Ультрацентрифугирование в градиенте плотности

При определении состава и строения П. с. широко используют физич. методы исследования — УФ-, ИК-и ЯМР-спектроскопию, вискозиметрию, рентгенографию, дифференциальный термич. анализ, рефрактометрию, гель-хроматографию, двойное лучепреломление, осмометрию, светорассеяние и ультрацентрифугирование в градиенте плотности, а также различные методы исследования физико-механич. свойств. Для получения подробной информации о строении и структуре П. с. целесообразно применение комплекса химич. и физич. методов при обязательном использовании сведений, полученных в процессе синтеза и выделения П. с. См. также Идентификация. [c.102]

ВЫХ оснований или нуклеотидов, полученных после расщепления полимера (подробнее — см. стр. 58). С нуклеотидным составом ДНК однозначно связаны два физических свойства двухцепочечных комплексов, которые часто используются для характеристики полученных препаратов 2 . 2в Одно из них — так называемая температура плавления Гщ — это температура, при которой происходит распад двухцепочечного комплекса на одноцепочечные молекулы этот процесс легко наблюдать по изменению УФ-поглощения или оптического вращения раствора (подробнее см. в гл. 4). Другая характерная константа ДНК — плавучая плотность р — может быть определена из результатов равновесного ультрацентрифугирования Такое центрифугирование проводят обычно в растворах солей, обладающих высокой плотностью чаще всего применяют хлорид или сульфат цезия. При длительном центрифугировании устанавливается градиент плотности раствора, а ДНК собирается в узкой зоне, где существует равновесие между центробежной силой и выталкивающей силой, которая определяется разностью плотности осаждаемого вещества и применяемого солевого раствора в данной зоне. Равновесное центрифугирование в градиенте плотности Сз С1 может служить не только аналитическим методом для характеристики препарата ДНК, но и полезным препаративным методом для разделения ДНК, различающихся по нуклеотидному составу. Подобным же образом препаративное ультрацентрифугирование в градиенте плотности сахарозы используется для разделения молекул ДНК, различающихся по скорости седиментации. [c.31]

Другой тип седиментационного эксперимента — это зонное ультрацентрифугирование или неравновесное ультрацентрифугирование в градиенте плотности, предложенное для аналитических целей Виноградом с сотр. [45]. Тонкий слой раствора полимера во время разгона ротора наслаивается на более плотный растворитель необходимый для этого вкладыш седиментационной ячейки описан в работе [46], а вопросы седиментации и диффузии макромолекул в зоне рассмотрены, например, в [47]. [c.22]

Метод равновесного ультрацентрифугирования в градиенте плотности находит применение для исследования образцов, однородность которых по плотности известна, таких, как некоторые препараты ДНК. Крупные молекулы для такого исследования более удобны, так как они образуют узкие полосы, и градиент плотности в пределах этих полос мало отличается от линейного. Этот случай удобен для теоретического анализа и прост для измерений. [c.129]

Тонкослойные хроматограммы привитых сополимеров поливи-нилацетата со стиролом представлены на рис. 114. Во всех случаях был проведен анализ не только образца привитого сополимера, но и смесей определенных количеств образца и гомополимера, что позволяло количественно определить содержание примесей гомополимера в исходном образце сополимера. Были предприняты попытки выделить чистый привитой сополимер из смеси продуктов реакции [1299—1306]. С этой целью было также использовано ультрацентрифугирование в градиенте плотности [1307], однако данный метод оказался очень сложным. [c.295]

РАВНОВЕСНОЕ УЛЬТРАЦЕНТРИФУГИРОВАНИЕ В ГРАДИЕНТЕ ПЛОТНОСТИ СУЛЬФАТА ЦЕЗИЯ [c.192]

Метод ультрацентрифугирования в градиенте плотности [115, 1Щ. Когда при центрифугировании в градиенте плотности достигается седи-ментационное равповесие, концентрации макромолекул распределяются но гауссову закону ширина полосы седиментации определяется двумя противоположно действующими факторами — тенденцией макромолекул диффундировать в область более низких концентраций и их стремлением седиментировать в зону с соответствующей плотностью. Было показано, что в такой системе приближенное значение молекулярного веса может быть определено по следующей формуле [c.240]

При использовании ультрацентрифугирования в градиенте плотности в биохимии целью исследования часто бывает анализ систем, содержащих макромолекулы идентичного молекулярного веса, но имеющих различную эффективную плотность. Способность к разделению зон, содержащих различные компоненты растворенного вещества, будет зависеть от соотношения у расстояния Аго между срединными участками и средним квадратичным отклонением а местоположения макромолекул в пределах их зон. Так как Аго = Apf/(dp/dr), то, подставляя значения Го и ст из уравнений (IV-48) и (IV-49), получаем [c.164]

Рис. 57. Исследование образования гибридной ДНК с помощью ультрацентрифугирования в градиенте плотности.

Первое поколение дочерних молекул ДНК состоит наполовину из старых и наполовину из новых полинуклеотидных цепей. Зто было подтверждено замечательным экспериментом на бактериальных культурах с использованием меченых атомов ( N разд. 20.17). Об этом опыте в 1958 г. сообщили М. Мезельсон и Ф. У. Шталь. Они выращивали несколько поколений кишечной палочки Es heri hia oli) на питательной среде, в которой присутствовало соединение азота с высоким содержанием тяжелого изотопа Выделенная в этом случае бактериальная ДНК имела большую молекулярную массу (атомы в молекуле были те же) и большую плотность, чем ДНК, полученная из бактерий, выращенных на обычной среде. Различие плотности определяли методом, называемым ультрацентрифугированием в градиенте плотности. Раствор хлорида цезия помещают в центрифужную пробирку и вращают ротор с такой скоростью, чтобы получить центробежное ускорение, в 100 000 раз превышающее ускорение земного тяготения. В центробежном поле концентрация ионов цезия, имеющих высокую плотность (вместе с компенсирующими их заряд ионами хлора), будет выше в периферическом конце пробирки. Таким образом, по направлению к периферии в пробирке создается градиент плотности. Большие молекулы, вроде ДНК, при введении в пробирку и создании силового поля концентрируются в зонах, где их плотность равна плотности раствора хлорида цезия, т. е. в периферическом конце пробирки. Мезельсон и Шталь перенесли бактерии, выращенные в среде, обогащенной [c.460]

Осн. характеристики П. соотношение мол. масс нуклеиновых к-т и белков (определяется хим. анализом или из значения плавучей плотности Н., измеряемой ультрацентрифугированием в градиентах плотности s l или s SOJ, стабильность в р-рах с разл. ионной силой, конформация и гиютность упаковки нуклеиновых к-т в Н., взаимная укладка макромолекул нуклеиновых к-т и белков. Все эти параметры варьируют для разных Н. в широких пределах. [c.304]

Ультрацентрифугирование в градиенте плотности. Частицы седиментируют в смеси легкого и тяжелого растворителей, например СбНб и СВг4. В равновесных условиях под влиянием центробежной силы частицы собираются в точке, в которой плотность смеси растворителей точно соответствует плотности макромолекул в растворе (рис. 8,19, в) (см. разд. 8.4). [c.129]

На заключительном этапе выделения и очистки белков исследователя всегда интересует вопрос о гомогенности полученного белка. Нельзя оценивать гомогенность индивидуального белка только по одному какому-либо физико-химическому показателю. Для этого пользуются разными критериями. Из огромного числа хроматографических, электрофоретических, химических, радио- и иммунохимических, биологических и гравитационных методов наиболее достоверные результаты при определении гомогенности белка дают ультрацентрифугирование в градиенте плотности сахарозы или хлорида цезия, диск-электрофорез в полиакриламидном геле, изоэлектрическое фоьсусирование, иммунохимические методы и определение растворимости белка. Действительно, если при гель-электрофорезе белок движется в ввде одной узкой полосы и в этой зоне сосредоточена его биологическая активность (ферментативная, гормональная, токсическая [c.32]

В настоящее время применяют ряд усовершенствованных методов разделения нуклеиновых кислот на фракции из суммарного препарата, полученного описанным методом. Это прежде всего хроматография на геле фосфата кальция, ионообменная хроматография (в качестве адсорбентов используют ДЭАЭ-целлюлозу, ДЭЛЭ-сефадекс и др.), ультрацентрифугирование в градиенте плотности сахарозы, хроматография по сродству на белковых носителях, фильтрация через гели агарозы и сефарозы, гель-электрофорез и др. [c.97]

Технология получения гемагглютинина из гриппозных вирионов заключается в следующем накопленный вирусный материал в аллантоисной жидкости куриного эмбриона сепарируют, подвергают микрофильтрации и фильтрационному концентрированию примерно в 50 раз, при необходимости дополнительно очищают ультрацентрифугированием в градиенте плотности сахарозы концентрированный вирионный материал обрабатывают катионным ПАВ и отделяют гемагглютинины ультрафильтрацией с последующими диализом и стерилизующей фильтрацией. На последней стадии стандартизируют и контролируют с ъединичную вакцину (особенно — на отсутствие живых гриппозных вирусов). [c.486]

В седиментационном анализе можно проводить два типа экспериментов. При анализе методом скоростной седиментации проводят определения скорости оседания и диффузии частиц при бioльшиx скоростях вращения ротора, тогда как при анализе методом седиментационного равновесия выжидают установления равновесия между процессами седиментации и диффузии в процессе центрифугирования при меньших скоростях вращения ротора. Теоретически неоднородность распределения по молекулярным весам в образце можно охарактеризовать с помощью обоих указанных методов, получая методом скоростной седиментации распределение по коэффициентам седиментации, а методом седиментационного равновесия — распределение по молекулярным весам. Распределение по молекулярным весам легче интерпретировать хими-ку-полимерщику, не имеющему специальной подготовки. Было показано, что детализированный характер распределения по коэффициентам седиментации можно получить методом скоростной седиментации в отсутствие дополнительных предположений о форме кривой распределения. Такие дополнительные предположения, как правило, необходимы при анализе методом седиментационного равновесия. Скоростное ультрацентрифугирование приобрело, следовательно, наиболее широкое распространение при исследовании неоднородности распределения но молекулярным весам полученные этим методом данные обычно комбинируют с результатами других измерений, преобразуя кривую распределения по коэффициентам седиментации в кривую распределения по мол екулярным весам, в ряде случаев более подходящую для целей исследования. Метод седиментационного равновесия применяется в основном в качестве способа определения абсолютных величин средних молекулярных весов, но применение этого метода для растворов в смешанных растворителях ультрацентрифугирование в градиенте плотности), как недавно было показано, позволяет оценить распределение полимера по плотности. [c.216]

Приведенная работа Месельсона интересна также тем, что наряду с первым применением на практике принципа ультрацентрифугирования в градиенте плотности оказалась основополагающей для типично биологической проблемы — выяснения механизма воспроизведения (редупликации) молекул дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК). В градиенте плотности хлорида цезия авторы проводили центрифугирование смеси молекул ДНК, меченных тяжелым изотопом азота ( К) или 5-бромурацилом, с немечеными молекулами. Вследствие весьма незначительной разницы в плотностях таких молекул возможно разделение меченых и немеченых молекул. Таким образом было показано, что в процессе удвоения количества ДНК у бактериальных клеток кишечной палочки все молекулы ДНК первого поколения клеток оказываются гибридными (содержат равные количества меченого и немеченого материала), во второй же генерации получаются в равных количествах гибридные молекулы и молекулы, не содержащие метки. Позже было показано подобное распределение молекул ДНК и у других размножающихся митозом организмов. В итоге такие данные позволили отвергнуть дисперсный механизм редупликации ДНК и строго доказали наличие двойной структуры молекулы ДНК, воспроизводящейся, вероятно, по полукопсервативпому механизму.— Прим. перев. [c.242]

Ультрацентрифугирование в градиенте плотности оказывается полезным не в качестве метода определения молекулярных весов, но как обладающий высокой чувствительностью метод оценки различий в плотностях макромолекул данного образца. Если степень различия между плотностями макромолекул разных типов достаточно высокая, то можно получить распределение с более чем одним максимумом. Бреслер с сотр. [77], применяя методы ультрацентрифугирования в градиенте плотности, отделил блок-сополимер стирола и изопрена от соответствующих гомополимеров в то время как Бухдалу с сотр. [78] удалось разделить сополимер акрилонитрила с винилацетатом на три фракции с отличающимися кажущимися удельными парциальными объемами, причем различие, наблюдаемое между кажущимися удельными парциальными объемами двух фракций, составляло лишь 0,0005 см г. Бухдал с сотр. [79] смог также отделить атактический полистирол от стереорегулярного, при этом удельные парциальные объемы отличались на [c.243]

Что касается низкой гетерогенности бактериальных ДНК по составу (но не обязательно по последовательности), то она очевидна также из данных по определению плотности ДНК методом ультрацентрифугирования в градиенте плотности [245, 246[. При изучении большого числа дезоксирибонуклеиновых кислот вновь была найдена линейная зависимость между плотностью ДНК и содержанием гуанина и цитозина. Экстраполирование этих результатов показало, что двойная спираль из аденин-тиминового полидезокси-нуклеотида должна иметь плотность 1,662, а плотность соответствующего гуанин-цитозинового полимера должна быть 1,764. Если известна плотность нативной ДНК и ее величина укладывается между этими крайними значениями, то это позволяет точно определять состав ДНК. Соответствующие денатурированные ДНК имеют плотность на 0,015 выше. Если гетерогенность двух препаратов ДНК из животных тканей удалось выявить по увеличению ширины полос, то бактериальные нуклеиновые кислоты характеризуются узким распределением по составу (половина ширины полосы соответствует 3—5 мол. % гуанина + цитозина по сравнению с 11 % для ДНК из зобной железы теленка), а распределение по составу ДНК бактериофага настолько узко, что его не удалось измерить. Избирательная тепловая денатурация ДНК из зобной железы теленка (с низким содержанием гуанин-цитозиновых пар) дает фракцию нативного препарата с более высокой плотностью, чем плотность исходного препарата, из которого она была выделена [245[. [c.577]

Ясно, что ренатурация может быть легко достигнута для более однородных образцов ДНК (например, для тех препаратов, которые дают достаточно узкие зоны при ультрацентрифугировании в градиенте плотности), так как в растворах совершенно гомогенной ДНК после ее денатурации будет наибольшая концентрация комплементарных цепей. Таким образом, наиболее полно будут рена-турировать ДНК бактериофагов, в несколько меньшей степени бактериальные f ДНК и в значительно меньшей степени ДНК из животных тканей (например, из зобной железы теленка), которые весьма гетерогенны по составу (см. также стр. 601, где денатурация и ренатурация обсуждаются более детально). [c.580]

Определены оптимальные условия ренатурации ДНК после ее тепловой денатурации I308]. Концентрация ионов патрия должна быть выше 0,4 М, а температура на 25 ниже температуры плавления. Так как переход спираль — клубок воспроизводим (в отношении физических свойств и тепловой инактивации биологических маркеров), при охлаждении образуется та же вторичная структура, а сколько-нибудь заметного образования неспецифических водородных связей не происходит. Полнота ренатурации увеличивается с увеличением молекулярного веса ДНК и, как и следовало ожидать, заметно зависит от гомогенности препарата. Степень реконструкции вторичной структуры убывает в последовательности для ДНК из бактериофага > мелких бактерий > бактерий > животных тканей, и этот порядок отражает изменение числа различных молекул ДНК и различие нуклеотидного состава, которыми характеризуется каждый из источников ДНК 1308]. Как было показано фракционированием ренатурированной трансформируюшей ДНК при иомош,и ультрацентрифугирования в градиенте плотности, ренатурация не относится к процессам типа все или ничего>л а образование двойной спирали вновь после разрушения может происходить в различной степени [309]. В основном это есть результат случайного расщепления ковалентных связей в полин клеотид-ной цепи при нагревании. При стандартных условиях тепловой денатурации и последующего охлаждения можно рассчитать, что в каждой цепи ДНК с молекулярным весом 10 может происходить в среднем по три разрыва. Поэтому в процессе ренатурации будут участвовать комплементарные цепи с длиной, различающейся на i/i—1/2, что понижает ренату рацию на 20—30% [310]. Действительно, на микрофотографиях часто наблюдаются клубки на одном или на обоих концах ренатурированных цепей, которые соответствуют выступающим концам однотяжных цепей. [c.605]

Например, для седиментации лизоцима (s = 2S, р= 1,4 г/мл) в градиенте от мениска до дна пробирки ротора Be kman SW29 требуется t — к Is = 290/2 = = 145 ч в более совершенном роторе SW65Ti для этого требуется /s = 120/2 = 60 ч. Если используемые условия ультрацентрифугирования в градиенте плотности отличаются от приведенных по крутизне градиента или температуре, величину к можно определить, пользуясь уравнениями и таблицами, приведенными з работе [18]. [c.198]

Для этого был изобретен остроумный и исключительно чувствительный метод ультрацентрифугирования в градиенте плотности. Метод Месельсона представляет собой ультрацентрифугирование, при котором мы разделяем макромолекулы не по молекулярному весу, а по удельному весу полимера. В среду вводится электролит большой плотности ( s l с р = 3,7). Эта соль распределяется в кювете ультрацентрифуги в согласии с законом Больцмана, и нри установившемся равновесном распределенни концентрация соли будет зависеть от координаты примерно как [c.251]

Фермент Корнберга вовлекает бромуридинтрифосфат в полимеризацию с аденозинтрифосфатом, и в результате получаются смешанные цепочки. Убедиться в этом нетрудно, применяя метод ультрацентрифугирования в градиенте плотности. Чистый полимер иоли-АТ имеет плотность 1,69, чистый ноли-АБ — 1,87. Это различие в плотностях столь велико, что применение метода Месельсона здесь весьма просто. Экснеримент отлично подтвердил написанное выше уравнение и тем самым показал, что синтез ДНК в реакции Корнберга идет также путем редупликации и разделения двойных спиралей, как это с несомненностью было показано для биосинтеза ДНК в клетке. [c.256]

Для количественного анализа нами был применен метод, основанный на ультрацентрифугировании в градиенте плотности. (Для би0.т10гических систем такой метод был ранее предло- [c.76]

Поскольку новые методы исследования тесно связаны со стереорегулярностью полимеров, в книге приведена отдельная глава но определению микротактичности. Только одна глава книги — фракционирование—составлена с препаративной точки зрения. Но даже в этом случае выбраи один метод — экстракционная хроматография применительно к полиолефинам. В шести главах изложены методы, которые можно отнести к категории оптических. К ним относятся использование поляризованного излучения и дейтерированных образцов в инфракрасной спектроскопии, двойное лучепреломление и светорассеяние твердыми полимерами, дисперсия оптического вращения, поляризационная флуоресценция, дифракция рентгеновских лучей под малыми углами и дифракция электронов. В главе о ядерном магнитном резонансе рассматриваются только спектры высокого разрешения. Двумя термометрическими методами являются дифференциальный термический анализ и новый метод измерения тепловых эффектов при механической деформации. Остальные пять глав посвящены свойствам растворов и некоторым другим свойствам светорассеянию и осмометрии при повышенных температурах, ультрацентрифугированию в градиенте плотности, двойному лучепреломлению в потоке, эластоосмометрии и полимерным монослоям. [c.7]

При фракционировании макромолекул па колонках с помощью ультрацентрифугирования в градиентах плотности или противоточного распределения возникает необходимость анализа большого числа фракций, содержащих различные химические реактивы и растворители, применявшиеся при фракционировании. При определении радиоактивности сцинтилля-ционным методом эти комнонепты могут мешать (вследствие самопоглощения или эффекта гашения). На фильтры можно нанести любое количество фракций и затем отмыть их от мешающих счету примесей, например от [c.146]

Переход от этой в основном упорядоченной конформации к отдельным цепям беспорядочного клубка приводит к изменению молекулярных размеров, которые проявляются в изменении светорассеяния или свойств, основанных на внутреннем трении макромолекул. За изменениями кажущейся плотности и двукратным уменьшением кажущегося молекулярного веса ДНК за счет диссоциации двойной спирали можно проследить при помощи ультрацентрифугирования в градиенте плотности (гл. IV). Наиболее наглядным доказательством существования перехода спираль — клубок в ДНК является значительное изменение ультрафиолетового спектра поглощения (гл. V). Кроме этих физико-химических методов, однозначным критерием целостности нативной спиральной структуры служит биологическая активность некоторых препаратов ДНК. Авери и др. [3411 обнаружили, что контакт некоторых бактерий с растворами ДНК может привести к трансформации наследственных характеристик микроорганизмов. Эта трансформирующая активность , которая исчезает после денатурации нуклеиновой кислоты, может быть использована в качестве наиболее чувствительного средства определения доли молекул, присутствующих в нативной двойной спирали [342, 343]. [c.127]

Первый эксперимент с применением метода центрифугирования в градиенте плотности [461] особенно наглядно продемонстрировал значение этого метода. В этом эксперименте бактерии выращивались на среде, богатой № , и поэтому дезоксирибонуклеиновая кислота (ДНК) организмов, меченных изотопом тяжелого азота, обладала несколько большей плотностью, чем обычная ДНК. Через определенное время бактерии переносили в среду с обычным распределением изотопа азота и методом центрифугирования в градиенте плотности анализировали изменения плотности ДНК, выделенной из ряда последовательных генераций клеток. На основе предположения Уотсона и Крика [30] было принято, что редупликация ДНК во время деления клеток включает разделение двух цепей двойной спирали (см. стр. 130), причем каждая цепь служит матрицей для синтеза дополняющей ее цепи. Если этот механизм достоверен, то вторая генерация клеток, происходящих от клеток, меченных N , должна содержать ДНК, в которой изотопом тяжелого азота мечена одна из цепей каждой двойной спирали. В последующих генерациях должно возрастать количество ДНК с обычным распределением изотопов азота, однако при этом сохраняется также некоторое количество наполовину меченной ДНК. В любой данный момент времени в растворе должны присутствовать молекулы ДНК только с тремя четко определенными плотностями и никаких компонентов с промежуточной плотностью обнаруживаться не должно. Это предположение было полностью подтверждено данными по ультрацентрифугированию в градиенте плотности (рис. 55), и поэтому механизм редупликации ДНК, который раньше был лишь плодом смелых теоретических представлений, можно считать в настоящее время окончательно установленным. В относительно короткое время после этого классического эксперимента метод центрифугирования в градиенте плотности различными путями способствовал развитию биохимических исследований. Можно привести несколько примеров, иллюстрирующих это положение. Методом меченых атомов, подобным описанному выше, было установлено, что некоторая часть рибонуклеиновой кислоты (РНК) переходит в последующие генерации клеток в нативной форме [468]. Было найдено, что плотность ДНК является линейной функцией содержания гуанина и цитозина в различных микроорганизмах, и, таким образом, ДНК, выделенная из какого-либо вещества, образует в градиенте плотности полосу с характерным расположением [469, 470]. На диаграмме градиента плотности ДНК, полученной из тканей высших организмов, периодически обнаруживаются сателлит-ные полосы [471], которые могут быть обусловлены симбиозными организмами или другими, еще неизвестными причинами. Типичный пример этого эффекта изображен на рис. 56, который, между прочим, наглядно свидетельствует также о чувствительности метода обнаружения малых [c.165]

Рис. 55. Анализ ДНК, выделенной из бактерии Е. oli с помощью ультрацентрифугирования в градиенте плотности. Бактерип выращивали на питательной среде, богатой N1 , и в пулевой момент времени добавляли большое количество питательного вещества, содержащего (по Мезельсону).

Первое сообщение о применении ультрацентрифугирования в градиенте плотности для исследования синтетических полимеров было опубликовано Бреслером и др. [473], которые использовали этот метод для исследования свойств системы, содержащей изопренстирольный блок-сополимер, а также два гомополимера. Применение этого метода имеет большое потенциальное значение для определения свойств сополимеров, так как в результате различных методов фракционирования, как правило, получаются вещества, отличающиеся как по химическому составу, так и по молекулярному весу. Поэтому проблема раздельного определения функций распределения по длине цепей и по составу полимера в течение длительного времени с.лужила предметом оживленных дискуссий. Однако теоретические затруднения при объяснении данных, полученных для растворенного вещества, состав и молекулярный вес которого изменяются непрерывно [463], значительно серьезнее, чем те, [c.167]

Сальватор и др. [117] сделали критический обзор методов очистки тиреоглобулина и предложили улучшенные методы получения практически гомогенного тиреоглобулина с выходом 60—70%. Эти авторы рекомендуют одноэтапный процесс очистки с использованием или фильтрации на геле (агара или декстрана) или ультрацентрифугирования в градиенте плотности. Первый метод целесообразно использовать для получения больших количеств белка. [c.230]

Вполне понятно, что легкие и тяжелые фрагменты не представляют собой чистые фотосистемы I и II, а лишь в той или иной мере обогащены ими, чем и объясняется смешанный характер спектров флуоресценции (рис. 17). Вслед за Бордма-ном фрагменты хлоропластов, обогащенные фотосистемами I и II, были получены рядом авторов (Вернон, Митчел, Шлык и др.). Они использовали для дезинтеграции хлоропластов не только дигитонин, но и другие детергенты (тритон Х-100, додецилсульфат натрия), ультразвук, а также простое механическое раздробление хлоропластов. Затем фрагменты разделялись методами гельэлектрофореза или ультрацентрифугирования в градиенте плотности. [c.77]