Сухая колоночная хроматография

Благодаря определенным преимуществам (быстрота и простота приготовления, те же результаты, что и в случае применения тонкослойной хроматографии) в наиболее сложных случаях препаративного разделения отдается предпочтение сухой колоночной хроматографии. [c.215]

При выборе растворителя и объема отбираемых фракций может быть рекомендован метод, приведенный в работе [И]. Применяя незакрепленные тонкие слои силикагеля, первоначально находят систему растворителей, в которой наименее полярный компонент разделяемой смеси имеет значение / / 0,5. Тот же растворитель затем применяют и в сухой колоночной хроматографии, причем желательно, чтобы объем отбираемых фракций (мл) составлял одну двадцатую часть от массы адсорбента (г) в колонке. Как правило, если применение определенного растворителя на обычных тонкослойных пластинах приводит к хорошему разделению, то в колоночной хроматографии должен быть применен менее полярный растворитель. Турина [121 предложил метод нахождения оптимального состава системы растворителей в тонкослойной хроматографии, при котором достигается наилучшее деление при проведении наименьшего числа опытов. Ме-, тод основан на общих принципах и может быть применен также и в колоночной хроматографии. [c.215]

СУХАЯ КОЛОНОЧНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ [c.124]

Сухая колоночная хроматография (СКХ) [36] фактически представляет собой усовершенствованный вариант метода, использованного Цветом. Эти два метода взаимосвязаны. Условия разделения методом СКХ подбирают, проводя хроматографирование на тонких слоях. Главное преимущество СКХ заключается в том, что этим способом можно разделять значительно большие количества веществ (несколько граммов) при меньшей длительности разделения и меньшем расходе растворителей. Основное условие, обеспечивающее получение хороших результатов посредством СКХ, — правильный подбор активности адсорбента. Оксид алюминия и силикагель дезактивируют, добавляя соответственно 3—6 и 12—15% воды (см. гл. 4, разд. 4.2). [c.124]

Если используется однокомпонентный элюент, сухая колоночная хроматография соответствует ТСХ в 5-камере с ненасыщенной атмосферой (это справедливо также и для многокомпонентных систем), а смеси растворителей расслаиваются одинаково как в 5-камере с ненасыщенной атмосферой, так и в сухой колонке, образуя несколько фронтов растворителей. Однокомпонентный элюент, естественно, не может расслоиться, и значения 7 /, полученные в ТСХ, соответствуют величинам получаемым при хроматографировании как в сухой, так и в увлажненной колонках. [c.125]

В настоящее время известно более 100 сортов силикагеля [31], свойства которых могут сильно различаться. Некоторые марки силикагеля предназначаются специально для разделения определенных групп соединений, например липидов, или для специальных методов хроматографии, например сухой колоночной хроматографии [8] . Товарный силикагель обязательно должен быть химически чистым. Ионогенные примеси, которые могут остаться в материале в процессе приготовления, способны вызывать изомеризацию хроматографируемых соединений или каким-либо иным образом нарушать процесс хроматографического разделения. Помимо ионогенных примесей, качество адсорбента снижают также следы органических соединений, особенно если этот адсорбент используют для выделения из многокомпонентных смесей следов соединений, которые затем анализируют масс-спектрометрически. Размеры частиц различных марок силикагеля лежат в пределах от 0,063 до 0,5 мм, плотность его составляет 0,3—0,5 г/см [c.161]

Оценка разделения. Для определения состава пигмента листьев растений Цвет применил метод разделения на колонке, заполненной СаСОд. Он получил окрашенные зоны на сухом наполнителе, которые разделил механически, удалив наполнитель из колонки и разрезав его. Такой способ получения внутренней хроматограммы не типичен для современной техники проведения колоночной хроматографии. Его применяют лишь в особых случаях. Для удобного выделения вещества работу проводят с разъемными колонками или с колонками, снабженными пластмассовыми шлангами, отделяемыми после окончания процесса разделения. В случае разделения окрашенных веществ в самой колонке можно провести качественную оценку разделения (по значению определить ширину зоны и провести полу количественное определение концентраций растворов (применяя эталоны). Для количественного определения необходимо проэкстрагировать вещество из механически выделенных из колонны фракций и затем определить его содержание при помощи какого-либо метода. [c.353]

Этого краткого описания (ниже оно будет развернуто) достаточно для того, чтобы отметить два принципиальных отличия ТСХ от колоночной хроматографии. Во-первых, жидкий элюент мигрирует по слою сухого носителя, смачивая его,— это необходимо для обеспечения действия капиллярных сил. Отсюда следует, что формирование неподвижной жидкой фазы внутри и на поверхности гранул носителя происходит за счет элюента в ходе самого хроматографического процесса. Во-вторых, одна из поверхностей тонкого слоя пористого носителя остается открытой и с нее может идти испарение элюента. Оба отличия играют немаловажную роль как в понимании процесса ТСХ, так и в разработке методов его практической реализации, чему уделено соответствующее внимание в последующих разделах. Что же касается того обстоятельства, что поперечное сечение носителя является не кругом, а очень тонкой и длинной полоской, то оно не играет принципиальной роли в протекании хроматографического процесса при условии, что диаметр гранул мал по сравнению с шириной полоски, а слой носителя однороден и имеет везде одинаковую толщину, так что фронт элюента продвигается с одной и той же скоростью по всей ширине пластинки. [c.459]

Джонс [38] разделил сложную газовую смесь (На, Оз, N3, СО, СО-2, НаЗ, ННз, Н2О, углеводороды С —С5) на порапаке Q, применив двух колоночный хроматограф. Одна колонка, заполненная порапаком Q, находилась ири температуре сухого льда, и в ней разделялись азот, кислород, окись углерода, а вторая (с тем же сорбентом) — при комнатной температуре, и в ней происходило разделение метана и углекислого газа последующее программирование температуры от комнатной до 125° С позволило разделить все остальные компоненты. Наблюдалась линейная зависимость между парциальными давлениями компонентов и площадью соответствующих пиков на хроматограмме. При анализе не требовалось никакой предварительной обработки газовой смеси для удаления кислых и коррозионных газов. [c.110]

Метод разделения веществ, называемый хроматографией в сухих колонках, в настоящее время описан во всех деталях . Этот мощный метод имеет ряд преимуществ перед обычной колоночной хроматографией. Они связаны с повышением разделяющей способности и скорости разделения компонентов изучаемой смеси. Кроме того, этот метод позволяет использовать почти без всяких изменений результаты тонкослойной хроматографии (разд. 3.2). [c.438]

Навеску сухого вещества помещают в патрон, свернутый из очищенной от флуоресцирующих примесей фильтровальной бумаги, экстрагируют в аппарате Сокслета в течение 10—12 ч очищенным от флуоресцирующих веществ и перегнанным органическим растворителем — бензолом, диэтиловым эфиром и др. Далее растворитель отгоняют (желательно под вакуумом) прп слабом нагревании на водяной бане. При анализе промыщленных продуктов (нефтяных, сланцевых и продуктов коксохимического производства) навеску от 0,2 до 0,5 г растворяют в 3—6 мл перегнанного бензола (в некоторых случаях с добавлением ацетона) и далее подвергают фракционированию методом колоночной хроматографии. [c.292]

Колоночная хроматография. В качестве хроматографических колонок можно использовать стеклянную бюретку диаметром от 8 до 12 мм и длиной 25—30 см. Колонку закрепляют в штативе. На дно колонки (перед сужением) кладут кусочек стеклянной ваты. Оксид алюминия (для хроматографии) просеивают через сито (0,25 мм). Сорбент вносят либо в сухом виде, либо в виде суспензии в том растворителе, в котором будет происходить хроматографирование. В первом случае оксид алюминия постепенно засыпают в колонку, наполненную растворителем, и все время слегка постукивают по колонке, чтобы адсорбент равномерно уплотнился. Избыток растворителя спускают через кран. [c.25]

В то время, когда Тизелиус начал систематическое изучение колоночной хроматографии, Синдж достиг успеха в опытах по выделению ацетилированных аминокислот из белковых гидролизатов путем проводившейся в воронках экстракции из водной фазы в органическую. Мартин и Синдж [21] сконструировали состоявшую из сорока сосудов экстракционную установку разделение ацетилированных аминокислот достигалось благодаря различиям их констант распределения между противоточными фазами — водой и хлороформом (рис. 1.2). Обе фазы перемешивали с помощью вибратора. Однако в том же 1941 г. была опубликована работа, автор которой осуществил аналогичное разделение на колонке, заполненной частицами силикагеля (рис. 1.3)-. Частицы силикагеля могут удерживать значительное количество водной фазы, оставаясь сухими на ощупь и твердыми. Хлороформ (органическая фаза) протекал в колонке между ча- [c.16]

Для колоночной хроматографии хлорофиллов можно использовать те же системы растворителей, что и для ТСХ этих соединений (разд. 11.3.3.1), а в качестве сорбентов — сахарозу [146, 155—158], целлюлозу [140, 146, 148, 159—163], крахмал [140, 146, 148], полиамид [164], полиэтилен [153, 158] и полипропилен [160]. Судя по нашему опыту, наилучшие результаты получаются на колонках, наполненных сухим сорбентом (порошкообразной коммерческой сахарозой, содержащей 3% крахмала, который добавляют, чтобы предотвратить спекание сорбента) и элюируемых смесью петролейного эфира с пропанолом-1 или диэтиловым эфиром (рис. 11.10). По окончании хроматографирования растворитель удаляют путем отсасывания, а сорбент выталкивают из колонки и разрезают на соответствующие зоны. Вещества экстрагируют эфиром или, если необ- [c.235]

Нейтральные вещества можно отделить от кислот или оснований, фильтруя пробу через ионообменники. Содержащиеся в водных растительных экстрактах алкалоиды можно концентрировать следующим образом. Подкисляя экстракт, сначала получают их сильно гидрофильные соли, затем экстрагируют липофильные компоненты межклеточного вещества органическим растворителем, например хлороформом, далее переводят свободные основания алкалоидов в щелочную форму и экстрагируют их хлороформом. Подобным образом можно повысить содержание липофильных кислот, но при этом кислотную обработку и перевод в щелочную форму проводят в обратном порядке. Для концентрирования ряда соединений можно использовать большинство видов колоночной хроматографии ( (хроматографической фильтрации). При работе с сухим исходным материалом экстракцию обычно ведут в аппарате Сокслета растворителями различной полярности. Например, в результате фильтрации водных растительных экстрактов в колонке, заполненной порошкообразным полиамидом, удерживаются соединения фенольного типа, а другие растворимые в воде соединения, например сахара, аминокислоты и т. п., проходят через колонку. Оставшиеся в колонке соединения можно элюировать мета- [c.87]

До последнего времени широкое применение находила классическая колоночная хроматография на силикагеле или окиси алюминия. Недавно в химии бора стали использовать сухую колоночную хроматографию. Основными преимуществами этого метода являются хорошее качество и высокая скорость разделения, незначительная степень деструкции твердой фазы под действием водорода (вследствие гидролиза), а также возможность быстрого подбора условий разделения методом ТСХ. Хорошие результаты были получены не только при разделении окрашенных соединений (металлокарбораны, имеющие структуру типа сэндвича), но также и при разделении соединений, поглощающих в УФ-области спектра, при условии проведения хроматографии в кварцевых колонках или в колонках из полиэтилена или полипропилена. Для разделения борорганических соединений пытались использовать гель-проникающую хроматографию [1] и высокоэффективную жидкостную хроматографию [2], однако эти методы требуют дальнейшего усовершенствования. [c.167]

Для правильного подбора элюента применяют метод ТСХ с использованием соответствующей неподвижной фазы. В классической элюентной хроматографии обычно применяют растворители, которые обеспечивают хорошее разделение веществ методом ТСХ при значении Нр, равном 0,1—0,2. В сухой колоночной хроматографии используют растворители, которые обеспечивают хорошее разделеняе в более широком диапазоне Яр (до 1). При разделении больших количеств гидридных соединений бора, восстанавливающих нитрат серебра, не рекомендуется применять четыреххлористый углерод во избежание взрыва. [c.168]

Хорошие результаты получены при разделении нейтральных и ионных металлоценов (т. е. соединений, различающихся величиной заряда на атоме металла), замещенных и незамещенных соединений, металлоценов с разными лигандами или изомеров, различающихся положением атомов углерода. Смеси этих соединений часто интенсивно окрашены, и поэтому их удобно разделять методом сухой колоночной хроматографии. Типичные примеры разделения металлокарборанов приведены в табл. 43.4. [c.172]

В большинстве случаев разделение, достигаемое посредством аналитической ТСХ, можно перевести на микро- или полу-микропрепаративный уровень. Препаративное разделение на тонких слоях чаще всего проводят методами адсорбционной и распределительной хроматографии, тогда как препаративное разделение методом ионообменной или колоночной хроматографии проводится только на колонках. Помимо препаративной тех существуют и другие методы препаративного разделения (например, классическая жидкостная хроматография и особенно высокоэффективная жидкостная хроматография, или хроматография при высоком давлении, см. гл. 4), которые в ряде случаев могут оказаться более эффективными. Методом сухой колоночной хроматографии (СКХ) можно проводить препаративное разделение в таких же условиях, которые применяются при разделении методом ТСХ [36]. Поэтому рекомендуется прежде всего проанализировать достоинства и недостатки различных типов и методов хроматографии и оценить целесообразность их применения для разделения конкретных соединений (устойчивых или неустойчивых, с близкими или значительно различающимися величинами Rf). Выбор метода зависит также от того, какие количества соединений и как быстро необходимо получить. [c.121]

В других случаях желательно подчеркнуть особый характер течения фаз. В сухой колоночной хроматографии элюент вводят в колонку, заполненную сухим адсорбентом. В круговой хроматографии стартовая линия пробы имеет форму окружности элюент вводится в центр, и фронт растворителя движется радиально, образуя расширяющуюся окружность. Продвижение подвижной фазы можно ускорить, вращая хроматограмму в центрифуге центрифужная хроматография). Препаративный вариант этого процесса проводится в цилиндрическом сегменте и носит название радиальной хроматографии. Аппарат для препаративной центрифужной радиальной хроматографии называется хроматоцентрифугой. Хроматография на клиновидных полосках представляет собой комбинацию круговой и линейной хроматографии сначала используется принцип круговой хроматографии на круговом сегменте, чтобы расширить зоны в поперечном направлении и сузить в продольном, а дальнейшее разделение проводится при обычном линейном и параллельном перемещении растворителя. [c.34]

Пример 2. 2-Амино-4-метокси-5-нитропиримидина. К раствору 220 мг (1.05 редокс экв.) перманганата калия добавляли 310 мг (2 ммоль) 4-метокси-5-нитропириминидина малыми порциями при (-70 °С) с перемешиванием. Реакционную смесь выдерживали 15-20 мин при (-60 °С) и затем добавляли 20 мл метанола через сухой лед/ацетоновый конденсатор. 2-Амино-4-метокси-5-нитропириминидин выделяли колоночной хроматографией на си- [c.115]

ДЛЯ ввода инертного газа и мембраной в 15 мл безводного ТГФ (в атмосфере азота) растворяют 0,84 мл (6,00 ммоль) сухого диизопропиламина и раствор охлаждают до 0°С. После этого шприцем добавляют 3,44 мл (5,50 ммоль) 1,6 М раствора н-бутиллития в гексане, смесь перемешивают 20 мин при О °С, охлаждают смесью ацетон-сухой лед до -78°С и шприцем медленно вводят 1,00 г (5,00 ммоль) (48)-3-бути-рил-4-изопропилоксазолидинона-2. Реакционную смесь перемешивают 60 мин при — 78 °С и медленно вводят при помоши шприца охлажденный раствор (см. разд. 1.4) 0,75 мл (10,0 ммоль, с1= 1,577) свежеперегнанного пропаргилбромида в 1 мл ТГФ. Смесь перемешивают в течение 8 ч при — 78 °С и затем в течение 8 ч нагревают до комн. температуры. Смесь обрабатывают, вливая ее в насышенный водный раствор КН4С1 (30 мл), разделяют фазы и водную фазу экстрагируют эфиром (3 х 20 мл). Объединенные органические фазы высушивают над М 804 и растворитель отгоняют в вакууме. ГХ-анализ неочишенного продукта (капиллярная колонка 8Е-30 длиной 50 м, давление N2 1 атм, начальная температура 150 С/15 мин, температурная программа 5 "С/мин, конечная температура 270 °С ПИД) дает соотношение диастереомеров 120 1 (время удерживания = 18,23 мин, 19,11 мин). Продукт очишают методом колоночной хроматографии на 50 г силикагеля (размер зерен 0,063-0,200 мм) при элюировании смесью эфир-петролейный эфир (1 3), что дает 0,83 г (70%) продукта алкилирования в виде прозрачного желтоватого масла. [c.489]

Шеффер и сотр. [32] разделили смеси 1-циклогексен-3,4,5-триокси-1-карбоновой кислоты, винной, хинной, малоновой, лимонной и малеиновой кислот с помощью колоночной хроматографии на слабоосновном декстрановом анионите сефадекс А-25 при 25 °С, используя градиентное элюирование уксусной и муравьиной кислотами. Низкокипящие кислоты выделяли из фракций элюата путем выпаривания в вакууме над смесью хлорида кальция и едкого натра (1 1). Сухие остатки экстрагировали 50%-ным раствором метанола и титровали 0,1 н. раствором NaOH. Этот метод использовали для разделения, выделения и анализа кислот в экстрактах корней хлебных злаков. [c.163]

В классической колоночной хроматографии алкалоиды в отдельных фракциях определяют спектрофотометрически, колориметрически, потенциометрическим титрованием, взвешиванием сухого остатка и т. д. Описано детектирование алкалоидов в элюате на спектрофотометре с проточной ячейкой. Для автоматического анализа, например в токсикологии, разработан интересный прибор [12], в котором колоночная хроматография сочетается с экстракционной обработкой комплексов алкалоидов [c.103]

Перенос условий ТСХ на колоночную хроматографию (КХ) сопряжен с рядом трудностей, и поэтому желательно знать, какие факторы влияют на этот перенос. Согласно данным Гейсса [16], неудачи могут быть вызваны следующими причинами а) переходом от ТСХ к КХ при использовании несопоставимых хроматографических систем, например ВЫ-камеры и сухой колонки б) неправильными формулами перехода в) применением в тех и КХ различных сорбентов г) различной активностью сорбентов, используемых в ТСХ и КХ д) отсутствием оптимизации режима работы при КХ е) перегрузкой колонки. [c.125]

Оксид магния чаще всего применяется для разделения соединений типа каротиноидов и порфиринов. Хроматографические свойства оксида алюминия наиболее подробно исследовал Снайдер [68] . Этот автор нашел, что активность дезактивированного водой оксида магния можно быстро повысить, элюируя его сухими органическими растворителями. Однако после такой обработки возможна необратимая адсорбция некоторых органических, главным образом ароматических, соединений. Этого нежелательного явления можно избежать, используя растворители, содержащие воду. По своим свойствам оксид магния в известной степени похож на оксид алюминия. Основное различие заключается в его большем сродстве к двойным углерод-углерод-ным связям, а следовательно, и к ароматическим соединениям. Для хроматографическо1 о анализа можно использовать собственно оксид магния и различные его комбинации с другими адсорбентами. В колоночной хроматографии обычно применяют оксид магния в сочетании с диатомовой землей, чтобы облегчить элюирование. Николаидес [51] определил условия тонкослойного и колоночного хроматографирования таких смесей восков и стеринов, которые трудно разделить другими методами. Он показал, что разделение веществ на оксиде магния происходит в соответствии с плоскостными размерами их молекул. [c.170]

Силикагель получил столь же широкое применение в хроматографии эфиров порфиринкарбоновых кислот, как и оксид алюминия, однако он обладает меньшей емкостью. Лукас и Ортен [120] хроматографировали метиловые эфиры уропорфирина I, копропорфирина I, мезопорфирина и протопорфирина на силикагеле в системах петролейный эфир — хлороформ. Для того чтобы добиться полного разделения смеси указанных соединений, нужно постепенно увеличивать концентрацию хлороформа в элюенте. Первым выходил из колонки эфир протопорфирина, а затем элюировались остальные компоненты смеси в порядке увеличения числа сложноэфирных групп в их молекулах. Уайт и др. [76] проводили хроматографирование на колонках с сухим сорбентом, а в качестве элюента использовали предложенную Кардиналом и др. [92] систему растворителей [петролейный эфир (т. кип. 30—60°С) —хлороформ (1 5)], исключив из нее аммиак. В действительности любые системы растворителей, пригодные для ТСХ на силикагеле, можно также использовать и для проведения колоночной хроматографии на этом сорбенте. [c.225]

Системы растворителей, разработанные для ТСХ, могут быть без каких-либо изменений использованы и для колоночной хроматографии, в частности для хроматографии на колонках с оксидом алюминия и силикагелем. При нанесении образцов на колонку необходимо соблюдать некоторые меры предосторожности в силу низкой растворимости порфиринов часто бывает необходимо наносить их из довольно большого объема. В общем случае наиболее подходящими растворителями для этой цели являются хлороформ и дихлорметан. Если образец не концентрируется в самом начале колонки в виде узкой зоны, то для набивки колонки и растворения образца следует использовать бензол или толуол. Если же и эта мера окажется недостаточной, то, возможно, проблему удастся решить с помощью хроматографии на колонках с сухим сорбентом [43]. Этот метод, впервые введенный в практику исследования порфиринов Адлером и др. [124], нашел особенно широкое применение для отделения хлоринов, которые присутствуют в виде примеси в препаратах синтетических лгезо-тетраарилпорфиринов, полученных путем взаимодействия пиррола с бензальдегидом или его производными. [c.227]

В последнее время вместо колоночной хроматографии находит все более широкое применение ВЭЖХ, которая позволяет разделить жирорастворимые витамины (А, О, Е, К), обычно присутствующие одновременно в пищевых продуктах, и количественно их определить с большей точностью. ВЭЖХ облегчает возможность определения различных форм витаминов (витамин А-спирт, его изомеры, эфиры ретинола и родственные соединения), что особенно необходимо при контроле за внесением витаминов в пищевые продукты [61, 84, 97]. Метод ВЭЖХ с успехом был применен для определения ретинилпальмитата в обогащенных продуктах, таких, как сухие завтраки, молоко и молочные продукты, маргарин [59, 61]. [c.301]

Использование ГЖХ для очистки феромонов. Чаще всего ГЖХ применяется для препаративного разделения активных фракций, полученных очисткой экстракта колоночной хроматографией [6, 28, 35, 43, 103, 118, 168, 183, 207] или ТСХ [74, 91, 170, 183]. Однако если экстракт лолучен из воздуха над насекомыми [10, 28, 53, 58, 86], непродолжительным вымачиванием желез [46, 68, 115, 130, 168] или экстракцией фильтра, на котором были выращены насекомые, то возможно использование препаративной ГЖХ без предварительной очистки экстракта. При сборе фракций поток, выходящий из хроматографа, делится так, что меньшая его часть (5%) идет в пламенно-ионизационный детектор [117], остальное — в ловушку. А в качестве ловушки применяют капилляр (1,8 мм хЗОсм), охлаждаемый жидким азотом или сухим льдом в ацетоне [20, 42, 58, 109, 117, 129, 158, 219]. Выход феромона при таком способе сбора составляет 40—70%. Большой выход (до 90%) феромона при препаративном сборе ГЖХ возможен при использовании коллектора с термическим градиентом [220]. Сбор феромона возможен также и в ловушки, охлаждаемые до —75°С и заполненные растворителем (пентаном, U спектральной чистоты) [169]. [c.26]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология