Электрофоретические методы очистки

В производстве резины, где требуется выделять полужидкие частицы каучука из латекса, латекс подвергают электрофорезу анодом служит движущееся металлическое полотно, на котором осаждаются частицы латекса и выносятся на этом полотне из ванны. При производстве прорезиненных тканей ленту ткани пропускают вблизи неподвижного анода частицы латекса передвигаясь к аноду, удерживаются на ткани. Для гуммирования металлических деталей аппаратов с антикоррозионными целями деталь погружают в латекс каучука, делая ее анодом. После образования на детали каучуковой пленки ее вулканизируют. Широко распространен электрофоретический метод нанесения тонких слоев изолирующего покрытия из суспензии алунда (плавленного корунда) на подогреватели электронных ламп или карбонатов щелочноземельных металлов на катоды этих ламп. Комбинацией электролиза и электрофореза достигается довольно высокая степень очистки воды. Очищаемая вода проходит последовательно ряд ячеек, каждая из которых разделена двумя пористыми диафрагмами на три пространства анодное, среднее и катодное. Под действием электролиза ионы примесей электролитов свободно проходят сквозь поры диафрагмы, концентрируясь в электродных пространствах, откуда вымываются промывными водами. Твердые коллоидные частицы примесей при своем передвижении к электроду удерживаются поверхностью диафрагм. [c.33]

Возможность использования в процессах очистки воды электрокинетических явлений пока еще недостаточно изучена. Электрофоретический метод, обычно используемый для определения знака заряда и величины -потенциала содержащихся в воде взвешенных частиц, может, вероятно, найти применение также и для разделения взвесей. [c.103]

Технико-экономические расчеты показали, что капитальные затраты на установку электрофоретической очистки окрашенных вод производительностью 100 м в сутки составляет 25—40% от стоимости других типов водоочистных станций. Стоимость электрофоретической очистки воды на 20—40% ниже стоимости очистки другими методами, при полном устранении трудоемких работ по приготовлению и дозированию реагентов или регенерации медленных фильтров. Следует отметить, что сравнение электрофоретического метода очистки с безреагентными схемами, включающими медленные фильтры, условно, поскольку последние не могут обеспечить снижения цветности воды до требований ГОСТ. [c.211]

В заключение следует сказать несколько слов о разрушении эмульсий. К расслоению системы приводит часто механическое воздействие. Используют методы вытеснения эмульгатора веществом, обладающим большей поверхностной активностью, но меньшей способностью к образованию структурированных слоев, а также все способы, применяемые для коагуляции — увеличение концентрации электролита, дегидратация, вымораживание, электрофоретическое выделение дисперсной фазы. Задача разрушения эмульсий приобретает в настоящее время особую важность в связи с проблемой очистки сточных вод. [c.291]

Другие методы, сгруппированные под общим названием электрофоретические методы , распространены не столь широко по причинам, которые будут рассмотрены в разд. 5.2 и 5.3. Третий, мало используемый прием разделения веществ в растворе— фазовое распределение, — при котором белки могут перемещаться из одной жидкой фазы в другую, описан в разд. 5.4. В качестве общего метода разделение веществ в растворе играет важную роль как в научных исследованиях, так и в промышленной очистке ферментов и других белков. [c.197]

Протеолитические ферменты катализируют ограниченное расщепление, в результате которого образуются с хорошим выходом относительно крупные фрагменты. Поскольку каждый пептид должен быть выделен в чистом виде, что обычно осуществляется с помощью хроматографических и электрофоретических методов (гл. 5), то чем меньше число фрагментов, тем проще проблема их очистки. [c.179]

Электрофоретический метод отличается простотой выполнения и избирательностью. Это единственный из известных методов оценки активности рестриктаз, в результате применения которого имеется возможность судить о характере расщепления субстрата — каждая специфическая эндонуклеаза генерирует уникальный набор фрагментов ДНК субстрата, который после проведения электрофоретического их разделения дает определенный, характерный для этого фермента набор зон в геле. Рассмотрение таких картин позволяет судить не только о наличии рестриктазы в исследуемом растворе, но отчасти и об ее активности и субстратной специфичности. Последнее свойство обсуждаемого метода оказывается очень важным в тех случаях, когда в фракционируемой смеси содержится более чем одна рестриктаза. Кроме того, снижение интенсивности и четкости зон ДНК позволяет судить о наличии в фракциях неспецифических нуклеаз. Однако, электрофоретический метод наряду с отмеченными достоинствами имеет существенный недостаток, выражающийся в том, что количественное определение активности исследуемых ферментов проводится путем оценки перехода неполное расщепление—полное расщепление субстрата. Для того, чтобы идентифицировать этот переход, необходимо проводить обработку субстрата различными количествами фермента, что значительно увеличивает число анализируемых проб. Если учесть, что в ходе хроматографической очистки такой оценке подлежат многие десятки фракций, трудоемкость количественного определения активности рестриктаз электрофоретическим методом в таких опытах становится очевидной. Однако использование именно этого метода оправдывает себя в случае определения активности конечного препарата, предназначенного для применения в качестве аналитического реагента. В этом случае необходимо знать количество фермента, обеспечивающее исчерпывающее специфическое фрагментирование [c.127]

Электрофорез используется для выделения и разделения ферментов на конечных стадиях очистки, а также для препаративных и аналитических целей. Для препаративного выделения и очистки ферментов проводят зонный электрофорез па бумаге и в блоках или на колонках с различными наполнителями (целлюлозным порошком, крахмалом и другими), а также электрофорез в гелях — агар-агаровом, крахмальном, полиакриламидном. Электрофорез в гелях отличается от электрофореза на порошкообразных или пористых носителях. Здесь сочетаются два метода разделения ферментов — электрофоретический и метод, основанный на гель-фильтрации. Фракционирование ферментов на основе различной электрофоретической подвижности оказывается одним из самых эффективных методов. [c.201]

Электрофорез применяют для очистки различных фармацевтических препаратов. В Фармакопее СССР (изд. 10) предусмотрено установление степени чистоты по электрофоретической однородности ряда антибиотиков, витаминов и других веществ. Электрофорез (ионофорез) является одним из методов введения лечебных препаратов в организм человека. Широкое применение как аналитический и препаративный метод разделения и выделения различных лекарственных веществ и биологически активных соединений нашел электрофорез на бумаге, а также в агаровом или крахмальном геле. Эти методы применяют также при диагностике ряда заболеваний путем сравнения фракционного состава (по числу и интенсивности зон на электрофореграмме) нормальных и патологических биологических жидкостей. [c.408]

ЭЛЕКТРОФОРЕТИЧЕСКИЕ И ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ РАЗДЕЛЕНИЯ И ОЧИСТКИ БЕЛКОВ И ДРУГИХ БИОЛОГИЧЕСКИХ ВЕЩЕСТВ [c.121]

Разновидность электрофореза — изоэлектрическое фокусирование. Метод основан на электрофоретическом разделении смеси белков в градиенте pH с достижением изоэлектрической точки (ИЭТ) каждого белка и его фокусированием в отдельной зоне и применяется для быстрого и эффективного фракционирования больших количеств (несколько граммов) образца на начальных стадиях его очистки. [c.222]

На конечных стадиях очистки ферментов часто используется электрофорез. Это — физический метод, в основе которого лежит различная скорость движения отдельных белков в электрическом поле, определяемая величиной свободного заряда их молекул. Так как количественные соотношения положительно и отрицательно заряженных групп в белках неодинаковы, то различия в их свободном (суммарном) заряде могут служить основой для электрофоретического разделения белковых смесей. Когда белок находится в изоэлектрическом состоянии, т. е. его суммарный отрицательный заряд равен положительному, то в электрическом поле он неподвижен. При различных pH среды он может двигаться либо к аноду, либо к катоду, причем с неодинаковой скоростью. [c.154]

О гомогенности ферментов после их очистки судят на основании сопоставления результатов, полученных несколькими методами. К ним относятся ультрацентрифугирование, электрофорез и определение растворимости белка. Наиболее чувствительным способом исследования степени гомогенности ферментов и других белков является сочетание электрофоретического разделения с иммуноэлектрофорезом на агаре. [c.128]

Эмалирование методом электрофореза. Принципиальная схема процесса электрофоретического эмалирования показана на рис. 11.10. Проволока поступает через устройство для ее предварительной очистки в узел нанесения 7. Обычно проволока служит анодом. При выходе проволоки из узла нанесения с нее удаляется скупочный слой специальным устройством (на рисунке не показано), затем она поступает в печь 10 на термообработку. На этой стадии покрытие состоит приблизительно на 70—90% из полимера, остальное — вода. На качество получаемого покрытия в значительной степени оказывают влияние побочные процессы, проходящие в узле нанесения параллельно с осаждением полимера. Прежде [c.139]

Приготовление пробы. Обычно препаративный электрофорез в полиакриламидном геле не используют в качестве одного из начальных этапов в очистке белков и нуклеиновых кислот. Для предварительного грубого фракционирования компонентов омесей применяют методы хроматографии, высаливания или осаждения. Чтобы провести электрофоретическое разделение, пробу необходимо сконцентрировать до 5 мл для однородной системы и до 10—20 мл для неоднородной. От избытка солей можно избавиться при помощи диализа или гель-фильтрации. Концентрация солей в исследуемом растворе должна быть такой же, как в буфере концентрирующего геля. Если же этот гель не попользуется, то пробу диализуют против буфера разделяющего геля, разведенного в 5 раз. Медленное вхождение пробы в гель во время электрофореза свидетельствует о слишком высокой концентрации солей. Любой осадок, присутствующий в пробе, следует удалять центрифугированием или фильтрованием через миллипоровый фильтр, так как он может закупорить разделяющий гель. [c.117]

Гель-хроматография — простой, но чрезвычайно эффективный метод, позволяющий определять размеры молекул, а также фракционировать молекулы на основе различий в размерах. Молекула, которая не может проникать в поры молекулярного сита, движется быстрее вдоль колонки, чем молекула меньших размеров. Еще одним чрезвычайно полезным инструментом, применяемым для очистки и качественного анализа смесей макромолекул, служит электрофорез. Довольно трудно получить аналитическое выражение, связывающее наблюдаемую в опыте электрофоретическую подвижность с зарядом и формой молекулы. Однако в некоторых специальных случаях электрофорез лает количественную информацию. Пользуясь методом изоэлектрического фокусирования, находят pH изоэлектрических точек белков. А воспользовавшись электрофорезом в носителе, представляющем собой молекулярное сито, можно крайне просто определять молекулярную массу белков (в присутствии ДСН) или нуклеиновых кислот. [c.306]

Поскольку здесь рассматриьаются общие химические черты ферментативного катализа, мы в большинстве случаев будем избегать подобных осложнений и ограничимся, где это возможно, только простейшим типом мономерного фермента. Белок этого типа — обычно большая молекула, состоящая из одной полипептидной цепи, содержащей, возможно, несколько сот аминокислот и свободно существующая в растворе внутри клетки. Такой белок можно очистить до степени гомогенности (по нескольким различным критериям), используя хроматографические и электрофоретические методы, пригодные для разделения заряженных макромолекул в водной среде [5]. На этой стадии очистки при благоприятных условиях белок можно закристаллизовать. Многие ферменты, таким образом, становятся доступными в качестве вполне определенных органических соединений, удовлетворяющих обычным критериям чистоты, и они, естественно, могут быть синтезированы 6]. Они также могут быть получены в значительных количествах, i e хорошо изученные ферменты — например, трипсин, химотрипсин, лизоцим и рибонуклеаза — доступны в граммовых количествах. Значительное число других доступны коммерчески в миллиграммовых количествах. [c.450]

В настоящее время прогресс биологической и медрг-цинской наук в значительной мере обязан развитию хроматографических и электрофоретических методов разделения и очистки биополимеров. [c.121]

Однако в процессе дальнейших исследований, связанных с отработкой методов очистки токсина, особенно электрофоретического разделения, чрезвычайно сложного процедурного момента при очистке именно этого соединения, очень часто кончающегося полной инактивацией токсина, Марти и Капиндаль (Murthy, apindale, 1970), разработав свой способ выделения, получили [c.164]

В последние 10 лет в нескольких лабораториях были разработаны методы получения высокоочищенной карбоангидразы из эритроцитов [34—42]. Они заключаются в осаждении гемоглобина смесью хлороформ—этанол [37, 39, 42] с последующей хроматографией на колонке, заполненной ДЭАЭ-целлюлозой [34, 37, 42], ДЭАЭ-сефадексом [43] или гидроксилапатитом [37, 39, 42]. Белок хорошо переносит лиофилизацию, и в большинстве методов она используется на той или иной стадии выделения. Накопленный опыт препаративной работы выявил некоторые особенности методов очистки фермента. Обработка смесью хлороформ—этанол существенно не меняет большинство физико-химических свойств. Но, как показал рентгеноструктурный анализ, воздействие этой смеси на фермент С человека снижает качество кристаллов [22, 23]. Для удаления гемоглобина лучше использовать гель-фильтрацию [37] или хроматографию на ДЭАЭ-сефадексе [43]. Качество кристаллов повышается, если проводится электрофоретическая очистка фермента [23] и если не применяется лиофилизация [22, 23]. [c.562]

Апельцина Е. И. Исследование закономерностей очистки природных вод электрофоретическим методом//Автореф. дис.... канд. техн. наук. М. 1972. [c.305]

В табл. 2.2 представлены данные по очистке речной воды [8] электрофоретическим методом. В этих экепериментах применяли нитроцеллюлозные фильтры с пористостью меньше 1 мкм, напряженность электрического поля составляла 2500 В/м и скорость фильтрации 0,08 м/ч. [c.49]

Поскольку бромистый водород довольно плохо растворим в трифторуксусной кислоте, процесс отщепления проводят обычно, пропуская слабый ток безводного бромистого водорода в суспензию пептидил-полимера в трифторуксусной кислоте в течение 60— 90 мин. Отделение пептидов этим методом осуществляется превосходно. Так, при синтезе аналогов брадикинина выход очищенных пептидов составил 85% в расчете на первую аминокислоту, присоединенную к полимеру [128]. Выходы других пептидов колебались в пределах от 85 до 50%. Естественно, что выход снижается, если на какой-либо стадии реакция протекает неполно. Нельзя определять выход пептида после отщепления его от полимерного носителя по сухому весу неочищенного продукта, так как упомянутый реагент отщепляет от полимера также значительное количество непептидного материала, обычно нерастворимого в воде. Этим веществом непептидной природы, как правило, пренебрегают, поскольку его легко удалить любыми методами очистки. Хотя природа его подробно не исследована, можно предполагать, что это вещество представляет продукт разложения самого полимера. Было показано, что отщепление не вызывает перехода а-связи остатка аспарагиновой кислоты в ангиотензине в р-связь [65], хотя при получении одного пептида, содержащего связь остатка аспарагиновой кислоты с остатком серина, был получен в результате промежуточной циклизации р-аспарагиновый пептид [75]. Некоторые исследователи сомневаются в правильности и необходимости длительного отщепления. Почти все пептиды, которые можно отщепить от полимера, отделялись, в конечном счете, в первые несколько минут [30, 65] (см. стр. 88), а при отщеплении ангиотензина [65] в течение более 5 мин получали вещество, которое не расщеплялось лейцинаминопептидазой, хотя электрофоретически оно отличалось от р-аспарагинового пептида. Для отщеп- [c.34]

В процессе работы над книгой мы вскоре поняли, что критическая оценка преимуществ и недостатков отдельных методов принесет читателю больше пользы, чем простое перечисление лабораторных прописей. Тем не менее некоторые наиболее важные процедуры описаны весьма детально, что позволит легко воспроизвести их в экспериментальной работе. Для специальных же методик указаны лишь самые существенные моменты, а подробности читатель сможет найти в соответствующих оригинальных работах. В главах, посвященных методам выделения различных групп белков, нуклеиновых кислот и глпкоз-аминогликанов, мы стремились показать, что применение того или иного приема фракционирования обусловлено свойствами разделяемых макромолекул данного типа. Во многих случаях выбор электрофоретического метода зависит от способов выделения и очистки анализируемого образца а стадиях, предшествующих электрофорезу, так как именно эти стадии сущест- [c.8]

GGT из почек мыши. Чувствительный электрофоретический метод разделения смеси GGT-антител позволяет продемонстрировать сильное иммуновзаимодействие между GGT из почек мыши и антителами против GGT из почек крысы. Это подтверждает возможность использования иммобилизованных антител против GGT из почек крысы в качестве иммуноадсорбента для очистки GGT из почек мыши. Данные по очистке фермента из почек мыши суммированы в табл. 7. Подробная методика во многом аналогична описанной выше общей методике. После повторной хроматографии активность GGT увеличивается в 530 раз при суммарном выходе 35%. [c.160]

Резюмируя рассмотрение количественных методов определения активности рестриктаз, следует отметить, что они являются адекватными приемами для изучения кинетических параметров катализируемых этими ферментами реакций. Несомненно, что в аналогичных опытах они найдут применение и в будущем. Однако, их использование в таких экспериментах, как, например, очистка рестриктаз и изучение влияния условий культивирования на содержание целевых предметов в биомассе, является малопривлекательным. Это, кроме отмеченных выше ограничений, выражающихся в необходимости подбора в каждом конкретном случае подходящих субстратов, обуслов-ленно трудоемкостью приготовления таких субстратов (это замечание особенно касается радиоактивных субстратов) и анализа продуктов реакции. На всех этих этапах необходимо располагать уникальной аппаратурой и возможностью работать с изотопами. Хотя часть из обсуждаемых методов и была использована в единичных опытах по очистке рестриктаз [106, 163, 184, 254,], по вышеизложенным причинам они распространения не получили. Их трудоемкость является очевидной, а выигриш в точности определения в таких опытах по сравнению с электрофоретическим методом не окупает затрат. [c.129]

Как уже отмечалось (и это имеет принципиальное значение), электрофоретический метод позволяет в одном опыте, путем рассматривания гелей, дифференцировать специфическую и неспецифическую нуклеазные активности и наличие нескольких рестриктаз. Конечно, рассмотренные выше количественные методы после соответствующих их модификаций можно адаптировать и для решения таких задач. Однако, это еще более усложнило бы их применение. Поэтому в опытах по поиску продуцентов рестриктаз и в значительной мере в экспериментах по их очистке электрофоретический метод не имеет себе равных. [c.130]

На заключительном этапе выделения и очистки белков исследователя всегда интересует вопрос о гомогенности полученного белка. Нельзя оценивать гомогенность индивидуального белка только по одному какому-либо физико-химическому показателю. Для этого пользуются разными критериями. Из огромного числа хроматографических, электрофоретических, химических, радио- и иммунохимических, биологических и гравитационных методов наиболее достоверные результаты при определении гомогенности белка дают ультрацентрифугирование в градиенте плотности сахарозы или хлорида цезия, диск-электрофорез в полиакриламидном геле, изоэлектрическое фоьсусирование, иммунохимические методы и определение растворимости белка. Действительно, если при гель-электрофорезе белок движется в ввде одной узкой полосы и в этой зоне сосредоточена его биологическая активность (ферментативная, гормональная, токсическая [c.32]

В некоторых случаях, например когда в результате длительной очистки удается получить лишь очень малые количества материала ИЛИ при необходимости исследовать компоненты отдельных клеток, приходится прибегать к микроварианту электрофоретического разделения белков и нуклеиновых кислот. В то же время микроанализ в полиакриламидном геле сам по себе обладает рядом преимуществ. Так, более короткое время, затрачиваемое на проведение электрофореза, а также на окрашивание и обесцвечивание гелей, делает применение микроанализа целесообразньгм даже тогда, когда материала вполне достаточно для макроварианта. Микрометодика при наличии определенного опыта едва ли намного сложнее обычного диск-электрофореза, хотя требует такого специального оборудования, как микропипетки, микроманипулятор, лупа и микроденситометр. Читатели, интересующиеся деталями этого метода, могут обратиться к монографии Нейхоффа [915], в которой поми мо электрофореза освещены и другие виды работ с микроколичествами материала (гомогенизация, диализ, фотометрия, центрифугирование в капиллярах и т. д.). [c.107]

Наиболее серьезные ошибки в эксперименте возникают из-за использования авторами различных нестандартных способов приготовления и очистки (диализации) золей, методов физического и физико-химического анализа. В частности, степень агрегативной устойчивости золя Ре(ОН)з, часто являющегося объектом исследования при изучении механизма коагуляции, зависит от способа его приготовления [30]. Результаты определения ДП дисперсных частиц связаны со способом измерения их электрофоретической подвижности. [c.112]

Электрофоретически удаляют эмульгированную воду из сырой нефти. Так называемый метод электроочистки широко используют для удаления дыма из топочных газов и пыли из воздуха, например, в цементной промышленности. В этом случае воздух или газ, подлежащий очистке, пропускают через камеру — металлическую трубу, вдоль оси которой имеется металлический стержень, заряженный до высокого потенциала стенки несут противоположный заряд. Воздух, благодаря высокому напряжению, ионизируется. Ионы адсорбируются на поверхности частиц пыли и сообщают им заряд, противоположный заряду стенки камеры, на которой пыль и оседает. [c.207]

В создаваемом электрическом поле моющий раствор осветляется в результате целого ряда процессов, а именно электрофоретического переноса частиц загрязнений, электролиза солей, присутствующих в растворе, анодного растворения материала электродов и разложения воды с выделением газообразного водорода и кислорода. На аноде образуется хлопьевидный осадок, состоящий из частиц загрязнений, сульфокислот и гидрата окиси цинка, а на катоде происходит восстановление водорода, в результате накопления ОН-групп и образования КаОН. Величина pH осветленного раствора повышается на 1,5—2 единицы. После электрохимической обработки осветленный раствор содер--жит 60% ПАВ, 30% N328103, 45% КазРзОю и 70% ЫагЗО по отношеиню к исходному количеству. Содержание в растворе гидрата окиси цинка зависит от метода удаления осадка, образующегося в ходе электрохимической очистки. Рекомендуется в этом случае применять высокоскоростные центрифуги. По данным Л. Л. Шевченко, введение в прачечных регенерации моющих растворов, помимо сокращения расхода моющих средств и тепла, уменьшит расход исходной воды и сброс сточ ных вод примерно в 20 раз. [c.92]

Недавно было показано, что нуклеопротеиды [147] и другие белки [148], разделенные с помощью гель-электрофореза, можно перенести на нитроцеллюлозные или диазобензилоксиметилцел-люлозные фильтры. Более того, белки после такой процедуры сохраняют способность связываться с ДНК [148]. С помощью этого метода, по-видимому, можно выделить и охарактеризовать белки, взаимодействующие с ДНК или РНК. В работе [149] показано, что /ас-репрессор из Е. соИ специфически удерживается на колонке с диазобензилоксиметилцеллюлозой, содержащей ковалентно связанные фрагменты /ас-оператора Е. соН. В отличие от электрофоретического разделения, которое требует соблюдения весьма специфических условий, этот тип аффинной хроматографии идеально подходит для изучения влияния ионной силы, pH и температуры на эффективность взаимодействия белков с нуклеиновыми кислотами. Такого рода аффинную хроматографию, вероятно, можно использовать для очистки белков, контролирующих экспрессию генов. [c.196]

Изучение влияния сил неоднородного поля на ДЭС и поведение частиц в полярных средах в связи с технологией формирования электрофоретических покрытий проведено также в работе [15]. Возможность использования электрокипетических явлений для решения прикладных задач при очистке природных и сточных вод с помощью электрофореза и электрокоагуляции, проиллюстрирована обзором [16]. Показано, что методы электрообработки высокотехнологичны и перспективны. На электрофоретических и электрокоагу-ляционных установках, даже для таких слабоконцентрированных систем, как природные воды, достигается 100%-ный эффект очистки по основным параметрам — мутности, цветности и содержанию бактерий. При этом на 10—20% снижается и солесодержание, что может ощутимо уменьшить нагрузку на ионообменные установки при опреснении питьевых и обессоливании технологических вод. [c.15]

Расчеты показали, что минимальные удельные приведенные затраты и стоимость очистки 1 м воды соответствуют скоростям фильтрования 0,03—0,05 м/ч. При экономической оценке метода, кроме электрофоретических аппаратов, были учтены выпрямители, пусковые устройства и приборы контроля, микрофильтры для предварительного отделения от воды крупной взвеси, установки типа ОВ-Ш с бактерицидными лампами для обеззараживания воды, здание водоочистной станции объемом 170 м . Стоимость электроэнергии принята равной 2,5коп. за 1 кВт-ч. [c.211]

Разделение в тонком жидком слое. Фильпот [91] предложил совершенно новую и оригинальную идею электрофоретического фракционирования белков. В связи с ограничениями метода движущейся границы он предложил метод, пригодный для очистки больших количеств вещества путем разделения в тонком текущем слое с применением чрезвычайно сильных токов. Принцип Филь-пота состоит в следующем электроды берут горизонтальные, анод (уголь) помещается на дне и катод — из полосок медной фольги — наверху. Между электродами протекают справа налево пять слоев жидкости. Состав слоев выбирается таким, чтобы каждый слой был тяжелее предыдущего для предотвращения выделения газов на аноде, анодным раствором служит концентрированный раствор бромистого аммония. Газам, выделяющимся па катоде, дают удаляться между полосками медной фольги. Смесь белков, подлежащая разделению, содержится в среднем слое, текущем над слоем с той же концентрацией соли, но с глицерином вместо белка. Далее идет слой буфера без белка и без глицерина. Наконец, [c.288]

Демонстрация ключевой роли сиаловой кислоты как компонента многих гликонротеинов в их отношении к частице вируса гриппа и к вирусной инфекции (обзор см. [186]) имела большое влияние на современные исследования гликонротеинов. Можно отметить лишь немногие направления в современном развитии исследований. Многие уже известные и очищенные гликонротеины, включая групповые вещества крови и белки сыворотки, были исследованы вновь и вскоре стала очевидной широкая распространенность гликонротеинов, содержащих сиаловые кислоты. Присутствие сиаловой кислоты во многих гликопротеинах, представляющих биологический интерес, делает необходимым развитие мягких методов их выделения и очистки, поскольку кетозидная связь, соединяющая концевой остаток сиаловой кислоты с ее партнером, чувствительна даже к 0,05 п. минеральной кислоте. Ферментативное отщепление сиаловой кислоты от гликонротеинов позволило оценить ее вклад в физические, химические и биологические свойства индивидуальных гликопротеинов. Этот подход был очень плодотворным. Так, оказалось, что сиаловая кислота ответственна за низкую изоэлектрическую точку и высокую электрофоретическую подвин ность сиалогликопротеинов, за электрофоретическую подвижность эритроцитов и раковых клеток, за вязкость гликонротеинов слюны, за биологическую активность гонадотропинов и других гормонов и за правильное функционирование фактора Кэстла. По счастливому стечению обстоятельств этот рост исследований гликонротеинов происходил в то время, когда был доступен арсенал чувствительных, мощных и специфических методов исследования состава и структуры сложных белков и определения их физических свойств и химической реакционной способности. Ниже будут рассмотрены успехи, достигнутые к настоящему времени. [c.23]

При использовании гранулированной поддерживающей среды, обладающей свойствами молекулярного сита, электрофорез накладывается на эффект сита, что приводит к улучшению разделения. Тедеско и др. [1283] приспособили для электрофореза колонку с сефадексом G-200, предназначенную для гель-фильтрации. Хорошее разделение в ней было достигнуто при фракционировании сыворотки крови и очистке галактозо-Ьфосфат-уридилтрансферазы. Был разработан также метод гель-хроматографии в электрическом поле. По этому методу элюирующий раствор течет вниз, а полюс, к которому должны двигаться компоненты смеси в процессе электрофореза, располагается сверху. При этом электрофоретический ток замедляет движение определенных компонентов в дополнение к эффекту молекулярного сита, проявляющемуся в геле в отношении молекул меньшего размера. [c.52]

Чтобы избежать ошибок в процессе картирования путем подбора пар по методу отпечатков пальцев , важно не использовать при приготовлении фрагментов лигазную обработку. Мы предпочитаем двумерную электрофоретическую очистку выделению в градиенте плотности сахарозы, так как это дает более ясную картину распределения по размерам и достаточный выход эффективно клонируемых фрагментов. [c.34]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология