Белки определение азота

Определение основано на том, что содержание азота в большинстве белков практически одинаково и может быть принято равным 16%. По количеству определенного азота находят количество белка в пробе. При нагревании органического соединения с концентрированной серной (хлорной) кислотой происходит его минерализация, азот переходит в сернокислый аммоний (перхлорат аммония), и его можно определить количественно. [c.85]

Определение азота аминокислот медным способом. ()писано ниже, в работе Гидролитическое расщепление белка ферментами поджелудочной железы (см. с. 146). [c.143]

Определение проводят в соответствии со статьей Определение азота в органических соединениях (ГФ XI, вып. 1, с. 180) со следующими дополнениями навеску препарата, содержащую 10—20 мг испытуемого белка, помещают в колбу в , затем осторожно прибавляют 0,25 г растертой смеси калия сульфата, меди сульфата и натрия селената, взятых в соотношении 20 5 8,5, и 2 мл концентрированной серной кислоты. Проводят минерализацию, нагревая колбу на горелке или плитке, пока раствор не станет прозрачным. После этого продолжают нагревание еще в течение 30 мин. В конце минерализации, когда вся вода испарится, прибавляют 1—2 капли пергидроля и про- [c.33]

В ряде вопросов, например при выяснении родства между белками, при сравнении фракций патологических и нормальных белков и т. д., перекрестные реакции оказывают существенную пользу. Реакции преципитации весьма чувствительны. Например, с помощью антисыворотки соответствующего титра можно обнаружить овальбумин в концентрации 1 мкг/мл. В зависимости от используемого метода определения азота в количественной реакции преципитации удается обнаружить от 75 до 125 мкг антигенного азота. [c.16]

Определение бактериальной массы. Выбор метода для определения бактериальной массы зависит от того, с какой целью это определение производится. Для оценки урожая обычно взвешивают сырые или сухие отцентрифугированные клетки. При определении интенсивности обмена или ферментативной активности исходят из содержания в клетках белка или азота. Часто выбор метода диктуется такими соображениями, как простота или быстрота работы. В повседневной практике предпочтение отдается не прямым, а косвенным методам (после соответствующей калибровки). [c.192]

Реакции окисления-восстановления широко используются в почвенных и агрохимических анализах для определения белко вого азота и калия в растениях, органического вещества и каль ция в почве и т. д. Например, для определения органического вещества в почве ее нагревают с хромовым ангидридом и серной кислотой, при этом углерод органического вещества почвы окисляется до СО2. Эти реакции в суммарном виде можно записать так [c.123]

Белки — составляющая часть всего живого. На долю белка приходится приблизительно 50% сухого веса клетки. Из природных источников выделяют белки-ферменты, белки-гормоны, белки-токсины, белки-антигены и другие. Осуществляя ферментативную функцию, белки обусловливают динамичность обмена веществ. Белки — органические соединения. Элементарный состав белка углерод —50 — 55,5% водород — 6,5—7,3% азот — 15—18% кислород — 21—24% сера — 0—2,4%. Характерный показатель — содержание азота, в среднем его принимают равным 16%. При определении содержания белка по азоту количество азота умножают на фактор пересчета 6,25(100 16= 6,25). [c.12]

Однако усовершенствование метода определения азота Ж- Дюма и А. Кауром [148] позволило им уже в 1842 г. опровергнуть предположение Либиха об идентичности белков растительного и животного происхождения. [c.41]

Особенно большие колебания в содержании азота наблюдаются у растительных белков, так что при расчете па белок результатов определения азота в тех или иных природных продуктах пользуются особыми множителями например, для бобов сои, рапса и кукурузы применяют множитель 6,00 для овса, ржи и гороха—множитель 5,70 для земляных орехов, хлопкового и льняного семени, миндаля, подсолнухов—множитель 5,50. Во всяком случае, данные анализа всегда следует сопровождать указанием величины множителя, который был использован при вычислении содержания белков. [c.357]

Определение азота при анализе белков применяется так широко, что полное рассмотрение соответствующей литературы выходит за пределы настоящей статьи. Обычно принимается, что смесь чистых белков содержит 1 % азота. Содержание белка в образце получают умно- [c.16]

Трудности в определении азота по Кьельдалю главным образом связаны с проблемой разложения. Различные факторы, влияющие на полноту (и скорость) превращения азота белка в аммиак при разложении серной кислотой, содержат следующие источники ошибок [c.18]

Определение азота трудоемко и требует особого оборудования, поэтому для количественного определения белка был разработан ряд колориметрических методов. В тех случаях, когда необходимо определить общее содержание белка во многих образцах, обычно применяют методы, в основу которых положены биуретовая и нингидриновая реакции. [c.323]

Изучены некоторые факторы, влияющие на полноту разложе-яия навески при определении азота по методу Кьельдаля в различных модификациях [152, 184]. Питательную ценность некоторых концентратов, применяемых в качестве корма для цыплят, можно установить на основании данных, полученных после разложения белкового концентрата на фракции неизмененных белков (осаждаемых медью), продуктов разложения белков (осаждаемых фосфорновольфрамовой кислотой), неперевариваемых белков и -белков, растворимых в горячей воде [6]. [c.160]

При определении азота в белках и белковых гидролизатах по полумикрометоду Кьельдаля применен особый тип ловушки [102]. [c.220]

Идентификация гена в отсутствие гетерологичного зонда или какой-либо информации об этом гене — задача не из легких. В таких случаях часто приходится разрабатывать принципиально новую схему отбора. В ее основе может лежать иммунологическая идентификация искомого белка, определение его активности, ДНК-гибридиза-ция с олигонуклеотидным зондом, нуклеотидная последовательность которого была определена исходя из данных о частично секвениро-ванной аминокислотной последовательности очищенного искомого белка, или комплементация мутантов. Очень часто после идентификации гена, кодирующего определенную функцию, можно выделить аналогичные гены из других организмов, используя первый вьщеленный ген в качестве гетерологичного зонда для ДНК-гибридизации. Результативность данного подхода зависит от близости нуклеотидных последовательностей зонда и искомого гена. Эта стратегия оправдывает себя в случае консервативных в эволюционном плане генов, например генов, кодирующих белки, которые участвуют в фиксации азота, но в больщинстве случаев она малопригодна. [c.319]

Определение общего азота в различных биологических объектах. Метод Коха — Мак-Микина был применен для определения азота в разнообразных биологических материалах, например аминокислотах, пиримидинах, пуринах, нуклеиновой кислоте, креатине, витаминах и аналогичных веществах, в экстрактах из нормальной мышцы и опухоли, а также в очищенных диализом белках. [c.113]

В анализируемые растворы, склонные к пенообразова-нию, добавляют 1 каплю или, в случае необходимости, больше каприлового спирта, однако спирт нужно прибавлять в минимальных количествах, так как он может мешать определению реактивом Несслера вследствие образования белого осадка. Нужно следить за тем, чтобы спирт позднее был полностью окислен перекисью водорода при нагревании. Такое же количество каприлового спирта добавляют и в стандартные растворы. Добавляют 0,3 мл серной кислоты 1 1 и выпаривают воду на электрической нлитке. Продолжают нагревание 5 мин после появления белых паров. Снимают колбу и дают остыть 30 сек. Добавляют 0,1 мл 30%-ной перекиси водорода по стенке колбы, которую держат почти горизонтально. Нагревают еще 2 мин. Повторяют обработку перекисью водорода один, четыре или шесть раз, в зависимости от анализируемого объекта. При обычном определении азота в биологических жидкостях и экстрактах обработку перекисью водорода повторяют один раз, при анализе выделенных белков — четыре раза, а нри анализе таких стойких веществ, как рибофлавин, тиамин, фолиевая кислота, холин и никотиновая кислота,— не менее семи раз. Определения выполняют параллельно на двух пробах при обычной работе и на трех, если необходима большая точность. Охлаждают анализируемый раствор до комнатной температуры. Добавляют 20 мл дистиллированной воды, не содержащей аммиака, смывая ею стенки колбы. Помещают колбу на 5 сек в аппарат для перемешивания. Добавляют при перемешивании 5 мл [c.114]

В химии аминокислот используется много других аналитических способов. Определение азота по Къелъдалю дает содержание всего азота в белке или белковом гидролизате. При. этом определении органическое соединение разлагается путем, нагревания со смесью концентрированной серной кислоты и катализаторов, таких, как двуокись селена. Образующиеся аммонийные соли превращаются в аммиак, который отгоняют и титруют. Общее содержание азота заметно меняется в зависимости от характера аминокислот в белке. Количество азота, присутствующего в виде первичных аминогрупп, определяется по методу Ван-Слайка. Неизвестное вещество обрабатывают азотистой кислотой и измеряют объем выделяющегося азота. [c.539]

На этой реакции основывается метод количественного определения групп NHa, 0 Ван Сляйку, в аминокислотах и белках выделяющийся азот определяется объемным методом. [c.381]

Организм животных может синтезировать лишь определенные аминокислоты другие происходят из белков нищи, как уже указывалось выше. Поэтому недостаточно, чтобы пища животных содержала определенное количество белков (определенный процент азота) она должна содержать достаточное количество каждой незаменимой аминокислоты. Белки молока, мяса, рыбы, яиц, мозга, сыворотки, фибрина, сои и пшеничного зародыша содержат незаменимые аминокислоты в адекватном количестве эти белки могут заменять друг друга без какого-либо ущерба. Нанротив, в гемоглобине, желатине и многих белках растений (см. зеин) наблюдается дефицит некоторых незаменимых аминокислот (см. табл. 14). Потребление с пищей исключительно этих белков приводит к серьезным расстройствам (например, к нервным расстройствам у крыс в отсутствие валина). Отсутствие незаменимых аминокислот в белках пищи ярко проявляется на молодых животных, рост которых прекращается или замедляется. Эти явления исчезают при введении в их диету молока. [c.443]

Второй метод определения азота разработан в 1883 г. Кьельдалем-, Навеску вещества нагревают с концентрированной серной кислотоГ , обычно с добавкой какого-либо окислителя (КМПО4, НСЮ4), в результате чего вещество разлагается, а содержащийся в нем азот превращается в аммиак и образует сульфат аммония. Раствор разбавляют п после прибавления избытка ш,елочи аммиак отгоняют с водяным паром, пропуская его в титрованный раствор серной кислоты. Титрованием непрореагировавшей кислоты можно определить количество образовавшегося аммиака. Метод Кьельдаля, будучи менее общим, чем метод Дюма, применяется для быстрого анализа веществ с низким содержанием азота, например белков. [c.22]

Чибнэл, Рис и Вильямс [157А] указывают на то, что некоторые белки в безводном состоянии настолько гигроскопичны, что требуют особых прие.мов при обращении. Поэтому определение азота и влажности следует проводить на раздельных образцах белков, высушенных на воздухе. [c.353]

Чибнэл, Рис И Вильямс [157А] еще раз подтвердили выводы более ранних исследователей (Осборн, Сёренсен и др.), что при определении азота по Кьельдалю в белках и белковых гидролизатах (особенно при большом содержании лизина и гистидина) озоление следует продолжать еще 8 час. после получения бесцветных растворов даже в том случае, если применялись катализаторы и малые количества вещества. Эго правило редко соблюдается. [c.353]

При выделении фермента наибольшая часть времени затрачивается на определения активности (и белка). Поэтому при выборе соответствующих тестов ищут таких, которые могут обеспечить максимальную скорость анализов. В этих случаях быстрота определений более важна, чем их высокая точность (основные методы определения ферментативной активности рассматривались в гл. 3). Количество белка можно установить различными путями на основании химических, физико-химических и даже чисто физических способов, но чаще всего его определяют а) сжиганием вещества и определением азота но Кьельдалю б) биуретовой реакцией в) по методу Лоури, совместным использованием биу-ретового и фенольного реактивов. [c.139]

При определениях азота, входящего в состав белковых веществ, белки отделяют от других азотистых соединений осаждением, затем осадок сжигают с серной кислотой и определяют содержание азота по Кьель-далю. [c.7]

Для контроля степени очистки и для оценки качества конечного препарата необходимы прежде всего надежные методы количественного определения белка. Широкое распространение получило определение белка по количеству азота в осадке, образующемся при добавлении трихлоруксусной кислоты (ТХУ). В 10%-ной ТХУ происходит полное осаждение подавляющего большинства белков. Следует лишь иметь в виду, что при очень низких концентрациях белка (например, менее 1 мг1мл) не всегда удается количественно определить и без потерь промыть осадок. Азот белка можно определять либо непосредственно в осадке, либо по разности содержания азота в растворе до и после осаждения белка с помощью ТХУ. Последний, косвенный , вариант пользуется большей популярностью, так как позволяет избежать трудностей, связанных с собиранием и промыванием малых по объему осадков. Однако он малопригоден при наличии в растворе больших концентраций азотсодержащих веществ, не осаждаемых ТХУ. Само определение азота ведется по классическому методу Къельдаля или с помощью его модификаций (микроварианты, метод Конвея и др.). Метод сводится к кипячению белка с концентрированной серной кислотой и сульфатом калия в присутствии катализаторов (сульфат меди, соли селена или ртути) до полного перехода азота в сульфат аммония с последующим превращением его в аммиак (добавлением щелочи), отгонкой и количественным определением последнего (титрометрически или с помощью цветных реакций). Подробное описание метода можно найти во многих практических руководствах по биологической химии. Здесь заметим лишь, что необходима осторожность в расчете количества белка по количеству обнаруженного азота. Применяемый для этого пересчетный коэффициент 6,25 является средней величиной. Как уже указывалось выше, для ряда белков наблюдаются существенные отклонения от среднего уровня содержания азота. Особенно велики они у основных белков клеточного ядра — расхождения в этом случае могут быть более чем двукратными. Как правило, однако, отклонения не превышают 5—10%. [c.33]

Постановка опыта по изучению баланса азота. При изучении обмена азота необходимо учесть следующие обстоятельства если моча за 24 часа обычно отвечает обмену азота за то же время и азот, полученный из пищи, разрушенный и перешедший в мочу, обычно успевает выделиться за то же время, то выделение кала сильно отстает, иногда на 3—4 дня. Поэтому при определении баланса нельзя производить определение азота только в кале, выведенном в день опыта, и вообще нужно изучать баланс не за один, а за 4—5—б дней (чехМ больше, тем лучше), т. к. и моча может быть задержана на некоторое время в зависимости от водного обмена, что видно по иногда резко колеблющимся суточным количествам ее. Кроме того, некоторое изменение привычных условий жизни и питания, связанное с постановкой опыта, также может отразиться на балансе, в силу хотя бы большего или меньшего, чем обычно, потребления пищи. Поэтому опыт ставят обычно следующим образом. Подопытное лицо подвергается медицинскому исследованию, исследованию мочи на белок и сахар, исследованию крови на число форменных элементов и гемоглобина, измерению роста и взвешиванию (последнее аовтиряется ежедневно все время опыта, так как вес в зависимости отводного обмена иногда сильно колеблется).-После этого составляется точная раскладка (с учетом не только белков, но и жиров и углеводов, общей калорийности и витаминов), которую в данном опыте хотят исследовать. Затем начинается предварительный 4—5-дневный период. В течение его у исследуемого лица собирается за каждые 24 часа моча (с 9 ч, утра до 9 ч. следующего утра), точно измеряется и выливается. Собирается отдельно и кал в стеклянную, фарфоровую или новую (без трещин ) эмалированную посуду кал ежедневно взвешивается и выбрасывается. Вся пища, которую получает исследуе [c.194]

Полученные тем или иным способом осадки (см. предыдущий раздел) могут служить для количественного определения содержания в них белков по Кьельдалю. При использовании этого метода предполагают, что осадок содержит только белковый азот. Однако это предположение не совсем справедливо, потому что вместе с белками осаждаются и другие высокомолекулярные соединения, такие, как полисахаридные кислоты (например, хон-дроитинсерная кислота) и некоторые азотсодержащие липиды (например, лецитины или кефалины). Метод Кьельдаля основан на переводе имеющегося в навеске белкового азота в сульфат аммония путем кипячения белка с концентрированной серной кислотой и сульфатом калия в присутствии катализатора. Обычно принимается, что содержание азота во всех белках равно 16%. В действительности эта величина значительно варьирует. Например, яичный альбумин содержит 15,75% азота, в то время как эдестин содержит 18,7% [34]. Отсюда ясно, что необходимо знать точно содержание азота в исследуемом белке. Хотя метод Кьельдаля представляет собой один из стандартных методов, употребляемых в биохимических лабораториях, получаемые по этому методу результаты часто слищком занижены. Наиболее точные данные получаются при использовании в качестве катализатора ртути [35, 36]. Нагревание белка с серной кислотой и сульфатом калия в присутствии катализатора должно продолжаться в течение 8 час. [34]. При соблюдении этих условий были получены точные данные для ряда белков, содержание азота в которых было известно. [c.19]

МИНЫ — при концентрации 2,57 моль1л [12]. Для получения больших количеств глобулинов этот метод удобнее электрофоретического получаемые отдельные фракции содержат, однако, некоторое количество примесей белков других смежных фракций. Сернокислый аммоний в качестве осадителя обладает и еше одним недостатком он содержит азот, что делает невозможным прямое определение азота в выделенных белках по методу Кьельдаля. Поэтому в клинике для количественных определений альбуминов и глобулинов в сыворотке крови вместо сульфата аммония пользуются сернокислым натрием [9]. [c.173]

В связи с переводом на тетраплоидный уровень многих форм гороха небезынтересно было выяснить наличие возможности и перспектив для селекции тетраплоидов на повышенное содержание белка. Определение содержания общего азота у 22 форм, относящихся к трем хозяйственно-ценным видам, показало, что во всех без исключения случаях у полиплоидов наблюдается возрастание процентного содержания общего белка от незначительного (0,57) до существенного (4,47) (табл. 4). Причем во всех случаях наблюдается достаточно высокая и достоверная степень различий между диплоидами и тетраплоидами по содержанию сырого протеина. Эти различия еще бопее существенны при ont>-ставлении диплоидного и тетраплоидного линейного материала. Некого рые линии тетраплоидов превосходили лучшие дшхлоидные тех же исходных форм на 5,0-5,5 и даже 6,1% сырого белка. [c.205]

В 1813 г. А. Браконно исследовал белковые вещества грибов [104]. Вскоре после этого А. Сеген выделил белки из зерен кофе [402], а П. Буллей изучил белки горького миндаля [101]. Более подробные исследования белков горького миндаля провел А. Фогель, который не только определил содержание двух белков в зернах миндаля, но и провел определение азота и углерода в продуктах их сухой перегонки [453]. [c.20]

Ожесточенно опровергая новые данные Мульдера и его сотрудников [78], Либих опирался на результаты многочисленных анализов белковых веществ, проведенных в начале 40-х годов XIX в. им самим и его учениками [304, 306]. После усовершенствования метода определения азота Ф. Варрентраппом и Г. Виллем [439] весьма точные анализы белков были проведены И. Шерером [391], В. Гельдтом [246], Г. Бенс-Джонсом [82] и особенно Ф. Рохледером [372, 373]. Во всех случаях были обнаружены значительные отклонения от средних величин Мульдера. [c.38]

Попытку создать метод количественного определения для характеристики белковых препаратов предпринял В. Гаусман, предложивший характеризовать белки по распределению азота в трех основных группах продуктов их гидролитического расщепления. Он проводил количественное определение азота аммиака, а также азота оснований я неосновного азота гидролизата [243, 244]. Этот метод в модификации Т. Осборна, добавившего определение четвертой фракции — азота меланина, или, по современной терминологии, азота гумина,— стал одним из наиболее распространенных методов аналитической химии белков [348]. Но это был групповой метод и он не мог дать никаких сведений об отдельных компонентах белковой молекулы или отдельных продуктах ее гидролитического распада. Метод разделения основных аминокислот, предложенный А. Косселем и Ф. Кутчером, имел ограниченное значение [282], как это будет видно в дальнейшем. [c.65]

Определение азота, входящего в состав амидов, представляет интерес с точки зрения биохимического анализа в связи с изучением процессов метаболизма, когда приходится определять содержание амидов в физиологических жидкостях или в культурах- Кроме того, определение азота в амидах представляет интерес для химии белков, поскольку в молекулу белка входит (или образуется в процессе гидролиза) составная часть, определяемая на основании жоличества азота, содержащегося в амидах. Большая часть амидного азота входит в состав аспарагина и глутамина, связанного в мо- [c.208]

Задача определения азота, входящего в состав амидов, содержащихся в физиологических жидкостях (и тканях), отличается от задачи определения содержания амидного азота в молекуле белка. В физиологических жидкостях, вследствие присутствия мочевины, а также других соединений, содержащих азот, метод полного гидролиза исследуемых соединений использован быть не может. Поэтому анализируемый образец подвергают гидролизу в мягких условиях, в результате которого только амиды, входящие в состав образца, превращаются в аммиак. При анализе некоторых жидкостей, например мочи, серьезной помехой является аммиак, поскольку он присутствует в количествах, значительно превосходящих количество амидов, и определяется с помощью любого метода, который может быть использован для определения аммиака, образующегося в результате гидролиза амидов. Борсук и Дубноф [5] в общих чертах описали ультрамикрометод определения амидов. Однако они не привели никаких данных относительно пределов применения этого метода, его надежности, а также воспроизводимости получаемых с его помощью результатов. Исследования этого метода в лаборатории автора показали, что при анализе таких веществ, как аспарагин, глутамин и ацетамид, он дает несколько заниженные и плохо воспроизводимые результаты. [c.209]

Определение азота является скорее проблемой элементарного анализа, чем проблемой анализа белков, а применение микрометода Кьельдаля почти универсально. Чибнел с сотрудниками [175] показали, однако, что в настоящее время желание ускорить анализ привело к заниженным и переменным результатам и необходимо большее время разложения, чем указывается в современных методах. Очевидно, что ошибка определения азота проявится в любых аналитических данных по аминокислотам. Однако, если проводить работу тщательно, определение азота более точно, чем любое определение аминокислот, [c.61]

Среди опубликованных за последнее время работ можно указать на статьи по определению альдегидов, в частности ацеталь-дегида в летучих маслах [311] ацетона [437] по химической характеристике аэроспорипа [247, 333] по определению аргиназы [403], триптофана [432], р-глюкоронидазы [361] и содержания азота в белках [469]. Изучено влияние различных катализаторов и некоторых изменений при определении азота по Кьельдалю [316, [c.220]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология