Треонин, кислотный гидролиз

При кислотном гидролизе полностью разрушается триптофан, гидролизуются амидные группировки, частично разрушаются серии и треонин, происходит окисление цистина и цистеина. Для определения указанных аминокислот разработаны специальные методики [25, 73, 74]. [c.351]

Гидролиз белков ЗМ /г-толуолсульфокислотой или АМ метан-сульфокислотой [7,8], содержащей 0,2% триптамина, в вакууме при 110°С, в течение 3 суток с хорощим выходом приводит к аминокислотам, включая триптофан, однако углеводы могут мешать. Триптофан можно определять также после щелочного гидролиза, но при этом разрушаются полностью аргинин, цист(е)ин, серин и треонин. Общее содержание амидов, обусловленное наличием аспарагина и глутамина, можно определить после гидролиза 10 М НС1 при 37°С в течение 10 суток и последующего анализа на аммиак с помощью микродиффузионной техники. Раздельное определение аспарагина и глутамина можно провести с помощью предварительной этерификации (метанол-уксусный ангидрид) свободных карбоксильных групп, последующего восстановления (борогидрид лития) образовавшихся сложноэфирных групп и определения аспарагиновой и глутаминовой кислоты после кислотного гидролиза соответственно в виде v-гидрокси-а-аминомасляной кислоты и б-гидрокси-а-аминовалериановой кислоты. Содержание аспарагина и глутамина получают путем вычитания этих величин из содержания аспарагиновой и глутаминовой кислот после полного гидролиза немодифицированного белка. Полный ферментативный гидролиз белков без деструкции аминокислот можно осуществить, используя смешанные конъюгаты Сефарозы с трипсином, химотрипсином, пролидазой и аминопептидазой М [9] [c.260]

Для повышения специфичности расщепления сложноэфирной связи по сравнению со специфичностью кислотного гидролиза Эллиот ацилировал свободные аминогруппы при pH 5. В результате обработки ацилированного белка 0,01 и. щелочью при комнатной температуре в течение 1,5 час значительно увеличивается количество диализуемого азрта, что согласуется с гидролизом эфирной связи с образованием смеси ацетил- или формилсерилпептадов. От этих пептидов ацильные группы были отщеплены обработкой на холоду раствором хлористого водорода в метаноле окисление перйодатом продукта реакции позволило установить, что из общего числа остатков серина в цепи 62% составляют концевые свободные остатки. Описанные выше реакции, которые Эллиот [96] использовал для селективного расщепления Пептидных цепей по остаткам серина и треонина, протекают по следующей схеме [c.219]

Для полного гидролиза белков можно использовать сильную кислоту, сильное основание или специфические катализаторы — протеолитические ферменты. Наиболее часто используется для этой цели сильная кислота. Обычная методика гидролиза состоит в кипячении белка с 6 н. НС1 в запаянной ампуле (из которой предварительно откачивают воздух) при 110° в течение 12—96 час. В этих условиях пептидные связи гидролизуются с количественным выходом (для полного освобождения валина, лейцина и изолейцина требуется сравнительно большое время) и в результате гидролиза образуются гидрохлориды аминокислот. При нагревании с минеральными кислотами триптофан полностью распадается, а оксиаминокислоты серин и треонин подвергаются частичному разрушению. Эти потери определенным образом учитываются. Рацемизации аминокислот при кислотном гидролизе не происходит. [c.57]

Метод энантиомерной метки учитывает потери L-аминокислот в процессе обработки и дериватизации, но не учитывает их потери вследствие возможной рацемизации [4]. Степень рацемизации можно определить в отдельном эксперименте со смесью чистых стандартов. Отличительная особенность метода состоит в том, что он позволяет полностью компенсировать потерю некоторых лабильных аминокислот, таких как триптофан, цистеин, треонин и серии, в процессе кислотного гидролиза белков. [c.177]

Анализ аминокислотного состава включает полный кислотный гидролиз исследуемого белка или пептида с помощью 5,7 н. соляной кислоты и количественное определение всех аминокислот в гидролизате. Гидролиз образца проводится в запаянных ампулах в вакууме при ПО "С в течение 24 ч. При этом полностью разрушается триптофан и частично серии, треонин, цистин и цистеин. а глутамин и аспарагин превращаются соответственно в глутаминовую и аспарагиновую кислоты. В то же время пептидные связи, образованные аминокислотными остатками с разветвленной боковой цепью (Val, Не. Leu), из-за стерических препятствий гидролизуются частично. Особенно стабильны связи Val—Val. Ile—Ile, Val—De и Ile—Val. [c.34]

Гидролиз белков кислотой обычно сопровождается разрушением (в результате окисления) большей части триптофана, окислением цистеина в цистин и некоторым распадом серина и треонина. Щелочной гидролиз имеет то преимущество перед кислотным, что триптофан в этих условиях более стабилен. Однако при щелочном гидролизе имеет место интенсивный распад серина, треонина, цистина, цистеина и аргинина. Кроме того, при щелочном гидролизе наблюдается рацемизация природных аминокислот. Гидролиз белка как кислотой, так и щелочью сопровождается дезамидированием глутамина и аспарагина. Эти амиды аминокислот и триптофан можно выделить из гидролизатов, полученных при помощи протеолитических ферментов. Однако ферментативный метод также страдает определенными недостатками в частности, гидролиз может быть неполным и сам фермент может распадаться с освобождением аминокислот. Выделение аминокислот из белков и получение их с количественным выходом представляет очень сложную задачу, которой занимались многие исследователи. Эта обширная область всесторонне рассмотрена в монографии Блока и Боллинг [98]. [c.24]

Гидролиз пищевых продуктов. Чаще всего при определении аминокислотного состава пищевых продуктов используют кислотный гидролиз в 6 н. растворе НС1, проводимый в запаянных ампулах при температуре ПО—120°С в продолжение 22—24 ч [38, 48, 61]. Необходимо отметить, что гидролиз — наиболее несовершенная операция в аминокислотном анализе, так как в белках содержится несколько лабильных аминокислот (треонин, серин, цистин, метионин, гистидин, триптофан, тирозин), которые, по мнению многих авторов, заметно разрушаются даже при кратком кислотном гидролизе другие (валин, лейцин, изолейцин), наоборот, с трудом высвобождаются из полипептидных цепей при длительных сроках гидролиза (в течение 70—80 ч). Поэтому для определения истинных количеств аминокислот в белках при особо точных исследованиях гидролизуют несколько (3—4) проб белка при различных сроках (20—80 ч). Путем построения графиков зависимости количества аминокислот от длительности гидролиза находят истинное значение содержания лабильных аминокислот, экстраполируя кривую к начальному моменту гидролиза. [c.190]

Если не требуется хроматографировать пептиды, то надо с помощью гидролиза отделить аминокислоты от пептидов или белков. Чаще всего для этого применяют кислотный гидролиз, в результате которого триптофан разлагается полностью, а ци-стин, треонин, серии и иногда тирозин частично. Лучше всего проводить гидролиз 6 н. соляной кислотой. [c.121]

Вариантами кислотного гидролиза являются гидролиз муравьиной или уксусной кислотой, а также ионообменными смолами, Гидролиз органическими кислотами идет медленно и неполно, но более мягко, чем с 6 н. соляной кислотой. Гидролиз белка ионообменной смолой осуществляется благодаря наличию активной сульфогруппы ЗОзН у некоторых катионообмен-ников, которая действует как слабая кислота. Гидролиз протекает в мягких условиях, идет не до конца и удобен в том отношении, что отщепляющиеся аминокислоты сразу связываются смолой. Неполный гидролиз белка можно осуществить и соляной кислотой с целью получения коротких пептидов и исследования в них последовательности расположения аминокислот. Для этого применяют концентрированную (12 н.) соляную кислоту и гидролиз ведут при 37° в течение 2—6 суток. Характерные недостатки кислотного гидролиза сохраняются и в этом случае. Частичные гидролизаты содержат, как правило, пептидные фрагменты с остатками серина, треонина и аспарагиновой кцслоты в концевом положении, что говорит о различной чувствительности пептидных связей между различными парами аминокислот к кислотному гидролизу. [c.39]

При гидролизе белков кислотами рацемизации аминокислот не происходит, т. е. аминокислоты получаются в виде /-аминокислот. В этом состоит преимущество кислотного гидролиза перед щелочным. Большинство аминокислот устойчиво к действию кипящих минеральных кислот. Исключение составляют триптофан, который при таком гидролизе полностью разрушается, и окси-аминокислоты — серии и треонин, разрушающиеся частично. Продукты разложения триптофана превращаются в темнокоричневые вещества, называемые гуминами гумины образуются, вероятно, в результате конденсации индольного ядра триптофана с небольшими количествами образующихся во время гидролиза альдегидов [1]. Образование гуминов можно предотвратить прибавлением [c.23]

Гидроксильная группа свободного серина, подобно другим первичным спиртовым группам, химически мало активна. Однако она оказывает существенное влияние на свойства участка белка, соседнего с остатком серина. Близлежащие пептидные связи становятся менее прочными и легко разрываются при кислотном гидролизе Так, например, при гидролизе инсулина соляной кислотой пе удалось получить пептиды, содержащие связи, образованные аминогруппами остатков серина и треонина, — они разрушались в первую очередь. [c.207]

В ходе расшифровки аминокислотной последовательности часто прибегают к анализу аминокислотного состава соответствующих белковых фрагментов после их кислотного гидролиза. Для этой цели предпочтительно пользоваться современным автоматическим аминокислотным анализатором. Однако, поскольку необходимые меры предосторожности при проведении гидролиза соблюдаются не всегда, полученные результаты могут быть ошибочными. Обычно воспроизводимые результаты получаются в том случае, когда гидролиз ведут в запаянных ампулах (из которых тщательно откачен воздух), содержащих 1—5 мг белка и дважды перегнанную 6 н. НС1 при хорошо контролируемом нагревании до 108°. Однако различные белки или пептиды различаются между собой по скорости, с которой происходит при гидролизе разрушение серина, треонина, а иногда и тирозина. С неодинаковой скоростью происходит и высвобождение изолейцина, лейцина и валина. Только проводя гидролиз в течение различных промежутков времени и экстраполируя затем данные об аминокислотном распаде к нулевой [c.66]

Для анализа этих соединений, как правило, используется метод исчерпывающего кислотного гидролиза с последующим оире-делением аминокислотного состава гпдролизата. В продуктах гидролиза асфальтетшвых и порфириновых фракций обнаруживается до 12 нингидринположительных соединений, из которых, по крайней мере, шесть идентифицируются как белковые кислоты глицин, аланин, серин, треонин, аспарагиновая и глутаминовая кислоты (рис. 4.2), [c.134]

Определение качественного и количественного аминокислотного состава белков и пептидов проводят после их гидролиза кислотой или щелочью. Оба вида гидролиза разрушают некоторые аминокислоты. При щелочном гидролизе частично разрушаются цистеин, серии, треонин и происходит частичная рацемизация некоторых аминокислот. При гидролизе соляной кислотой (5,7 н., 105—110° С), которая обычно используется при кислотном гидролизе пептидных связей, практически полностью разрушается триптофан. В связи с этим содержание триптофана в пробах обычно определяют после щелочного гидролиза или спектрофотометрическим методом Кроме того, наблюдаются значительные потери оксиаминокислот (серина, треонина, тирозина), се-русодержащих аминокислот (цистеина, метионина) и частично пролива. При этом степень разрушения аминокислот зависит от чистоты и концентрации НС1, используемой для гидролиза, а также длительности и температуры гидролиза. Следует отметить, что примеси альдегидов при кислотном гидролизе приводят к значительной потере тирозина, а также цистеина, гистидина, глутаминовой кислоты и лизина, а примеси углеводов в больших концентрациях — к разрушению аргинина. [c.123]

При получении аминокислот белки прежде всего расщепляют с помощью основного, кислотного или ферментативного гидролиза [54]. В классическом методе кислотного гидролиза [55, 56] используют 6 н. НС1 ( 110 °С) или 8 н. H2SO4. Время реакции от 12 до 72 ч в зависимости от строения белка. Очень устойчивы к гидролизу пептидные связи, образованные лейцином, изолейцином и валином. При этом триптофан разрушается полностью, серин и треонин до 10%. [c.38]

Было известно, что простетическая группа сукцинатдегидрогеназы не идентична ФМН или ФАД и в отличие от них ковалентно связана с одной из аминокислот белка [373]. Последующими исследованиями установлено, что этот кофермент имеет структуру 8а-(Ы- -гистидил)-ФАД. При воздействии протеолитическими 4 рментами из сукцинатидегидрогеназы было выделено пептидное производное — СД-ФАД [373]. Затем в результате кислотного гидролиза из этого соединения получено 6—7-аминокислот — аланин, серин, глутаминовая кислота, валин, треонин и, кроме того, СД-рибофлавин, содержащий еще один аминокислотный остаток [373]. Были основания считать, что аминокислота связана с 8-СНз-группой рибофлавин [374]. [c.553]

При кислотном гидролизе триптофан разрушается полностью, а серии и треонин — на 5—10% разрушаются также цистин, цистеин и метионин. Из метионина получается главным образом метио-нинсульфоксид, который частично снова превращается в метионин в процессе гидролиза. Серусодержащие аминокислоты могут быть определены только в окисленных образцах (например, окисленных надмуравьиной кислотой). [c.178]

Аминокислотный состав П. определяют после их гидролиза (кипячение в 6 и. НС1 в течение 20 ч) до составляющих аминокислот, к-рыс анализируют хромато-графич. методом на сульфокатионитах с автоматич. фотометрироваиием окрагиенных продуктов их взаимодействия с нингидрином. Для определения содержания триптофана применяют щелочной гидролиз пептидов (кипячение в 5 н. NaOH в течение 20 ч), т. к. кислотный гидролиз приводит к разрушению триптофана, а также частично серина и треонина. Глутаминовая к-та при гидролизе подвергается значительной рацемизации. Полиаминокислоты с объемистыми алкильными боковыми группами (валин, изовалин, изолейцин, лейцин) гидролизуются значительно медленнее остальных. Гидролиз П. до аминокислот моишо проводить п при помощи ферментов (трипсин, эрепсин). [c.15]

Другие авторы, особенно Блэкберн, Миддлбрук и Филлипс [251], а также Деснуэлли и Казал [252], предполагали наличие оксазолиновых колец в белках и отмечали необычную лабильность пептидов серина и треонина к кислотному гидролизу. Позднее Эллиот [253, 254], используя динитрофторбензол в качестве реактива для обнаружения свободных аминогрупп, наглядно показал, что иод действием концентрированной серной кислоты пептидные связи, образованные аминогруппа.ми серина и треонина в фиброине шелка и лизоциме, превращаются в 0-эфирные связи. В такой же мере эффективна безводная фосфорная кислота [255]. Подобные перегруппировки были обнаружены для глутена и глиадина (по методу Эллиота) [256, 257], а также для лизоцима и рибонуклеазы (при инкубации С безводной муравьиной кислотой) [258, 259]. Нарита [260], [c.156]

Из других аминокислот, претерпевающих изменения при кислотном гидролизе, следует указать на серусодержащие которые окисляются до разнообразных продуктов (цистин, ци-стеиновая кислота и др.), а также оксикислоты, серии и треонин, которые окисляются до а-кетокислот (на 10—30%). Истинное содержание оксиаминокислот в белках определяется следующим образом. Навеску белка гидролизуют, отбирая через 24, 48 и 72 часа пробы (аликвотные количества) гидролизата, в которых определяют концентрацию серина и треонина. Далее строят график изменения их концентраций во времени и экстраполяцией до нулевого времени гидролиза находят истинное содержание оксиаминокислот. [c.39]

Гидролиз белков можно также проводить путем простого кипячения исследуемого образца с обратным холодильником в перегнанной из стекла постоянно кипящей НС1 или в смеси муравьиная кислота — НС1 (1 1) в течение 22—72 час (5 мл смеси на 1 мг белка). При этих условиях выход серина и треонина обычно составляет 90 и 95% соответственно. Поскольку триптофан в условиях кислотного гидролиза разрушается, эту аминокислоту обычно определяют при помощи спектрофотометра или по нингидриновой реакции после щелочного гидролиза белка (см. гл. 11). [c.79]

Первые данные об ацильной миграции показали, что пептидные связи, образуемые аминогруппами серина и треонина, при кислотном гидролизе лабильнее других пептидных связей [52]. Более определенная информация об ацильной миграции в белках была опубликована Эллиотом [53] обрабатывая фиброин шелка концентрированной серной кислотой в течение 72 час при 21°, он получил белок, в котором произошло около 60% из числа возможных миграций при остатках серина. Количественная оценка перегруппировок в фиброине шелка основывалась на [c.128]

К аминокислотам, разлагающимся нри кислотном гидролизе, относится прежде всего триптофан (главным образом в присутствии axapou и следов тяжелых металлов). Тирозин, фенилаланин, цистеин и аргинин также до некоторой стенени разлагаются. Аналогичной неустойчивостью обладают алифатические оксиаминокислоты, пз которых серии разлагается приблизительно на 10%, треонин— па 5% (Рис). Цистин разлагается в такой степени, что при его определении необходимо проводить специальную подготовку. [c.466]

Кислотный гидролиз фенилтиогидантоино] проводят нагреваниеА с 5,7 н. соляной кислотой при 150° в течение 16 -20 час. Гидролизационные трубки рекомендуют эвакуировать до 20—30 мм рт. ст. (Френкель-Кон-рат [2]). Этот метод более удобен, нежели щелочной гидролиз, но здесь также образуются артефакты (иапример, триптофан отщепляет серин, ФТГ треонина, серина и цистина также разлагаются). Аминокислоты, полученпые кислотным или щелочным гидролизом соответствующих ФТГ, хроматографируют обычным способом (рис. 190). [c.483]

В гидролизате ДНФ-энеапептида была найдена ДНФ-цистеиновая кислота, чем было доказано, что К-концевой аминогруппой является цистеиновая кислота. Из приведенных выше результатов следует, что структуру энеанентида составляет ряд последовательно расположенных аминокислот Цис-Ала-Глу Цис-Гис-Тр Вал Глу Лиз. Среди продуктов расщепления не был обнаружен пептид, содержащий связь гистидин—треонин, очевидно потому, что пептидные связи, в которых участвует треонин своей аминогруиной, прп кислотном гидролизе расщепляются очень легко. [c.494]

Об участии азотсодержащих структурных единиц в формировании гумусовых веществ свидетельствуют данные кислотного гидролиза. В гидролизатах обнаружены все аминокислоты, характерные для растительных белков, в том числе и ароматические. Так, при гидролизе 6 п. НС1 гуми-новых кислот и фульвокислот подзолистой почвы, чернозема и гумусовых веществ, образовавшихся в культуральной жидкости Aspergillus niger, пами (Кононова, Александрова, 1956) найдены цистин, лизин, гистидин, аргинин, аспарагиновая кислота, глицин, серии, глутаминовая кислота, треонин, аланин, пролин, тирозин, валин, метионин, фенилаланин, лейцин. В остатке гуминовых кислот после гидролиза найдены циклические формы азота типа индола (обзор работ см. Кононова, 1963). [c.138]

При этих условиях белки распадаются с образованием различных а-амино-кислот. При кислотном гидролизе, однако, разрушается триптофан и час-< тично серии и треонин. Для предохранения этих аминокислот от разруше- [c.17]

Рис [401 определил избыточный аммиак , образующийся при обработке различных белков кипящей 6 н. соляной кислотой в течение 24 час, вычитая количество амидного азота из общего количества аммиака, выделяющегося в отих условиях. Для эдестина и глобина лошади этот избыточный аммиак лишь немного больше величины, ожидаемой в результате раз-лон еиия серина и треонина, причем неучитываемый избыток составляет всего 0,04% общего белкового азота. Этот факт еще раз подтверждает устойчивость основных аминокислот к кислотному гидролизу. В случае инсулина неучитываемый избыток составил 0,5% общего азота, что, возможно, вызвано разложением тирозина, которого много в инсулине. Некоторые другие белки дают избыточный аммиак порядка 0,3%, и это позволяет предположить, что некоторые типы аминокислотных остатков, в том числе серии и треонин, могут быть более склонны к разложению, находясь в пептидно цепи, чем в свободном состоянии. Далее, некоторые виды связей могут делать остаток аминокислоты более уязвимым, чем другие так, например, остатки серина, несущие фосфоэфирные группы, могут быть особенно склонны к разложению [49]. Избыточный аммиак , освобождающийся при гидролизе горячей соляной кислотой, является в некоторой степени меро 1 деструкции аминокислот за счет взаимодействия с углеводами и продуктами их разложения. Следует принимать во внимание также аммиак, образующийся при разложении сиаловых кислот и гексозаминов (см. гл. 6 и 7). [c.129]

Смотреть страницы где упоминается термин Треонин, кислотный гидролиз: [c.209] [c.112] [c.667] [c.141] [c.214] [c.98] [c.206] [c.222] [c.369] [c.280] [c.376] [c.215] [c.483] [c.280] [c.376] [c.225] [c.66] [c.385] [c.36] [c.130]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология