Обнаружение при хроматографировании на колонках

Обнаружение прн хроматографировании на колонках. Методы обнаружения можно разделить на три основные группы 1) наблюдение вещества непосредственно на колонке [c.74]

Поскольку при хроматографировании происходит разделение компонентов анализируемой смеси, то в ряде случаев обычные качественные реакции на ионы неорганических соединений в условиях получения осадочных хроматограмм становятся высоко селективными. Например, обнаружение ионов Hg2+ в виде иодида ртути красного цвета на колонке или бумаге, содержащей иодид калия в качестве осадителя, является абсолютно селективным. Такая же высокая селективность характерна для обнаружения ионов по реакции с диметилглиоксимом на хроматографической бумаге. [c.231]

Единственным параметром, по которому система узнает пик, подлежащий обработке, выделяет его из шумов нулевого (фонового) сигнала, приписывает ему соответствующие градуировочные коэффициенты и концентрации, является время его появления, отсчитываемое от момента введения пробы в колонку и начала хроматографирования. Пик будет регистрироваться системой, если заданное для него время выхода попадает в интервал фактического времени выхода фронта пика (для системы САА-05) или всей длительности пика (для системы САА-06). Аналитик должен следить, чтобы фактическое время выхода пика соответствовало заданному, в противном случае пик может быть не обнаружен или его коэффициент и концентрация будут присвоены другому (соседнему) пику. [c.140]

Обнаружение при хроматографировании на колонках [c.460]

Вещества кислого характера можно обнаружить на столбике следую щим образом перед хроматографированием носитель пропитывают неболь шим количеством подходящего индикатора. Зоны органических кислот обнаруживают, например, на колонках с силикагелем импрегнированных метиловым оранжевым, в виде цветных полос [102]. Этот способ обнаружения имеет, однако, тот недостаток, что трудно найти такой индикатор, который постепенно не вымывался бы подвижной фазой. Другим затруднением является смещение точки перехода индикатора, вызванное его адсорбцией на носителе. Поэтому вместо метилового оранжевого были предложены некоторые природные [50] и синтетические красители [99]. [c.460]

Одним из наиболее удобных и эффективных методов контроля является тонкослойная хроматография отдельных фракций элюата. Основные преимущества этого метода состоят в следующем а) быстрота б) высокая разрешающая сила в) возможность применения очень чувствительных разрушающих способов обнаружения г) возможность осуш ествления контрольного хроматографирования на тех же материалах и в тех же системах, которые применяют для хроматографического разделения на колонке.— Прим. ред. [c.462]

В рассмотренных выше многоступенчатых приборах колонки как при последовательном, так и при параллельном соединении располагаются одна за другой. При параллельном соединении колонки работают одновременно, но независимо друг от друга, иначе говоря, параллельное соединение двух колонок при определенных условиях допускает раздельное исследование фракций смеси. Однако в принципе можно провести хроматографирование всей пробы одновременно и в одинаковых условиях с этой целью введенную дозатором пробу пропускают через специальный тройник, откуда она поступает одновременно в обе колонки. Обнаружение разделенных компонентов проводят одним детектором (рис. 1У.53) [256]. Недостаток такого соединения колонок состоит в том, что вследствие различной скорости элюирования каждого компонента в различных колонках они часто регистрируются детектором дважды, что вызывает перекрывание пиков. Поэтому метод одновременного разделения проб в двух колонках с одним детектором применим только для проб с относительно небольшим числом компонентов. [c.286]

Газо-жидкостная хроматография позволяет многократно перераспределять смесь паров между движущимися газом и жидкостью. При этом достигается значительное увеличение длины пути, на котором происходит контакт разделяемых веществ с жидкостью и газом. Второе важное преимущество газо-жидкост-ной хроматографии — возможность вести процесс при больших скоростях газового потока и автоматическое обнаружение даже небольших количеств веществ, содержащихся в выходящем из колонки газе. Процесс хроматографирования продолжается обычно не более 20—30 мин. Не менее важным является и то, что колонка, заполненная носителем и адсорбентом, может быть использована многократно. [c.135]

Хроматографический анализ пенициллина производился следующим образом. Сначала готовился адсорбент. Для этого 1,25 мг Ва(0Н)2 растворяли в 250 мл дестиллированной воды. В полученный раствор насыпали 25 v силикагеля. Суспензию выпаривали на водяной бане и окончательно высушивали в сушильном шкафу. Водный раствор неочищенного пенициллина доводили добавлением 2—5%-ной фосфорной кислоты до pH 1,8—2,0, после чего пенициллин переводили в амилацетат. При пропускании амилацетатного раствора пенициллина через адсорбционную колонку в последней образовывались различно окрашенные зоны. После хроматографирования колонку расчленяли на соответствующие обнаруженным зонам участки, из которых адсорбированные вещества вымывали и их активность определяли микробиологическим методом. [c.116]

В колоночной (в том числе газовой) хроматографии по достижении положения, показанного на рис. 61, б, подачу подвижной фазы не прегфащают. Хроматографирование продолжают до тех пор, пока подвижная фаза выносит из колонки разделяемые вещества. Этот процесс называют элюированием, а выходящую из колонки подвижную фазу, содержащую разделяемые вещества, — элюатом. Элюат обычно контролируют на содержание разделяемых веществ с помощью датчиков, которые называют детекторами. Сигналы детекторов принимаются измерительными приборами и передаются к самописцам. Получают хроматограммы, подобные той, которая показана на рис. 61, в. Если на оси абсцисс отложено время, по хроматограмме можно определять время удерживания вещества в колонке. Для 81 это 1, а для 83 — 2 (отсчет времени ведется с момента ввода смеси разделяемых веществ). Часто все же по оси абсцисс откладывают не время, а объем элюата. Нулевая точка тогда соответствует выходу той порции подвижной фазы, в которую была введена смесь разделяемых веществ. Потом в элюате меняются концентрации разделяемых веществ в соответствии с различными степенями их удерживания. По полученной хроматограмме определяют объем удерживания. Для 81 это v , а для 83 = а-Время (объем) удерживания при постоянных условиях хроматографирования представляет собой величину, характерную для данного вещества. Поэтому наряду с другими методами обнаружения для идентификации веществ можно использовать значения времени (объема) удерживания. Количества же разделенных веществ пропорциональны площадям их пиков. Это используют для проведения количественных определений. Можно также собрать отдельные порции элюата и определить содержание в них разделяемых веществ с помощью подходящих методов количественного анализа. [c.258]

Для вымывания с такой колонки полос с небольшими значениями R требуется много времени и большой объем растворителя. Поэтому в таких случаях колонку приготавливают несколько иным способом. Стеклянную трубку разрезают продольно на две половины. Обе половины складывают вместе и по всей длине обматывают полоской мокрого целлофана. Весь процесс хроматографирования проводят в такой колонке до тех пор, пока компонент смесн с наибольшим значением величины R не начнет выходить нз колонки. Затем проявление. заканчивают, разматывают целлофан и одну половину трубки в горизонтальном положении осторожно снимают с поверхности столбнка целлюлозы. На такой открытой поверхности определяют при помощи подходящего метода обнаружения размещение полос компонентов столбец разрезают и отдельные компоненты экстрагируют водой. [c.466]

К счастью, несколько иная методика измерения была разработана рядом хроматографистов, одним из которых был Г. Поллок, работающий в том же самом Научном центре в Эймсе. Основанный на газовой хроматографии, метод Поллока требует всего лишь нескольких микрограммов пробы и может быть применен к сложным смесям атаино-кислот. Первым этапом методики была этерификация аминокислот чистым (только одним энантиомером) 7 -2-бутанолом. Полученный эфир имел два асим метрических центра и мог существовать в виде-двух диастереомеров ЯЯ и где первая буква относится к конфигурации спирта, а вторая — к конфигурации аминокислоты. Затем эфиры были переведены в амиды обработкой трифторуксусным ангидридом для уменьшения полярности амино-группы и повышения летучести производных аминокислот, что позволило проводить успешное их хроматографирование. Используя капиллярные колонки, имеющие характеристики, приведенные на рис. 17-16, Поллок получил хроматограмму смеси диастереомерных производн ых аминокислот. Заметим, что каждая аминокислота дает пару пиков. Эксперименты доказали, что каждый пик отвечает одному из двух диастереомеров и что характеристики удерживания диастереомеров, которые отличаются только конфигурацией при асимметрическом углеродном атоме, как оказалось, были вполне достаточными, чтобы можно было проводить их разделение на газохр оматографической колонке. Таким образом, относительные количества Я- и 5-энантиомеров для некоторых отличающихся между собой аминокислот можно было определить хроматографированием,, сравнивая относительные высоты ЯЯ- и 5-пиков для каждого производного аминокислоты, причем для обнаружения требуется всего несколько нанограммов каждой аминокислоты. [c.585]

Фронтальные выходные кривые можно также использовать для определения ем кости колонок (в миллиэквивалентах на миллилитр набивки колонки). Для определения емкости колонки обычно проводят франтальную хроматографию раствором исследуемого соединения до тех пор, пока концентрация его в элюате не станет равной К01нцентрации в исходном растворе. После этого хроматографирование прекращают и колонку промывают элюентом, который замещает исходный раствор в свободном объеме колонки, не смывая вещества, удерживаемого неподвижной фазой. Когда концентрация вещества в элюате снизится ниже предела обнаружения, элюент заменяют на раствор, который вымывает вещество с неподвижной фазы, и элюируют его полностью. Определение концентрации вещества в этом элюате позволяет определить количество соединения, первоначалыно удерживаемого колонкой. [c.92]

Предварительное прокаливание кирпича вызывается следующей необходимостью. При анализе проб НЦГ было установлено, что одна из примесей, обнаруженных в НЦГ, необратимо задерживается в колонке, по-видимому, полимеризуясь на кирпиче. Промывка кирпича растворами НС1, Naa Os и добавление 2% КагСОз не дали желаемых результатов. Поэтому в дальнейшем кирпич промывали, как обычно, только водой, но прокаливали в муфеле, что не требовалось при хроматографировании других веществ. После 6—8 час. прокаливания кирпича при 950—1000° С полимеризация примеси прекращалась. [c.298]

Для подтверждения правильности идентификации по классам соединений применяют вариант реакцио1шой газовой хроматографии — метод вычитания -парафины и олефины удаляют из пробы до хроматографирования с помощью фор-колонки с молекулярными ситами 5 А, олефины и ароматические углеводороды поглощаются в форколонке с силикагелем и серной кислотой, а для обнаружения серосодержащих соединений используют их поглощение на короткой колонке с Ag Oз и РЬ (СНзСОО)2. [c.106]

В табл. 58 приведены результаты некоторых хроматографических разделений. В шестой графе указаны количества рацемических или диастереоизомерных веществ, вносимых в колонку, в восьмой графе приведено время, необходимое для хроматографирования, без учета времени, затраченного на приготовление колонки. В девятой графе приведены количества одного энантио-мера (или диастереоизо.чера), а степень его оптической чистоты указана в десятой графе. Вообще говоря, обнаружение заключалось в определении количества и оптической чистоты энантио-мера (или диастереоизомера) во фракции фильтрата без отделения от большого объема растворителя и, возможно, от других растворенных веществ. Параметр е (одиннадцатая графа) определяется по уравнению [c.344]

Исчезновение малых проб хелатов металлов в колонке. К настоящему времени получены летучие комплексы практически всех существующих металлов. Благодаря широкому ассортименту высокочувствительных газохроматографических детекторов любой хелат в принципе может быть обнаружен в газовой фазе с порогом чувствительности не нижеЮ — 10 г. Однако на практике для работы со столь малыми количествами газовая хроматография пока может быть использована для определения всего лишь нескольких металлов (бериллия, алюминия, хрома, кобальта, ванадия и немногих других). Причина этого заключается еще в одном аномальном эффекте, наблюдающемся при хроматографировании малых количеств летучих комплексов. Этот эффект состоит в том, что при уменьшении количества хроматографируемого хелата линейность калибровочного графика нарушается, кривая отклоняется вниз и пересекает ось абсцисс в точке, соответствующей определенному, отличному от нуля, количеству хелата (рис. VI.13). Практически это означает, что при вводе в колонку этого или любых меньших количеств определяемого хелата соответствующий пик па хроматограмме не появляется вообще, независимо от числа введенных проб, хотя чувствительность детектора (при условии линейности калибровочного графика) вполне достаточна для обнарун ения этих количеств комплекса. В ре- [c.62]

Рассмотрим возможность автоматизации хроматографического анализа ферментов на примере, заимствованном из статьи [42]. Авторы статьи провели хроматографическое разделение ферментов на автоматическом анализаторе фирмы Te hni on (рис. 8.22). В этом приборе используется пропорциональный насос Р с 12 пластмассовыми трубками различного диаметра. Буферный раствор из системы формирования градиента прокачивается в колонку через трубку 1. Разделение белков происходит в колонке К. Основная часть элюата из колонки поступает в коллектор фракций F и затем используется после окончания анализа. В процессе хроматографирования от основного потока элюата отделяется очень небольшая часть, которая поступает в три аналитические секции, где проводится определение основной фосфатазы, трансаминазы и всех белков. После определения основной фосфатазы часть элюата поступает через трубку 2 вместе с пузырьками воздуха, введенными через трубку 3, и субстратом из трубки 4 в аналитическую систему. В короткой стеклянной спирали М происходит тшательное смешивание водных растворов, полученная смесь проводится через термостат I, в котором при определенных условиях происходит расщепление субстрата. Чтобы реакция прервалась, к смеси через трубку 5 добавляется раствор соответствующего реагента. Через смесительную спираль результирующая смесь вводится в проточную кювету колориметра С и затем идет на оброс. Сигнал детектора записывается самописцем Z, фиксирующим концентрацию основной фосфатазы (I). На абсциссу наносятся номера фракций. Определение трансаминазы проводится аналогичным образом. Через трубки 6—9 подаются образец, воздух, субстрат и реагент соответственно. Окончательный продукт реакции проходит через колориметр Сг. Результирующая концентрация трансаминазы пропорциональна кривой III записываемой самописцем. Третья аналитическая система, регистрирующая суммарное содержание белков, несколько проще, чем две другие. Часть элюата поступает через трубку 10, воздух проводится через трубку 11, а реагент для обнаружения белков — через трубку 12. Растворы смешиваются в спирали М, полученная смесь поступает в проточную ячейку колориметра Сз. Содержание белков в смеси записьгеается в виде кривой II. [c.80]

Непосредственный ввод в хроматограф пробы пара над пищевым продуктом привлекает своей простотой и в некоторых случаях дает удовлетворительные результаты [2, 3]. К сожалению, при этом хроматографические пики дают лишь те вещества, которые характеризуются достаточно высоким давлением паров и которые имеются в пробе в количестве, достаточном для их обнаружения детектором. Пробы большей величины содержат большие количества менее летучих материалов, однако такие пробы не смогут обеспечить узкие хроматографические зоны и острые хроматографические пики вместо этого они дают широкие наложенные друг на друга пики и плохое разделение. Некоторые исследователи перед входом в колонку устанавливают охлаждаемую ловущку или охлаждают короткий начальный участок самой колонки. При этом неконденсирующиеся газы проходят сквозь, а конденсирующиеся летучие вещества остаются в ловушке или в охлажденном переднем участке колонки. Затем охлаждаемый участок нагревают, и начинается процесс хроматографирования. Сразу же очевидны две связанные с этим трудности нелегко сконструировать доколоночную ловушку так, чтобы ее содержимое быстро переносилось в колонку при малых скоростях газового потока, используемых в таких высокоэффек- [c.139]

Поэтому, чтобы избежать инфицирования гелей, в суспензии гелей, заполненные колонки и элюенты добавляют бакте-риостазы, которые не должны реагировать ни с матрицей геля, ни с хроматографируемыми соединениями, не должны денатурировать или осаждать их. Если ход хроматографирования прослеживается по УФ-поглощению, то эти соединения не должны также поглощать в той спектральной области, которую используют для обнаружения. В самом начале развития гель-хроматографии был предложен в качестве бактериостазов ряд соединений, в частности толуол, фенол, крезол, формальдегид и хлороформ (см. также гл. 5, табл, 5.10). Однако фенолы и формалин вступают в реакцию с белками и вызывают необратимые их изменения. Хлороформ, который применяется в виде насыщенных водных растворов, непригоден для работы с мягкими гелями, так как вызывает уменьшение степени набухания и, таким образом, неблагоприятно влияет на хроматографические свойства этих гелей. Он также непригоден в тех случаях, когда колонки оснащены пластмассовыми трубками, так как повреждает их. [c.376]

Колонка 10X97 см (1 ,=9100 мл) элюент —0,1М раствор ацетата натрия с добавкой 0,01% азида натрия восходящее элюирование скорость потока 200 мл/ч проба — 55 мл экстракта отбор фракций каждые 30 мин температура хроматографирования 5 °С обнаружение— по поглощению при 280 и 410 нм. Ферментативная активность / — катепсн-на С (410 нм), 2 —катепсина В (280 нм), 3 —катепсина В1 (410 нм). [c.384]

Газовую хроматографию (ГХ) можно использовать для количественного определения липидов, разделенных методов ТСХ. Виоке и Холман [138] анализировали методом ГХ эфиры жирных кислот после хроматографирования их на силикагеле G с различными смесями диэтилового эфира и гексана. Зоны затем элюировали диэтиловым эфиром, объем полученного раствора доводили до определенной величины, отбирали аликвотную часть его и вводили в газовый хроматограф. Бойер и др. [182, 183] таким же методом определяли липиды крови, но сначала эти авторы экстрагировали примерно 5 мг липидов из крови и наносили пробу на слой кремневой кислоты. После разделения пятна обрабатывали 10 %-ной серной кислотой (масса/ /объем) и этерифицировали, добавляя безводный метанол и нагревая 1 ч при 80 °С (сфингомиэлин нагревали 16 ч). К смеси на этой стадии добавляли кристалл гидрохинона, выполняющий роль антиксиданта. После метилирования к пробе добавляли воду и экстрагировали сложные эфиры петролейным эфиром (40—60°С). Экстракт петролейного эфира сушили над смесью безводного сульфата и бикарбоната натрия (4 1), концентрировали и вводили в колонку газового хроматографа. Неподвижной фазой служил полиэфир янтарной кислоты и этиленгли-коля. При разделении указанным способом не следует применять для обнаружения иод, поскольку это приводит к частичной потере ненасыщенных кислот [184]. Аналогичным методом анализируют и стероиды [185, 186]. В этом случае трнметилсили-ловые эфиры можно получить при взаимодействии с гексаме-тилдисилазаном. Описанным способом в суточной пробе мочи определили 15 мкг тестостерона с точностью 7% [185]. [c.338]

Применение других растворителей (метилбутил- и пропилкетонов, содержащих НС1) рассмотрено в работе [80]. О неирерьшном хроматографическом разделении Li и К см. [81]. Хроматография на бумаге нашла в основном применение для качественного анализа щелочных металлов и для приближенного количественного их определения. Описано выделение с ее помощью изотопа s - из хлорида бария, облученного нейтронами [77], и из азотнокислого раствора облученного урана [69], причем в последнем случае опыты могут проводиться на колонках из целлюлозы. Для качественного разделения смеси щелочных металлов наиболее пригодны смеси, содержащие фенол [64, 67], и, в частности, фенол-метанольная смесь с H L Недостатком метода хроматографирования на бумаге является то, что разделение может производиться с максимальным количеством (100— 200 мкг) металла. Чувствительность химических методов обнаружения редких щелочных металлов в зонах — 1 —5 мкг. Эти два обстоятельства су- [c.42]

Для получения этого олигосахарида проводят отдельно гидролиз и хроматографирование. Приблизительно 90 з ксилана гидролизуют 4,5 л дымящей соляной кислоты (уд. вес 1,42) при 0°, пока количество образовавшейся D-ксилозы не составит /3 от теоретического. Раствор выливают на лед и нейтрализуют бикарбонатом натрия. Профильтрованный раствор наносят на колонку (75 X 850 мм) со смесью уголь — целит 1 1 (по весу). Некоторое количество сахаров десорбируется при промывании колонки 60 л воды, 24 л 5%-ного и 24 л 15%-ного спирта. Адсорбент аккуратно вытряхивают из колонки, делят на две равные части, нижнюю половину отбрасывают, а из верхней приготовляют колонку размером 54x790 мм. Эту колонку промывают сначала 8 л воды (элюат отбрасывают), затем последовательно 20%-ным (4 X 2 л), 30%-ным (4 X 2 л) и 40%-ным спиртом (4 X 2 л). Каждую порцию элюата отдельно упаривают досуха в вакууме при 45° и анализируют методом хроматографии на бумаге в системе к-бутанол — пиридин — вода 5 5 3 (по объему) в течение 73 час, обнаружение сахаров проводят реактивом Толленса [13]. [c.451]

Хроматографирование проводится на колонке с силикагелем, специально выпускаемым для этой цели. Нейтральный силикагель, необходимый для разделения трифенилметиловых эфиров сахаров, готовят обработкой силикагеля раствором аммиака с последующей активацией сорбента при 150 °С [15]. За ходом хроматографического разделения удобно следить при помощи тонкослойной хроматографии (ТСХ) (см. гл. 6). Подходящим сорбентом для этой цели является кизельгель G, а проявителем — смеси бензола, эфира и этилацетата в различных соотношениях для обнаружения применяется смесь анисового альдегида с серной кислотой [16]. Как правило, подвижность сахаров на кизель-геле G оказывается выше, чем на силикагеле, заполняющем колонку. [c.111]

Авторы работы [66] при хроматографировании дипивалоилметанатов и Но вместе с образцом вводили в хроматограф НДПМ. В этом случае колонка входила в стационарный режим уже после второго ввода пробы и наблюдалось некоторое снижение предела обнаружения хелатов РЗЭ. Кроме того, такой способ ввода пробы частично устраняет сложности детектирования, возникающие при хроматографировании в потоке паров Р -дикетона. [c.167]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология