Белки определение колориметрическими

Для количественного определения белка используют колориметрические и спектрофотометрические методы, в некоторых случаях пользуются определением белка по содержанию общего азота в препарате. [c.29]

Для определения содержания иммобилизованного белка можно в принципе использовать все известные методы, применяющиеся при работе с растворимыми белками. Однако из-за светорассеяния, характерного для гелей агарозы, быстрого оседания их частиц, а также адсорбции красителей на гелях в определение содержания белка внесены отдельные модификации. Могут быть рекомендованы спектрофотометрический и колориметрический методы. [c.84]

В растворе миозина проводят определение белка одним из колориметрических методов (с. 81) и определяют активность фермента. [c.393]

Разработанные впоследствии колориметрические методы определения аминокислот сильно продвинули наши сведения об аминокислотном составе белков. Но и для осуществления этими методами требоваюсь. много времени и значительное количество вещества. [c.479]

I. Колориметрические методы определения белка [c.30]

При определении белка в лекарственных препаратах при помощи колориметрических методов предварительно строят калибровочный график с использованием стандартного образца белка, указанного в частных статьях (бычьего сывороточного альбумина, сывороточного альбумина человека или аминокислоты тирозина). [c.30]

Для отбора клеток, содержащих рекомбинантную ДНК, используют специальные приемы. Чтобы уменьшить количество кольцевых плазмидных молекул, образующихся ири сшивании фрагментов ДНК-лигазой Т4, рестрицированную плазмидную ДНК обрабатывают щелочной фосфатазой, удаляющей 5 -концевые фосфатные группы. Для отбора трансформированных клеток, содержащих гибридные плазмиды, проводят 1) тестирование на резистентность к определенным антибиотикам или колориметрическую реакцию 2) иммунологические тесты или выявление специфического белка - продукта клонированного гена 3) гибридизацию с зондом, комплементарным како-му-либо участку искомого гена. [c.78]

Существует два способа количественного определения красителей, связавшихся с белками элюирование фракций из электрофореграммы и их колориметрическое измерение и прямая электрофотометрия неразрезанной полоски. [c.60]

Колориметрическое определение молочной кислоты в биологических жидкостях применение катионитов для удаления белков [1272]. [c.276]

Триптофан обычно определяют в белках, которые пе подвергались гидролизу [165, 186]. Однако в последнее время были сделаны попеки стабилизации его молекулы, а также молекулы тирозина, цистеина и метионина при помощи реакции восстановления, которой предшествовала реакция десульфурации [92]. Кроме того, был разработан количественный метод колориметрического определения аминокислот в гидролизатах, полученных при действии селенитов щелочных металлов [56]. [c.392]

Пептиды и белки обладают сильным избирательным поглощением в области 210—220 нм. Однако при этом нельзя работать в буферных растворах, включающих карбонил со держащие соединения. Еще более чувствительным является определение пептидов при 192—194 нм, однако при измерении в этой области можно использовать лишь водные растворы фторидов щелочных металлов. По этой причине спектрофотометрическое определение белков в области ниже 210 нм используется крайне редко (лишь в специальных случаях ГПХ). По чувствительности определение белков при 210 нм сопоставимо с колориметрическим методом Лоури, Например, сывороточные белки определяли в концентрации 2 мкг/мл [79]. Поглощение при 210 нм характерно для пептидной связи, и, следовательно, белки имеют одинаковые коэффициенты экстинкции (табл. 35.8). [c.457]

Кульберг Л. М. и Сойфер П.А. Быстрый колориметрический метод определения белков в однородных, богатых белками пищевых концентратах животного происхождения. Биохимия, 1947, 12, вып. 1, с. 1 — 6. Резюме на англ. яз. 7560 [c.287]

Петровых Б. А. Простой колориметрический способ определения содержания белка в сыворотке крови [при различных заболеваниях]. Клинич. медицина, 1943, 21, № 6, с. 74—75. 7916 [c.299]

Разработанные впоследствии (к 1930 г.) методы количественного определения аминокислот, главным образом колориметрические, позволили определить до 100% аминокислотного состава белка. В последнее время для исследования состава белка стали применять новые методы химические, микробиологические, энзиматические и т. д. Среди них особое значение приобрел метод распределительной хроматографии . [c.705]

Муравьиная кислота — реактив для выделения платины и палладия, для отделения бериллия от алюминия и железа, для разделения вольфрама и молибдена уксусная кислота применяется для определения молекулярной массы веществ, для приготовления буферных растворов, как среда и ацетилирующее средство пропионовая кислота— для определения ароматических аминов антраниловая кислота — для обнаружения и гравиметрического определения кадмия, кобальта, меди, ртути, марганца, никеля, свинца и цинка бензойная кислота служит эталоном в колориметрии 2,4-диокси-бензойная кислота применяется для колориметрического определения железа, титана и других элементов лимонная кислота — в качестве сильного маскирующего комплексообразователя, для приготовления буферных смесей, определения белка в моче, как растворитель фосфатов при анализе удобрений молочная кислота — при полярографическом определении металлов, при электролитическом осаждении меди в присутствии железа, цинка и марганца нафтионовая кислота — для колориметрического определения нитрат иона, в качестве флуоресцирующего индикатора олеиновая кислота — для определения малых количеств кальция и магния, в титриметрическом анализе для определения жесткости воды пировиноградная кислота — для идентификации первичных и вторичных аминов, в микробиологии стеариновая кислота — для нефелометрического определения кальция, магния и лития сульфо-салициловая кислота — для колориметрического определения железа, в качестве комплексообразователя, для осаждения и нефелометрического определения белков трихлоруксусная кислота — как реактив на пигменты желчи и фиксатор в микроскопических исследованиях. [c.44]

На полоску САМ толщиной 0,2—0,5 мм и шириной 2,5 см обычно наносят 0,2—1,0 мкл образца. Для стандартного разделения компонентов сыворотки с последующим фотометрическим определением используется до 3 мкл образца, содержащего 0,1—0,2 мг белка. Оптимальное количество образца зависит от метода обнаружения. Для колориметрического обнаружения после элюирования необходимо наибольшее количество образца, а для фотометрического и радиоизотопного обнаружения — наименьшее. Если проводится фотометрическое обнаружение, наименьшее количество образца требуется в тех случаях, когда [c.295]

Для определения содержания маннозы была использована методика радиоизотопного разведения она дала величину около 2%, и, следовательно, весь нейтральный сахар в белке, определяемый колориметрическими методами, является маннозой [57], что подтвердило предположение, сделанное ранее Сёренсен и Хогаардом [66] на основании колориметрических исследований. [c.12]

Мы определили общее содержание железа в крови 10 особей моллюсков М. mus osa каждую особь исследовали дважды с помощью колориметрического метода Фишера и Прайса (Fis her, Pri e, 1964). Оказалось, что концентрация железа варьирует в пределах от 42 до 113 мкг/мл. Сначала, пытаясь охарактеризовать состояние железа в крови, мы обнаружили, что фракционирование с помощью хроматографии в агарозном геле дает единственный содержащий железо пик, соответствующий молекуле белка определенной величины. Затем путем центрифугирования в градиенте плотности сахарозы мы установили, что компоненты этого пика обладают коэффициентами седиментации, колеблющимися в широком диапазоне (от 66 до 20S). Такие свойства [c.97]

Для колориметрического определения содержания ys в белках используются цветные реакции Эммана, заключающиеся во взаимодействии 5,5 -дитио-б ис-2-нитробензойной кислоты [c.394]

БИУРЕТОВАЯ РЕАКЦИЯ — цветная реакция, которую дают с солями меди в щелочной среде биурет H2N ONH ONH2, амиды и имиды кислот, полипептиды, белки и другие соединения, содержащие группировки —СО—NH—, Б. р. — цветная реакция на белок — лежит в основе его количественного колориметрического определения. Если к щелочному раствору белка прибавить раствор uSO , появляется фиолетовое окрашивание. Чувствитель-1юсть Б. р. невысока. [c.45]

Возможные ошибки при определении pH колориметрическим методом. Неточности определения pH могут зависеть от солевой ошибки, обусловленной высокой концентрацией солей в растворе, изменяющей растворимость и диссоциацию индикатора от белковой ошибки, связанной с наличием в растворах белковых веществ (кровь, плазма и др.) от индикаторной ошибки, так как белки, обладающие амфотерными свойствами, взаимодействуют с кислотными и основными индикаторами, а также адсорбируют индикатор при этом происходит изменение общей концентрации его в испытуемом растворе таким образо.м, добавление значительных количеств индикаторов, которые, являясь слабыми кислотами и основаниями, могут, особенно в незабуференных растворах, изменять значение pH от температурной ошибки, зависящей от изменения константы диссоциации индикатора при колебаниях температуры так, -нитрофенол имеет при 0 С р/С = 7,30, а при 50° С рК = 6,81 с изменением температуры изменяется и pH стандартных растворов. [c.67]

Для количественного определения может быть использована биурето-вая реакция, хотя в случае пептидов также наблюдается положительный результат. Реакция основана на образовании фиолетового медного комплекса, интенсивность окраски которого (540 — 560 нм) может быть измерена колориметрически. Гораздо более высокую чувствительность имеет метод Лаури [62], в котором при участии остатков Тгр, Туг и Су8 образуется комплекс белка с фосфомолибденовой кислотой и медью. Это наиболее часто применяемый колориметрический метод определения малых количеств белка. Образующийся голубой комплекс (максимум абсорбции при 750 нм) достаточно устойчив для количественного определения. В качестве стандартного белка служит сывороточный альбумин. Предел обнаруживания 5 — 10 мкг/мгл раствора. Определению по методу Лаури мешают трис- [c.355]

Для установления количественного состава входящих в гликопротеин моносахаридов и аминокислот биополимер подвергают полному кислотному гидролизу, и состав гидролизата определяют обычными методами количественного анализа. Пептидные связи устойчивее гликозидных по отношению к кислотам, поэтому для полного расщепления на мономеры гликопротеины приходится гидролизовать в более жестких условиях, чем обычные полисахариды (6 н. НС1, 100—ПО °С, 24 ч) . Нужно иметь в виду, что как сахара, так и аминокислоты могут частично распадаться в условиях кислотного гидролиза, причем в ряде случаев можно с помощью ХОЛОСТЫХ опытов внести соответствующие поправки при анализе. Специфической для гликопептидов побочной реакцией в условиях кислотного гидролиза является возможная конденсация сахаров с аминокислотами, приводящая к окрашенной сложной смеси различных веществ, в том числе простейших карбонильных соединений (так называемая реакция Майяоа). Например, по данным Готшалка , потеря аминокислот при кислотном гидролизе богатых сахарами гликопротеинов может составлять до 30 %. Количественное определение моносахаридов проводят с использованием хроматографии, спектрофотометрической и колориметрической техники (см. гл. 14). Для анализа аминокислот применяют обычно методы, хорошо известные из химии белка. Так, количественный анализ аминокислотного состава проводят в автоматических анализаторах или с помощью газо-жидкостной хроматографии . [c.567]

Колориметрический метод определения количества белка по биуретовой реакции. Этим методом непосредственно определяют количество белка в растительных продуктах, используя цветную реакцию белка, обработанного концентрированным раствором щелочи с USO4. Белок исследуемого образца (муки, зерна и т. п.) переводят в раствор, с которым проводят биуретовую реакцию. Эта реакция характерна для пептидной связи, она получила свое название от производного мочевины — биурета, образующего с щелочным раствором USO4 комплексное соединение фиолетового цвета. [c.54]

По литературным данным, одределение тирозина в продуктах гидролиза белка и других биологических материалах принято производить колориметрическим методом, основанным на применении реакции Миллона-Бернгарта. Однако в отношении пригодности данного метода определения тирозина суш,ествуют разноречивые мнения. [c.217]

Метод состоит в колориметрическом определении интенсивности окрашивания раствора образующегося при нагревании о-толуидина с глюкозой в присутствии ук- сусной кислоты. Интенсивность окраски прямо пропорциональна концентрации глюкозы. Содержание глюкозы определяют в безбелковом фильтрате крови, поэтому белки предварительно осаждают 3%-ным раствором ТХУ. Метод является специфическим и дает возможность определять истинную глюкозу, так как другие редуцирующие вещества крови (глютатион, глюкуроновая кислота, аскорбиновая кислота и др.) с о-толуидиновым реактивом не дают окрашивания [c.130]

В основе чувствительного колориметрического метода определения белков в элюатах лежит биуретовая реакция, а также реакция с фенольным реактивом Фолина—Чокальто [77] в модификации Лоури [78]. Таким путем определяют белок в кон- [c.454]

В Присутствии примесей, поглощающих в ультрафиолетовой области при 260—280 нм, например компонентов нуклеиновых кислот, определение белков по поглощению при 220 нм идентично колориметрическому методу Лоури. Показано, что при этом можно работать в растворах хлористого натрия, какоди-лата, бората, фосфата натрия и калия, сульфата аммония (при концентрации выше 0,1 М), тогда как концентрация гидроокиси натрия, ацетатов, глицина, трис-буфера не должна превышать [c.458]

Другим колориметрическим методом определения белков является метод Лоури и др. [49]. Хейвкес и др. [31] применили его [c.249]

Примечание. Как мы установили, описанньп выше метод позволяет получать удовлетворительные н сходящиеся результаты с большим числом белков, значительно различающихся по аминокислотному составу н по степени чистоты. Однако следует помнить, что для определения основных аминокислот нельзя установить постоянных правил. Часто оказывается необходимым изменять условия эксперимента вследствие специфических особенностей. Напрпмер, если содержание в белке одной или нескольких основных аминокислот невелико, то для анализа полезно применять больщие количества белка или комбинировать микро-метод Косселя со специфическими колориметрическими методами, вписанными ниже. Разработанное нами видоизменение метода Косселя позволяет двум работникам проводить 2 полных определения аргинина, гистидина и лизина в течение примерно 12 час. При этом единственной аппаратурой, которая встречается не [c.31]

Примечание. Этот метод, которым пользовались авторы, открывшие триптофан, имеет не только исторический интерес. Поль, зуясь И.М, авторы выделили из казеина 1,5% триптофана. Это количество совпадает с теми, которые получены в ряде колори-метрически.х определений или выше. Только один исследователь (Дэкин [183]) получил более высокие результаты, выделив из казеина 1,7% триптофана. В обоих случаях пользовались техническим трипсином. Гопкинс и Коле [307] употребляли на 1 кг казеина 400 мл панкреатического сока. Дэкин [183] не указывает количества взятого экстракта панкреаса. Есть основания полагать, что в течение столь длительного переваривания (7—14 дней) в значительной степени гидролизуются белки панкреаса. Выделявшийся при этом триптофан считали за триптофан казеина. Наличие в панкреасе 1,4% триптофана, может быть, является причиной того, что из казеина выделяют больше триптофана, чем определяют наиболее точными колориметрическими методами. Для разрешения этого противоречия Шо и Мак-Фарлен [577] гидролизовали казеин трипсином. Но после гидролиза им удалось выделить менее 1% триптофана. Эта величина лишь немногим ниже устаксвленной колориметрически. [c.115]

Неионогенные моющие вещества осаждаются из раствора в виде комплексного соединения бария, вольфрамофосфата и моющего вещества. После отделения жидкости центрифугированием определяют колориметрически вольфрам в осадке добавлением гидрохинона в среде серной кислоты. Вариант Л применяется для определения в присутствии малых количеств белков, а вариант Б — в присутствии больших количеств. [c.323]

Применение. В микроскопии в качестве фиксатора (является одним из лучших фиксаторов). Применяется самостоятельно, а также служит исходным веществом для приготовления фиксирующих смесей, в частности смеси Санномия аналитической химии для колориметрического определения железа, для осаждения и нефелометрического определения белков. [c.377]

Прямые методы. 1. Сырую биомассу определяют после осаждения клеток центрифугированием. После центрифугирования отмытых клеток можно определить сухую массу. Оба метода не свободны от довольно больших систематических ошибок. 2. Гораздо большую точность обеспечивает определение общего азота (метод микро-Кьельдаля и микродиффузионный метод определения аммиака), а также определение общего содержания углерода (по ван Слай-ку-Фолчу). 3. В повседневной практике часто определяют содержание бактериального белка. Хорошие результаты дают модификации биуретового метода и другж колориметрические методы. Микрометоды основаны на измерении количества характерных компонентов белка тирозина, триптофана (по Лоури или Фолину). [c.192]

Козловский В. С. Упрощенный колориметрический способ определения протеолити-ческой силы ферментов желудочного сока. Сов. медицина, 1949, № 8, с, 32, 7400. Козловский В. с. и Латыш А. П. Колориметрический способ определения общего белка в сыворотке крови, основанный на реакции Мульдера. Врачеб. дело, 1949, № 6, стб. 491-494. 7401 [c.281]

К цветным реакциям относятся колориметрические методы, более или менее специфические для пентоз и дезоксисахаров. Эти методы рассмотрены в обзоре Дише [3]. В общем присутствие пентозосодержащих соединений не мешает определению дезоксипентозы, и наоборот. В то лее время большинство колориметрических реакций па сахар чувствительно к белкам, и результаты определения пентозы могут быть искажены наличием фурфурола, происходящего из мукополисахаридов. Желательно поэтому до [c.102]

Соединения, содержащие 2,4-динитрофениламиногруппу, при действии NaBHi дают интенсивное красное окрашивание. Это -может быть использовано для колориметрического определения таких соединений. Метод нашел применение в химии пептидов и белков для анализа аминокислот [2310]. [c.546]

Щелочной гидролиз и определение триптофана. Триптофан при кислотном гидролизе белка распадается почти полностью и поэтому для его определения, как правило, проводится отдельный анализ с щелочным гидролизом. Ранее для определения триптофана в щелочном гидролизате широко использовались многочисленные модификации колориметрического метода, основанного на реакции триптофана с пора-диметнламинобензальдегидом [7, 17, 42, 68]. Однако этот ме тод применим лишь при определении триптофана в чистых растворах и в какой-то мере в гидролизатах чистых белков, В случае использования его для определения триптофана в гидролизатах пищевых продуктов среда окрашивается в rpflSHOBato-зеленые тона, соверщенно не сопоставимые с ярко-синим стандартом [47]. [c.191]

На САМ удобно оценивать количественно содержание фракций. САМ, предназначенную для колориметрических определений, пропитывают парафиновым маслом, например Shell Whitmore Oil 120, или уксусной кислотой, при этом САМ становится прозрачной, и на ней можно измерять поглощение и отражение. Поскольку САМ растворима в ряде органических растворителей, при проведении некоторых количественных определений можно использовать это ее свойство. Полученные растворы можно анализировать, колориметрически или сцинтилляционным методом. Для иммуннодиффузии и иммуноэлектрофореза САМ можно применять даже без агара. Разделяемые на САМ соединения, как правило, дают узкие зоны, что позволяет для большинства типов разделений уменьшить общую длину пути до 6—12 см. Миграция на меньшее расстояние приводит к сокращению длительности электрофореза и меньшему уширению зон под влиянием диффузии. В результате разделение, например, сывороточных белков можно осуществить при градиенте поте.ч-циала в 20—25 В/см за 60—90 мин. [c.293]