Рацемизация и хроматография

О применении газовой хроматографии для определения рацемизации при пептидном синтезе сообщается в разд. 2.2.6.2, для установления аминокислотной последовательности — в разд. 3.6.1.2.2. [c.62]

Для определения состава пептида его подвергают гидролизу (в кислом растворе, поскольку щелочь вызывает рацемизацию) и определяют количество каждой из образующихся при этом аминокислот. Одним из наилучших способов анализа смесей аминокислот является разделение смеси на компоненты хроматографией, а иногда, после превращения в метиловые эфиры (зачем ), газовой хроматографией. [c.1048]

Гистидин-2-С был получен [5], по существу, при помощи описанного метода с общим выходом 7,1%. Чистота препарата контролировалась методом бумажной хроматографии. Была исследована возможность частичной рацемизации а-углеродного атома и найдено, что она может быть проведена не более, чем на 1,3%. [c.326]

В разд. 8.5 мы еще вернемся к хроматографии оптических изомеров соединений, склонных к рацемизации. [c.84]

Смесь аминокислот, образующуюся после полного гидролиза пептида химическими методами, можно подвергнуть разложению путем инкубирования с оксидазой ь-аминокислот не вступающие в реакцию о-аминокислоты определяют с помощью хроматографии [1821]. Можно также использовать оксидазу D-аминокислот в этом случае о наличии о-аминокислот судят по количеству выделившегося кислорода. Следует принимать во внимание возможность рацемизации в ходе полного гидролиза [1603, 2253]. Рацемизацию можно количественно учесть, поставив слепой опыт со смесью аминокислот в условиях гидролиза [1821]. [c.402]

Азидный метод. Рацемизация до сих пор не была обнаружена даже самыми чувствительными методами (газовой хроматографией) независимо от условий реакции [2495, 2566]. [c.407]

Хроматографическое разделение тройной смеси оптически активных ментена — ментона — ментола проведено с поляриметрическим анализом фракций. Поляриметрия в сочетании с хроматографией все шире применяется для анализа многих органических соединений. Вазон этим способом анализировал смесь ментола и неоментола. Показана возможность анализа смеси изомерных терпенов и ментолов методом газо-жидкостной хроматографии. Однако при таком методе анализа нужно считаться с возможной рацемизацией разделяемого соединения, поэтому для получения оптически чистых компонентов в препаративных количествах в некоторых случаях целесообразно применение адсорбционной хроматографии. [c.65]

Другой случай рацемизации, протекающей в мягких условиях, описан совсем недавно Оказалось, что оптически активные галоидпроизводные, например а-фенилэтилхлорид, рацемизуются при хроматографировании на силикагеле, в то время как при хроматографировании на основной окиси алюминия оптическая активность сохраняется. Это сообщение должно стать стимулом к исследованию возможности рацемизации других оптически активных соединений при хроматографировании. Вопрос этот имеет важное значение, поскольку хроматография ныне является одним из распространенных методов разделения и очистки веществ, в том числе и многих оптически активных. [c.297]

Обычную процедуру разделения [10, 38] можно применить к кинетически инертным комплексам, стабильным или подвергающимся в водных растворах медленной рацемизации. Это относится ко всем комплексам Со(1П), r(III), Rh(III)) Ir(III), Os(II) и Pt(IV) и в некоторых случаях к октаэдрическим комплексам Fe(II), Ni(II) и Со(II). Для катионных и анионных комплексов это обычно означает образование диастереомерных солей с оптически активным органическим или неорганическим анионом или катионом, но нейтральные комплексы разделить труднее как правило, для этой цели используют методы хроматографии или зонного плавления. Для кинетически лабильных октаэдрических или тетраэдрических комплексов Ре (II), Ре (III), Ni(II), Со (И), М,п(П), Си(II), Zn(II) и др. энантиомерные формы могут быть выделены только в случае их исключительной стабильности. Обычно их исследование проводят в асимметричном окружении, таком, как активный спирт (бутанол-2), или в водном растворе. [c.71]

Разделение рацемических аминокислот методом газовой хроматографии. (Диастереоизомеры метиловых эфиров АК не подвергаются разложению и рацемизации при т-рах до 175° в течение 1 часа.) [c.83]

Хроматография оптических изомеров (особенно энантиомеров) представляет особый интерес как метод определения степени рацемизации аминокислот в ходе пептидного синтеза и анализа природных пептидов, содержащих остатки О-аминокислот. Для газохроматографического разделения таких изомеров либо используют оптически активную неподвижную фазу, либо в молекулы анализируемых производных вводят второй асимметрический центр и получают таким образом пары диастереомеров. [c.79]

Полимер-субстратные взаимодействия были изучены методом газовой хроматографии данные использованы для определения степени рацемизации аминокислот и других природных соединений. Во всех случаях о-энантиомер рацемической смеси аминокислот элюировался из ь-аминокислотиой (полимерной) фазы раньше 1.-формы. Из рис. 5.14 следует, что преимущественно взаимодействует один энантиомер. Такой благоприятный стэкинг между акцепторной поверхностью полимера и субстратом невозможен, если субстрат имеет о-коифигурацию. Значение диметилсилоксановых [c.300]

При синтезе длинноцепочечных оптически активных пептидов отсутствие рацемизации в ходе конденсации имеет решающее значение, так как стереоизомеры крупных фрагментов почти невозможно разделить с помощью таких операций очистки, как кристаллизация, иоиообмениая хроматография и др. Оптическая чистота синтетических пептидов зависит от степени рацемизации на каждой стадии конденсации. Если представить себе, что на каждой стадии синтеза рацемизация составляет только 1%, то после 100 конденсаций продукт будет содержать всего 61% желаемого стерео-изомера. Этот пример показывает, какое огромное значение имеет проблема рацемизации при пептидных синтезах. Поскольку целью пептидных синтезов является получение биологически активных пептидных и белковоподобных веществ, биологическая активность которых зависит от оптической чистоты, то следует уделять особое внимание вопросам снижения рацемизации при пептидных синтезах. [c.170]

Определение аминокислот всегда представляло исключительно важную задачу биохимии ввиду того, что эти соединения играют роль кирпичиков при построении пептидов и белков. Широко применяемый, основанный на ионной хроматографии и теперь уже ставший классическим метод Мура и Штейна [1] не позволяет провести различие между энантиомерами. Между тем в хиральном аминокислотном анализе ощущается явная потребность так, например, в пептидном синтезе решающее значение может иметь оптическая чистота исходного материала, а результаты стереохимического анализа могут искажаться из-за рацемизации. Другой областью применения дгырдльного аминокислотного анализа является определение строения многих микробиологических продуктов, таких как полипептидные антибиотики, в состав которых входят о-аминокислоты, не обнаруженные у млекопитающих [2]. [c.173]

На пластинке Фиксион 50x8 изомеры-трипептиды Гли-L-Ала-Ь-Лей и Гли-О-Ала-Ь-Лей разделяются довольно хорошо. По интенсивности пятен разделенных пептидов можно оценить степень рацемизации препарата. Хроматографию проводят на уравновешенных пластинках в буферном растворе Е (табл. 10), т. е. во втором буферном растворе одноколоночной системы анализатора. Для получения оптимального разделения на пластинку наносят 10 мкл раствора образца в 0,01 н. НС1 (концентрация пептида 10 мг/мл). Хроматографируют при комнатной температуре до высоты 12—15 см. Если требуется количественно определить степень рацемизации (с точностью 5—10%), применяют денситометрию тонкослойных хроматограмм. Для получения более точных результатов целесообразно воспользоваться автоматическим анализатором. [c.261]

Для обнаружения рацемизации можно с успехом использовать ферментативные методы. С этой целью применяли ферменты, специфичные для гидролиза пептидных связей в таких пептидах, в которых вновь образующиеся карбоксильные группы взаимодействуют с а-аминокислотными остатками Ь-конфи-гурации [43]. Гистидилфенилаланиларгинилтриптофилглицин был синтезирован из Ь-аминокислот с применением в качестве конденсирующегося реагента N. М -дициклогексилкарбодиимида [44]. После обработки пентапептида трипсином произошло образование гистидилфенилаланиларгинина и триптофилглицина вместе с большим количеством негидролизованного вещества, как это было показано с помощью хроматографии на бумаге. Расщеплению подверглось только 37 /о пентапептида. Фермент лейцинаминопептидаза привел к образованию гистидина, фенилаланина, аргинина, триптофана и глицина в следующих молярных соотношениях 1 1 0,4 0,4 0,4. Таким образом, оба ферментативных метода показывают, что в продукте реакции содержалось только около 40% от исходного оптически чистого Ь-изомера. Лейцинаминопептидаза также применялась для того, чтобы показать, что октапептид, занимающий положения б—13 в молекуле АКТГ, был синтезирован без рацемизации [45]. [c.182]

Вследствие относительно высокой упругости паров соединений, содержащих фтор [50], газо-жидкостная хроматография применяется для разделения К-ТФА-эфиров ди-, три- и тетрапептидов, Газо-хроматографический анализ различных летучих производных коротких пептидов проводился рядом автором [51—56]. Бименом и Веттером, например, осуществлено хроматографическое разделение N-aцeтилиpoвaнныx аминоспиртов и полиаминов, полученных из лейцил-аланина, глицил-фенилаланина, фе-нилаланил-глицина, лейцил-аланил-пролина и лейцил-аланил-глицил-лейцина с последующим масс-спектрометрическим определением последовательности аминокислот в пептидных цепях [53]. Однако наибольшего успеха удалось достигнуть при применении, как и в случае разделения аминокислот, К-трифторацетилирован-ных метиловых эфиров (рис. 9). Указанный метод, по-видимому, имеет ограниченное применение при исследовании структуры пептидов [64] и степени рацемизации при их синтезе [55]. [c.267]

Для LXII и LXX циклизация под действием полифосфорной кислоты привела к ожидаемой смеси кетонов, которую удалось разделить препаративной тонкослойной хроматографией [15, 44]. Из оптически активных кислот были получены оптически активные кетоны в каждом случае смесь левовращающих кетонов образуется из правовращающих кислот и, наоборот, из левовращающих кислот получается смесь правовращающих кетонов. Однако вследствие относительно жестких условий циклизации можно ожидать по крайней мере частичной рацемизации при асимметрическом центре кроме того, вероятно, что состав образующихся продуктов будет зависеть от их термодинамической стабильности. [c.84]

Виниловые эфиры N-защищенных аминокислот получены методом переэтерификации с винилацетатом в присутствии хлористого палладия (ср. [2109, 2110]). По-видимому, их можно использовать для реакций конденсации с пространственно экранированными аминокислотами. Во время аминолиза виниловых эфиров отщепляется ацетальдегид, который можно связать, например, малоновым эфиром. До настоящего времени описаны главным образом виниловые эфиры трифторацетиламинокислот. Эти эфиры реагируют с эфирами аминокислот с образованием соответствующих пептидов при комнатной температуре реакция продолжается 10 час, а при нагревании до 65° — 40 мин. С помощью газовой хроматографии установлено, что во время этерификации и последующей реакции конденсации при синтезе TFA-L-Val-L-Val-OMe методом виниловых эфиров происходит незначительная рацемизация [2502] (относительно аминолиза пропаргиловых эфиров см. [266]). [c.151]

Попытка разделить диастереомерные соединения путем хроматографии на бумаге увенчались успехом лишь в нескольких случаях [1009, 1821, 2264а, 2266а, 2275]. Однако смесь метиловых эфиров диастереомерных трифторацетилпептидов очень легко разделяется с помощью газовой хроматографии. Благодаря высокой чувствительности этого метода его можно использовать и в случае неочищенных продуктов реакции. В последнее время газовая хроматография стала наилучшим методом для количественного определения степени рацемизации в ходе пептидного синтеза [2477, 2495]. [c.401]

В работе [2605] высказано предположение, что происхождение некристаллизующихся фракций высокомолекулярного поли-пропиленоксида при синтезе из оптически активного мономера е использованием стереоселективных координационных катализаторов связано с частичной рацемизацией асимметрического центра через карбониевый промежуточный продукт, приводящей к образованию частично атактического полимера. В более поздней работе [2632] было показано, что такая интерпретация в целом неверна и образование некристаллических фракций обусловлено изомерией положения. Путем исчерпывающего озонолиза и восстановления алюмогидридом лития полипропиленок-спд можно перевести в материал, содержащий дипропиленгли-коль. Так как дипервичные, дивторичные и первично-вторичные изомеры легко разделяются методом газовой хроматографии, можно показать, что некоторые (но не все) образцы некристаллического полипропиленоксида содержат много мономерных звеньев типа голова к голове и хвост к хвосту . Корреляция содержания звеньев с ориентацией голова к голове с оптическим вращением некристаллических фракций, синтезированных из оптически активного мономера, указывает на то, что в этих фракциях существует один асимметрический центр, инвертированный для каждого сочетания голова к голове . [c.441]

Первое успешное разделение энантиомеров методом газовой хроматографии было проведено для аминокислот. Сравнительно широкое распространение метод получил именно при исследовании этого класса соединений. Таким образом были установлены конфигурации аминокислотных компонентов в биополимерах, биологических жидкостях, в магматических и осадочных породах, а тжже в почвах [7, 48, 49, 50]. Был проведен геохронометрический эксперимент по определению возраста знаменитых свитков Мертвого моря путем оценки рацемизации природных аминокислот (Э. Джиль-Ав, частное сообщение). Метод газовой хроматографии был использован для изучения небольших величин энантиомерной чистоты аминокислот в экспериментах по обнаружению оптической активности в неживых системах [ 51]. Конфигурационную стабильность аминокислот белка при гидролизе пептидов и получении производных на фазе 6 тщательно исследовал Франк [52]. [c.89]

Первое количественное разделение энантиомеров немодифициро-ванною субстрата методом газовой хроматографии на комплексообразующих хиральных фазах было проведено Шуригом [69] в 1977 г. на примере 3-метилциклопентена (15) на хелате родия 10. С помощью газовой хроматографии для субстрата 15 определили 14%-ное обращение конфигурации (постоянное во время всей реакции), одновременное образование 4-метилциклопентена и перегруппировку в 1-метил-циклопентен при получении (Д) 15 кислотным дегидрированием (Д)-3-метилциклопентанола цис и транс) (см. рис. 4). Было также установлено, что при пиролизе ацетатов эпимерных спиртов в (Н)-15 при 530 °С не происходит рацемизации и перегруппировок [70]. Точное определение энантиомерной чистоты и количеств изомеров алкена позволили интерпретировать спектр кругового дихроизма [84] и оценить удельное вращение (К)-15 ([а]2о + 174,5 + 4°) [70], причем это значение вдвое превышает опубликованное в работе [ 85] и вычисленное теоретически [86].. Было найдено, что новое значение соответствует корреляции, существующей между [а] 3-замещенных цикло-пентенов и величиной, обратной их молекулярной массе [87]. [c.99]

Оказалось, однако, что активность синтезированного таким образом декапептида составляет всего лишь 1 % активности природного гормона. Сравнение удельного оптического вращения промежуточных соединений с удельным вращением тех же соединений, синтезированных другими исследователями, показало, что при синтезе тетрапептида Pro-Phe-His-Leu, осуществленном путем последовательного наращивания пептидной цепи, начиная с N-конца, имела место рацемизация. Действительно, в продуктах гидролиза свободного тетрапептида, разделенных с помощью ионообменной хроматографии, обнаружен лишь рацемический фенилаланин. Чреввычайно низкая активность синтетического УаР-ангиотензина I, составлявшая всего лишь 1 % активности природного соединения, может быть объяснена, по мнению Эллиотта, тем, что получающийся в качестве примеси Val -D-Phe -ангиотензин I является мощным ингибитором all-L-соединения, или тем, что на последующих стадиях синтеза относительное количество а11-ь-пептида резко снижается. [c.57]

Соединения (2) иДЗ) удалось различить только с помощью хроматографии на тонком слое окиси алюминия в системе вгор-бутанол/3%-ный аммиак (100 44), а также путем электрофореза на носителе при pH 2,1 или 9,1. Разделение этих соединений в препаративном масштабе было достигнуто хроматографией на нейтральной окиси алюминия в системе метанол/2 н. водный аммиак (I I). Строение октапептида (3) установлено его расщеплением трипсином, в результате которого образовалась смесь гексапептида (4) и дипептида (5), а структура последнего в свою очередь доказана сравнением с синтетическим образцом H-Asp-p-Arg-OH. До сих пор не установлено, в какой степени процесс транспептидации сопровождается рацемизацией. А5р -р-Уа1 -Ангиотензин II оказался на 50% активнее УаР-ан-гиотензина II в тесте на повышение кровяного давления у крыс с удаленными почками (ср. [10876]). Гросс [868] высказал предположение, что повышенная активность и пролонгированное действие А8р -р-Уа1 -ангиотензина II объясняются его большей устойчивостью к инактивации, которая вызывается не только эндопептидазами и карбоксипептидазами, но и аминопептида-зами. Точно таким же образом можно объяснить более высокую [c.65]

Вопрос о рецемизации был изучен затем Вейгандом и сотр. с применением метода газо-жидкостной хроматографии для разделения диастереоизомеров. Оказалось, что рацемизация не происходит при конденсации кapбoбeнзoк и- -вaлинa и метилового эфира -валина при 20 °С в хлористом метилене с использованием некоторых инаминов в качестве конденсирующих агентов. Особое преимущество применения инаминов вместо других дегидратирую- [c.121]

Изучение рацемизации пептидов посредством газовой хроматографии L-N-a-хлоро-пропиониламинокислот. 1. Влияние соседних групп на присоединение замещенных дипептидов к эфирам аминокислот. [c.82]

B53.№4.473-480 РЖБиохим.1976.17Ф27I. Аминокислотный состав и рацемизация аминокислот в коллагене мамонта, изученные с помощью газовой и жидкостной хроматографии. [c.394]

Разделение энантиомеров аминокислот представляет не только теоретический интерес в связи с изучением механизма взаимодействия хиральных молекул, но и имеет практическое значение как метод анализа биологических объектов и способ оценки степени рацемизации синтетических аминокислот и пептидов. Газовая хроматография позволяет разделять энантиоме-ры аминокислот только в виде их производных [120] (см. разд. 2.4.1.3), причем препаративное разделение сопряжено со значительными трудностями. Поэтому предпринимались многочисленные попытки разделить смесь энантиомеров, используя метод жидкостной хроматографии [121, 122]. Существует два подхода к решению этой задачи. Один из них сводится к превращению энантиомеров в диастереомеры до их разделения [123], а второй, наиболее часто используемый в настоящее время, заключается в том, что диастереомеры образуются в процессе хроматографирования в результате взаимодействия энантиомеров с оптически активным реагентом, присутствующим либо в подвижной, либо в неподвижной фазе. [c.56]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология