Центрифугирование в градиенте плотност зонное

Центрифугирование в градиенте плотности используют для разделения компопептов смеси нолимеров па дискретные зоны (т. наз. зонное центрифугирование). В аналитич. УЦ возможно обнаружение микрогеля, оценка его мол. массы, определение различия в плотностях компонентов в р-ре, получение распределения гю мол. массам и химич. составу, оценка средних мол. масс (включая М ), изучение избирательной сорбции одного из растворителей полимером. Метод не чувствителен к наличию примесей, даже если они высокомолекулярны или присутствуют в больших количествах. [c.200]

ВЫХ оснований или нуклеотидов, полученных после расщепления полимера (подробнее — см. стр. 58). С нуклеотидным составом ДНК однозначно связаны два физических свойства двухцепочечных комплексов, которые часто используются для характеристики полученных препаратов 2 . 2в Одно из них — так называемая температура плавления Гщ — это температура, при которой происходит распад двухцепочечного комплекса на одноцепочечные молекулы этот процесс легко наблюдать по изменению УФ-поглощения или оптического вращения раствора (подробнее см. в гл. 4). Другая характерная константа ДНК — плавучая плотность р — может быть определена из результатов равновесного ультрацентрифугирования Такое центрифугирование проводят обычно в растворах солей, обладающих высокой плотностью чаще всего применяют хлорид или сульфат цезия. При длительном центрифугировании устанавливается градиент плотности раствора, а ДНК собирается в узкой зоне, где существует равновесие между центробежной силой и выталкивающей силой, которая определяется разностью плотности осаждаемого вещества и применяемого солевого раствора в данной зоне. Равновесное центрифугирование в градиенте плотности Сз С1 может служить не только аналитическим методом для характеристики препарата ДНК, но и полезным препаративным методом для разделения ДНК, различающихся по нуклеотидному составу. Подобным же образом препаративное ультрацентрифугирование в градиенте плотности сахарозы используется для разделения молекул ДНК, различающихся по скорости седиментации. [c.31]

Сходными выглядят и данные зонных методов (рис. 2) — седиментационные кривые распределения С (%) в зоне раствора полимера при центрифугировании в градиенте плотности и профиль зоны раствора, проходящего хроматографическую колонку. В процессе обоих явлений зона претерпевает расширение, вызванное [c.8]

Аналитическое ультрацентрифугирование полимеров [1, 2, 4, 12] включает в себя три следующих экспериментальных метода скоростную седиментацию, изучение седиментационного равновесия и процесса приближения к нему. Скоростная седиментация позволяет определить константу седиментации и полидисперсность образца. Седиментация макромолекул в зоне (зонное ультрацентрифугирование) — ценный метод обнаружения гетерогенности высокомолекулярного образца. Метод приближения к равновесию позволяет рассчитать молекулярную массу М и получить сведения о неоднородности полимера, а изучение седиментационного равновесия (состояния, достигаемого транспортным переносом макромолекул, хотя сам метод и не является истинно транспортным) — молекулярную массу (надежнее, но с большей затратой времени, чем в предыдущем методе) различных типов усреднения. Метод центрифугирования в градиенте плотности заключается в исследовании седиментации, состояния равновесия и приближения к нему в условиях искусственно создаваемого в кювете градиента плотности это — широко используемый метод определения молекулярной массы, наличия неоднородности и ее типа, служащий и для препаративных разделительных целей. [c.14]

Метод ультрацентрифугирования в градиенте плотности [115, 1Щ. Когда при центрифугировании в градиенте плотности достигается седи-ментационное равповесие, концентрации макромолекул распределяются но гауссову закону ширина полосы седиментации определяется двумя противоположно действующими факторами — тенденцией макромолекул диффундировать в область более низких концентраций и их стремлением седиментировать в зону с соответствующей плотностью. Было показано, что в такой системе приближенное значение молекулярного веса может быть определено по следующей формуле [c.240]

Это соотношение подсказывает простой способ определения константы седиментации исследуемых молекул путем сопоставления их с маркером — веществом такой же природы (белок, ДНК или РНК), но с известным значением Sjo.w. Оба эти вещества надо, предварительно смешав, разделить зонально-скоростным центрифугированием в изокинетическом градиенте плотности, а затем по соотношению расстояний, пройденных их зонами от мениска, рассчитать искомую величину S2o,w = S2o, m(///m). Буквой м обозначен маркерный препарат. Для цилиндрической части пробирки отношение расстояний от мениска можно заменить отношением соответствующих им объемов. Опорожнять пробирку в этом случае удобнее, начиная с мениска (см. ниже). Объемы нередко заменяют числом капель. При этом следует проявлять осторожность, так как объем падающей в коллектор капли зависит от поверхностного натяжения и плотности жидкости, а они неодинаковы на разных участках градиента плотности. [c.205]

В самом начале центрифугирования следует задать центрифуге минимальное ускорение (см. главу 2). Именно в процессе набора скорости чаще всего происходит смешивание слоя препарата с верхней частью градиента, в результате чего существенно ухудшается разделение зон. Останавливать центрифугу при фракционировании в градиенте плотности следует без торможения. Рабочую скорость центрифугирования, как правило, выбирают максимально допустимой для данного ротора с учетом плотности раствора. Для сахарозы это в большинстве случаев несущественно ее плотность достигает значения 1,2 г/см лишь при концентрации 45%. Работа на максимальной скорости позволяет уменьшить продолжительность центрифугирования и расширение зон за счет диффузии. [c.220]

Следует иметь в виду, что профиль равновесного градиента плотности сохраняется только во время вращения ротора при расчетном числе оборотов. При замедлении вращения перед остановкой ротора диффузия уже не уравновешивается центробежными силами. Это особенно проявляется у обоих концов градиента, в то время как в средней его части наблюдается определенная компенсация диффузия соли из какого-либо среднего слоя в сторону мениска пополняется диффузией в него из соседнего слоя со стороны дна пробирки. Практически в срединных трех четвертях длины градиента форма его сохраняется вплоть до полной остановки ротора. Именно здесь, а не вблизи краев градиента, должны располагаться зоны фракционируемых частиц. Само собой разумеется, что раскапывать равновесный градиент надо немедленно по окончании центрифугирования. [c.244]

Если же начальные плотности солевых растворов (р ), объемы градиентов и скорости вращения для углового и бакет-ротора одинаковы, то в угловом роторе в силу уменьшения длины градиента значение Ар будет намного меньше. После остановки ротора и переориентации градиента картина распределения зон частиц в. угловом роторе будет такой же, как при центрифугировании в пологом градиенте плотности в бакет-ро-торе зоны окажутся сильно раздвинутыми между собой, хотя [c.256]

Первые две процедуры позволяют избавиться от фрагментов тканей, обрывков клеток и крупных ядерных органелл (ядер, митохондрий). Супернатант после второго центрифугирования фильтруют и центрифугируют 60 мин при 145 000 Полученый осадок ресуспендируют в среде гомогенизации и центрифугируют 120 мин при 95 000 g в ступенчатом (25 %, 30, 40 %) градиенте плотности сахарозы, содержащем 5 мМ имидазола-НС1 (рН=7,2). Образовавшиеся белковые зоны, локализованные в верхних слоях растворов сахарозы, отбирают и разводят в 20—25 раз средой гомогенизирования и центрифугируют с целью концентрирования при 145 ООО g в течение 60 мин (ротор РПУ-35). Супернатант отбрасывают, а осадок ресуспендируют в среде хранения, содержащей 25 % (по объему) глицерина, [c.220]

Принципиально возможно определение коэффициентов седиментации и, следовательно, приблизительных молекулярных масс даже не вполне индивидуальных белков, если имеется подходящий метод для измерения относительных концентраций белков, например путем измерения их ферментативной активности. Изучаемый образец осторожно наносится на раствор сахарозы с линейным градиентом концентрации и подвергается высокоскоростному центрифугированию в роторе с откидывающимися пробирками (в ба-кет-роторе). Обычно в качестве стандарта в раствор добавляется белок с известным коэффициентом седиментации s. Вещества с различными седиментационными свойствами отделяются в градиенте плотности друг от друга, образуя полосы. По окончании центрифугирования в нижней части центрифужной пробирки проделывают небольшое отверстие, фракции сливают и анализируют. Если фракции отбирают через различные промежутки времени центрифугирования, то временная зависимость расстояния от мениска до зоны белка, обладающего активностью, должна быть линейной. Для данного времени центрифугирования соблюдается следующая [c.130]

Пря улыпрацентрифугировании для разделения используется седиментация, зависящая от размера, плотности и формы молекулы белка. Центрифугирование в градиенте плотности (зональное центрифугирование) часто применяется для разделения белков, а также для разделения органелл и вирусов. Одной из характеристик белка служат данные седиментационного анализа в ультрацентрифуге (разд. 3.5.4). Положение возникающих белковых зон можно наблюдать с помощью оптических методов. [c.349]

Используя соответствующую соль, можно создать устойчивый в условиях центрифугирования градиент ее концентрации, а тем самым и градиент плотности растворителя. Если природа соли и распределение ее концентрации таковы, что плавучая плотность биополимера выше, чем плотность растворителя на мениске, но ниже, чем у дна пробирки, то по мере перемещения к дну пробирки биополимер достигнет участка, где множитель 1 - / о/р станет равным нулю и дальнейшая седиментация прекратится, т.е. возникнет устойчивая зона нахождения биополимера. Наиболее широкое применение для этой цели нашли растворы солей цезия, которые позволяют получить растворы с плотностью, достаточной для остановки перемещения нуклеиновых кислот. Эксперименты подобного рода весьма дороги, так как требуют длительной, обычно на протяжении нескольких суток, работы ультрацентрифуг. Однако они открывают некоторые уникальные возможности. Например, удается разделить биополимеры, различающиеся лишь изотопным составом. Молекулы ДНК из одного вида микроорганизма, выращенные на средах, содержащих в качестве источника азота соли аммония и 15NH4, не отличаются по объему, но имеют разные массы и, следовательно, различные плавучие плотности. Поэтому при равновесном центрифугировании и градиенте плотности хлорида цезия они образуют отдельные зоны. Пример применения этого метода для доказательства полуконсервативного характера репликации ДНК приведен в 5.1. [c.244]

В принципе, реальные эксперименты можно вести при фиксированном (или исключенном) времени, но переменной координате, или при фиксированной координате, но переменном времени. Возможность подобной перестановки координата время — отличительный признак истинно транспортных методов однако, в некоторых вариантах использования ультрацентрифуг или электрофореза получаются равновесные, неподвижные кривые распределения концентрации ( полосы ), например, при изоэлект-рической фокусировке, зонном и скоростном центрифугировании в градиенте плотности и т. п. [c.4]

Преимущество метода зонного центрифугирования — возможность определения 5 и Л для весьма малого количества полимера. Но еще более ценна возможность разделения гетеродисперсного полимера на составляющие компоненты, каждый из которых, отделяясь в градиенте плотности, седиментирует в виде отдельной зоны. Последнее широко используют для разделения биологических объектов. [c.23]

Центрифугирование в градиенте плотности, предложенное Ме-сельсоном [60], — ценный метод исследования природных и синтетических полимеров, основанный на различии в плотностях или скоростях седиментации его используют для разделения компонентов смеси полимеров на дискретные зоны (зонное центрифугирование). Например, сошлемся на развитие методики изучения равновесного центрифугирования в капиллярах [61 ]. [c.30]

При описанном выше ультрацентрифугировании пики, наблюдаемые при помощи шлирен-системы, отвечают границам между раствором и растворителем. Первые, быстрые пики отвечают компонентам, движущимся в окружении более медленных компонентов (фиг. 8). В биохимических смесях некоторые из этих медленных компонентов (например, рибосомы при анализе бактериального экстракта) создают большую вязкость. Измеряемые коэффициенты седиментации могут при этом очень сильно отличаться от приведенного к стандартным условиям значения Поэтому полученные при помощи скоростной седиментации значения s не всегда можно непосредственно использовать при планировании и анализе данных препаративного зонального центрифугирования в градиентах плотности. При зональном ультрацентрифугировании анализируемая смесь наносится в виде слоя на раствор с увеличивающейся по направлению ко дну плотностью (что предотвращает конвекционное перемешивание) и различные компоненты седиментируют в градиенте плотности в виде отдельных зон. Для наслоения смеси можно использовать специальную аналитическую ячейку, в которой техника наслоения принципиально не отличается от обычного препаративного наслоения на градиент. Одна из таких ячеек (Be kman Instruments In .) приведена на фиг. 15. Преимущества применения такой ячейки, как отмечают Виноград и Брунер [11], состоят в том, что она требует меньше исследуемого материала, анализируемые компоненты в ней пространственно разобщены, медленные примеси отстают от быстрее движущихся зон и седиментацию последних можно осуществлять в любом растворителе, не прибегая к предварительному диализу. Растворитель должен быть более плотным по сравнению с [c.67]

Непреформированный равновесный градиент плотности. В этом случае и растворитель, и растворенное вещество сначала распределены равномерно по всему объему пробирки. После центрифугирования в течение некоторого времени концентрация солей растворителя (например, s l) становится различной по высоте пробирки в соответствии с седиментационным равновесным распределением, в результате чего создается градиент плотности. Исследуемые макромолекулы собираются в виде отдельной зоны в части пробирки с соответствующей им плотностью. [c.182]

При использовании метода, основанного на измерении скорости седиментации, градиент сахарозы может быть заранее приготовлен с помощью автоматического устройства, создающего градиент. Раствор, содержащий макромолекулярные частицы, осторожно наслаивают сверху. Хотя в результате такого наслаивания в верхней части раствора образуется область отрицательного градиента плотности, слой частиц поддерживается очень сильным положительным градиентом плотности сахарозы, которая препятствует осаждению каиелек жидкости и обеспечивает постоянную скорость миграции крупных молекул. В ходе центрифугирования под действием центробежных сил частицы мигрируют сквозь столбик жидкости и распределяются по дискретным зонам. Каждая зона содержит только молекулы одного типа, движущиеся вдоль градиента с характерной для них скоростью седиментации. По истечении заранее намеченного времени центрифугу останавливают, пробирки вынимают из ротора и тем или иным способом отбирают фракции. Поскольку в данном методе за расположением границ в процессе центрифугирования наблюдать невозможно, приходится действовать вслепую. В связи с этим для определения промежутка времени, оптимального для разделения на фракции, приходится проводить несколько пробных центрифугирований. [c.417]

Центрифугирование в градиенте плотности основано на том же принципе. Как и в вышеуказанном случае, градиент плотности создается градиентом концентрации. В колонке градиент концентрации достигается тем, что слои с различной концентрацией помещают друг над другом, после чего начинается медленная диффузия, постепенно выравнивающая градиент. Роль сил тяготения сводится главным образом к стабилизации системы путем снижения до минимума конвекционных токов. Наоборот, при центрифугировании в градиенте плотности градиент концентрации является результатом сил, действующих в центрифуге, и достигает равновесного значения. Установленный таким образом градиент плотности достаточно стабилен. Этот эффект был использован Пикельсом [2] для снижения конвекции в опытах по центрифугированию. Такой же принцип применяли Калер и Ллойд [31 в своих опытах с так называемой стабилизированной движущейся границей в препаративной ультрацентрифуге. Другим применением градиента плотности является зонное центрифугирование —методика, разработанная Брекке [4], которая позволяет разделять компоненты смеси полимеров на дискретные зоны. Предварительно создают градиент плотности, так что ни в одной точке плотность не превышает плотности любого из компонентов исследуемого образца, раствор которого помещают сверху, а затем подвергают центрифугированию. Различные компоненты мигрируют в разные зоны, которые все более и более разделяются по мере центрифугирования. Еще до того, как движущаяся с наибольшей скоростьЕо зона достигнет дна кюветы, центрифугу останавливают и анализируют различные зоны. Очевидно, что метод основан на различиях в скоростях седиментации. Градиенту плотности принадлежит второстепенная ролы стабилизация системы и влияние плотности жидкости на скорость седиментации. [c.418]

Аномальные полосы. При центрифугировании в градиенте плотности s l лиг атов клеток человека (выращенных в культуре) была обнаружена необычная полоса, не содержащая ДНК [18]. Эта полоса сохранялась носле обработки ДНК-азой и обнаруживалась в зоне ДНК. Так как эта полоса исчезала после обработки а-амилазой, предположили, что это [c.181]

Для выделения различных мембранных структур из гомогената, имеющих разные величины коэффициента седиментации, применяют зональное центрифугирование в градиенте плотности определенных веществ. Исследуемый раствор наносят на предварительно приготовленный в центрифужной пробирке градиент плотности и центрифугируют. Градиент создается путем последовательного наслоения растворов градиентной среды уменьшающейся концентрации (плотности) в центрифужной пробирке. Субклеточные структуры разделяются на отдельные зоны в соответствии с их относительной плотностью. Для создания градиента плотности необходимо подбирать вещества в чистом состоянии, не взаимодействующие с компонентами суспензии и реагентами исследуемого раствора. Чаще всего для этого используют сахарозу, однако ее растворы с высокой концентарцией имеют большую вязкость, вследствие чего происходит дегидратация органелл или их лизис. Кроме того, серьезным недостатком этого метода является проницаемость многих органелл для сахарозы, что вызывает их осмотическое разрушение и изменение эффективной плотности. Поэтому в настоящее время для создания градиента плотности предпочитают применять другие среды фиколл, перколл и др. (табл. 16). [c.218]

Обычно применяют линейные градиенты плотности, однако в некоторых случаях в верхней части колонки целесообразно создавать также и более крутые нелинейные градиенты. Практически можно воспользоваться любым методом, предложенным для получения градиентов плотности. Наиболее простая методика, не требующая никаких специальных приборов, заключается в последовательном наслаивании нескольких растворов в порядке убывашя их плотности. Неоднородности на границах примыкающих зон позднее сглаживаются благодаря диффузии. Однако в настоящее время больщинство исследователей работают с градиентными смесителями разных типов, используемыми для создания градиентов концентрации растворов при хроматографии, центрифугировании в градиенте плотности или изо-электрическом фокусировании. Некоторые виды этих устройств и математические формулы для расчета формы кривой градиента плотности описаны Свенссоном [1259]. Приборы нескольких типов, позволяющие по желанию легко получать градиент плотности нужной формы, выпускаются промышленностью. [c.29]

Для разделения белков в первом направлении можно использовать не только электрофорез, но и другие методы. Так, например, Пиндер и Гратцер [1008] описали простой и прямой способ последовательного сочетания центрифугирования в градиенте плотности сахарозы и электрофореза в геле. Белки сыворотки человека центрифугировали в градиенте 0—40%-ного раствора сахарозы, содержащего 5% акриламида (2,5% составлял бас-акриламид), ТЕМЭД, (1 мг/мл) и рибофлавин (50 мкг/ /мл). После центрифугирования пробирки облучали люминесцентной лампой для полимеризации акриламида. Чтобы видеть, результаты центрифугирования, один из параллельных гелей окрашивали амидовым черным. Затем из центральной части неокрашенного геля вырезали полоску шириной 2 мм и использовали ее как стартовую зону для электрофореза на пластине 57о-но-го полиакриламидного геля при pH 8,5. [c.234]

Рис. 1.9. Формирование зон плазмидной и хромосомной ДНК в градиенте плотности s l. В УФ свете сфотографирована центрифужная пробирка, в которой произошло разделение плазмидной и хромосомной ДНК после центрифугирования прн 55 000 об/мнн в течение 22 ч.

Чтобы улучшить эффективность высева протопластов после поглощения ДНК, можно разделить поврежденные и интактные протопласты с помощью дифференциального центрифугирования в градиенте плотности. Для этого обычно протопласты центрифугируют в/на среде, которая имеет то же осмотическое давление, что и раствор для поглощения ДНК, но большую плотность. Например, протопласты, отмытые в растворе, содержащем 13% (вес на объем) маннитола, можно ресуспендировать в растворе, содержащем 21% (вес на объем) сахарозы, без осмотического шока. При центрифугировании (400 об/мин, 10 мин) интактные протопласты будут флотировать, образуя компактную зону на поверхности раствора, тогда как более плотный дебрис будет осаждаться. Аналогичным образом можно использовать градиенты перколла или фиколла. Альтернатива заключается в осаждении через плотную сахарозную подушку, которая удерживает менее плотные протопласты нг своей поверхности. [c.211]

Чтобы преодолеть эту трудность, необходимо создать градиент плотности. Это можно осуществить и в умеренно разбавленных солевых растворах, применяемых в аналитическом ультрацентрифугировании, если исследуемый материал первоначально находится в более разбавленном растворе. Когда слой с исследуемым материалом нанесен на поверхность основного объема растворителя, из-за быстрой диффузии малых молекул образуется пологий градиент плотности (рис. 11.16, Б). Перепад плотности от мениска до дна ячейки может составлять всего так что это почти не влияет на скорости седиментации. При центрифугировании градиент остается стабильным (и даже увеличивается), поскольку молекулы соли имеют ббльшую, чем у воды, плотность. Большие силы в ультрацентрифуге могут влиять даже на небольшие ионы. Однако градиенты в разбавленных солевых растворах недостаточно стабильны вне центрифуги. Бели вы захотели бы извлечь очищенный материал соответствующей зоны, вам пришлось бы отсасывать его, пока ротор еще крутится. Это возможно, но в большинстве случаев существует более простое решение. [c.250]

Теперь посмотрим, что получится, если перед началом центрифугирования добавить небольшое количество макромолекул в солевой раствор. Если плотность макромолекул (компонент 2) превышает максимальную плотность sQ в основании градиента, то они образуют осадок на дне пробирки. Если их плотность меньше минимальной плотности s l, то они всплывут на поверхность. Если же их плотность попадает в диапазон из юне-ния градиента, то они соберутся в зоне, где плотность такова, что коэффициент (1 — Kjp) равен нулю (рис. 11.19). Зная р пределение плотности вдоль пробирки, можно определить плотность (а тем самым и Kj) макромолекул по их положению в ячейке. В центре зоны просто равен плотности рд раствора в данной точке. Эта плотность называется плавучей плотностью. Описанным способом можно разделить в препаративной центрифуге смесь макромолекул разной плотности. Казалось бы, разрешающая способность метода должна быть очень высокой, так как в принципе можно создать весьма пологий градиент плотности. Поэтому нам важно знать, какие факторы определяют ширину зоны, содержащей макромолекулы. [c.260]

Было бы утомительно проводить серию электрофоретических опытов при различных близких друг к другу значениях pH. Разумной альтернативой такой постановки опыта служит электрофорез в градиенте pH. Этот вариант метода, называемый изоэлектриче-ским фокусированием, является прямым аналогом равновесного центрифугирования в градиенте плотности. Молекулы, несущие и положительные и отрицательные заряды, называют амфолитами к ним относятся, например, полимеры, содержащие многочисленные амино- и карбоксильные группы. Смесь амфолитов с широким спектром изоэлек-трических точек вводят в колонку и ожидают, пока она не распределится по колонке под действием электрического поля. Таким способом достигается стабилизация градиента pH, в котором каждый конкретный амфолит оказывается около своей изоэлектрической точки. Для того чтобы избежать потерь биологического материала на аноде или катоде, на обоих концах градиента устанавливают такие значения pH, при которых у биологических материалов не может быть изоэлектрических точек. Чтобы подавить конвекцию, градиент pH создают в твердотельном носителе. В эту систему добавляют небольшое количество белка. Он мигрирует, пока не достигнет pH, соответствующего его изоэлектрической точке. Там он и концентрируется, образуя узкую зону. Чтобы проанализировать результаты такого опыта, можно просканировать гель и измерить поглощение белка можно также окрасить белок либо нарезать гель на тонкие слои и измерить в каждом слое pH, содержание белка, ферментативную активность или радиоактивность. [c.302]

Осадок полностью ресуспендируют и наносят на градиент плотности s l (I ч). Проводят равновесное центрифугирование вируса в градиенте плотности s l (2 ч). Извлекают зоны вируса и разбавляют 50 мМ трис-НС1, pH 8,0 (3 мин). Вирус концентрируют ультрацентрифугированием, ресуспендируют в трис-буфере и измеряют Егео (30 мин). [c.208]

При препаративном фракционировании ДНК зонально-скоростным центрифугированием в градиенте плотности сахарозы можно для подбора режима воспользоваться предварительной окраской ДНК бромистым этидием. Центрифугирование затем можно прервать и наблюдать положение зон ДНК в пробирке, освещая ее ультрафиолетовым светом (336 нм). После отделения зон бромистый этидий экстрагируют бутанолом [Raafat-El-Ge-wely, Helling, 1980]. [c.222]

Можно построить номограммы, подобные приведенным, но более точные, для определения Sao.w без маркера, по положению частиц в результате центрифугирования в линейном градиенте сахарозы. В этом случае их следует строить отдельно для каждого ротора и наперед условиться о заполнении полусферического дна пробирки подущкой определенного объема, не участвующей в формировании градиента плотности раствора сахарозы. Сам градиент тоже должен иметь строго определенный объем. Все эти ограничения не слишком обременительны, но не следует забывать, что при раскапывании градиента точность определения положения пиков соответствующих зон не очень высока, так что определение значений s o.w с точностью, превышающей 5%. вряд ли реально. [c.232]

Наибольшая концентрация тандемных повторов обычно наблюдается в области центромер и теломер в хромосомах животных и растений. Иногда в одном таком участке обнаруживаются сотни и даже тысячи копий какой-то одной единицы, и на их долю часто приходится значительная часть суммарной геномной ДНК (табл. 9.12). При денатурации суммарной ДНК с последующей реассоциацией эти последовательности составляют фракцию наиболее быстро ренатурирующей ДНК (т.е. для них характерны очень малые значения ot). Как и другие длинные тандемные повторы, при равновесном центрифугировании в градиенте плотности эти элементы часто образуют отдельные сателлитные зоны (рис. 9.25). Все эти ДНК, включая и ДНК из зон, содержащих рДНК или повторяющиеся гистоновые гены, были названы сателлитными. Этот термин используется сейчас в основном в отношении [c.188]

У многих организмов имеется несколько разных сателлитаых ДНК. Иногда (например, у Drosophila) они концентрируются в отдельных зонах при центрифугировании ДНК в градиенте плотности (рис. 9.25). У некоторых организмов центромерные и теломерные повторы вообще не обнаруживаются при центрифугировании. Такие криптические сателлитные ДНК либо находятся в составе основной зоны, либо в другом месте, но их количества недостаточно для образования дискретной зоны. [c.189]

Перед начален центрифугирования суспензию частиц наслаивают поверх градиента плотности жидкости (а). При скоростноы цеитрифугироваини частицы не достигают изопикни-ческой точки, а при изопикническом разделении центрифугирование продолжают до тех пор, пока исследуеыые частицы не достигнут зоны с соответствующей плотностью (б). [c.47]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология