Белки ширина линии ЯМР

Большинство гидрофобных боковых цепей (Ала, Лей, Иле, Вал, Фен, Про) расположены внутри белковой глобулы, а почти все заряженные полярные группы — на ее поверхности (обычное строение для глобулярных белков). Лизоцим обычно димеризуется при pH>7, и поэтому его лучше всего изучать при pH = 6 или более низких. Лизоцим человека и лизоцим белка куриного яйца были изучены с помощью метода ЯМР [7—И, 19—28], причем первый исследован более подробно. В ранних работах [7, 8] были установлены основные характеристики его спектра в ОгО и отмечена относительно высокая устойчивость к развертыванию при нагревании до 65 °С, что, по-видимому, отчасти обусловлено наличием четырех дисульфидных мостиков. Измерения при 220 МГц обнаруживают небольшие изменения спектра в температурной области 35— 60 °С, но в общем подтверждают этот вывод [24—27]. Однако при нагревании от 65 до 75 °С происходит денатурация и в спектре наблюдаются заметные изменения. (Природа этих изменений будет обсуждена детально немного позднее.) На рис. 14.3 показаны полные спектры 10%-ных растворов Лизоцима в ОгО (рО = 5,5) при 30, 54 и 80 °С. На рис. 14.4 приведены детальные записи слабопольных и сильнопольной областей спектра при температуре несколько ниже (65 °С) и несколько выше (80 °С) температуры денатурации. Для сравнения представлен спектр, рассчитанный и построенный на основании данных табл. 13.1 и, следовательно, соответствующий неупорядоченному состоянию белковой молекулы. Ширина линии была принята равной 10 Гц [11, 24]. Спектр при температуре 80 °С очень близок к спектру лизоцима в неупорядоченном состоянии, если учесть искажения, вызванные дисульфид-ными связями. Если эти связи разрываются, то линии спектра еще [c.353]

Исследование структуры белков методом ПМР в существенной мере осложнено большой шириной линий (около 10 Гц), характерной для спектров ПМР этих соединений, а также малыми различиями химических сдвигов Н различных аминокислотных остатков. С помощью ПМР трудно изучать даже сравнительно низкомолекулярные пептиды несмотря на то, что в данном случае дипольное уширение линий, свойственное [c.203]

Мы уже видели, что связывание субстратов и ингибиторов с лизоцимом и рибонуклеазой изменяет резонансные сигналы пептидных групп ароматических аминокислот, расположенных вблизи места связывания (см. разд. 14.2.2 и 14.2.3). Особенно важна информация, полученная при изучении резонансных сигналов от гистидиновых и триптофановых остатков лизоцима. Мы теперь рассмотрим прямые наблюдения резонансных сигналов малых молекул. Можно обнаружить изменения химических сдвигов и ширины линий для многих систем. Для определения положения активного центра эти наблюдения, по меньшей мере, столь же полезны, как и изучение резонансных сигналов протонов аминокислотных остатков белка. Однако, поскольку основное внимание в этой книге сосредоточено главным образом на самих полимерах, наше обсуждение этого аспекта исследований белков с помощью ЯМР будет относительно кратким. [c.387]

В разд. 14.3.6 мы указывали на использование фторид-иона как метки активного центра карбоксипептидазы А. Из других ионов наибольшее применение для этой цели получил хлорид-ион [120— 122]. Ядро имеет спин и вследствие этого обладает квадрупольным моментом (см. разд. 1.10). Как и для (см. разд. 13.3.2), время его спин-решеточной релаксации зависит от симметрии окружающего электростатического поля. Ион С1 в воде симметрично гидратирован, и его резонансная линия имеет ширину 10—15 Гц, в то время как для ССЦ ширина линии составляет около 14,5 кГц. Если атом хлора связан с белком (обычно через атом ртути, который сам присоединен, например, к сульф-гидрильной группе), то его резонансная линия должна быть широкой, но ширина линии будет уменьшаться пропорционально времени, которое ион проводит в водной среде (при условии, что обмен между связанным и гидратированным состояниями протекает быстро). Этот вопрос подробно рассмотрен Холландом и сотр. [122]. [c.394]

РСА основан на дифракции рентгеновских лучей на хорошо сформированных белковых кристаллах. На основании дифракционных картин рассчитывают распределение электронной плотности в кристалле, а по картам распределения электронной плотности восстанавливают пространственную структуру молекул белка с атомным разрешением. Метод ЯМР позволяет получать ценную информацию о динамике белковых структур в растворах. Он основан на измерении времен релаксации по ширине линий резонанса. К настоящему времени методами РСА и ЯМР [c.70]

Следует сказать, что вышеупомянутые методы измерения относятся к случаю радикала, вращающегося в изотропной среде, т. е. к случаю изотропной диффузии. Однако, в реальных ситуациях спектры ЭПР спиновых меток следует анализировать, исходя из того, что подвижность метки слагается из двух составляющих движения метки относительно молекулы биополимера и движения самой молекулы биополимера, несущего на себе метку. В случае, если метка жестко иммобилизована на поверхности биополимера, спектр ЭПР отражает подвижность только молекулы биополимера, поскольку движение метки будет определяться относительно медленным вращением белковой глобулы. Эффективное время корреляции можно определять, измеряя, например, расстояние между крайними широкими пиками и ширину линий в спектре (Кузнецов, 1976). Однако, случай, когда спиновая метка жестко связывается с молекулой биополимера, практически не реализуется. Па самом деле, спин-метка, связанная с белком, принимает участие в двух типах движения. Во-пер-вых, это быстрое вращение оси радикала и ее колебания относительно системы координат, связанной с глобулой. Это движение носит локальный характер. Во-вто-рых, это движение самой белковой глобулы, которое может носить изотропный характер (сферическая глобула) и замедляется с ростом вязкости окружающей среды. [c.279]

Пример 17-3. Расстояние между местом связывания и аминокислотным остатком белка. Если гистидин-15 лизоцима ковалентно связан со спиновой меткой, содержащей иминоксильный азот, и к ферменту добавляется субстрат — Ы-ацетилглюкозамин (НАГ), резонанс метильных протонов ацетамидной группы НАГ становится шире, чем в отсутствие спиновой метки (рис. 17-18). С помощью простого уравнения по ширине линии можно рассчитать расстояние между неспаренным электроном иминоксильной группы и протонами, ответственными за резонанс. После введения поправки на собственную длину спин-меченого соединения можно вычислить истинное расстояние между протонами суб- [c.512]

Гораздо меньшие затраты на аппаратуру требуются для гель-хроматографии в тонком слое (см. гл. П). В этом случае в конце опыта вместо объема выхода необходимо измерить расстояние от стартовой линии до пятна вещества — длину пробега ]56]. При стандартизации результатов хроматографии на бумаге длину пробега относят к пути, пройденному растворителями (определяют величину / /) в тонкослойной гель-хроматографии длину пробега исследуемого вещества относят к пути, пройденному хорошо идентифицированным веществом [72]. Для белков (а только для них тонкослойная гель-хроматография и применялась до настоящего времени) удается таким образом определять молекулярный вес, имея в распоряжении всего несколько микрограммов вещества [56, 72, 73]. В качестве стандартов здесь также используются белки, приведенные в табл. 22. Из фиг..36 видно, что отношение длины пробега ряда белков к пути, пройденному цитохромом с, является линейной функцией от логарифма молекулярного веса. Как показывает опыт, эту калибровочную линию нельзя считать достаточно универсальной, поскольку ее наклон довольно сильно изменяется от одной серии экспериментов к другой. Результаты определения молекулярного веса становятся более точными, если соответствующие стандартные белки наносят на каждую пластинку. Это вполне возможно, так как на пластинку шириной 20 см свободно можно одновременно нанести по меньшей мере 10 образцов. Благодаря несложному оборудованию и небольшим затратам вещества точность определения молекулярного веса этим методом можно повысить. [c.167]

То обстоятельство, что в спектрах ЭПР облученных белков не наблюдаются линии радикалов отдельных аминокислот, привело Горди с сотрудниками [39] к предположению о миграции радиационного повреждения по белковой структуре к наиболее с ла-бым местам, например, к атому S цистеинового остатка). Малая ширина сигнала ЭПР, отсутствие СТС и пониженный радикальный выход для многих нативных белков привели Л. А. Блюменфельда и [c.188]

Отрезанную от катушки с фильтровальной бумагой полосу бумаги длиной 13 см и шириной 1,3 см сгибают и размечают так, как это показано на рис. 42,а. Все операции проводят., ае дотрагиваясь пальцами до рабочей поверхности бумаги, так как контакт с белками кожи может привести к появлению пятен, не связанных с составом испытуемой смеси. Для осуществления такой предосторожности отрезают полосу бумаги на 4 см длиннее, чем требуется для опыта (по 2 см с каждого конца). К этим участкам можно прикасаться руками, а после окончания всех подготовительных операций их отрезают. Такая полоса показана на рис. 45. На нес наносят исходную (в) и конечную (б) линии хроматограммы, находящиеся на расстоянии 10 см друг от друга, а также участки, к которым можно прикасаться (а и [c.165]

Физические основы метода. Этот метод также дает важную информацию о динамике белков. Он позволяет определять амплитуды смещений атомов в структуре белка на коротких временах (10 -10 с). Он основан на том, что при поглощении у-кванта происходит переход ядра из основного Е1) в возбужденное состояние Е2) согласно обычному закону АЕ = Е2 — Е = Нм, где для ядерных уровней АЕ составляет 10 -10 эВ. Поглощение у-квантов наблюдается на ядрах тяжелых атомов Ре, Си, РЬ. Для изотопа Ре, содержащегося в природных соединениях в количестве 2,2%, величина при резонансном поглощении составляет 14,4 КэВ, а время жизни ядра Ре в возбужденном состоянии т 10 с. Отсюда согласно соотношению неопределенностей для энергии (Х.2.16) можно найти, что естественная ширина резонансной линии поглощения у-квантов составляет очень малую величину Г 10 эВ. [c.290]

После электрофореза полоски пленки помещают во влажную камеру. Для этой цели удобно использовать плоскую пластмассовую коробку с плотно прилегающей крышкой. Пленку кладут на подложку из фильтровальной бумаги с прямоугольной прорезью так, чтобы с подложкой соприкасались только края пленки. Подложки можно изготавливать, например, из нескольких слоев фильтровальной бумаги ватман № 3. Крышку коробки следует выстлать поролоновой губкой, которую увлажняют, чтобы во время иммунодиффузии в камере поддерживалась влажная атмосфера. Подложки также смачивают раствором электролита, используемым для пропитывания пленок. Полоски фильтровальной бумаги (ватман № I) шириной 1—2 мм пропитывают антисывороткой, проводя по ним пастеровской пипеткой, которую держат в вертикальном положении. Оптимальное количество антисыворотки и расстояние между полоской с антисывороткой и образцом подбирают эмпирическим путем. Если полоска содержит только часть необходимого количества антисыворотки, то остальной объем наносят уже после того, как полоску помещают на пленку. Оптимальное время диффузии следует определять в предварительных опытах как правило, для этого требуется 18—48 ч. Линии преципитации не видны на пленках и обнаружить их можно только после окрашивания. С этой целью избыток белка удаляют путем промывания пленки солевым раствором в течение нескольких часов, после чего преципитаты можно окрасить так же, как зоны, получаемые при электрофорезе на ацетате целлюлозы. Лучше всего пользоваться водорастворимыми красителями (пунцовый 5 или нигрозин). [c.245]

Пример 17-Б. Развертывание белков. Денатурация белков приводит к существенным изменениям в ЯМР-спектрах. Линии становятся уже, так как свобода движения возрастает, а химические сдвиги одинаковых аминокислот приближаются друг к другу. Рассматривая ширину и положение линии как функцию pH, температуры, концентрации различных денатурирующих агентов и т. д., можно проследить за независимым развертыванием различных частей белка. [c.503]

При денатурации в протонных спектрах белков неизменно происходят резко выраженные изменения. Обычно меняется ширина и положение линий. Будете ли вы ожидать, что одним из изменений будет появление или исчезновение расщепления [c.516]

При этом следует сделать одио предостережение. Многие практические аспекты двумерной спектроскопии ЯМР разрабатывались исследовательскими группами, изучающими белки. Для таких молекул общий спектр является чрезвычайно сложным, одиако он построен из хорошо определенных субъединиц спектров аминокислот. Спектры аминокислот содержат не так много типов мультиплетов, как правило, с довольно большими расщеплениями линий и короткими временами релаксации (когда они встроены в молекулу белка). Для этих случаев подходят очень небольшие значения А, . В спектрах обычиых органических молекул расщепления и ширины линнй изменяются в более широких пределах, поэтому простое использование рецептов задания параметров в последовательности OSY, полученных в экспериментах с белками, вряд ли даст хороший результат. Прн планировании эксперимента здесь нужно учесть данные одномерного спектра. [c.302]

Резкое уширение сигналов ЯМР в С0С1з может быть связано с агрегацией [107, 111, 118]. Показано [142], что ПБ-1-Г в хлороформе существует в жидкокристаллическом состоянии. В более разбавленных растворах полимеров (ниже 5%) мезо-фаза может не существовать, однако агрегация цепей сох раняется, как это следует из незав исимости ширины линий от концентрации полимера. Дипольное уширение (см. разд. 1.5) аналогично набл10дае-мому для нативных белков (см. гл. 14), но последнее несколько сильнее. Молекулярные массы доменов с жидкокристаллической структурой составляют около 10 для полимера с СП = 55 и могут [c.312]

Холлис и сотр. [77] наблюдали высокопольную область спектра а-химотрипсина на частоте 100 МГц. Молекула имеет грубо сферическую форму [12], молекулярная масса равна около 25000. Тепловая денатурация а-химотрипсина изучалась путем измерения температурной зависимости ширины линий протонов алифатических боковых цепей. Результаты соответствуют двухпозиционному процессу денатурации (см. с. 355), что подтверждается и другими физическими измерениями. Однако до сих пор об этом белке с помощью ЯМР получена лишь минимальная информация. [c.383]

Шпигель-Адольф с согрудниками опубликовали серию работ [53, 54], в которых исследовалось методом рентгенографии влияние различных физических и химических агентов на неориентированные образцы белков. Большинство образцов снималось под большими углами. Белок туберкулина [53] дает обычное белковое гало. Количественное значение этих работ очень сомнительно. Трудно понять, как можно давать плоскости с точностью до 0,001 при диаметре диафрагмы в 1 мм, расстоянии образца от пленки в 37,7 мм и при работе с нефильтрованным медным излучением. В [53] ширина линий используется для расчета размеров кристаллитов. [c.341]

Во-первых, типичный белок имеет около 850 линий, многие из которых перекрываются. Поскольку на ширину линии влияет подвижность молекулы (.табл. 17-2, правило 6), которая возрастает (грубая оценка) с уменьшением коэффициента диффузии и, следовательно, с увеличением молекулярной массы, пригодные для обработки спектры (в которых линии могут быть разрешены) получены в настоящее время только для молекул с молекулярной массой меньше 25 000. Во вторых, для однозначной идентификации лтти требуется знать полностью аминокислотную последовательность. Это не всегда возможно, но даже знание аминокислотной последовательности как правило не помогает из-за дополнительных взаимодействий, обусловленных третичной структурой. Для идентификации сигналов проводят избирательное дейтсрирование или изучают наблюдаемые при титровании определенных аминокислот изменения химических сдвигов. Но эти приемы не всегда помогают. В результате в сложном белке остается неидентифицированным значительное число линий. Тем не менее из спектров может быть получено много информации. [c.502]

САБ, ширина линий мет ильного и ароматических протонов существенно возрастает (рис. 17-16), что указывает на уменьшение подвижности этих протонов (табл. 17-2, правило 6). Наиболее простое объяснение изменения ширины линии состоит в том, что увеличение вязкости раствора в присутствии белка приводит к понижению подвижности протонов. Однако это объяснение не может быть правильным, потому что, как показано на рисунке, ширина линии ароматических протонов возрастает быстрее, чем метильных протонов. Если бы уширение было исключительно следствием возрастания вязкости раствора, вызванного добавлением САБ, все линии уширялись бы одинаково действительно, именно так и происходит, если добавляется у-глобулин (который не связывает сульфанилацетамида). Следовательно, изменение ширины линии, возможно, является результатом избирательного связывания так как изменение больше для ароматических протонов, ароматическое кольцо, вероятно, является главным местом взаимодействия. Отметим также, что ширина линии может слу- [c.508]

Определение соотношения отдельных фракций белка. При pH 8,6 белки сыворотки крови заряжены отрицательно и перемещаются в электрическом поле к аноду. Быстрее всего к аноду движется фракция, альбуминов, затем идут ар, аг,-, р- и у-глобулины (рис. 9, Л). Участки бумажных лент, на которых проявились пятна белков, делят поперечными линиями простым карандашом на полоски шириной в 3—5 мм и разрезают по этим линиям. Каждую полоску измельчают и помещают в отдельную пронумерованную пробирку, заливают 3 мл 0,01 М раствора NaOH, оставляют на час для извлечения краски из бумаги, а затем находят для каждого раствора значение оптической плотности на ФЭКе при 612 нм. Параллельно обрабатывают контрольную пробу. Для нее вырезают полоску из неокрашенных участков электрофореграммы. [c.91]

РИС. 13-8. Разложение спектров КД (Л) и поглощения (Б) голубого белка из Рзеи-с1отопаз, лежащих в видимой области, иа несколько перекрывающихся гауссовых кривых, которые соответствуют отдельным спектральным полосам (штриховые линии). Номерами от 1 до 6 обозначены полосы, занимающие в обоих спектрах одинаковые положения и имеющие одинаковую ширину. Сплошные линии — результат сложения гауссовых кривых. Каждая такая огибающая в йреде.лах ошибки измерений совпадает с экспериментально снятыми спектрами. Штрих-пунктирная часть огибающей и а спектре КД выше 700 нм вычерчена по форме полосы I в спектре поглощения [28], [c.17]

Таким образом, суммарный спектр ЯМР протонов коллагена должен характеризоваться широкой линией в форме пейковского дублета полушириной 12 Э, интенсивностью 2,9 ед., синглет полушириной 5 Э, интенсивностью 2,6 ед. и, вероятно, очень узкой линией от протонов воды интенсивностью 20 уел. ед., в которых полная интенсивность (площадь) спектра принята за 2,9 + 2,6 Н- 20 = 31,5. Учитывая, что амплитуда сигнала пропорциональна отношению его площади к полуширине, можно заключить, что при комнатной температуре сигнал ЯМР протонов воды в коллагене должен примерно на порядок — два превосходить сигнал протонов белковой составляющей. При низкой температуре, когда подвижность воды будет выморожена , ширина сигнала протонов воды достигнет обычного значения 15 Э, характеристики спектра ЯМР нативного коллагена будут определяться в первую очередь вкладом замерзшей воды, па фоне которой в 4 раза менее интенсивный сигнал протонов белка практически выделить невозмо>кяо. [c.110]

Отсюда следует, что обменное взаимодействие приюдит к сужению центральной части линии. Следует иметь в виду, что на краях линии, где1Аш > вг сигнал сохраняет Гауссову форму. Недавно был предложен простой графический метод определения oj путем построения линейных анаморфоз уравнений (2) и (3) [20]. Наличие обменного сужения линии служит для химика надежным указанием на существование достаточно быстрых (с частотой Wj) перемещений неспаренного электрона в системе. Этот эффект проявляется при так называемом переносе реакционного центра по цепи сопряженных связей. Сравнительно малая ширина сигнала ЭПР лоренцеюй формы от различных углей, несмотря на чрезвычайно высокие концентрации неспаренных электронов, однозначно указывает на наличие большого количества высокосопряженных систем. Как известно, этот вывод находится в полном соответствии с химическими рентгеноструктурными исследованиями углей [21]. Анализ опытных данных показывает, что частота обмена электронами между соседними конденсированными системами в углях равна по порядку величины 10 сек Ч Другим примером проявления обмена являются линии ЭПР неспаренных электронов в т-облученных белках, где благодаря делокализации электронов по регулярной сетке межцепочечных водородных связей линии ЭПР сужаются в десятки раз по сравнению с линиями ЭПР неспаренных электронов в f-облученных индивидуальных аминокислотах [12]. [c.124]

Эффект Мёссбауэра. Основной источник информации о динамической структуре белков заключается в изучении формы спектра относительного уширения спектра ЯГР и вероятности / резонансного поглош ения у-квантов без отдачи (максимум линии поглош ения, рис. Х.19). В твердом теле поглош ение без отдачи означает, что импульс отдачи принимает на себя весь кристалл в целом, обладаюш ий большой массой М. В этом случае энергия отдачи кристалла в М/т раз меньше, чем энергия отдачи одиночного ядра, т. е. пренебрежимо мала и намного меньше естественной ширины Г. Иными словами, в спектрах появляются линии, не смеш енные по энергии из-за отсутствия отдачи. Возбуждения колебаний отдельных атомов (фононов) в решетке не происходит, а импульс отдачи воспринимается всем кристаллом в целом. В этом, в суш ности, и состоит эффект Мёссбауэра. [c.291]

Температурные зависимости / и ДГ. Их изучение дает информацию о характере подвижности мёссбауэровских ядер и свойствах их окружения. Важнейшее преимущество данного метода заключается в возможности определять также и амплитуды движений атомов. В этом состоит его отличие от других резонансных методов, где определяются лишь частотные характеристики движений. На рис. Х.20 приведены кривые температурной зависимости / Т) для препаратов белков, меченных изотопом Ге. Для увлажненных белков вероятность эффекта слабо меняется в области низких температур, однако резко падает при температурах, превышающих —(60-30) °С, без уширения ГР-линии. Уширение мёссбауэровских спектров наблюдается только при температурах выше — 20 °С на конечных участках кривой / (Т), где вероятность эффекта уже мала (см. рис. Х.19). Сухой белок характеризуется слабой температурной зависимостью фактора / и постоянной шириной ГР-линии, что характерно для колебаний ионов Ге в твердой матрице. Зависимость / от относительной влажности образца Р/Ре) носит пороговый характер, что свидетельствует о кооперативном характере конформационной подвижности водно-белкового комплекса при степени гидратации Р/Ре 0,4 (см. 4 гл. IX). [c.293]

Сущность одного из видов метода ИК-спектроскопии — ИК-дихроизма — заключается в измерении разности поглощения света, поляризованного вдоль оси ориентации и перпендикулярно этой оси ориентации молекулы. С помощью измерения ИК-дих-роизма можно установить, как направлены важнейшие группы белка (> С = О и -КН) по отношению к оси его макромолекулы. Необходимыми для определения частотами пептидной связи белков являются следующие 3330 см" для валентного колебания -КН-группы (колебание ядер вдоль линии связи между атомами в молекуле), 1660 см для валентного колебания >СО-группы и 1550 см для деформационного колебания (колебания, обусловленные периодическими изменениями угла между связями отдельных атомов в молекуле ) КН-группы. Анализ смещения этих полос поглощения, изменения их ширины, формы, величины по- [c.213]

Агаровый или агарозный гель является наиболее подходящей средой для иммунодиффузии, В классическом варианте иммуноэлектрофореза и электрофорез, и иммунодиффузию осуществляют в одном и том же геле. Однако во многих случаях иммунодиффузию приходится проводить уже после того, как макромолекулы были разделены в другой среде, менее подходящей для иммунодиффузии. Паулик [1027] еще в 1852 г. применил иммунодиффузию для анализа антигенов, разделенных с помощью электрофореза на бумаге. Хотя иммунодиффузию можно осуществлять и на ацетате целлюлозы (см. ниже), Кон [695] предложил переносить антигены с ацетата целлюлозы в агаровый гель вместо того, чтобы проводить весь иммуноэлектрофо-ретический анализ на ацетате целлюлозы. Пленку из ацетата целлюлозы, на которой антигены подвергали электрофорезу, разрезают на две половинки одну из них окрашивают, а из другой вырезают полоску шириной 1 см (на расстоянии 1 см от центральной линии) и помещают ее на поверхность заранее приготовленного агарового геля, следя за тем, чтобы под ней не образовывались пузырьки воздуха. Можно также быстро окрасить одну половинку полоски, а вторую разрезать на кусочки, так чтобы каждый из них содержал отдельную электрофоретическую фракцию. Эти кусочки пленки помещают на поверхность агарового геля, оставляя между ними промежутки в несколько миллиметров. Пропитанные соответствующей антисывороткой полоски фильтровальной бумаги шириной 2 мм кладут на гель параллельно кусочкам пленки и на оптимальном расстоянии от них. Это расстояние определяется теми же факторами, что и в случае иммуноэлектрофореза в агаровом геле. После завершения иммунодиффузии с поверхности геля удаляют полоски бумаги и кусочки пленки, а затем фотографируют полученную картину преципитации. Для приготовления стабильных препаратов гель высушивают и окрашивают по методике, предназначенной для иммуноэлектрофореграмм в агаре. Удаление лишних белков перед высушива1нием геля, как правило, не является обязательным. [c.243]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология