Хроматография на колонке с дауэксом

Рис. 47. Разделение спиртов методом высаливающей хроматографии. Колонка размером 32,0 см х 2,28 см с дауэксом 1-Х8 (200—400 меш).

Рааделение амино слот на ионообменниках основано на способности аминокислот образовывать соли с кислотами и щелочами. Подбирая соответствующие катиониты или аниониты, можно быстро и с успехом разделить гидролизат белка, пользуясь для этого 2,5—3,5 мг белка. Ионообменную хроматографию хорошо сочетать с элюционным или вытеснительным анализом. Мур и Штейн пользуются для этого катионитной смолой сульфополистирольного типа Дауэкс-50, через колонку которого пропускают аминокислоты последние вымывают затем соответствующими буферными растворами. Для разделения достаточно 3 мг аминокислот. [c.481]

Ионообменная хроматография. Для поглощения разделяемых катионов чаще всего применяются анионитные смолы дауэкс 1, амберлит и другие в хло-ридной, фосфатной или цитратной форме. Методы разделения основаны на способности катионов кобальта давать в сильно солянокислом растворе хлоридные анионные комплексы, поглощающиеся анионитом катионы никеля, марганца и некоторых других металлов в этих условиях не задерживаются анионитом и проходят в фильтрат. При промывании колонки более разбавленным раствором соляной кислоты, например 4 N раствором, происходит вымывание кобальта, в то время как медь, железо остаются адсорбированными смолой. Описаны и другие методы, когда разделяемые катионы поглощают катионитами, а затем вымывают кобальт растворами подходящих комплексообразующих веществ, например, раствором нитрозо-К-соли, комплексо-ном III и др., или смесью растворов соляной кислоты и органических растворителей. В табл. 18 дана сводка предложенных мето- [c.81]

При определении следовых количеств примесей в сплавах торий— уран и плутоний — торий макрокомпоненты отделялись комбинированным методом, заключающимся в проведении операций ионного обмена и экстракционной хроматографии в одной и той же колонке [36]. Четырехвалентные актиноиды (ТЬ, и) сорбировались на анионите дауэкс 1X8 из 8 М НЫОз, а уран(VI) сорбировался ТБФ, нанесенным на кель-Р. [c.266]

Частичный гидролиз полисахаридов проводят для получения олигосахаридов, важных для установления структуры. Олигосахариды можно исследовать с помощью хроматографии на бумаге образцы, необходимые для идентификации или структурного анализа, могут быть получены после хроматографического разделения на бумаге или на колонках, заполненных целлюлозой [55, 99], а также градиентным элюированием водным спиртом из колонки, заполненной смесью уголь — целит [8, 17, 56]. Было показано [114], что смеси олигосахаридов легко разделить в нейтральной среде на колонках со смолой дауэкс 50 (2% диви-нилбензола, величина частиц 40—80 мк, Ь1+) при элюировании водой. Элюирование протекает в порядке уменьшения размера молекул, и первыми вымываются из колонки олигосахариды с более высоким молекулярным весом. [c.304]

В некоторых случаях в результате дифференциации кислотности разделение улучшается по сравнению с использованием чисто водных растворов. С помощью вытеснительной адсорбционной хроматографии при использовании растворов соляной кислоты в 35%-ном водном растворе диоксана была количественно разделена смесь муравьиной и уксусной кислот на колонке, наполненной дауэксом-1 [14]. Таким же образом эти авторы разделили и смеси муравьиной в фенилуксусной кислот, масляной и фенилуксусной кислот, пропионовой, уксусной и фенилуксусной кислот, фенилуксусной и бензойной кислот. [c.154]

Условия хроматографического разделения органических кислот на анионообменных смолах с использованием в качестве элюента муравьиной кислоты были изучены в работе [54]. Авторы нашли, что степень поперечной сшивки сильноосновной анионообменной смолы дауэкс-1 не влияет на порядок элюирования карбоновых кислот. Молярную концентрацию муравьиной кислоты, необходимую для элюирования 94 кислот из колонки, заполненной дауэксом 1-Х10, определяли по методу Дэвиса и сотр. [55]. Условия элюирования зависели от рК разделяемых кислот. Важна также и растворимость кислот в муравьиной кислоте, потому что она влияет на образование хвостов хроматографических зон. При выборе соответствующего градиента концентрации муравьиной кислоты было достигнуто полное или частичное отделение некоторых кислот (яблочной от мезовинной, янтарной от адипиновой и винной от хинолиновой кислоты), при этом было подавлено образование хвостов . Элюат собирали по фракциям, состав которых анализировали с помощью хроматографии на бумаге после предварительного удаления муравьиной кислоты путем выпаривания досуха в вакууме над силикагелем. [c.177]

Рис. 44.5. Хроматография пиримидиновых предшественников тиамина на колонке с дауэкс AG 50W-X8 (Н ) [30].

В работе [65] описано разделение сульфопроизводных тетра-фенилпорфиринов на колонке, содержащей промытую кислотой диатомовую землю, в системе пиридин — хлороформ — вода (2 1 1), однако Пастернак и др. [66] обнаружили, что этот метод дает неудовлетворительные результаты, и рекомендовали вместо него использовать хроматографию на дауэксе 50 -Х8. Число публикаций, касающихся хроматографии синтетических водорастворимых порфиринов, чрезвычайно мало, однако очевидно, что для разделения этих соединений, скорее всего, пригодны описанные выше методы хроматографии водорастворимых порфиринкарбоновых кислот. [c.216]

Нерастворимые (кбровые) пептиды могут быть солюбилизированы и затем разделены в денатурирующих условиях, но, как правило, более выгодно проводить их предварительную фрагментацию. Для гидролиза смеси труднорастворимых алифатических пептидов используют эластазу или термолизин, для пептидов ароматического характера — химотрипсин или пепсин при кислых pH. Образовавшиеся фрагменты разделяют хроматографией на бумаге или, если кор составляет значительную часть молекулы белка, на колонке дауэкс-50 с окончательной очисткой полученных фракций на бумаге. [c.357]

Из водного гидролизата удаляют кислые компоненты, пропуская его через ионообменную колонку со смолой Дауэкс-3 (щелочная форма), проверяют нейтральность элюата. Порцию элюата, содержащую 10 мг сахаров, помещают в грушевидную колбу и упаривают досуха во вращающемся вакуум-испарателе при температуре 40° С. Затем прибавляют несколько миллилитров этанол-бен-зольнон смеси (4 1) и вновь выпаривают досуха. К остатку добавляют 1 мя пиридина, содержащего 0,2% перхлората лития, и выдерживают при 40° С в течение 2 ч, после чего прибавляют 0,3 мл смеси, состоящей из 2 объемов гек-саметилдисилазана и 1 объема триметилхлорсилана. После выдержки а течение 5 мин при 40° С смесь упаривают досуха. Незначительное количество пиридина в остатке допустимо, поэтому упаривание продолжают до слабого запаха пиридина. К. остатку прибавляют 4 мл н-гексана и встряхивают для растворения триметилсилиловых эфиров. Раствор отделяют декантацией и фильтруют в пробирку с пришлифованной пробкой. Для газовой хроматографии достаточно [c.83]

КИПЯТЯТ С обратным холодильником в течеиие 24 час. на паровой бане. Минеральную кислоту удаляют в вакууме, причем последние следы ее удаляют, добавляя к остатку четыре порции воды по 60 мл. Оставшуюся хлористоводородную соль кислоты (примечание 4) растворяют в нескольких миллилитрах воды, и равные порции пропускают через 2 колонки (200 X 15 мм), содержащие 60 мл ионообменной смолы дауэкс-50 в Н-форме. Колонки промывают 300 мл воды и затем элюируют 300 мл 2 н. раствора гидроокиси аммония и промывают 800 мл воды. Элюаты и промывные воды объединяют и упаривают досуха, а остаток перекристаллизовывают из водного спирта. Маточные жидкости после получения второй порции валина упаривают досуха, а остаток возгоняют в вакууме, получая в результате третью порцию валина. Выход очищенного вещества 1,196 г, что в расчете на цианистый калий составляет 51,4 /о. Анализы, проведенные методами двухмерной бумажной хроматографии и радиоаутографии, свидетельствуют о том, что полученное вещество гомогенно (примечание 5). [c.200]

В работе Гросса [5] описано получение S-этил-1-С -/-гомоци-стеина из йодистого этила-1- и 8-бензил-/-гомоцистеина. Исходное вещество (1,14 г), полученное из метионина через 8-бен-зил- /-гомоцистеин [6] и Ы-ацетил-5-бензил- /-гомоцистеин [7], восстанавливают металлическим натрием в жидком аммиаке, и образовавшийся меркаптид обрабатывают 0,63 г йодистого этила-ЬС Прибор для проведения реакции представляет собой модификацию прибора, о котором идет речь в примечании 2. Вещество, оставшееся после испарения аммиака, растворяют в воде, и полученный раствор подкисляют соляной кислотой до pH 1—2, затем этот раствор пропускают через колонку [8] (высота 2,5 м, диаметр 22 см), наполненную ионообменной смолой дауэкс-50 (степень сшивания 8%) с величиной зерен 200—400 меш. Фракции, содержащие продукт реакции, полученные при элюировании 2,5 н, соляной кислотой, объединяют и испаряют при пониженном давлении. Остаток растворяют в воде и с помощью раствора едкого натра создают среду с pH 6,2. Для очистки вещество сублимируют при температуре 180—200° и давлении 1 мм рт. ст. Выход 0,400 г (60%),[а]д + 23°, концентрация 1% в 2 н. растворе соляной кислоты. Методом бумажной хроматографии в системе бутиловый спирт — вода— уксусная кислота (10 5 2) или в системе третичный амиловый спирт — вода — пиридин (7 6 8) при температуре 22—25° на бумаге ватман № 4 показано, что вещество состоит из свободной аминокислоты и радиохимических примесей RjSi,61 и 0,61 соответственно. [c.218]

К 3 Л1У1 0,5 М эфирного раствора алюмогидрнда лития [I] прибавляют при перемешивании раствор 0,022 г амида пировино-градной-2- кислоты в 10 мл абсолютного эфира с такой скоростью, чтобы поддерживалось слабое кипение с обратным холодильником. Смесь нагревают с обратным холодильником в течение 4 час., выдерживают в течение ночи, концентрируют до объема 3—5 мл, затем обрабатывают 10 мл безводного хлороформа и вновь испаряют. Смесь нагревают с обратным холодильником в течение 4—5 час. с 0,6—0,7 мл хлорокиси фосфора в 10 мл хлороформа, затем выдерживают в течение ночи и разбавляют 15 Л1Л воды. Хлороформ испаряют на паровой бане, нагревают водный раствор при 100° в течение 2 час. (примечание 2), охлаждают и с помощью 10 н. раствора едкого кали доводят pH среды до 7. Раствор нагревают при перемешивании при 100° в течение 5 мин. с 12—14 мл 1 /М раствора ацетата бария (примечание 3). Фосфат бария отделяют центрифугированием и пять раз промывают водой (порциями по 25 Л1уг) (примечание 4). Промывные воды объединяют и пропускают раствор через колонку (высота 20 см, диаметр 2 см) с ионообменной смолой дауэкс-50 (Н-форма), которую затем пять раз промывают водой (порциями по 10 мл). Элюат объединяют и концентрируют в вакууме при комнатной температуре до объема 5 ма (примечание 5) и очищают продукт реакции методом двухмерной нисходящей хроматографии на бумаге (примечание 6), причем в качестве растворителей используют следующие смеси изопропиловый спирт — концентрированный раствор аммиака — насыщенный водный раствор версена (6 2) изопропиловый спирт — насыщенный водный раствор версена — 2 М раствор хлоруксусной кислоты (7 2 1). Общий выход продукта 25—39% в расчете на амид пировииоградной кислоты (примечание 7). [c.544]

В последнее время появилась возможность определять аминокислотный состав белков с помощью автоматических аминокислотных анализаторов. Когда в 1948 г. Мур и Стейн [551 в дополнение к классическим методам органической химии, а также манометрическому и бактериологическому анализу ввели ионообменную хроматографию, наступил поворотный момент в развитии химии аминокислот. В основу работы созданных сотрудниками Рокфеллеровского института современных автоматических аминокислотных анализаторов была положена ионообменная хроматография. Принцип работы этих приборов заключается в следующем. Исследуемый белок гидролизуют, затем гидролизат подвергают хроматографии на смоле типа дауэкс 50 х8 в Na-форме. Элюирование производят с помощью непрерывной подачи буферного раствора. Выходящий из колонки элюат попадает в пластмассовую ячейку особой формы, где он смешивается с раствором нингидрина. Подачу нингидрина осуществляет специальный насос, работающий синхронно с насосом, подающим буферный раствор на колонку. Затем смесь элюата с нингидрином проходит через тефлоновый капилляр, который погружен в кипящую баню. В этих условиях в растворах происходит нингидриновое окрашивание, интенсивность которого измеряется в проточной кювете спектрофотометрически. Поглощение света регистрируется самописцем. Применение сферических смол [80] позволило сократить время исследования одного образца примерно в четыре раза, а использование особых ячеек сделало вполне допустимыми для анализа очень малые количества исследуемого вещества — порядка 0,01—0,05 мкмоля [38]. Введение одноколоночной процедуры значительно упрощает метод [9, 29, 43, 60]. С помощью этой методики в одной и той же пробе можно определить кислые, нейтральные и основные аминокислоты, что не только экономит исследуемый материал, но и повышает точность и сокращает время исследования. Работая на стандартном аминокислотном анализаторе и пользуясь некоторыми модификациями известных методов, можно полностью закончить анализ одного вещества в течение 3 ч [91. [c.32]

Ионообменная хроматография в колонках со смолой дауэкс привела к открытию и разделению изомерных 2 - и 3 -мононуклеотидов [18]. Таким же образом были найдены и другие новые мононуклеотиды [18, 20, 27, 28]. Смилли [79] фракционировал мононуклеотиды из рибонуклеиновой кислоты на ионообменной бумаге. Он применил целлюлозную бумагу, пропитанную обменником амберлит . [c.446]

Ионообменная хроматография имеет гораздо меньшее значение для разделения свободных спиртов по сравнению с другими методами хроматографии. Высаливаюш,ую хроматографию на колонке, наполненной дауэксом 1-Х8 (ЗО -), использовали для [c.27]

Высшие спирты были разделены на колонке, наполненной дауэксом 50-Х8 (Н+) (200—400 меш), путем постепенного элюирования уксусной кислотой возрастающей концентрации (1—Зн.) [7] (табл. 18.3). Шерма и сотр. [8] также изучали возможность, разделения высших спиртов на дауэксе 1 (СНзСОО ) при элюировании водноорганическими солевыми растворами. При этих разделениях важное значение имеет как высаливание, так и растворимость, и, следовательно, зависимость логарифма коэффициента распределения выделенного вещества относительно концентрации электролита не всегда линейна. Эти работы показывают, что возможно неполное разделение высших спиртов (к-гексанола, н-гептанола и н-октанола) с использованием в качестве элюента 4 М раствора ЫС1 в метаноле. Однако наблюдалось существенное расширение кривых элюирования. Шерма и Лаури [9] изучили хроматографию на основе солюбилизации на макропористых ионообменных смолах. Разделение гомологического ряда алифатических спиртов с помощью хроматографии на основе солюбилизации на макропористых ионообменных смолах амберлист 15 было проведено не так успешно, как на гелях обычных смол. [c.27]

Низшие спирты разделяли с помощью жидкостной хроматографии в форме их л-(М,К-диметиламин)бенз-/г -азобензоатов на колонке 240x2,7 мм, наполненной катионообменной смолой дауэкс 50Ш-Х2 (200—400 меш) [13]. При элюировании водных спиртов раствором соляной кислоты были найдены коэффициенты объемного распределения для оптимальных количеств соляной кислоты в элюенте (табл. 18.4). Хорошее разделение этих окрашенных производных может быть достигнуто с помощью адсорбционной хроматографии на колонке, наполненной силикагелем СН (5—40 мкм) с применением в качестве подвижной фазы смеси циклогексан—этилацетат. [c.29]

Разделение многоатомных спиртав (ксилитов, глицерина и этиленгликоля) проводили методом колоночной хроматографии на катионообменной смоле (Ки-2) с применением воды для элюирования [22]. На колонке, наполненной дауэксом 50-Х 12 (200—400 меш) или КН-2 со степенью сшивки 12%, разделяли смесь многоатомных спиртов. В качестве подвижной фазы использовалась вода при температуре 60 °С. Компоненты элюировались в следующем порядке ксилит, эритрит, глицерин, этилен-гликоль и пропандиол-1,2. Разделение занимает 24—26 ч. Фракции анализировали на рефрактометре Аббе или колориметрически после окисления бихроматом. Наилучшие результаты разделения были получены в случае, если использовали ионооб-менники в Н+-форме. На ионообменниках в Са +-форме наблюдается изменение в последовательности элюирования. Так, ксилит сорбируется на таких обменниках селективно и, следовательно, элюируется последним. Было также предложено разделение малых количеств ксилита и этиленгликоля на катионооб-менниках со свободным Н+. Этот метод можно использовать для аналитического контроля при крупнотоннажном гидролизе сахаров и многоатомных спиртов. [c.31]

Шерма и Рейман [33] использовали хроматографию на колонке с катионообменником дауэкс-50 для разделения фенолов. Пирокатехин и фенол элюировали 1,0 н. уксусной кислотой, а о-крезол и о-нитрофенол элюировали 2,0 н. уксусной кислотой. [c.39]

Лорнитцо и Голдман [14] использовали гель-проникающую хроматографию на колонке 28x2,5 см с сефадексом G-25 для очистки растворимого низкомолекулярного (4400) полисахарида, содержащего 60% о-глюкозы, 40% 6-0-метил-о-глюкозы и одну кислотную группу. В качестве подвижной фазы применяли воду. При фильтрации через колонку с дауэксом-50 удалялись небольшие количества веществ, вступающих в биуретовую и нин-гидринную реакцию полисахарид при этом практически не удерживался. [c.131]

В связи с быстрым развитием хроматографии аминокислот на сульфокатионитах использование других ионитов носит ограниченный характер. На начальных этапах ионообменной хроматографии для разделения аминокислот пытались использовать амберлит IR -50 [23, 24]. К недостаткам этого катионита относятся трудности уравновешивания колонки, и необходимость соблюдения точных значений pH образца. Сильноосновный анионит дауэкс 2-Х10 находит применение для разделения аспарагиновой и глутаминовой кислот, а также их производных [25]. На анионитах сильнее других аминокислот удерживаются ци-стеиновая кислота, фосфосерин и подобные им вещества, которые, следовательно, можно отделять и получать в чистом виде. Как и в случае сульфокатионитов, степень разделения на анионитах зависит от диаметра частиц, их однородности, степени. сшитости и других факторов. [c.334]

Такая система позволяет получить более четкое разделение. При нанесении образца (в объеме 40 л) элюат, не содержащий аминокислот, сливают в трап. После впитывания всех 40 л отсоединяют первую колонку и оставшиеся три промывают 0,15 н. водным раствором аммиака со скоростью 20 мл/мин, собирая элюат по фракциям объемом 250 мл. Анализ ведут методом бумажной хроматографии. Первую колонку, содержащую основные аминокислоты, соединяют с двумя небольшими колонками (2,5x20 см и 1,7x13,6 см), также заполненными полистиролом. Вытеснение ведут 0,075 н. раствором едкого натрия со скоростью подачи 6 мл/мин (объем фракций равен 250 мл). Профиль элюирования строят по данным хроматографии на бумаге. Объединяют фракции, характеризующиеся наиболее простым составом и максимальным содержанием аминокислот. Эти уже обогащенные смеси вновь фракционируют на сульфокатионите (Zeo-Karb-215) в различных условиях или на дауэксе-2 до получения чистых аминокислот. Не представляющие интереса промежуточные фракции отбрасывают. Условия рехроматографии выбирают с учетом состава смеси. Выход аминокислот составляет около 50% от веса исходного белка. В качестве источника аминокислот используют белковые гидролизаты например, яичного альбумина) или гидролизаты микроорганизмов (например, дрожжей) и даже биологические экстракты [90]. Важно лишь, чтобы смесь не содержала большого количества полисахаридов. [c.356]

Менее эффективным методом является элюентная хроматография на ионитах, по емкости на два порядка уступающая вытеснительной технике. Однако ее несомненным преимуществом является возможность получения хроматографически чистых аминокислот. Еще в 1950 г. был разработан предельно простой метод препаративного разделения аминокислот на смоле дауэкс 50-Х8 в ступенчатом градиенте соляной кислоты [91]. Аминокислоты выделяли из элюата простым упариванием досуха. Однако в этом случае плохо разделяются серин и треонин, а также лейцин и изолейцин. Основные аминокислоты элюируют 4 н. раствором НС1, и тем не менее элюирование занимает много времени. Поэтому авторами была разработана новая схема элюирования — аммоний-ацетатным и аммоний-формиатным буферами, при которой достигалось полное разделение всех аминокислот. Первой стадией является элюирование ацетатными буферами на колонке с дауэксом 50-Х8 высотой 15 см. При этом происходит разделение основных аминокислот. Первые два пика содержат смесь аминокислот, которая разделяется при рехроматографии. Второй пик, соответствующий тирозину и фенилаланину, хроматографируют на колонке (высотой 60 см) с дауэксом 50-Х8. Материал, соответствующий первому пику, фильтруют через колонку (высотой 15 см) с ам- [c.356]

Природные нуклеозиды разделяют ионообменной хроматографией в условиях, описанных ранее для фракционирования оснований, например на смоле дауэкс 1 в формиатной форме при элюировании формиатом аммония с pH 10,2 [73, 74] или на дауэкс 50 в нуклеозидном анализаторе [52]. Наилучшие результаты получены [75] при разделении нуклеозидов за счет ионной эксклюзии (исключения ионов) на колонке с катионитом аминекс А-6 [75] (рис. 37.7). В случае элюирования боратом натрия или калия (с концентрацией Ю- —Ю- М) при pH 8— 10 соединения, имеющие цыс-диольную группировку, образуют боратный эфир и приобретают вследствие этого дополнительный отрицательный заряд, что создает благоприятные условия для ионообменного разделения. При разделении рибонуклеозидов на сильном анионите (в боратной форме) в градиенте концентрации боратного буферного раствора (pH 9,2) и раствора хлорида натрия (0,01—0,1 М) компоненты смеси элюируются в следующем порядке цитидин, аденозин, уридин, гуанозин [76]. [c.47]

Ионообменную хроматографию использовали при исследовании продуктов, выделенных из культуральной жидкости Pseudomonades. Продуцент выращивают на синтетической среде, содержащей биотин, к которой добавляют С-меченый по карбонилу биотин. Культуральную жидкость центрифугируют (16 000 g, 20 мин) для отделения клеток. К 9 л полученного раствора добавляют дауэкс 50W-X8 (100—200 меш) и после перемешивания фильтруют на бумаге. Смолу промывают 6 л 70%-ного этанола, элюат объединяют с предыдущим фильтратом и концентрируют до 600 мл. После отделения осадка раствор (рн 7,0) делят на три равные части и каждую порцию пропускают через колонку (1,5X70 см) со смолой дауэкс 1-Х2 (НСОО-, 100—200 меш). Соединения, содержащие радиоактивную метку, элюируют последовательно водой, а затем 0,01 и 0,1 М муравьиной кислотой. [c.194]

Неомицином обычно называют смесь трех родственных антибиотиков—неомицинов В и С, являющихся стереоизомерами, и продукта их деградации — неамина (неомицина А). Коммерческие препараты в основном содержат неомицин В. Во многих продажных препаратах в качестве примесей (менее 1%) присутствуют другие антибиотики этой группы, в частности неомицины D, Е и F, идентифицированные как паромамин, паромо-мицины I и II [22]. Коммерческий препарат сульфата неомицина нейтрализовали и сорбировали на колонке с амберлитом G-50 (NHI). При градиентном элюировании разбавленным аммиаком получали две фракции, в первой из которых содержатся неамин, неомицин D и неомицин F, во второй — неамин и неомицины D, F, В, Е (в порядке выхода). Далее обе группы веществ фракционировали с помощью ион-эксклюзионной хроматографии на смоле дауэкс 1-Х2 (0Н ). Компоненты смеси элюировали дистиллированной водой и идентифицировали обычными методами. [c.211]

Смотреть страницы где упоминается термин Хроматография на колонке с дауэксом: [c.386] [c.26] [c.352] [c.352] [c.81] [c.468] [c.117] [c.208] [c.284] [c.53] [c.451] [c.131] [c.289] [c.161] [c.298] [c.355] [c.366] [c.405] [c.41] [c.54] [c.210] [c.219] [c.226]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология