Материалы для гель-хроматографии

Логичным продолжением этой работы явились обобщения Д. Дика и Т. Иена [40], сделанные на основе сопоставления экспериментального материала по масс-снектральным исследованиям, данным дифракционно-рентгеноструктурных измерений, результатам гель-проникающей хроматографии, ультрацентрифугирования, электронной микроскопии, а также обсуждения пока- [c.235]

В молекулярно-ситовой хроматографии в качестве неподвижной фазы применяют пористые материалы. При этом поры имеют вполне определенные размеры, соответствующие размерам молекул одного из разделяемых веществ. Поэтому именно эти молекулы задерживаются в порах, а остальные остаются в растворе. В качестве пористого материала обычно применяют гидрофильные гели, поэтому метод именуют также гель-хроматографией. [c.255]

Для образования полисахаридного геля нужно, чтобы цепные молекулы были организованы в рыхлую пространственную сетку, в ячейках которой находится растворитель (вода). Одним из ключевых вопросов, ответ на который позволяет связать структуру полимера с его способностью к гелеобразованию, является природа узлов этой сетки. Это могут быть ковалентные связки между цепями, и в таком случае сетка представляет собой одну гигантскую трехмерную молекулу. Так построен, например, гликопептид бактериальной клеточной стенки, который мы уже рассмотрели, а из искусственных образований — сефадекс, полусинтетический материал для гель-хроматографии. Более типичны полисахаридные гели, в которых связи цепей в узлах не ковалентны. [c.164]

Подготовка исследуемого материала. Раствор белка, наносимый на колонку, должен иметь тот же состав и те же значения pH и ионной силы, что и исходный буферный раствор, которым уравновешен ионообменник. Образец переводят в исходный буферный раствор, подвергая его предварительно диализу или гель-хроматографии. Если объем пробы, предназначенный для ионообменной хроматографии, невелик, образец можно развести исходным буферным раствором. Нерастворимые компоненты удаляют центрифугированием или фильтрованием. Если [c.110]

Проникающая гель-хроматография. Этот метод довольно трудоемок при измерении размеров пор, если кремнезем применяется в качестве материала для набивки хроматографической колонки. Метод основан на определении глубины проникновения в кремнезем молекул или полимеров различных размеров, которое происходит до тех пор, пока не начнут препятствовать такому проникновению эффекты поглощения порами [184]. [c.691]

Для группового разделения пестицидов применяют также гель-хроматографию. Этот метод редко используют для очистки пестицидов, поскольку в той же области элюируется большое количество сопутствующего окрашенного материала. Но, с другой стороны, колонка с гелем допускает многократное ее использование с сохранением в течение длительного периода первоначальных объемов элюирования. [c.238]

За кратким введением и историческим обзором следует подробное изложение техники эксперимента. Теоретические основы гель-хроматографии еще не разработаны достаточно строго в соответствии с этим их изложению в книге уделено сравнительно мало места. Далее на отдельных примерах обсуждаются различные приемы и возможности метода. Из-за чрезвычайной широты применения метода мы могли детально разобрать лишь немногие конкретные задачи. Остальной экспериментальный материал, классифицированный в соответствии с характером решаемых проблем, обсуждается в заключительной главе монографии. [c.10]

Чтобы получить более полное представление о свойствах геля, позволяющих использовать его в качестве носителя для гель-хроматографии, необходимо расширить и уточнить общие положения, приведенные в предыдущей главе. Не всякий гель годится в качестве материала для заполнения колонок при гель-хроматографии. [c.28]

В предыдущей главе на отдельных примерах мы рассмотрели возможные пути применения гель-хроматографии. При этом, подбирая иллюстративный материал, мы руководствовались лишь методическими аспектами и совершенно не принимали во внимание., к какому классу принадлежат исследуемые вещества. Такой подход был вполне оправдан, поскольку приемы при работе с веществами разных классов в значительной мере одинаковы. В разделах Гель-фильтрация и особенно Определение молекулярного веса рассмотрена значительная часть имеющихся экспериментальных результатов. В раздел же Гель-хроматография была включена лишь очень небольшая часть обширного материала, описанного в литературе (в основном из области биохимических исследований). Поэтому в настоящей главе речь пойдет главным образом о "таких экспериментах, которые ранее-мы относили к гель-хроматографии в узком смысле. Эти данные в основном касаются разделения более или менее сложных смесей на относительно высоких слоях геля, поскольку присутствующие в них компоненты мало различаются по молекулярному весу. [c.211]

В гель-проникающей хроматографии стационарная фаза, состоит из полисахаридного материала с поперечными связями между молекулами, который набухает в воде (или другом растворителе), образуя гель. Небольшие молекулы в состоянии-проникать в дырки в полимерной матрице, но более крупные-молекулы не могут. Следовательно, большие молекулы быстро проходят через пространство между частицами геля, тогда как небольшие молекулы дольше удерживаются гелем и элюируются позднее. Таким образом, разделение основано на различии-в физических размерах молекул. [c.61]

Применение гель-проникающей хроматографии позволяет производить довольно быстрое фракционирование полимера с использованием небольших количеств материала, что является несомненным преимуществом этого способа по сравнению с другими, известными в настоящее время способами фракционирования. [c.240]

Для проведения анализа порцию анализируемого материала, содержащую не менее 10 мг воды, помещали во взвешенную пенициллиновую склянку, куда добавляли примерно 100%-ный избыток ДМП и 10 мл катализатора — 0,1 н, раствора метансульфокислоты в метаноле и нагревали нд горячей водяной бане около 1 мин. Реакционную смесь трижды подвергали газохроматографическому анализу. Вводимые в хроматограф пробы реакционной смеси чередовали с пробами стандартного раствора, содержащего известные количества ДМП и ацетона. Разделение осуществляли в изотермических условиях при 115—120 С и скорости газа-носителя (гелий) 60—75 мл/мин детектор — катарометр. [c.302]

Опыты проводили в изотермических условиях при температурах 164, 184, 204, 224 и 250 °С. Эксперимент при каждой температуре повторяли в среднем 8 раз. Исходный вес образца около 5 г. Приблизительно 0,5 г из остатка, который не продавливался через капилляр, брали из резервуара и подвергали анализу методом гель-проникающей хроматографии. Это позволяет исключить возможные эффекты деструкции в резервуаре, которые могут явиться следствием вторичных течений, возникающих непосредственно вблизи плунжера, или любых других причин. Измерения показали, что действительно материал, непосредственно прилегающий к плунжеру, в некоторой степени подвергается деструкции. Из дальнейшей обработки также исключали начальную часть экструдата длиной примерно 50 мм. При необходимости повторить опыт с ранее деформировавшимся материалом струю разрезали на мелкие гранулы, которые вновь закладывали в резервуар вискозиметра. От каждого образца отделяли небольшие порции для хроматографического анализа. Эти порции растворяли в тетрагидрофуране. [c.193]

Как видно из материала, изложенного выше, уровень изученности соединений микроэлементов в нефтях очень низок. Практически нефтяные соединения микроэлементов систематически не исследовались на молекулярном уровне с применением современных физико-химических методов. Большинство исследователей ограничиваются определением общего элементного состава сырых нефтей или их отдельных фракций, не ставя задачу выделить микроэлементные соединения в чистом виде. Очень мало с этой целью применяются также мягкие, недеструктирующие методы, как адсорбционная или гель-хроматография. Практически не исследована судьба микроэлементных соединений в процессе нефтепереработки. [c.181]

К наиболее распространенным физико-химическим методам определения молекулярной массы белков наряду с седиментационными относятся гель-хроматография (на колонках и в тонком слое), а также электрофорез в полиакриламидном геле в присутствии додецилсуль-фата натрия. Использование этих методов не требует сложной аппаратуры и большого количества исследуемого материала. Получаемые результаты хорошо воспроизводятся и, как правило, коррелируют с данными, полученными другими методами. [c.116]

Тонкослойный вариант гель-фильтрации был предложен Детер-маном [6], а также Иоханссоном и Римо [11 ] и оказался весьма полезным для микроанализа и быстрого сравнительного анализа нескольких образцов исследуемого материала. Эндрюс [1 ], а позднее Моррис [12] применили тонкослойную гель-фильтрацию для определения молекулярного веса белков на основе установленной ими линейной зависимости между логарифмом молекулярного веса данного белка и расстоянием, пройденным им в слое данного носителя за определенный помежуток времени. В соответствии с этим можно ориентировочно определять молекулярные веса неизвестных белков, если одновременно проводить гель-фильтрацию стандартных белков известного молекулярного веса. Когда исследователь располагает достаточно чувствительными методами обнаружения белка в слое носителя, для определения молекулярного веса достаточно всего лишь нескольких микрограмм исследуемого материала. При определении молекулярного веса белков гель-фильтрацией в тонком слое следует иметь в виду, что подвижность данного белка при хроматографии в гель зависит не только от молекулярного веса, но и от формы его молекул. Поэтому определение молекулярного веса с помощью гель-хроматографии правомерно лишь в том случае, когда форма молекул исследуемого белка незначительно отличается от < рмы молекул стандартных белков, используемых для калибровки. [c.238]

Важнейшей характеристикой стабильности полимерного материала является скорость его окислительной деструкции, измеряемая числом разрывов полимерной цепи в единице массы, происшедших в течение единицы времени (разрывы на килограмм полимера). Выше (см. гл. 2) была выведена формула, связывающая число разрывов цепи с изменением среднечисловой молекулярной массы ls = 6,02-10 (ЛII —Мпо), определенной, например, методом гель-хроматографии. К сожалению, наиболее простые методы измерения молекулярной массы дают не среднечисловую, а среднемассовую или близкую к ней средневязкостную величину. В этих случаях использовать формулу (2.101) можно только, если известно отношение Мт/М для неокисленного полимера. [c.227]

Если хроматографическая колонка заполнена пористым материалом, то часть общего объема колонки образует пространство между частицами материала, остальной объем занимает, во-первых, непористый скелет, а во-вторых, его поры. Подвижная фаза с разделяемыми веществами может свободно протекать только в объеме между частицами, в поры молекулы веществ проникают лишь в результате диффузии. Разделение веществ может быть основано либо на принципе различия в способности их молекул проникать в поры (гель-проникающач хроматография), либо на основании различия в их взаимодействиях с внутренней поверхностью материала (сорбционная хроматография) или с жидкостью, находящейся на этой поверхности (распределительная хроматография). [c.231]

Экспериментальные исследования, подтверждающие низкотемпературную теорию, выполнены на высоком уровне, с привлечением наиболее распространенных методов исследования состава и структуры химических соединений масс-спектрометрии, инфракрасной спектроскопии, гель-хроматографии с интерферо-метрическим и УФ-детектировйнием и др. В результате экспериментов получены производные полипептидов, полисахаридов, липидов— протобиополимеры, склонные к самосборке в устойчивые микросферы, стенки которых проявляют свойства мембран, обладают фотовозбудимостью и определенными электрическими свойствами. Микросферы могут селективно удерживать биологически активные соединения, благодаря чему развивается их каталитическая активность. Этот процесс авторы рассматривают как первый шаг в эволюционной цепи самоорганизации материи. [c.6]

Своеобразной разновидностью осадочной хроматографии является вариант этого метода, получивший название диффузионная осадочная хроматография [1501. Она от- личается от обычной осадочной хроматографии тем, что в ней основным механизмом массопереноса является диффузия, а не фильтрация раствора. Специфичность реакционной среды состоит в том, что она не допускает фильтрации раствора и конвективного перемешивания растворенного вещества. К таким средам относятся гели (студни), а также влагонасыщенный пористый материал и растворы в капиллярах. [c.196]

В книге дан подробный анализ современных технических приемов хроматографии и возможностей н0ве11Ш011 аппаратуры, а также полный справочный материал по обменникам и сорбентам.. Анализируются последние достижения в гель-фил5,трации, распределительно , адсорбционно , ионообменной, аффинной и тонкослойной хроматографии. В каждом из методов наряду с обычно хроматографией рассмотрены достижения ыетодов высокоэффективной хроматографии при высоком давлении в колонках и на микропластинках. [c.2]

Жидкость неподвижной фазы, как и прп гель-фильтрации, может быть просто иммобилизована внутри пористых гранул, илп, например, быть прочно связана с волокнами набухшей целлюлозы, илп же покрывать тонкой пленкой гранулы из сплошного материала и поверхность пор внутри них. Покрытие может осуществляться за счет смачивания, сорбции пли химическим путем. В последнем случае нередко пленка жидкости сводится к мономолекулярному слою вещества, способного удерживать близ своей поверхности молекулы колшонентов фракционируелюй смеси в соответствии со степенью их сродства к нему. В этом случае о соотношении растворимостей говорить трудно, так что лучше оперировать только понятиями сродства того или иного компонента к неподвижной и подвижной фазам, что, впрочем, с позиций теории хроматографии сведется к точно такой же, как при истинном растворении, количественной характеристике равновесного распределения фракционируемого материала между двумя фазами. Если в процессе распределительной хроматографии участвуют две истинные жидкости, то для осуществления равновесного распределения вещества они сами тоже должны быть в равновесии между собой, т. е. в случае частичной их растворимости друг в друге должны быть взаилшо насыщенными. [c.8]

В этом процессе неподвижная фаза представляет собой твердый сорбент. Равновесие процессов сорбции и десорбции в условиях, достаточно далеких от насыщения емкости сорбента, устанавливается независимо для каждого компонента смеси веществ. Различие в коэффициентах адсорбции обусловливает разницу в распределении этих компонентов между сорбентом и подвижной жидкой фазой. Соответственно чел1 большим сродством к сорбенту обладает данный компонент смеси, тем медленнее он будет мигрировать вслед за элюен-том вдоль колонки или пластинки. Если сорбция происходит на наружной поверхности сплошных гранул, то имеет место адсорбционная хроматография в чистом виде. Если же материал сорбента имеет пористую структуру и большая часть сорбирующей поверхности находится внутри его гранул, то в задержании молекул вещества в неподвижной фазе участвует еще и процесс их диффузии в неподвижной жидкости внутри пор, подобно тому как это имеет место при гель-фильтрации. Практически, впрочем, связывание вещества за счет сорбции доминирует. [c.9]

Метод гель-фильтрации в топком слое (ТСГФ) имеет ряд преимуществ перед колоночной хроматографией. Во-первых, на стартовую линию пластинки шириной, например, 20 см можно нанести 10—15 препаратов в виде пятен диаметром 3—5 мм, что позволяет сопоставлять результаты фракционирования многих препаратов в одном опыте, в идентичных условиях. Во-вторых, благодаря малой толщине слоя геля (0,4—1 мм) объем препарата может быть уменьшен до 5—20 мкл. Соответственно можно сильно уменьшить и количество фракционируемого материала, тем более что для его детектирования в этом случае можно использовать высокочувствительные методы окраски (см. ниже). Нет проблем и с обеспечением ровного слоя препарата — он мигрирует в виде пятна, как обычно при ТСХ. Наконец, нет необходимости ожидать, пока все компоненты фракционируемой смеси один за другим достигнут конца пластинки. Процесс разделения прекращают, как только наиболее быстрый компонент приблизится к нижнему краю геля. В этот момент регистрируют [c.162]

Теперь можно вернуться к процедуре посадки лиганда на матрицу. После окончания инкубации необходимо блокировать не использованные в реакции с лигандом активные группы матрицы. Для этого сорбент переносят в 1 М раствор этанола.мина или 0,2 М раствор глицина при pH 8 и снова перемешивают, как при посадке лиганда. Наконец, для удаления избытков лиганда и блокирующих агентов гель промывают на воронке 4—5 раз попеременно кислым и щелочным буферами, например 0,1 М Na-ацетатным (pH 4) и буфером. используемым для посадки лиганда, добавляя в оба буфера до 0,5 М Na l. Чередование pH при промывке способствует десорбции неспецифическп сорбированного на матрице материала. Промытый аффинный сорбент переводят в буфер для хроматографии и хранят на холоду. [c.377]

Одним из чрезвычайно интересных новых областей приложения масс-спектрометрии, которые активно изучается в настоящее время, является биохимия, или, точнее, определение параметров белков. Это является результатом внедрения таких методов, как MALDI и ионизации электрораспылением, которые обеспечивают экспрессное и точное определение средних молекулярных масс белков при малом количестве материала (на уровне пикомолей или ниже). Определяют среднюю молекулярную массу белка, так как для разделения различных изотопных пиков потребовалось бы спектральное разрешение по массе свыше 10000. В сравнении с другими, более традиционными биохимическими методами для определения молекулярной массы биологических макромолекул, такими, как SDS-PAGE и гель-проникающей хроматографии, масс-спектрометрия обеспечивает быстрое и легкое измерение, требующее малых количеств материала и обеспечивающее непревзойденную точность. Однако масс-спектрометрия является деструктивным методом, и использованный образец нельзя восстановить для последующих экспериментов. [c.307]

Наверное, простейшая по типу хроматография — это хроматография, использующая пористую инертную стационарную фазу. Разделение здесь достигается на основе соответствия размера и формы молекул размеру и форме пор, В методе гельпроникающей хроматографии 39] стационарной фазой обычно служит сшитая полистирольная смола, а подвижной фазой — органический растворитель, который в практических целях пропускают через колонку под высоким давлением. Очень близок к этому методу по технике исполнения метод гель-фильтрации [40], где стационарной фазой является сшитый полиакриламид (или другой гидрофильный материал), а подвижной фазой слух<ит водный раство- [c.318]

Проблема гомогенности белков в свое время решалась относительно просто с помощью традиционных методов анализа. Препарат считали гомогенным, если он не делился на фракции при электрофорезе или при ультрацентрифугировании. В настоящее время эти критерии гомогенности утратили свое значение. В нашем распоряжении появились более чувствительные методы исследования и стали обязательными более строгие показатели гомогенности. Ионообменная хроматография и электрофорез в геле являются сейчас наиболее чувствительными методами выявления так называемой микрогетерогенности белковых препаратов, какова бы ни была ее природа. Термин микрогетерогенность предложили Синг [82] в 1943 г. и Колвин с сотр. [6] в 1954 г. Из методов электрофореза в геле наиболее чувствительным для анализа микрогетерогенности белков оказался вертикальный диск-электрофорез. При использовании этого метода требуются весьма малые количества необходимого для исследования материала, с его помощью можно одновременно анализировать большое число образцов и к тому же он отличается высокой разрешающей способностью. Диск-электрофорезом можно обнаружить микрогетерогенность препарата даже в том случае, [c.31]

Выделение индивидуальных олигосахаридов представляет достаточно сложную задачу, которая не всегда может быть решена существующими методами. Для извлечения олигосахаридов из природного материала обычно прибегают к водной экстракции. Очистка олигосахаридной фракции от белков и других высокомолекулярных соединений достигается коагуляцией полимеров или путем гель-фильтрации. Для удаления гликозидов, соединений фенольного характера и других низкомолекулярных сопутствующих примесей могут быть применены различные варианты хроматографии или экстракции. Таким путем обычно сравнительно легко удается выделить достаточно обогащенную олигосахаридиую фракцию. [c.425]

Довольно обширный опытный материал о колоночной хроматографии смесей терпенов был собран Риганезисом [55]. В большинстве случаев в качестве сорбента использовали окись алюминия различной степени активности, а также гель кремневой кислоты. Адсорбционнохроматографическое разделение рассматриваемых смесей может быть успешным только в том случае, когда отдельные компоненты этих веществ значительно отличаются по полярности. [c.187]

При разделении аминов и аммиака на порапаках Р и Р не удается добиться удовлетворительной формы пиков [146]. На полимерах, модифицированных путем нанесения таких жидких фаз, как тетраэтиленпентамин или полиэтиленимин, возможно определение воды. Вытеснение влаги и свободного аммиака из расплавленного нитрита натрия продуванием воздуха и последующий газохроматографический анализ позволяют быстро определить pH и влажность этого материала [37 ]. Обермиллер и Шарлье [218] установили, что на колонках с порапаком Q (50—80 меш) возможен анализ смеси постоянных газов с оксидом углерода и газами, содержащими серу. Эти авторы использовали хроматографическую систему с двумя колонками. На колонке длиной 2 м с внутренним диаметром 1,2 мм при 75 °С разделяли СО , НаЗ, 50а и Н2О ( горячая колонка ), а на колонке длиной 10 м при —65 °С — Аг, Оа, N2 и СО. Полный анализ такой смеси осуществляли с помощью переносного хроматографа с двумя колонками и детектором по теплопроводности на термисторах. Для создания оптимальных условий отделения ЗОа путем соответствующего кондиционирования колонки в газ-носитель (гелий) добавляли ЗОа в концентрации 100 млн . [c.309]

Природа пористого материала. Перед использованием в молекулярноситовой хроматографии пористый материал должен набухнуть и впитать жидкую фазу, чтобы образовалась наполненная растворителем губка , в которую молекулы могут диффундировать. Поскольку молекулярно-ситовая хроматография проводится с различными жидкими фазами, начиная от воды и кончая углеводородными растворителями, то необходим большой набор различных пористых материалов — от гидрофильных, которые набухают в воде, до липофильных, которые впитывают неполярные органические растворители. Наиболее широко используемым гидрофильным материалом является искусственно сшитый полисахарид, полученный при обработке декстрана (природного полимера глюкозы) различными количествами эпихлоргидрина для получения определенной степени сшитости между цепями. Существует по крайней мере восемь различных степеней сшитости между цепями самый плотный гель будет исключать соединения с молекулярными массами свыше 700. Для полного исключения соединений на большинстве открытых гелей их молекулярные массы должны быть свыше 200 000. Пределы ситового исключения других пористых материалов, включая полиакриламид (имеющий десять различных степеней пористости) и гели агарозы, достигаются для соединений с молекулярными массами до 150000 000. Могут быть также использованы твердые , жесткие материалы, такие как стеклянные зерна с контролируемой пористостью. Молекулярно-ситовую хроматографию, в которой пример няют водную подвижную фазу, иногда называют гель-фильтрационной хроматографией. [c.597]

На ма[ссоперенос в порах твердого материала влияет целый ряд дополнительных факторов. Поскольку этот процесс используется во многих методах разделения (например, в гель-фильтрации, ионном обмене и газо-жидкостной хроматографии), целесообразно его обсудить отдельно. [c.470]

Гель-проникающую хроматографию (ГПХ) применяют для оценки изменений молекулярно-массового распределения в пленках [8]. По площади под полосой поглощения 1734 см измеренной в диапазоне от 1770 до 1690 m S можно определить концентрацию Tinivin 622 (поли-М-р-гидроксиэтил-2,2,6,6-тетраме-тил-4-гидроксипиперидилсукцината) до и после экспозиции пленки. Степень окисления, то есть карбонильный индекс (КИ) при различных условиях окисления получается из расчета поглощения на частоте 1713 см в Фурье-инфракрас-ном спектре на различных временных этапах окисления спектр неокисленного исходного материала используется как опорный сигнал. Все измеренные поглощения должны быть нормализованы на толщину пленки с помощью уравнения [c.264]

Водная суспензия при концентрации целлюлозных частиц порядка 12—15% (по массе) имеет структуру геля, к-рый реологически характеризуется наличием предела текучести и ведет себя подобно, напр., суспензиям бентонита или игольчатых кристалликов окиси алюминия, выращенных из основных солей. Эта суспензия способна поглощать до 50% (по объему) жидких углеводородов, напр, бензина, минеральных масел. Уд. поверхность может достигать 200000 (200 ж /г). Сухую дисперсию применяют как поглотитель масла, средство для перевода пищевых сиропов в порошкообразное состояние, наполнитель для лекарственных веществ и т. п. В спрессованном виде образуется очень прочный материал с большой сорбционной способностью. Он значительно превосходит другие материалы, применяемые для разделительной хроматографии. [c.534]