Справочник химика 21

Химия и химическая технология

Статьи Рисунки Таблицы О сайте English

Денатурация как антигены II III

    Выделение, очистку и концентрирование антигенных токсинов проводят обычными химическими методами. В этих процессах нельзя допустить денатурацию специфического белка (антигена). Чаще всего токсины высаливают растворами нейтральных солей или осаждают спиртом или ацетоном. [c.126]

    Внешние проявления денатурации сводятся к потере растворимости, особенно в изоэлектрической точке, повышению вязкости белковых растворов, увеличению количества свободных функциональных 8Н-групп и изменению характера рассеивания рентгеновских лучей. Наиболее характерным признаком денатурации является резкое снижение или полная потеря белком его биологической активности (каталитической, антигенной или гормональной). При денатурации белка, вызванной 8М мочевиной или другим агентом, разрушаются в основном нековалентные связи (в частности, гидрофобные взаимодействия и водородные связи). Дисульфидные связи в присутствии восстанавливающего агента меркаптоэтанола разрываются, в то время как пептидные связи самого остова полипептидной цепи не затрагиваются. В этих условиях развертываются глобулы нативных белковых молекул и образуются случайные и беспорядочные структуры (рис. 1.12). [c.47]


    О белковой природе ферментов свидетельствует факт инактивирования (потеря активности) ферментов брожения при кипячении, установленный еще Л. Пастером. При кипячении наступает необратимая денатурация белка-фермента. Фермент при этом теряет присущее ему свойство катализировать химическую реакцию. Точно так же белки при кипячении денатурируются и теряют свои биологические свойства (антигенные, гормональные, каталитические). Под влиянием различных физических и химических факторов (воздействие УФ- и рентгеновского излучения, ультразвука, осаждение минеральными кислотами, щелочами, алкалоидными реактивами, солями тяжелых металлов и др.) происходит денатурация ферментов, так же как и белков. [c.118]

    Под влиянием кислот инсулин претерпевает денатурацию, но основания регенерируют исходную физиологически активную форму. Агенты, разрывающие связи 8—8 необратимо денатурируют инсулин. Инсулин образует соединения с двухвалентными металлами из поджелудочной железы выделяют, как правило, хорошо кристаллизующееся соединение с цинком. Инсулин переваривается пепсином и химотрипсином и незначительно атакуется трипсином. Инсулин не проявляет антигенных свойств при впрыскивании животным, относящимся к другим родам, чем тот, из которого он был выделен. Как уже отмечалось инсулин быка, овцы и лошади различаются между собой последовательностью трех аминокислот определенного участка молекулы. Однако эти аминокислоты не имеют значения для физиологической активности гормона поэтому инсулин, выделенный из животных, может служить лекарственным препаратом для человека. [c.447]

    Белки являются специфическими антигенами антитела, образующиеся при впрыскивании чужеродного белка, дают осадки только с этим белком. Так, например, гемоглобин человека производит в сыворотке кролика антитело, осаждающееся гемоглобином человека, но не осаждающееся гемоглобином быка. Только в случае родственных животных родов антитела не дифференцируются белки сыворотки лошади производят в сыворотке кролика антитело, осаждающееся также белками сыворотки осла. С другой стороны, миоглобин быка обусловливает образование антитела, не осаждающегося гемоглобином того же животного ввиду того что оба вещества содержат гем, разумеется, что специфичность обусловлена не последним, а белковым участком молекулы. Белки теряют антигенные свойства в результате денатурации или частичного гидролиза протеолитическими ферментами. Желатина не обладает антигенными свойствами, потому что ее молекулы сильно расщеплены, а у инсулина, по-видимому, отсутствие антигенных свойств обусловлено слишком малым размером его молекул. [c.448]


    Наконец, при денатурации происходит утрата белками биологической активности. Воздействие денатурирующих агентов приводит к инактивации ферментов, гормонов и вирусов. Эта потеря специфических биологических свойств считается важным критерием денатурации. Однако имеется и ряд исключений. Например, активность инсулина сохраняется при денатурации мочевиной, в растворах которой сохраняют свою активность также трипсин, папаин и пепсин рибонуклеаза и лизоцим обладают тепловой устойчивостью, и их активность слабо изменяется при кипячении в разбавленной кислоте. Наряду с потерей ферментативной активности наблюдается и изменение иммунологических свойств. Как известно, иммунологическая активность белков характеризуется двумя показателями — антигенностью, т. е. способностью возбуждать образование антител, и специфичностью. Исследование этих показателей привело к выводу, что при денатурации ряда белков происходит понижение антигенности, но сохраняется иммунологическая специфичность. [c.191]

    Антигенные свойства белков исчезают после расщепления белков протеолитическими ферментами. В результате денатурации может происходить либо изменение, либо частичная потеря первоначальных антигенных свойств нативного белка. Так, например, антитела против нативного яичного альбумина весьма слабо реагируют с денатурированным яичным альбумином [14]. Иммунизация же денатурированным яичным альбумином приводит к образованию антител, специфически реагирующих только с денатурированным белком [15]. Надо, однако, отметить, что каких-либо заметных различий в антигенной активности нативного и [c.332]

    В ряде случаев после денатурации имеет место снижение чувствительности иммунологических реакций, может происходить изме-неипе антигенной или антительной специфичности белков. [c.211]

    Биохнмич. эффекты высоких Д. При Д в неск. сотен МПа происходит денатурация белков, при этом меняются их антигенные св-ва, снижается активность токсинов. Особенно чувствительны к Д. процессы образования связей белок-лиганд и белок-белок. Так, для белков характерно значив уменьшение скорости ассоциации с повышением Д. (AV положительны и могут исчисляться сотнями см /моль). Денатурирующее влияние Д. зависит от природы белка, т-ры и pH среды. Напр., овальбумин необратимо коагулирует при 800 МПа, тогда как р-ры альбумина не претерпевают изменений даже при 1,9 ГПа. Д. может препятствовать тепловой денатурации белка и даже вызывать ренатурацию белка, де- [c.621]

    Лучшим осадителем служит полиэтиленгликоль (ПЭГ). Его действйе подобно действию соли, отбирающей воду из структуры IgG и вызывающей ее денатурацию, в результате чего и происходит осаждение из раствора, но ПЭГ обеспечивает лучший контроль над системой. Метод широко используют в определениях ряда гормонов и стероидов различного типа, в ситуациях, когда гаптеновый антиген остается в растворе в условиях осаждения белка. [c.577]

    Макромолекулы, такие, как белки, полисахариды и нуклеиновые кислоты, внутри своих индивидуальных групп отличаются по физико-химическим свойствам лишь незначительно поэтому их выделение, основанное на различиях в этих свойствах, например, с помошью ионообменной хроматографии, гель-фильтрации или электрофореза сопряжено с известными трудностями и требует много времени. Вследствие этого в ходе выделения существенно падает их активность из-за денатурации, расщепления, ферментативного гидролиза и т. п. Одним из наиболее характерных свойств этих биологических макромолекул является их способность обратимо связывать другие вещества. Например, ферменты образуют комплексы с субстратами или ингибиторами, антитела— с антигенами (против которых получены), а нуклеиновые кислоты, такие, как информационная РНК, гибридизуются с комплементарными ДНК и т. д. Образование специфических диссоциирующих комплексов биологических макромолекул служит основой метода их очистки, известного как аффинная хроматография. [c.9]

    Выполнить эти условия трудно, так как, во-первых, химические аллергены, как иравило, в той или иной м е обладают денатурирующим белок действием. Поскольку по методике интенсивность денатурации белка под действием химического соединения не учитывается, а требуется лишь путем разведения аллергена уравнять степень ее по отношению к контрольному антигену, замена хотя бы одного аллергена другим триводит к изменению рабочих концентраций специфического или контрольного антигена. Во-вторых, объем сульфата аммония, добавляемого в контрольные пробы, будет зависеть от влияния коллоидного состояния и характера протеино-граммы контрольных и испытуемых сывороток. Все эти моменты не позволяют разработать стандартные условия реакций и, по-видимому, явились причиной отсутствия в публикациях данных о рабочих концентрациях. [c.248]

    Установлено, что на поверхности антитела имеются чаш е всего две чрезвычайно специфические группы — активные центры, жадно соединяющиеся с некоторыми группами на поверхности антигенных белков. Специфичность соединения антитела с антигеном, т. е. бе.ттком, к которому выработаны антитела, очень велика. Антигеном может служить почти каждый белок организма чуждого вида. Антигенами служат белки, составляющие поверхностную оболочку бактерий или вирусов. В последнее время показано, что антигеном может явиться ДПК, подвергнутая тепловой денатурации,некоторые синтетические полипептиды, содержащие основные аминокислоты, в особенности гистидин. Однако в последних случаях нет уверенности, что ДПК или полипептид не соединяются предварительно с одним из белков крови животного, подвергнутого иммунизации, и уже в таком виде становятся антигенами. [c.501]


    Необратимое свертывание белка яиц при нагревании — явление хорошо известное. Подобное изменение в состоянии указанного белка может быть вызвано и действием ряда других физических и химических агентов сильным встряхиванием, облучением ультрафиолетовыми лучами, действием ультразвуковых волн, кислот, щелочей, органических растворителей, солей тяжелых металлов, мочевины, гуанидина, салицилатов и многих других веществ. При всех этих воздействиях белок теряет свою первоначальную растворимость и в большинстве случаев становится нерастворимым при изоэлектрической точке. В отличие от других белков коллаген при нагревании в воде растворяется. Измененные под влиянием всех указанных воздействий нативные белки получили название денатурированных белков. часто сопровождается потерей биологической активности белков. Так, например, ферменты теряют свою каталитическую активность, гормоны — физиологическую функцию, антитела — способность соединяться с антигеном. Эти изменения не всегда протекают параллельно изменениям физико-химических свойств белков. Денатурация, очевидно, представляет собой комплексное явление. Вряд ли можно думать, что действие столь различных соединений, как мочевина и серная кислота, а также влияние нагревания обусловливают одно и то же изменение белков. Нельзя поэтому просто говорить о денатурации белков, например яичного альбумина необходимо всегда указывать, какой именно агент вызвал денатурацию. [c.147]

    Инсулин довольно устойчив к действию денатурирующих агентов и не денатурируется органическими растворителями и разведенными кислотами денатурация не наступает также и при образовании мономолекулярных слоев [45]. Если инсулин нагревать в слабокислом растворе, то образуются неактивные фибриллы, которые затем вторично агрегируются в нерастворимые, имеющие форму шара образования [46]. Интересно отметить, что этот процесс обратим и что инсулин реактивируется при воздействии щелочей [46]. Инсулин не обладает антигенными свойствами и видовой специфичностью [47]. [c.317]

    Хотя большинство методов получения линополисахаридов предполагает их частичную денатурацию, если полисахаридный компонент (соматический 0-антиген) удается выделить совместно с липидом А, метод признается годным. Впервые липополисахариды были выделены нз грамотрицательпых бактерий в 1933 г. экстракцией трихлоруксусной кислотой [1]. Другие препаративные методы включают экстракцию ди- [c.127]

    Согласно Сполдингу и Меткафу, метод хроматографии на бумаге можно применять для определеиия антиг(>пов. Окрашенный антиген наносят на линию старта и обрабатывают антителом. В том случае, когда происходит реакция, аптиген с антителом остаются на линии старта. Подобный принцип был использован в раз,яичных работах в области капиллярного анализа. Условие успешного проведения анализа заключается в пред-отвраш,епии денатурации белка на линии старта носле нанесения и сушки. Сполдинг и Меткаф рекомендуют для этоГ цели наносить белки в присутствии сахарозы. [c.505]

    Реакция антиген — антитело не происходит, если взаимодействующие белки подвергнуты денатурации. Поэтому можно считать, что взаимодействие между ними зависит от точной комплемептарности молекулярных поверхностей двух нативных белков. Эффективный метод исследования специфичности таких взаимодействий был разработан Ланд-штейнером, который получал антигены путем спаривания белков с многочисленными диазотированными производными анилина. Он обнаружил, что специфичность антител, создаваемая такими сопряженными антигенами, определяется в основном заместителями (гаптенами). Так как антитело будет также взаимодействовать с гаптенами, присоединенными к малым молекулам, равновесие при ассоциации может быть определено при диализе [1007]. Типичные данные такого рода были получены Карушем [1099], который изучал антитела к сопряженному белку, несущему D-изомер гаптеновой группы [c.340]

    Нарушение белкового обмена клеток, по Мег1еуе(1е (1956), при интоксикации бензолом может привести к денатурации белка и проявлению антигенных свойств лейкоцитов. [c.149]

    Иммунологические опыты показывают, что препараты аскислого гликопротеипа, полученные из человеческой плазмы по методам Веймера и сотр. ]20], Шмида [18, 19] и Шультце и сотр. [34], иммунологически идентичны [68]. Так же была обнаружена идентичность препаратов а -кислого гликопротеипа из плазмы и из мочи [23]. Антигенные свойства, по-видимому, не связаны с углеводной частью молекулы гликопротеина, так как при окислении перйодатом (см. раздел 6, б, 3) разрушаются остатки галактозы и сиаловой кислоты, но не удаляется антигенный участок [52]. Антигенные и видоспецифические свойства не изменяются при денатурации нагреванием. [c.76]

    Выделение гибридных белков, содержащих -галактозида-зу, было детально описано в предыдущей главе. Для иммунизации мышей требуются относительно небольшие количества антигена, поэтому его можно наработать любым методом. Хотя белковый материал, полученный в результате препаративного ДСН-электрофореза в ПААГ, не всегда обладает такими имму-ногенными свойствами, которые присущи большинству нативных препаратов, он имеет то преимущество, что вызываемый им иммунный ответ обусловлен устойчивыми к денатурации эпитопами. Используемый нами метод выделения нерастворимых гибридных белков приведен в табл. 6.4. Моноклональные антитела к таким эпитопам часто удается с успехом использовать в последующем детальном иммунохимическом анализе белковых антигенов. Наличие абсолютно чистого иммуногена не требует- [c.180]

    Особо следует рассмотреть вопрос о специфичности антител, образующихся при иммунизации денатурированными белками. Они взаимодействуют только с денатурированным белком, причем антитела к одному из денатурированных белков взаимодействуют с другим денатурированным белком. Это наблюдается и в том случае, когда изучаемые белки в нативном виде не имеют антигенного родства. Здесь надо иметь в виду, что, утратив определенную конформацию вследствие денатурации, белок приобретает некоторую другую конформацию, чаще всего хаотического клубка (random oil), которая допускает возникновение у разных белков статистически вероятных пространственных структур, мало зависящих от их первичной структуры. Скорее всего именно благодаря этим структурам возникает антигенное родство различных денатурированных белков. [c.32]

    На нерастворимом носителе (сефароза, целлюлоза) могут быть иммобилизованы антитела, так что с помощью такого сорбента можно извлечь из смеси антигенов определенный антиген. Ковалентное связывание антител с носителе.м производят по возможности в мягких условиях, чт )бы исключить их денатурацию. В связи с необходимостью фиксировать большие количества белка для приготовления иммуносорбеита крайне редко используют очищенные антитела. Обычно используют выделенные из антисыворотки иммуноглобулины. [c.242]

    Для того чтобы вызвать диссоциацию комплекса антиген —. антитело, необходимо частично денатурировать антитела. Однако полной денатурации, которая достигается обработкой 8М. гуанидин-НС1 или кипячением в ДСН, обычно не требуется. Это и хорошо, поскольку всегда желательно, чтобы после элюирования и антиген, и антитела восстановили свою нативную конформацию. Чаще всего элюция в диссоциируюших условиях используется при выделении антител, связавшихся с иммобилизованным антигеном. Как правило, используют следующее  [c.178]

    Сильноионные детергенты (например, ДСН). Додецилсульфат натрия редко применяется в аффинной хроматографии, поскольку он связывается со всеми участками белка и вызывает сильную денатурацию. Однако некоторые антигенные детер- [c.185]

    С помощью одних и тех же антисывороток перекрестный ИЭФ позволяет выявить большее число антигенов, чем простой ИЭФ. Дополнительное преимущество — это возможность очистки антигенов. Наибольшая ценность перекрестного ИЭФ заключается в том, что он позволяет определять специфичность антител в неденатурирующих антигены условиях. В то же время электрофорез в полиакриламидном геле в присутствии ДСН с последующим Вестерн-блоттингом и иммунохимиче-ским окрашиванием хотя и обладает очень высокой чувствительностью, однако позволяет обнаружить только те антигенные эпитопы, которые не изменяются после денатурации. [c.228]

    Для медицинского применения декстран-ферментных конъюгатов важно не только сохранение ферментативной активности, но также и время циркуляции в кровяном русле после внутривенного введения, снижение антигенности, повышение устойчивости к тепловой денатурации и к расщеплению протеазами. Как уже отмечалось, полимерная оболочка конъюгата, расположенная на периферии белковой глобулы, экранирует антигенные детерминанты белка. В результате удается избежать как индукции биосинтеза антител по отношению к белковой части конъюгата (т. е. иммуногенности), так и взаимодействия конъю- [c.177]

    Иммунологические исследования показали наличие в молекуле коллагена трех различных групп антигенных детерминант 1) терминальных, находящихся в телопептидах, 2) спиральных, локализующихся на поверхности молекул, и 3) центральных, находящихся в а-цепях и освобождающихся при частичной или полной денатурации коллагена, т. е, при распаде трехспиральной спирали на отдельные цепи [Timpl R,, 1976]. [c.87]

    Заключительная стадия — элюция с колонки — часто оказывается камнем преткновения для всего процесса. Взаимодействия между антигеном и антителом характеризуются константами диссоциации порядка 10 —10 М. Подставив эти значения как величины Кр в уравнение (4.5), мы получим значение а, близкое к единице. Ослабить специфические взаимодействия не просто. Хотя иммуноглобулины — весьма прочные молекулы и могут выдержать достаточно жесткие условия, необходимые, чтобы разрушить специфические взаимодействия, это не обязательно справедливо в отношении вытесняемого фермента. Так, при pH 2—3 антиген будет вытеснен, а оставшиеся на колонке антитела сохранят свою активность, так что колонку можно будет снова использовать однако весьма вероятно, что при pH 3 фермент будет разрушен. Сходные последствия обычно наблюдаются при использовании высоких концентраций мочевины и органических растворителей с целью соответственно уменьшить число водородных связей и ослабить гидрофобные взаимодействия. Применение высоких концентраций солей может быть успешным, если наблюдаются преимущественно электростатические взаимодействия, но в этих условиях усиливаются гидрофобные связи. Хаотропные соли, такие, как тиоцианат или иодид, бромид лития, хлористый магний и так называемые деформирующие буферы, например имидазолцитрат, дают довольно хорошие результаты, но опять-таки необходимые концентрации этих веществ могут вызывать денатурацию десорбированного фермента. Была описана методика быстрой элюции денатури-)ующим агентом, позволяющая получить активный антиген 102]. Эта методика заключается в том, что адсорбент помещают в верхнюю часть обессоливающей колонки, и поэтому, как только фермент покидает слой адсорбента, он сразу же отделяется от элюирующего агента (рис. 4.49). При малых количествах белка контакт с элюирующим агентом не превышает 1 мин, и за это время может произойти лишь незначительная денатурация белка. [c.175]

    После получения антитела проводят реакцию антиген — антитело путем смешивания этих двух веществ в буфере и инкубирова ния до тех пор, пока реакция не пройдет полностью. Буфер обычно обладает нейтральным pH и является изотоническим для пре-дотвращения денатурации белкового антитела, хотя допускается колебание значений pH в пределах 2 единицы, а для ионной силы возможен фактор 2. [c.249]

    Тепловой инактивации мелких сферических вирусов присущи песколько иные особенности. Так, для вируса кустистой карликовости томатов и вируса некроза табака значение для тепловой инактивации невелико, так что имеется довольно широкий интервал температур, в пределах которых наступает частичная потеря инфекционности. Для таких вирусов потеря инфекционности ие связана непосредственно с денатурацией вирусного белка. Можно получить препараты, полностью утративпше инфекционность, однако при этом они неотличимы от инфекционных препаратов по своей антигенной специфичности, способности кристаллизоваться и другим свойствам [94]. [c.316]

    Антигены МНС выполняют в оргризме разнообразные функции, в частности определяют образование конвертаз и, следовательно, активацию. комплемента (антигены класса III) индуцируют процессы пролиферации ш дифференциации кл<еток служат объектом распознавания и отторжения трансплантатов входят в состав рецепторов тимоцитов, гормональных рецепторов (антигены класса I). Наиболее значимым является то, что антигены МНС класса I и II определяют способность иммунной системы организма распознавать чужеродные антигены. Суть этого явления состоит в том, что микроорганизмы, продукты их распада или жизнедеятельности, другие нативные (неизмененные) антигены Т-лимфоцитами не распознаются. Все они вначале подвергаются процессингу (переработке) в эндосомах клеток, где происходат частичная денатурация и протеолиз, как правило, до пептидов. Такой низ- комолекулярный процессированный антиген перемещается на поверхность клетки, связывается с находящимися здесь молекулами МНС класса I и П и становится доступным для восприятия Т-лимфоцитами. При этом надо подчеркнуть, что комплексы антигенов с молекулами МНС класса I распознаются цитотоксическими Т-лимфоцитами, которые осуществляют разрушение злокачественно перерожденных или инфицированных вирусом клеток, а комплексы антигенов с молекулами МНС класса II, образующиеся в основном на В-лимфоцитах и макрофагах, —Т-хелперами, которые как посредники передают сигнал и включают В- и Т-клетки в ангителообразование или другие эффвкторные процессы. [c.25]


Смотреть страницы где упоминается термин Денатурация как антигены II III: [c.68]    [c.75]    [c.238]    [c.116]    [c.1060]    [c.238]    [c.383]    [c.54]    [c.619]    [c.619]    [c.320]    [c.340]    [c.32]    [c.242]    [c.353]    [c.354]    [c.199]    [c.86]    [c.326]   
Биология Том3 Изд3 (2004) -- [ c.98 ]




ПОИСК





Смотрите так же термины и статьи:

Антигенность

Антигены

Денатурация



© 2025 chem21.info Реклама на сайте