические, спектрофотометрические и др.) методы определения аминокислот по аминогруппе в неводных средах, главным образом в ледяной уксусной кислоте и в ее смесях с другими органическими растворителями [2—6]. [c.102]

На практике для определения азота аминокислот пользуются табл. 4, приведенной на стр. 189. В верхней строке таблицы находят барометрическое давление Р, а в первом столбце—температуру t°, при которых производился опыт. На месте пересечения находят непосредственно вес 1 мл аминоазота при данных температуре и давлении. Вес дается уже с учетом того, что при реакции с азотистой кислотой лишь половина азота происходит от аминокислот. Пользование этой таблицей значительно упрощает расчеты. [c.188]

По разности между количеством общего и белкового азота находят содержание азота в небелковых веществах. При значительном содержании небелковых азотистых веществ прибегают к отдельным определениям азота, находящегося в форме амидов, аминокислот, азотистых оснований и т. д. [c.412]

Эта реакция легла в основу нитритного метода Ван-Слайка для определения аминокислот выделяющийся азот может быть определен газометрическим [118, 119] или манометрическим методом [120]. [c.33]

На рис. 8 показано действие кислой и щелочной среды на глютин. На оси абсцисс отложены значения pH, на оси ординат —содержание продуктов распада глютина—аминокислот (установлено по определению азота). Наименьший гидролиз глютина наблюдается при pH в пределах 5—7. [c.38]

Москвина М. М., Мишин В. И., Определение азота и углерода в аминокислотах, меченных углеродом-14, с применением га- [c.357]

Определение азота а-аминогрупп в аминокислотах показало, что аминокислоты такого строения составляют от 20 до 50% их общего числа в поверхностных слоях почвы [169, 171 — 188], причем содержание их снижается с увеличением глубины профиля. [c.319]

Для определения азота, входящего в состав белков пищи, производится анализ пищевых продуктов. Весовая часть того или иного продукта сжигается в колбе в присутствии серной кислоты. Белки гидролизуются, и отщепляющиеся от аминокислот (и иных веществ) аминогруппы в виде аммиака связываются серной кислотой. Затем определяют количество сернокислого аммония, по которому судят о количестве азота белков. Обычно для установления прихода азота учитывают количество отдельных пищевых продуктов в пищевом рационе и по готовым таблицам устанавливают содержание в них азота белков. [c.425]

Определение проводят в водном растворе гидролизата белка. При титровании в 96°-м спирте получают сумму полипептидов и аминокислот, при титровании в 50°-м спирте находят содержание полипептидов. Количество аминокислот определяют по разности первого и второго титрования. Таким образом, можно дифференцировать, до известной степени азот аминокислот и азот полипептидов. Следует учитывать, что в 50°-м спирте при титровании аминокислоты связывают только 28%-й щелочи от общего количества, необходимого для их полной нейтрализации, поэтому при расчете содержания вводится коэффициент [c.381]

Однако, зная только порядок расположения аминокислот, нельзя еще представить себе совершенно отчетливо все уровни организации белковой молекулы. Даже прн осторожном нагревании белки нередко необратимо утрачивают свойства, присущие им в природном состоянии, иными словами, происходит денатурация белков. Причем обычно денатурация не сопровождается расщеплением полипептидной цепи чтобы расщепить цепь, нужны более жесткие условия. Следовательно, цепи образуют какую-то определенную структуру под действием слабых вторичных связей . В образовании таких вторичных связей обычно участвует атом водорода, находящийся между атомами азота и кислорода. Такая водородная связь в двадцать раз слабее обычной валентной связи. [c.130]

Эту реакцию используют для количественного определения аминокислот по объему выделяющегося азота, так как каждая грамм-молекула N-2 эквивалентна грамм-молекуле моноаминокислоты. [c.283]

Отгонка аммиака используется в широко известном методе определения азота в органических соединениях по Кьельдалю. В простейшем варианте этого метода пробу обрабатывают при нагревании концентрированной серной кислотой в присутствии солей ртути (катализатор), в результате чего органические соединения окисляются до СО2 и Н2О, а азот переходит в ЫН4Н504. После охлаждения к остатку добавляют раствор щелочи и отгоняют ЫНз в отмеренный объем титрованного раствора кислоты, а затем определяют избыток кислоты, не вошедшей в реакцию с аммиаком, и рассчитывают массу азота в пробе по формуле обратного титрования. Методом Кьельдаля можно определять азот в аминах, аминокислотах, алкалоидах и многих других азотсодержащих соединениях. Некоторые соединения можно проанализировать по методу Кьельдаля только после предварительного разложения или восстановления хлоридом олова (И) или цинковой пылью (азотсоединения, производные гидразина и т. д.) [c.215]

В колб[л 1 и 3 пипеткой вносят по 20 мл раствора желатина, в колбы 2 и 4 — по 20 мл дистиллироианной воды. Растворы во всех колбах перемешивают и иемедлен-1Г0 отбирают из каждой колбы по 2—5 мл смеси в мерные колбы на 25 мл для определения азота аминокислот. [c.149]

Для определения азота аминокислот в каждую мерную колбу прибавляют 2 капли раствора тимолфталеина и ло каплям 1 н раствор едкого натра до светло-голубого окрашивания (рП 10,2). К нейтрализованным растворам доливают по 10 мл суспеггзии фосфорнокислой меди и тщательно перемешивают. Если весь объем суспензии [ рореагировал, добавляют еще 5 мл. [c.149]

Другим методом количественного определения азота является метод Кьельдаля. При ЭТОМ вещество подвергают разложению нагреванием с концентрированной серной кислотой в присутствии ртуть- или селеносодержащего катализатора при этом происходит во.сстаиовление до аммиака. После добавления едкого кали и перегонки ацидиметриче- ски определяют количество образовавшегося аммиака в дистиллате. Метод Кьельдаля с успехом применяется для количественного определения азота в аминокислотах и аминах, однако он неприменим для анализа нитро- и азосоединений. [c.33]

Работая над настоящей книгой, автор стремился при изложении в ней новых методов по возможности не увеличивать объем книги. Во избежание увеличения объема книги были опущены такие широко известные и редко используемые специальные методы как определение азота аминокислот по Ван-Слайку, исследование дыхания манометрическим способом (по Баркрофту и Варбургу), а также некоторые другие методы, описанные в первом издании (см. Петров К- П. Практикум по биохимии пищевого растительного сырья. М., Пищевая промышленность , 1965). [c.3]

Образование синей окраски при взаимодействии аммиака с фенолом и гипохлоритом натрия было впервые отмечено Бертело в 1859 г. реакция время от времени исследовалась в течение последних 50 лет [171]. Преимуществом фенол-гипохлоритной реакции является образование истинного раствора окрашенного соединения. Чувствительность этой реакции близка к чувствительности реакции Несслера. Прямое фотометрическое определенде аммиака без дистилляции или аэрации невозможно [32, 149]. Ионы железа, хрома и двухвалентного марганца катализируют реакцию, в то время как ионы меди [149] и окислители, как, например, персульфат [32], подавляют развитие окраски. Некоторые аминокислоты [125, 149] и никотин [61] также влияют на чувствительность реагента. Температура влияет на воспроизводимость окраски [61]. Метод применяли для определения аммиака в водах кок-со-бензольного производства [60] и биологических объектах [32, 48, 116, 125, 126, 149, 171, 178]. Аналогичная реакция с применением тимола и гипобромита натрия с последующей эфирной или ксилольной экстракцией была предложена для фотометрического определения азота [c.93]

Определение общего азота в различных биологических объектах. Метод Коха — Мак-Микина был применен для определения азота в разнообразных биологических материалах, например аминокислотах, пиримидинах, пуринах, нуклеиновой кислоте, креатине, витаминах и аналогичных веществах, в экстрактах из нормальной мышцы и опухоли, а также в очищенных диализом белках. [c.113]

При определении аминокислот с помощью формольного титрования используется реакция аминокислот с формальдегидом, приводящая к увеличению кажущейся кислотности [171, 176]. Одним из самых старых методов определения степени гидролиза является газометрический метод Ван-Слайка, основанный на определении азота, выделяющегося нри взаимодействии аминокислоты с азотистой кислотой [171, 184]. В литературе описаны [171] различные модификации этого метода и оцениваются другие возможньге методы определения аминокислот, включая титриметрические, газометрические, спектрофотометрические и т. д. Использовалось также ферментативное декарбоксилирование специфических аминокислот при определении молекулярного веса полипептида и степени его гидролиза [16]. [c.401]

В химии аминокислот используется много других аналитических способов. Определение азота по Къелъдалю дает содержание всего азота в белке или белковом гидролизате. При. этом определении органическое соединение разлагается путем, нагревания со смесью концентрированной серной кислоты и катализаторов, таких, как двуокись селена. Образующиеся аммонийные соли превращаются в аммиак, который отгоняют и титруют. Общее содержание азота заметно меняется в зависимости от характера аминокислот в белке. Количество азота, присутствующего в виде первичных аминогрупп, определяется по методу Ван-Слайка. Неизвестное вещество обрабатывают азотистой кислотой и измеряют объем выделяющегося азота. [c.539]

Б газах 3492, 4030, 5219, 5405, 5940 в навозной жиже 7997 в пищевых продуктах 7835 в почвах 5569, 6603 в продуктах сахарного производства 6583 в стали 3482, 3693, 4107, 4194, 4723, 4737 в ферросплавах 3482 в цианамиде кальция 5897 прибор для его определения 2118, 2154 Азот аминный, см. аминокислоты и азот белковый Азот белковый, определение 8246, 8413 см. также аминокислоты Азот нитратный, опредапение 2857, 3584, 4041, 5532 Азот пуриновых оснований, определение 7462 Азот технический, определенна содержания О2 5656 Азота двуокись определение в воздухе 4203, 4650, 5196, 5360 [c.347]

С разложением. При применении указанной здесь методики не происходит рацемизации аминокислоты, и она обладает свойственной ей оптической деятельностью, [а]2б = -f 8,0° в присутствии трех молей хлористоводородной кислоты. Перекристаллизованный продукт обычно аналитически чист, и определение азота по Ван-Сляйку дает правильные результаты. Иногда для получения аналитически чистого продукта требуется еще одна перекристаллизация. [c.162]

Характер взаимодействия азотистой кислоты с аминокислотой сходен с рассмотренным выше для случая обычных аминов (разд. 19-6,В, см. также упражнение 19-21, а). Первичные амины реагируют с выделением азота, причем промежуточно образуются соот-ветствуюш,ие диазониевые соединения вторичные амины превращаются в нитрозосоединения, а третичные обычно не вступают в реакцию. Измерение количества азота, выделяющегося при обработке аминокислот или их производных азотистой кислотой, лежит в основе широко применяемого метода анализа на свободные NHa-группы аминокислот (определение аминного азота по Ван Сляйку). В случае аминокислот, так же как в случае аминов, взаимодействие с азотистой кислотой не может рассматриваться как вполне удовлетворительный препаративный метод превращения RNHa в ROH. [c.107]

ПОЛОСЫ поглощения. В той же области спектра поглощают гидрохлориды простых аминов бутиламина [37] и метиламина [38]. Томпсон и др. [19] обнаружили полосу поглощения 3100 см у гидрохлорида глицинового эфира, в то время как фенилглициновая соль натрия с незаряженной группой ЫНг дает обычную аминную полосу поглощения вблизи 3370 смГ . Гор и др. [24] подтвердили наличие полосы поглощения вблизи 3000 см у растворов глицина в тяжелой воде, содержащей ВС1. С другой стороны, при рассмотрении спектров гидрохлоридов аминокислот, опубликованных Рендаллом и др. [17], можно сделать заключение, что семь соединений, содержащих группу ЫНд, и три соединения, содержащих группу не поглощают в этой области, в то время как пять других соединений с группой ЫНд поглощают в пределах 3145—3049 слГ . Это свидетельствует о необходимости дальнейшей работы в этом направлении, так как если бы было подтверждено, что гидрохлориды аминокислот не поглощают в этой области, то было бы обоснованным сомнение в правильности отнесения этого поглощения к группе КНд. Однако поскольку все исследованные до настоящего времени нейтральные аминокислоты определенно поглощают в этой области, данная корреляция вполне может быть использована для их идентификации. Полосы валентных колебаний ЫН+ наблюдаются также у координационных соединений, таких как аммины кобальта. Эти соединения были изучены рядом исследователей [39—45]. Однако в этих случаях заряд, сосредоточенный на атоме азота, существенно меньше и частоты антисимметричных и симметричных колебании равны соответственно примерно 3300 и 3150 см -. [c.340]

Мешающие вещества. Некоторые амины, как метиламин, этиламин и другие [72], дают аналогичную реакцию с гипобромитом, хотя интенсивность окраски значительно слабее. В присутствии этих веществ а ммиак предварительно отгоняют. Более сложные азотсодержащие органические соединения, такие, как аминокислоты, полипептиды и другие, не реагируют подобным образом с гипобромитом. При определении азота в присутствии сложных азотсодержащих соединений сначала выполняют реакции по Кьельдалю и заГем отгоняют аммиак. В некоторых случаях нет необходимости в операции дистилляции, которую можно захменить экстракцией окрашенного соединения. [c.22]

В качестве примера можно привести работы по определению азота методом газовой хроматографии в газах, образующихся при радиолизо органических соединений [1401] в аминокислотах и других органических соединениях [815], в газах над закупоренным пивом [562]. [c.183]

В то время как сг-аминогруппы аминокислот и концевые л-аминогруппы пептидов очень быстро реагируют с азотистой кислотой, Е-аминогруппы лизина реагируют очень медленно. Прн действии азотистой кислоты медленно разлагается с образованием азота также аммиак, который при гидролизе соляной кислотой отщепляется от амидных групп аспарагина и глутамина [18]. Объем образовавшегося азота можно измерить либо при атмосферном давлении, либо манометрически — при пониженном давлении [20]. Метод Ван-Слайка дает прекрасные результаты с большинством аминокислот и пептидов. Необходимо, однако, принимать в расчет, что сама азотистая кислота под действием сильно восстанавливающих веществ (например, цистеина) разлагается с образованием азота [21]. При определении азота глицина и его пептидов также получаются данные, превышающие теоретически вычисленные величины [22, 23]. [c.26]

Попытку создать метод количественного определения для характеристики белковых препаратов предпринял В. Гаусман, предложивший характеризовать белки по распределению азота в трех основных группах продуктов их гидролитического расщепления. Он проводил количественное определение азота аммиака, а также азота оснований я неосновного азота гидролизата [243, 244]. Этот метод в модификации Т. Осборна, добавившего определение четвертой фракции — азота меланина, или, по современной терминологии, азота гумина,— стал одним из наиболее распространенных методов аналитической химии белков [348]. Но это был групповой метод и он не мог дать никаких сведений об отдельных компонентах белковой молекулы или отдельных продуктах ее гидролитического распада. Метод разделения основных аминокислот, предложенный А. Косселем и Ф. Кутчером, имел ограниченное значение [282], как это будет видно в дальнейшем. [c.65]

Определение аминного азота аминокислот по ван Сляйку [197]. Аминогруппа, присутствующая в аминокислотах, проявляет такое же отношение к действию азотистой кислоты, как и обычная аминогруппа первичных аминов, т. е. замещается на гидроксильную группу с одновременным выделением азота. Поэтому для определения азота аминогруппы в аминокислотах может быть использован тот же метод ван Сляйка, который применяется при анализе первичных алифатических аминов, изложенный на стр. 145. Никаких существенных изменений в методику вносить не требуется. 1 мл выделяющегося азота соответствует 0,585 мг азота аминогруппы. [c.270]

Определение азота является скорее проблемой элементарного анализа, чем проблемой анализа белков, а применение микрометода Кьельдаля почти универсально. Чибнел с сотрудниками [175] показали, однако, что в настоящее время желание ускорить анализ привело к заниженным и переменным результатам и необходимо большее время разложения, чем указывается в современных методах. Очевидно, что ошибка определения азота проявится в любых аналитических данных по аминокислотам. Однако, если проводить работу тщательно, определение азота более точно, чем любое определение аминокислот, [c.61]

Данные различных исследователей по одному и тому же белку легче всего сравнивать, когда они выражены в виде числа остатков каждой аминокислоты, приходящихся па тысячу (или другое удобное число) общих остатков [117]. При этом методе сравнения уменьшаются небольшие различия между отдельными данными за счет ошибок во взвешивании, колориметрии и определении азота. Существенно, однако, чтобы данные были полными и возможно более точными, так как иначе метод теряет свою ценность и может привести к ошибочным выводам. Обзор других методов, использованных для выражения результатов аминокислотных анализов, опубликован Истоу [38]. [c.150]

Важным является также вопрос о вариабельности данных по содержанию белка и аминокислот в пищевых продуктах. На основании материалов, поступивших из отраслевых подкомиссий МВК нами были обобщены данные по вариабельности содержания белков и аминокислот в пищевых продуктах [12]. Вариабельность содержания белка зависит от природы продукта. В животных продуктах коэффициент вариации (относительное среднеквадратичное отклонение) равен 5—10%, для растительных (зерно, бобовые, фрукты) 15—20%. При этом внут-рилабораторная методическая ошибка сходимости (внутрилаборатор-ный коэффициент вариации) при определении азота по Кьельдалю, как отмечалось выше, не превышает 1 %. Межлабораторная воспроизводимость (межлабораторный коэффициент вариации) не превышает 2— [c.287]

Аминокислоты (гликоколь, цистин , пролин, триптофан, аргинин, гистидин, epHH ), а также ди- и полипептиды реагируют своими аминогруппами, образуя соответствующие сульфокислоты, замещенные у азота . Последняя реакция была применена для определения строения белков и продуктов их расще-пления °. [c.267]

Дезаминирование первичных аминов азотистой кислотой сопровождается выделением азота, количество которого можно определить по объему на этом основан метод Ван-Сляйка для количественного определения соединений, содержащих первичную амино- группу (алифатических и ароматических аминов, аминокислот, незамещенных амидов). [c.232]

Несмотря на то что в состав белков человеческого организма и вхог дят все аминокислоты, перечисленные в табл. 14.1, однако отнюдь не все они должны обязательно содержаться в пище. Экспериментально доказано, что для человека существенное значение имеют девять аминокислот. Такими незаменимыми аминокислотами являются гистидин, изолейцин, лейцин, лизин, метионин, фенилаланин, треонин, триптофан и валин. Все остальные аминокислоты, которые называют зал1еныл1ьши аминокислотами, человеческий организм способен вырабатывать сам. Минимальные количества аминокислот, необходимые человеку в молодости, были установлены американским биохимиком У. Ч. Роузом. Ерли ежесуточное поступление в организм человека любой из восьми указанных аминокислот (за исключением гистидина) окажется ниже определенного уровня, то организм человека будет выделять больше соединений азота, нежели получать их с пищей белки в его организме станут распадаться быстрее, чем синтезироваться. Потребность молодых людей в аминокислотах колеблется в пределах двукратной дозы, например 0,4—0,8 г лизина в сутки. Минимальная потребность по Роузу представляет собой наибольшую величину для любого из наблюдаемых им лиц. Нет сомнений в том, что каждый человек отличается от другого своими генетическими особенностями, а следовательно, и своими биохимическими характеристиками. Данные, приведенные в табл. 14.2, вдвое превышают значения, установленные Роузом. Предположительно эти количества вполне достаточны для предотвращения нарушений белкового обмена для большинства людей (99%). Потребности женщин составляют приблизительно две трети от количеств, указанных для мужчин. [c.389]