Непрерывный электрофорез на бумаге

Для. препаративного использования разделения, сочетающего достоинства хроматографии и электрофореза на бумаге, удобен метод непрерывного электрофореза на бумаге Он является [c.563]

Непрерывный электрофорез на листах бумаги размером около 30 X 30 см использован для разделения У — Ьа, Ас — Ьа, N(1 — Рг с 1%-ным раствором лимонной кислоты [1306] или Се — ть во Се - - УЬ с 0,05М раствором мо- [c.149]

В основу этого метода положен зонный электрофорез в электролите, который движется перпендикулярно направленик> электрического поля. Первоначальный вариант метода предназначен для разделения на бумаге. Позднее [2] он был применен в отсутствие носителя, при этом стабилизация зон осуществлялась ламинарным потоком достаточно тонкого слоя электролита. Электрофоретическая ячейка имела форму плоской квадратной или прямоугольной рамки, длина ее стороны составляла несколько десятков сайтиметров, а толщина слоя равнялась 0,25—0,60 мм. Вначале этот прибор использовался для разделения высоко- и низкомолекулярных пептидных соединений, нсь позднее выяснилось, что таким способом можно эффективно разделять не только растворимые электрофоретические соединения, но и коллоидные частицы, включая субклеточные частицы и клетки, если конструкция аппарата не допускает быстрого осаждения макрочастиц на стенках электрофоретической ячейки. Движение частиц в условиях непрерывного электрофореза описывается следующим простым соотношением [39] [c.285]

Кроме того, электрофорез можно проводить при непрерывном пропускании растворителя через бумагу (непрерывный электрофорез). При этом избирательность разделения хотя и не повышается, но увеличивается препаративная емкость всего процесса. [c.541]

Актиний также хорошо отделяется от лантана при непрерывном электрофорезе на бумаге с использованием растворов в 1%-ной лимонной кислоте при рН = 7ч-8 и при хроматографическом разделении на бумаге растворов в бутиловом спирте, ацетилацетоне, уксусной кислоте i91]. Возможны также экстракционные методы. Для получения чистых препаратов актиния в качестве носителя удобно использовать трехвалентный церий. Отделение от церия основано на окислении церия до четырехвалентного состояния перекисью водорода, персульфатом, перманганатом и осаждении подходящей соли церия, обычно иодата или персульфата [92]. [c.231]

Разработаны методы непрерывного электрофореза на бумаге. Схема установки для непрерывного электрофореза приведена на рис. 14.6в. В этой установке используется висящий вертикально большой лист фильтровальной бумаги, верхний край которого погружен в желоб с буферным раствором. Раствор разделяемой смеси непрерывно подается в одной точке недалеко от верхнего края бумаги. Буферный раствор, [c.467]

Рис. 8.15. Принципиальная схема непрерывного электрофореза на бумаге

Принцип метода непрерывного электрофореза заключается в следующем по хроматографической бумаге, смоченной буферным раствором, стекает раствор исследуемого вещества, поступающий через ватный фитилек. Перпендикулярно к потоку направлено-электрическое поле, создаваемое двумя парами платиновых электродов, помещенных в буферный раствор. Скорость течения разделяемой жидкости и величина напряжения электрического поля являются главными факторами, определяющими степень разделения. [c.258]

Принцип метода непрерывного электрофореза состоит в создании электрического поля, направленного под прямым углом к протекающей через пористую среду (хроматографическая бумага) жидкой смеси, подлежащей разделению [4]. В результате этого находящиеся в растворе заряженные частицы вещества будут двигаться под определенным углом к направлению потока жидкости. Скорость течения разделяемой жидкости и величина напряжения электрического поля являются главными факторами, определяющими степень разделения. [c.269]

Преимущество метода распределительной хроматографии заключается в сочетании различий в коэффициентах распределения отдельных компонентов между двумя несмешивающимися растворителями с многократностью актов, в результате чего даже небольшие различия в коэффициентах распределения приводят к эффективному разделению. В качестве инертного носителя используются целлюлоза, силикагель, хроматографическая бумага, фторопласт иониты и различные органические полимеры [591. Методы распределительной хроматографии широко применяются для разделения осколочных РЗЭ. Особым преимуществом метода распределительной хроматографии по сравнению со всеми другими методами разделения РЗЭ, за исключением метода непрерывного электрофореза является возможность отделения больших количеств одного элемента от чрезвычайно малых количеств соседних элементов. [c.159]

Опубликованные об электрофорезе водорастворимых красителей статьи посвящены в основном не красителям для текстильных материалов, а индикаторам и красителям для бактериологических исследований. Применялись органические растворители для изучения миграции Эозина, Метиленового голубого. Жирового красного О и Ализаринового синего смеси абсолютный этанол-ле-дяная уксусная кислота) [126]. Эозин V был разделен на три компонента на бумаге ватман № 1 при градиенте потенциала 3,5 В/см за 2—15 ч с использованием в качестве электролита 0,1 н. аммиак (pH 11,1) [127]. Исследовано также поведение краски Райта (Эозин + Метиленовый голубой), Кристаллического фиолетового и Фуксина, которые разделили непрерывным электрофорезом на ряд фракций. Разделена смесь Метилового оранжевО го и Фенолфталеина [124]. Применен непрерывный электрофорез для разделения Бромфенолового синего и Крезолового красного [124]. Описано хроматографическое и электрофоретическое раЗ деление многих сходных веществ, а также интересный процесс для проверки наличия добавок, иллюстрированный на парах таких красителей, как Оранжевый II — Метиленовый голубой и Амидо-черный — Фуксин [128]. Разделены акридиновые красители в 0,1 н. соляной кислоте при градиенте потенциала 8 В/см за 1— [c.98]

Рис. 85. Разделение Се, Рт и Ей методом непрерывного электрофореза на бумаге [226]

Рис. 86. Разделение N 4 Рщ и методом непрерывного электрофореза на бумаге [200]

При одновременном проведении хроматограмм и электрофореза повышается во многих случаях степень разделения близких по свойствам веществ. Для препаративного разделения смеси веществ удобен метод непрерывного электрофореза. Этот метод сочетает достоинства двумерной хроматографии и электрофореза. Анализируемую смесь наносят на полосу бумаги на нижний ее конец и погружают в резервуар с раствором электролита так, что зона компонентов перемещается по бумаге снизу вверх. Под прямым углом, поперек полосы бумаги, подводят постоянный ток. Зоны достигают верхнего края бумажной полосы в различных точках, что объясняется, с одной стороны, неодинаковым распределением компонентов между двумя жидкими фазами, с другой, — различной миграцией в электрическом поле (рис. 33, а). [c.87]

В нашей монографии приняты следующие термины. Все методы, связанные с переносом простых и сложных ионов при наличии градиента потенциала в свободных растворах, в наполненных колонках и расплавах обозначаются общим термином электромиграционные методы . В качестве синонима применяется термин электрофорез , причем в зависимости от среды используются вспомогательные, уточняющие термины электрофорез в свободном растворе , непрерывный электрофорез , электрофорез на бумаге и пр. В качестве самостоятельного термина применяется термин фокусирующий ионный обмен . [c.5]

При одновременном проведении хроматографирования и электрофореза во многих случаях повышается степень разделения близких по свойствам веществ. Для препаративного разделения смеси веществ удобен метод непрерывного электрофореза. Этот метод сочетает достоинства двумерной хроматографии и электрофореза. Анализируемую смесь наносят на нижний конец полосы бумаги и погружают его в резервуар с раствором электролита, так что зоны компонентов перемещаются по бумаге снизу вверх. Под прямым углом поперек полосы бумаги подводят постоянный ток. [c.111]

Был сконструирован ряд приборов для непрерывного электрофореза. Одним из наиболее совершенных является прибор Свенсона и Братстена 1б6]. Вместо фильтровальной бумаги (рис. 488) в этом приборе используют стеклянный порошок насыпаемый между двумя пластинками. Стеклянный слой постоянно орошается сверху буферным раствором, а раствор разделя- [c.541]

Непрерывным электрофорезом на бумаге с использованием молочной кислоты в качестве буферного электролита осуществлено разделение ионов ванадия (IV) —(V)—железа (III) и железа (И)—(III)—ванадия (IV). Ил,-1, табл.—4, библиогр.—4 назв. [c.150]

Излагаются теоретические основы метода, приводятся данные по исследованию состояния ионов в растворах и расплавах и по разделению и выделению элементов различных групп периодической системы. Дается описание приборов и аппаратов, используемых на практике (приборы для периодического и непрерывного электрофореза, для электрофореза на бумаге, для фокусирующего обмена, для определения чисел переноса и подвижности ионов в расплавах и пр.) разбираются специфические особенности и возможные ошибки методов. [c.2]

Расшифруем некоторые из записанных таким образом способов разделения, приведенных на рис. 8. Два движения, обеспечивающих различные скорости движения частиц смеси, расположенные под прямым углом друг к другу, запишутся как W°W . При этом могут в одном направлении двигаться все частицы, а в другом только часть из них. Как пример такого способа разделения можно привести комбинации электрофореза с хроматографией на бумаге. Похожего эффекта разделения можно достичь включением вместо движения с равным углом. Практически этот случай реализуется, например, в хроматографии на бумаге с вращающимся бумажным барабаном или при сочетании свободного электрофореза с седиментацией. Вклад достигается здесь механическим перемещением всего разделяющего наполнителя поперечно к направлению движения W. При этом все частицы движутся в обоих направлениях. Время разделения (при лучшем его качестве) значительно уменьшается при использовании схемы противотока По этой схеме организованы, например, про-тивоточный электрофорез или газохроматографический метод, при котором против тока газа-носителя движется разделяющий наполнитель (вниз по вертикальной колонке). Схема W°V позволяет при непрерывном ее исполнении разделить только два компонента. Для того чтобы можно было осуществлять непрерывное противоточное разделение многочисленных компонентов, реализуют схему ГО ОУ У . Движение У выносит отдельные частицы из противотока. [c.47]

При непрерывном электрофорезе, в котором исследуемые ионы перемещаются вместе с фоновым электролитом, адсорбция практически не влияет на величину отклонения ионов в электрическом поле и, следовательно, не искажает результатов измерения подвижности ионов. В качестве пористого носителя в приборах непрерывного электрофореза используют бумагу [55, 56], стеклянный порошок [54], кварцевый песок [57] и др. [c.43]

Разделение лантана и актиния непрерывным электрофорезом на бумаге, [c.184]

Непрерывное оформление фокусирующего электрофореза осуществляется на листах бумаги и отличается от обычной методики тем, что по горизонтальному краю бумага разделяется на три участка при-катодный участок питается раствором комплексообразующего агента, прианодный участок — раствором минеральной кислоты, а средний участок — раствором смеси разделяемых ионов. Под влиянием [c.151]

При разделении больших количеств веществ электрофорез можно вести непрерывно, применяя очень простой способ. При этом разделяемая смесь медленно протекает по широкой бумажной полоске. Перпендикулярно направлению движения жидкости приложено электрическое поле. Направление и скорость движения заряженных частиц связаны с величиной приложенного напряжения и скоростью протекания жидкости частицы вещества отлагаются в различных участках нижнего края бумаги и могут быть разделены (рис. 146). Электрофоретическое разделение на бумаге смеси фосфорной и серной кислот в присутствии разбавленной соляной кислоты основано на различной степени ионизации обеих кислот. Ортофосфорная кислота мало диссоциирует и остается вблизи начальной точки, серная кислота, напротив, сравнительно быстро движется по направлению к аноду [20]. [c.277]

В приборах для непрерывного электрофореза бумагу обычно располагают как при нисходящей хроматографии. Для непрерывного электрофореза используют главным образом приборы Грас-смана и Ханнига, Дуррума, и Стрейна и Сулливана [16, 124, 125]. [c.98]

При электрохроматографическом разделении применяется такая же установка, как при непрерывном электрофорезе на бумаге (см. рис. 14.6б). Существенное различие методов состоит в том, что в электро-хроматографической установке верхний желоб заполнен элюантом, который позволяет разделять компоненты образца в отсутствие электрического поля. При использовании разделения для препаративных целей (на установке типа 14,6е) раствор смеси добавляют непрерывно. Способ, при котором образец вводят в виде аликвотной части раствора или пятна, называется методом аналитической электрохроматографии. Если сорбционный процесс является обратимым, этот метод позволяет разделять исходное пятно образца на несколько круглых или эллиптических пятен, которые отделяются друг от друга как по вертикали (хроматографическое разделение), так и по горизонтали (за счет электромиграции). [c.468]

Бурное развитие науки и техники за последнее десятилетие характеризуется применением новых, более совершенных методов исследования. К таким методам относятся электрофорез на бумаге, непрерывный электрофорез, фокусирующий ионный обмен и другие методы, основанные на электромитра-ции заряженных частиц (коллоидов, простых и сложных ионов). Эти методы наиболее широко используют для разделения белков и других высокомолекулярных соединений, а также для разделения простых и комплексных неорганических ионов. [c.3]

Для разделения лантаноидов возможно применение бумажной хроматографии и электрофореза на бумаге. Электрофорез ведется из растворов органических кислот. Подвижность ионов лантаноидов падает с ростом порядкового номера элемента и ростом концентрации кислоты. Быстрое разделение достигается при применении этилендиаминтетрауксусной и нитрилуксусной кислот. Методом непрерывного электрофореза в растворах 0,7 М винной и а-оксиизомасляной кислот при pH = 2,2 можно отделить малые количества прометия от больших количеств других редкоземельных элементов. [c.287]

Разделение некоторых радиоактивных изотопов, преимущественно осколков деления урана — 8г °, У ", КЬ , и др., было осуществлено [72] на фильтровальной бумаге в 0,1 н. растворе молочной кислоты Д1етодом как прерывного, так и непрерывного электрофореза. [c.37]

Фильтровальная бумага из-за ее пригодности для многих разделений и доступности остается наиболее популярной в качестве стабилизирующей среды, особенно для систем, в которых не требуется анализа большого количества компонентов. Если разрешающая сила является чрезвычайно важным фактором разделения смеси,то вместо бумаги используют полоски ацетилцеллюлозы, которая обладает большей проницаемостью для продвижения крупных молекул, например,протеинов. В качестве других пористых носителей буферного электролита были предложены картон, стеклянный порошок, кварцевый песок, ряд дающих лучшее разделение, чем бумага гелей (крахмал, агар-агар, акриламад, поливинилхлорид и др). Помимо этого для разделения небольших количеств смесей использовали тонкие пленки кизельгура, а также специальную асбестированную бумагу для электрохроматографии в расплавленных солях. Если объемы образца больше, чем те.которые могут быть нанесены на фильтровальную бумагу или тонкий слой другого носителя, можно применять колонки, заполненные тем или иным пористым материалом. Для препаративных разделений существуют различные мод икации установок непрерывного электрофореза,в которых используется ряд рассмотренных выше носителей. [c.163]

Более надежным в практическом использовании является метод непрерывного электрофореза, предложенный одновременно и независимо Стрейном [135], Свенс-соном и Браттстеном [54], Грассманом и Ханнигом [136]. По данному методу с целью стабилизации условии электрофореза движение электролита происходит, как правило, в среде пористого наполнителя фильтровальной бумаги, стеклянного порошка, кварцевого песка и т. д. Движение жидкости осуществляется либо благодаря гидростатическому давлению, либо принудительно, с помощью различного рода насосов. [c.70]

Аппаратурно несколько проще выглядит метод непрерывного электрофореза на листах фильтровальной бумаги, особенно широко применяемый Стрейном с сотр. [135, 143, 144]. Аппараты для непрерывного бумажного электрофореза описаны также в работах [56, 140, 145]. Лист фильтровальной бумаги или располагают между стеклянными пластинами [143, 144], или подвешивают на раме, которую помещают во влажную камеру для уменьшения испарения [56, 140, 145]. Верхний край бумаги спускается в кювету с фоновым электролитом. Движение раствора осуществляется самотеком благодаря гидростатическому давлению. Отбор осуществляется с помощью серии уголков, вырезанных в нижней части бумаги. Смесь разделяемых веществ подается с помощью бумажной ленты, один конец которой прижимается к листу бумаги, а другой опущен в сосудик с разделяемой смесью. Операцию нанесения смеси можно провести также с помощью приспособления, описанного Лоштиц-ким [146]. [c.74]

Кауричев И. С., Федоров Е. А., Шнабель И. А. Применение метода непрерывного электрофореза на бумаге к разделению гуминовых кислот.— Почвоведение, Л з 10, 1960. [c.282]

Зонный электрофорез предполагает использование неподвижного носителя, по поверхности или через объем которого осуществляется миграция ионов. Носители могут применяться в виде полос (например, бумаги), колонок, дисков, тонких слоев и т. д. Для зонного электрофореза чаще всего используют фильтровальные бумаги (Ватман № 1 и № ЗММ), а также ацетат целлюлозы, гели агара, крахмала и полиакриламида 24, 25]. Электрофорез осуществляется под действием электрических полей низкого (<1000 В) и высокого (от 1000 до 10000 В) напряжения. При непрерывном электрофорезе (препаративный метод с использованием низкого напряжении) образец непрерывно подается на носитель (чаще всего бумага Ватман № ЗММ или Шлейхер-Шюлль 2230). Электрофорез с высоким напряжением электрического поля проводят, как правило, на бумаге этот метод дает хорошие результаты при анализе аминокислот и других небольших молекул и непригоден для анализа больших молекул. [c.403]

В классический период развития органической химии, длившийся почти столетие, экспериментатор обходился, как правило, небольшим числом сравнительно простых типовых методов. Для овладения экспериментальной техникой тех лет достаточно было научиться осуществлять синтез нескольких десятков соединений, так как основные операции выделения и очистки веществ часто повторялись и мало отличались друг от друга. За последние десятилетия арсенал методов и приемов, применяемых в органической лаборатории, неимоверно вырос. Особенно много принципиально нового введено в методы выделения веществ, эффективность которых неизмеримо возросла благодаря внедрению различных видов хроматографии, противоточного распределения, электрофореза и т. д. Появился целый набор специальных приемов для работы в микро- и полу-ми кромасштабах. Такие методы, как хроматография в тонких слоях и на бумаге, в сочетании с физическими методами идентификации и контроля позволили органикам непрерывно следить за ходом химических реакций или процессов разделения веществ. [c.5]

Некоторые авторы [519, 1464] для препаративного электрофореза белков применяют толстую бумагу. Электрофорез следует проводить при температуре от +2 до -Ь4°С. Затем бумагу разрезают на полоски в направлении, перпендикулярном направлению миграции. Белки извлекают либо с помощью элюции буферным раствором, либо выжимая под давлением жидкость из полосок. Положение зон может быть установлено до разрезания электрофореграм мы путем получения реплики на тонкой фильтровальной бумаге и быстрого ее окрашивания (например, бромфеноловым синим). А можно просто разрезать всю бумагу на полоски и определить содержание белка в каждой из них. В этом случае, если выявление белка проводится путем регистрации оптической плотности при 280 нм, необходимо вероналовый буфер заменить на глициновый или борат-ный, так как веронал довольно сильно поглощает при этой длине волны. Было также предложено использовать в качестве препаративного метода непрерывный электрофорез на вертикальном листе бумаги [469, однако он едва ли применяется в настоящее время. [c.39]

Непрерывный электрофорез представляет собой препаративный метод, заключающийся в одновременном перемещении непрерывно прибавляемого вещества в одном направлении потоком растворителя и в другом направлении — электрическим полем. В качестве носителя здесь часто используют фильтровальную бумагу однако можно проводить проточный электрофорез и без целлюлозного носителя. Схема метода показана на рис. 9.14. БольшоГ лист бумаги, расположенный, как показано на рисунке, помещают в камеру из плексигласа. Верхний край бумаги погружают в. резервуар с буфером, причем первоначально всю бумагу смачивают буфером. Пока резервуар полон, буфер непрерывно движется по бумаге вниз под действием капиллярных сил и капает с зубцов на нижнем крае в пробирки. Вдоль линии старта непрерывно прибавляется разделяемый раствор с помощью механического шприца или фитиля. Электрическое поле приводит к постоянному горизонтальному перемещению, степень которого зависит от [c.238]

Электрофорез на агаровом, крахмальном геле и т. д. не находит широкого применения для исследования вирусов растений. М ало применялся также метод непрерывного электрофореза, при котором поперек листа висящей фильтровальной бумаги прикладывается разность потепциалов. Через лист сверху вниз протекает буфер. Этот метод не пашед широкого применения, что, по-видимому, обусловлено невозмонп-шстью разделения больших количеств материала, слишком большой затратой времени и другими причинами. [c.45]

Широкое распространение для разделения органических и неорганических ионов получил метод непрерывного -бумажного электрофореза, предложенный Деррамом [55]. Особенностью данного метода является то, что электрический контакт создается с помощью уголков бумаги, опущенных в сосуды, в которые погружены электроды (рис. 3.13). Легко понять, что в этом случае поле является неоднородным, а эффективность разделения заметно ниже по сравнению с прямоугольным бумажным электрофорезом при равном общем напряжении. Однако простота конструкции в значительной мере компенсирует отмеченный недостаток. Кроме того, форму поля можно приблизить к равномерной, если сделать несколько дополнительных отводов по высоте бумаги и погрузить их в дополнительные сосуды с электролитом, к которым подведено общее напряжение. При этом эффективность разделения увеличивается примерно вдвое [147]. Методика работы на аппарате Деррама в общем не отличается от описанной ранее. [c.75]

Известен целый ряд методически различных электромиграцион-ных способов — от самых простых, осуществляемых на полосках бумаги, до весьма сложных непрерывных процессов, сочетающих электрофорез с элюированием. [c.148]

При электрофоретическом разделении водного гумуса использовалась подвижность составляющих его высокомолекулярных соединений в электрическом поле вследствие наличия у них ионогенных групп. Представлялось целесообразным получить не электрофореграммы, а отдельные фракции, как при жидкостной хроматографии. Поэтому применяли методику непрерывного электрофоретического разделения на бумаге, при котором перпендикулярно нисходящим потокам исследуемого и буферного растворов в капиллярах вертикального листа бумаги накладывается электрическое поле постоянного тока высокого напряжения. Гуминовые вещества для электрофореза извлекали из днепровской высокоцветной воды экстракцией изобутиловым спиртом [46]. После испарения растворителя осадок растворяли в 0,1-н. едком натре и добавляли фосфатный буферный раствор pH 7,5, этот же раствор использовали и как фон при разделении. [c.61]

После окраски на электрофореграмме появляются 4 пятна, соответствующие альбумину, а-, р- -глобулинам. Часто альфа-глобулин можно разделить на, 01- и аг-глобулины реже на две фракции подразделяются р-глобулины. При pH 8,6 все эти белки в электрическом поле движутся по направлению- к аноду, так ак они в этих условиях обладают отрицательным зарядом. Быстрее всего движутся альбумины, затем а-глобулины, за ними Р-глобулины и, наконец, у-глобулины. Несмотря на то, что все белки движутся к аноду, после окраски у-глобулины оказываются на месте нанесения капли сыворотки или даже сдвинуты в сторону катода. Это объясняется тем, что во время электрофореза в бумаге происходит непрерывный ток жидкости от анода к катоду, который относит белки в сторону катода. Этот так называемый электроосмотический ток зависит от сорта бумаги, pH буферного раствора и напряжения, при котором производится электрофорез. Можно установить величину этого тока с помощью декстрана (полисахарид), движение которого при pH барбиталового буфера обуславливается только электроосмотиче-ским током. Его наносят на соседнюю полоску, и для определенных сортов бумаги его движение и движение альбумина находятся в постоянном соотнощении. Раз определив это отноще-мне, можно им пользоваться для внесения поправки на передвижение белков . [c.115]

Поскольку структура и природа пористого носителя оказывают существенное влияние на подвижность иона в электрофорезе и теоретическому учету эти факторы не поддаются, необходима жесткая стандартизация условий эксперимента или работа по непрерывному варианту для получения воспроизводимых значений подвижностей ионов. Большинство исследователей, занимающихся электрофорезом,стремится уменьшить воздействие носителя на подвижность ионов чтобы получить возможность работать в условиях чистой" электромиграгши,Однако имеются работы [2-4], в которых авторы путем специальной обработки бумаги усиливали ее ионообменные функции,отремясБ обеспечить при электрофорезе сочетание одновременного действиг двух различных механизмов разделения, действующих в противоположных направлениях. Несмотря на то, что в рассматриваемых работах авторам не удалось достигнуть высокой селективности и заметного улучшения качества разделения, подобные попытки представляют опреде- [c.163]