Липиды на индивидуальные соединени

Целью хроматографии липидов являются разделение липидов различных классов и последующее получение индивидуальных соединений с целью их идентификации и количественного анализа. В ходе изучения липидов с помощью хроматографических методов выяснилось, что многие организмы, ткани, клетки и субклеточные компоненты имеют характерный состав липидов, который можно определить, не прибегая к полному разделению и получению индивидуальных соединений. Количественный анализ липидов, полученных в результате частичного разделения первичного экстракта, часто является достаточным для установления источника, из которого были выделены эти липиды, и выяснения, с каким метаболическим состоянием (нормальным или аномальным) связан данный состав этих соединений. Практически все хроматографические методы могут быть применимы для выполнения этой задачи, однако более предпочтительны те, которые сочетают быстрое разделение с эффективной количественной оценкой. Такой подход имеет широкое применение — от определения полного состава липидов плазмы до характеристики индивидуальных липидов бактерий, основанной на анализе метиловых эфиров жирных кислот этих липидов или продуктов пиролиза последних. [c.204]

Природные липиды обычно являются смесями, и выделение чистых индивидуальных соединений — задача трудная, поэтому чистые липиды часто получают химическим путем. [c.89]

Для количественного определения отдельных фракций адсорбционную хроматографию в тонких слоях силикагеля используют вместе с другими чувствительными методами анализа, например колориметрическими или спектрофотометрическими. После хроматографического разделения, обнаружения и идентификации компоненты элюируют растворителями из участков силикагеля, соответствующих отдельным фракциям [2], и определяют подходящим способом. Необходимо иметь в виду, что проведение хроматографического разделения таким способом всегда сопряжено с возможностью потерь вещества на отдельных этапах. Поэтому необходимы тщательный контроль всех операций и, если возможно, сопоставление результатов определения индивидуальных соединений как по фракциям, так и по суммарным липидам. [c.213]

ГЖХ — один из наиболее эффективных методов разделения смесей нейтральных липидов на индивидуальные соединения. В данном случае происходит разделение по нескольким параметрам молекулярной массе, степени ненасыщенности, а в некоторых случаях — геометрической изомерии. Эффективность этого метода значительно возрастает при комбинировании его с ТСХ на носителях, содержащих ионы серебра. [c.185]

Лектинами называют белки или гликопротеиды растительного (фитогемагглютинины) или животного происхождения, проявляющие более или менее избирательное сродство к остаткам индивидуальных сахаров или групп сходных сахаров. Разнообразие остатков сахаров, часто встречающихся в природе, невелико, но они входят в салшх различных колхбинациях во множество биологически важных соединений полисахаридов, мукополисахаридов, гликопротеидов, глико-липидов и др. Многие из этих соединений участвуют в построении клеточных мембран. Подобно антителам, лектины обладают более чем одним участком связывания сахаров, что обусловливает их сио-собностъ агглютинировать эритроциты и другие клетки, отбирая их по классам, напрпмер опухолевые или эмбриональные. Используемые в качестве аффинных лигандов, лектины позволяют решать важные задачи очистки содержащих сахара компонентов плазмы, гликопротеидов клеточных мембран и др. [c.363]

Так, например, липопротеиды в некоторых случаях представляют настолько непрочные комплексы, что их скорее можно рассматривать как адсорбционные соединения белков с липидами, чем как индивидуальные химические вещества. [c.50]

Все животные и растительные ткани содержат такие сложные смеси липидов, что выделить и идентифицировать все компоненты этих смесей каким-либо одним аналитическим методом практически невозможно, и достичь этой цели можно, только объединяя несколько методов. Предварительное разделение липидов на группы, состоящие из соединений двух или трех хорошо охарактеризованных классов, облегчает последующее разделение смеси на индивидуальные компоненты. Этот прием сейчас широко используется в тех случаях, когда исследователь располагает достаточным запасом времени и достаточным для проведения такого последовательного анализа количеством вещества. В настоящее время существует несколько очень хороших систем, включающих колоночную и тонкослойную хроматографию, которые позволяют выполнить этот анализ. [c.135]

Использование радиоактивных изотопов в сочетании с иммунологическими методами исследования позволяет исключительную избирательность последних реализовать для ничтожно малых количеств биополимеров. Чувствительность радиоиммунных методов позволяет обнаруживать и определять нанограммовые, а иногда и пикограммовые количества индивидуальных белков и гормонов пептидной природы на фоне колоссального избытка родственных им молекул. Избирательность при работе с нуклеиновыми кислотами пока что заметно ниже (при том же уровне чувствительности метода), но прогресс и здесь явно заметен. Радиоиммунные методы широко используются для исследования-сахаров, липидов и других биологически активных соединений, однако эти приложения выходят за рамки настоящей книги. [c.269]

В круг пероксидазных субстратов фермента входят различные функционально активные вещества, в том числе и антиоксиданты. В реакциях индивидуального окисления эти соединения чаще всего являются медленно окисляемыми субстратами, однако при совместном окислении с быстро окисляемым субстратом скорость их пероксидазного окисления может возрастать в 100 и более раз. В ходе каталитического процесса могут образовываться свободные радикалы, которые в начальный момент прорастания семян способны инициировать реакции свободнорадикального окисления, активируя при этом протекание процессов перекисного окисления липидов. Высокие концентрации антиоксидантов ингибируют пероксидазу как в реакциях индивидуального, так и совместного окисления, осуществляя таким образом регуляторную функцию. Следует выделить ряд особенностей проявления активности пероксидазы в покоящихся и прорастающих семенах. Так, например, в сухих семенах выявляется высокая пероксидазная активность, коррелирующая с уровнем их жизнеспособности. Тогда как низкая активность фермента свидетельствует о понижении жизнеспособности и всхожести семян. [c.210]

И неполярные липиды (содержание последних довольно велико). Далее эфиром и смесями эфира с ацетоном (с возрастающей долей ацетона) вымывают гликозиды каротиноидов. В этих условиях фосфолипиды остаются адсорбированными в колонке. Гликозиды каротиноидов, выделенные из микобактерий, обычна этерифицируются различными жирными кислотами по одной из гидроксильных групп ГЛЮКОЗЫ. Поэтому эти эфиры необходимо омылить этанольным раствором гидроксида калия. Очень важной стадией является ацетилирование гликозидов уксусным ан-гидридом и пиридином. При этом сахарная, т. е. гидрофильная, часть молекулы становится липофильной и образующиеся ацетилированные гликозиды лучше поддаются дальнейшему разделению. Выделенные фракции повторно хроматографируют на силикагеле, однако полученные в результате фракции все-таки представляют собой смеси трех или более компонентов. Получить фракции индивидуальных компонентов можно, хроматографируя эти смеси на оксиде магния (колоночная или тонкослойная хроматография). В табл. 4.12 приведены все идентифицированные гликозиды каротиноидов, выделенные из микобактерий, а также их величины полученные на тонких слоях оксида магния элюированием смесью петролейный эфир (т. кип. 60—70 °С)—бензол — метанол (40 10 1). Подобную же смесь используют и в колоночной хроматографии. Колонку заполняют смесью (1 1) оксида магния и кизельгура (фирмы Мегск, Дармштадт, ФРГ). Как видно из табл. 4.12, каждая дополнительная сопряженная двойная связь в молекуле уменьшает Я), а циклизация молекулы увеличивает ее. Соединения В, Д и 3, перемещающиеся при хроматографии на силикагеле, как одна зона, легко разделяются этим методом. Различные типы ацетилированных гидроксильных групп (в соединениях А, В, Г я Ж) или карбонильная группа приводят к различному по величине замедлению движения хроматографируемого вещества. Очевидно, характер гликозидной связи также существенно влияет на величину [c.209]

При исследовании образца липида можно определить (качественно (i количественно) природу жирных кислот (или спиртов, или альдегидов), содерл-сащихся во всем исследуемом образце или в его отдельных фракциях. Кроме того, с помощью с )ерментов мол-сно определить жирные кислоты, содержащиеся в кал-сдом положении триглицерида или фосфоглицерида, и, наконец, путем сочетания хроматографического разделения с ферментативным деаци-лированием иногда можно идентифицировать индивидуальные соединения. [c.79]

Устранение такого несоответствия между возможностями изучения индивидуального соединения и возможностями выделения его из сложной смеси связано с развитием хроматографических методов. В первую очередь это касается трех разновидностей метода хроматографии — бумажной, тонкослойной и газо-жидкостной,— которые появились почти через полвека после первых успешных опытов Цвета [1] в 1901—1904 гг. Открытие и развитие метода бумажной хроматографии [2] создало прочную базу для анализа и разделения сложных смесей аминокислот, пептидов, липидов и нуклеотидов, что значительно расширило возможности биохимических исследований. В известной мере аналогичная техника тонкослойной хроматографии [3, 4] на закрепленных и незакрепленных с.лоях сорбентов ускорила исследования в области синтетической органической химии и в ряде прикладных областей химии и химической технологии. [c.5]

При обсуждении имеющихся в настоящее время данных любое разделение внутри определенного класса липидов мы будем рассматривать как разделение индивидуальных соединений, хо-ся отдельные компоненты не всегда могут быть получены в ка-кой-либо одной хроматографической системе или даже при сочетании нескольких систем. Для разделения жирных кислот, а также их эфиров и амидов в пределах всего класса липидов наиболее эффективными из доступных сейчас методов являются следующие ТСХ на носителях, содержащих ион серебра, ГЖХ на жидких полярных фазах, ВЭЖХ на колонках с обращенной фазой. В большинстве случаев эффективность разделения значительно увеличивается, если разделяемые соединения предварительно превратить в их менее полярные и термически более устойчивые производные. [c.167]

В последнее время для ГЖХ липидов стали применять капиллярные колонки [554, 556]. Наилучшее разделение с практически количественным выходом было получено с помощью ГЖХ на капиллярных колонках длиной 5 м при использовании в качестве газа-носителя водорода. В этих условиях было получено полное разделение глицеролипидов на индивидуальные соединения, отличающиеся на одно метиленовое звено, а также их некоторых насыщенных и ненасыщенных гомологов. Следует отметить, что при ГЖХ на колонках длиной 15 м наблюдается заметное расщепление триацилглицеринов с длинными цепями [724] и эфиров холестерина [725]. [c.208]

Тонкослойная хроматография (ТСХ) —один из наиболее эффективных, простых и универсальных методов разделения микроколичеств многокомпонентных смесей неорганических и органических соединений. Этот метод нащел щнрокое применение в биохимии, в анализе природных соединений, фармакологии. В органической геохимии ТСХ используют при исследовании липидов, стероидов, для разделения сернистых соединений нефти [46], ароматических УВ, фенолов и т. д. [4, 88]. Хроматография в тонком слое предполагает не только фракционирование сложных смесей на классы соединений, но и разделение внутри одного класса на индивидуальные компоненты. При исследовании сложных смесей применение ТСХ особенно эффективно в сочетании с ГЖХ и физическими методами ИК-, УФ-спектроскопией и масс-спектрометрией. Хроматография в тонком слое представляет собой метод, при котором раствор разделяемых веществ пропускается через тонкоиз-мельченный активированный сорбент, нанесенный на одну сторону стеклянной пластинки, в определенном направлении на определен-цое расстояние. Поскольку анализируемые компоненты, содержащиеся в жидкой фазе, по-разному удерживаются сорбентом, при движении растворителя происходит разделение (рис. 44). [c.114]

Денситометрическое определение всех классов соединений на основе использования обычных методов проявления хроматограмм недостаточно точно ввиду отсутствия единой для всех соединений пропорциональности оптической плотности и концентрации. Однако менее трудоемко. Исходя из этих положений, Д. И. Кузнецов и Л. И. Семенова [4] разработали методику денситометрического определения индивидуальных классов липидов, в том числе стеринов, на основе хроматографии в тонком слое силикагеля. Принцип метода заключается в том, что перед анализом к силикагелю добавляют краситель метиловый красный. Липиды проявляются в виде пурпурных пятен на розовом, а затем желтом фоне. После обесцвечивания фона парами аммиака хроматограмму фотографируют и затем фотокопии денсйтом трйрукЛ, сравнивая оптическую плотность изучаемых фракций с оптической плотностью стандарта. [c.213]

В целом органическое вещество океана А. П. Виноградов [58] характеризует как углеводопротеиновый комплекс. В его Составе за последние годы обнаружены разнообразные индивидуальные органические соединения. Среди них до 0,5 мг/л составляют органические кислоты, такие как уксусная (до 0,26 мг/л), муравьиная (до 0,68 мг/л), яблочная, лимонная, пальмитиновая, лауриновая, тетрадеценовая, линолевая, стеариновая и др. Содержание аминокислот достигает 45,7 мкг/л [175]. В воде обнаружены также пектиновые вещества, уроновые кислоты, углеводы, белки, полисахариды, липиды и др. Все эти индивидуальные органические соединения образовались в процессе жизнедеятельности организмов и при посмертном разрушении их тканей. В неглубоких морях (до 200—400 м) органическое вещество не успевает разложиться непосредственно в морской воде и, осаждаясь, достигает дна бассейнов, где в донных отложениях продолжается его превращение. Основная тенденция процесса биохимического разрушения и окисления органического вещества в океанической воде направлена к потере водорода, азота и фосфора и повышению содержания углерода, т. е. к образованию простых соединений с минимальным запасом свободной энергии. Однако, как отмечает А. П. Виноградов, не все органические вещества легко поддаются биологической обработке [c.29]

Однако ни одна классификация не в состоянии охватить по отдельности все эти индивидуальные органические соединения. Их приходится группировать в определенные классы и характеризовать индивидуально. Любопытно заметить, что большинство органических соединений, представляющих интерес для геологии, имеет некоторое структурное сходство с бывшим живым веществом. Даже Компоненты, когда-то синтезированные на добиогенной стаДии развития Земли, не очень отличаются как в химическом, так и в структурном отношении от отдельных мономерных строительных блоков, из которых состоят современные живые организмы. Поэтому геохимическая классификация органических веществ несколько похожа на биохимическую. Но если белки, углеводы и липиды в количественном отношении играют более важную роль среди растений и животных, то фенольные гетероноликонденсаты , углеводороды и асфальты имеют большее значение в геологических материалах. Ниже предлагается схема классификации, включающая основные биогео-химические соединения. [c.158]

Обнаружено, что ферменты, состоящие из нескольких субъединиц, значительно менее устойчивы в водно-органических смесях по сравнению с ферментами типа каталазы и пероксидазы, состоящими из одной полипептидной цепи. Необратимая инактивация ферментов, состоящих из нескольких субъединиц, вероятно, обусловлена неполной реассоциацией предварительно диссоциировавших субъединиц при возвращении системы к нормальным условиям. Процессы диссоциации и реассоциации субъединиц, происходящие под. влиянием органического растворителя. и гари замораживании, могут приводить к образованию полимерных форм, не обладающих ферментативной активностью. Так, замораживание растворов двух злектрофоретически индивидуальных форм лактат-дегидрогеназы, а затем их последующее плавление в присутствии хлорида натрия приводит к образованию пяти различных форм. Органические растворители, такие как этиленгликоль, пропилен-гликоль, глицерин или диметилсульфоксид, при их добавлении в растворы полностью ингибируют образование этих форм и, за исключением пропиленгликоля, способствуют сохранению ферментативной активности [626, 627]. Как правило, растворимость веществ, включая ферменты и субстраты, уменьшается при понижении температуры и при введении органических растворителей. Несмотря на это, для обнаружения промежуточных соединений при низких температурах часто бывает достаточно не очень больших концентраций субстратов, поскольку при понижении температуры увеличиваются стационарные концентрации [615, 628]. Необходимо, однако, проверять, являются ли обнаруженные при низких температурах промежуточные соединения теми же самыми, что и при нормальных условиях, так как направление процесса может измениться. Активность ферментов, которые находятся в биомем- ранах и связаны е липидами, падает при переводе их в водные буферные растворы. Например, известно, что цитохром Р-450 ин-активируется при экстракции в водные растворы (при этом наблю- [c.237]

В зависимости от химического состава ПАВ мицеллы могут быть неионными, катионными, анионными или амфотерными. Физические свойства ряда детергентов приведены в табл. 1. Наиболее широко применяемые неионные детергенты содержат полиоксиэти-леновую или полиоксипропиленовую цепь, связанную, как правило, со спиртами или фенолами имеющими длинную углеводородную цепь. К неионным ПАВ относятся также эфиры сахаров, жирные алканоламины, жирные окиси аминов. Все эти вещества довольно трудно получить в виде индивидуальных химических соединений, однако отсутствие ионов в мицеллах, которые они образуют, делает их особенно полезными в качестве детергентов и эмульгаторов и позволяет упростить теоретическое рассмотрение структуры таких мицелл. ККМ неионных ПАВ обычно в 100 раз меньше, чем ККМ ионогенных детергентов, содержащих сравнимые по величине гидрофобные группы. Поэтому масса мицелл неионных детергентов существенно больше, чем масса мицелл ионогенных ПАВ. Анионные детергенты обычно содержат длинную углеводородную цепь и карбоксилатную, сульфатную или сульфонатную группу. В качестве противоионов выступают натрий, калий, литий или водород. Длинноцепочечные четвертичные амины или пиридипы с бромид-, хлорид- или иодид-ионом в качестве противоиона образуют группу катионных ПАВ. Степень нейтрализации заряда противоионами в слое Штерна у катионных мицелл несколько меньше (это связано с некоторым экранированием заряда четвертичной аммониевой группы), поэтому их структура более компактна по сравнению с анионными мицеллами. Катионные мицеллы обладают несколько большей солюбилизующей способностью в отношении неполярных субстратов, чем анионные мицеллы, образованные ПАВ того же молекулярного веса. Амфотерные мицеллы образованы цвиттер-ионными молекулами, у которых тип диссоциации определяется pH раствора [45, 46]. Природные фосфатиды и липиды, такие, как лецитин и соли желчных кислот, также образуют мицеллы и определяют многие важные биологические функции in vivo и in vitro [20, 47—51]. [c.228]

ГЛИЦЕРИДЫ — сложные эфиры глицерина по числу кислотных остатков в молекуле делятся на MOHO-, ди- и триглицериды по числу различных кислотных остатков — на одно- (все кислотные остатки одинаковые), дву- и трехкислотные Г. (кислотные остатки разные). Изомерия Г. связана с расположением кислотных остатков. Среди Г. неорганич. кислот большое значение имеет триглицерид азотной к-ты, неправильно называемый нитроглицерином. Г. высших и нек-рых низших жирных к-т широко распространены в природе, т. к. являются основной составной частью липидов, к-рые служат источником получения индивидуальных Г. Фпзич. и химич. свойства последних очень сходны, поэтому выделение их в чистом виде весьма сложно оно достигается ректификацией, дробной пизкотемп-рной (до —75°) кристаллизацией из растворите.яей (ацетон, метанол, эфир и т. д.), через соединения включения (комплексы) с мочевиной, противоточным распределением, различными видами хро.матографии и т. д. Таким путем удастся получить несколько фракций Г., различающихся размерами кислотных остатков или числом кратных связей в них. Эти фракции вновь подвергают разделению, получая в конце концов чистые Г. [c.485]

Для выделения индивидуальных цереброзидов непосредственно из сложной смеси липидов были предложены различные методы, основанные на двумерной ТСХ [6]. Хорощие результаты дает также [14] одномерная тех на силикагеле Н. Водную суспензию 40 г силикагеля Н в 100 мл воды наносят на стеклянные пластинки размером 20x20 см так, чтобы образовался слой толщиной 0,5 мм. Пластинку активируют в сушильном шкафу при ПО—115°С в течение 1 ч. На каждую пластинку наносят раствор липида (- -25 мг) в смеси хлороформ — метанол (9 1 по объему) и проявляют в системе растворителей хлороформ — метанол — уксусная кислота — вода (80 13 8 0,3 по объему), в которой хорошо разделяются церазин и френозин. Полосы обнаруживают, выдерживая короткое время пластинку в парах иода. Положение полос отмечают и удаляют иод при слабом нагревании. Полосы соскребают с пластинки, адсорбированные соединения элюируют смесью хлороформ — метанол— вода (20 10 1 по объему) и элюат упаривают. Остаток экстрагируют смесью хлороформ — метанол (9 1 по объему). Раствор фильтруют, чтобы удалить небольшую примесь силикагеля, и прозрачный фильтрат упаривают в вакууме. Остаток представляет собой белый порошок. [c.346]

Жиры, котор1э1е мы. едим — это не индивидуальные химические соединения, а сложные смеси липидов, воды, минеральных солей и витаминов. [c.46]

Меньше внимания уделялось поведению в воде нерастворимых неполярных веществ или частично растворимых соединений, молекулы которых обладают как полярными, так и неполярными свойствами (амфифильные молекулы). Благодаря своей структуре амфифильные молекулы специфически ориентируются в водной среде и, следовательно, образуют упорядоченные структуры. Именно такие химические компоненты сыграли особую роль в возникновении, организации и развитии протобиополимеров на неорганической Земле в процессе их самосборки в индивидуальные субструктуры (мицеллы, монослои, бислои, биологические липиды и т. д.). [c.23]

С другой стороны, вследствие разных условий сохранения и разной устойчивости органического вещества, главным образом против окисления, происходит неполное разложение их до Н2О и СО2. Так, известно сохранение белков, аминокислот, пектиновых веществ в палеозойских осадочных породах возрастом сотен миллионов лет (АЬе1боп, 1955 Виноградов, Бойченко, 1943). Организмы и в процессе своей жизнедеятельности, и после гибели в осадках оставляют разнообразные органические вещества, часть которых в виде тех или иных органических соединений поступает в почвы, реки, моря и действует на горные породьг, осадки, взвеси и т. дТ Таким образом создаются месторождения разнообразных углей, нефтей, сапропелей, горючих сланцев, гуано, янтаря, селитры й множество индивидуальных органических соединений, продуктов распада организмов — органических кислот, углеводов, белков, аминокислот, липидов, пигментов, ферментов, а также различных углеводородов, фенолов и других более сложных циклических соединений. [c.5]