Нанесение веществ на тонкослойные пластинки

Рис. 1У.20. Тонкослойная хроматограмма (а), подтверждающая потерю вещества в колонке, и хроматограмма смеси на выходе из колонки (б). Колонка дает два вещества, которые также обнаружены и при помощи ТСХ. Проба, нанесенная непосредственно на пластинку (пятно А), дает пять веществ (I — направление движения пластинки II — растворителя)

Хроматография на бумаге основана на использовании в качестве иммобилизованной фазы высококачественной фильтровальной бумаги, адсорбирующей воду. В последнее время широкое распространение получила тонкослойная хроматография вместо бумаги здесь используется тонкий слой силикагеля, нанесенный на стеклянную пластинку. Этот метод гораздо удобнее хроматографии на бумаге, поскольку дает более быстрое и качественное разделение (рис. 2-34). Для разделения летучих веществ применяется газовая хроматография, основанная на [c.160]

Количественный анализ в ТСХ состоит из нескольких этапов подготовка и нанесение пробы на тонкослойную пластинку, разделение (хроматографирование) и проявление компонентов смеси на тонком слое сорбента, качественная и количественная оценка результатов анализа. Количественное определение вещества в пятне может быть одностадийным (по величине пятен с помощью оптических, электрохимических или ядерно-физических методов) и двухстадийным (вещества сначала отделяют от слоя сорбента извлечением растворителями или переводят в газовую фазу, а затем определяют инструментальными методами). [c.33]

Заметим, что соединения отличаются числом эфирных связей (от О до 3 сверху вниз в каждой вертикальной колонке) и числом двойных связей (от 3 до О слева направо в каждом горизонтальном ряду). Тонкослойное хроматографическое разделение, основанное на числе эфирных связей, т. е. на полярности растворенного вещества, достигается хроматографией на силикагеле с элюентом, выбранным таким образом, чтобы наименее полярное вещество имело / 0,8. Для случая, изображенного на рис. 17-8, подвижной фазой служил 10%-ный (по объему) раствор диэтилового эфира в петролейном эфире (последний не является на самом деле эфиром его называют так только в связи с его большой летучестью, он представляет собой смесь легких углеводородов). Разделение по числу двойных связей проведено на силикагеле, пропитанном приблизительно 5% (по массе) нитрата серебра, а растворитель используют тот же, что и раньше. В этом случае два способа разделения были оригинально скомбинированы. При нанесении тонких слоев конструкцию наносящего устройства изменили таким образом, чтобы можно было одновременно наносить два рядом расположенных тонких слоя, один из которых содержал нитрат серебра, а второй нет. Как показано на рис. 17-8, первое хроматографическое разделение проводили элюированием пробы вверх на части пластинки, покрытой силикагелем. Второе же разделение в направлении, перпендикулярном первому, приводило к быстрому движению зон растворенных веществ на часть пластинки, содержащую нитрат серебра. Таким образом было легко достигнуто, как это показано, разделение соединений с разным числом двойных связей. Относительное положение зон растворенных веществ на пластинке соответствует расположению структур, показанному выше. Наименее полярные соединения (не имеющие эфирных связей) мигрируют быстрее всех на первой ступени проявления, а соединения, не имеющие двойных связей, мигрируют быстрее всего на второй ступени проявления. Для обнаружения зон пластинку опрыскивали 70%-ной серной кислотой, насыщенной бихроматом калия, и нагревали при 200 °С. [c.565]

Д. НАНЕСЕНИЕ ВЕЩЕСТВ НА ТОНКОСЛОЙНЫЕ ПЛАСТИНКИ [c.121]

В последние годы широкое распространение получил метод хроматографического разделения веществ в тонком слое (0,1—0,5 мм) носителя, нанесенного на стеклянную пластинку. По способу проведения этот метод сходен с хроматографией на бумаге, однако вместо волокон целлюлозы в качестве носителя могут использоватьсй разнообразные сорбенты окись алюминия, активированный уголь, силикагель, ионообменные смолы, неорганические ионообменники и т. п. При разделении веществ в тонком слое в зависимости от поставленной задачи могут быть использованы принципы либо адсорбционной, либо распределительной, либо ионообменной хроматографии. По сравнению с бумажной хроматографией разделение в тонком слое в большинстве случаев проводится значительно быстрее. Например, методом тонкослойной хроматографии на смеси гипса и силикагеля отделение ионов 1102 + от смеси катионов Ре, ТЬ, АГ, Си и других было осуществлено за 10—1Б мин. [c.195]

Пластинку (20 X 20 см или иного размера) с проявленными пятнами отдельных веществ и порядковым номером, нанесенным тонкой иглой на слой адсорбента, помещали слоем кверху на верхнее стекло аппарата для контактной печати и включали красный свет в аппарате. На пластинку эмульсией вниз накладывали фотобумагу. Наложение фотобумаги следует проводить осторожно, чтобы не разрушить слой адсорбента. Бумагу прижимали к слою стеклянной пластинкой (20 X 20 см), закрывали крышку аппарата и включали лампу белого света на 0,5—1 сек. в зависимости от интенсивности окраски пятен. Затем крышку аппарата открывали и осторожно снимали чистую пластинку и фотобумагу. Соблюдение указанных в методике условий позволяет сохранить первоначальный вид тонкослойной пластинки и ее пригодность для дальнейшей работы. [c.33]

Нанесение проб испытуемых веществ на пластинку. Количество наносимого вещества или смеси веществ на пластинку играет существенную роль при разделении веществ с помощью тонкослойной хроматографии. Если нанести очень много вещества, то получатся чересчур большие и плохой формы пятна, которые [c.74]

Тонкослойная хроматография — это разделение веществ в тонком слое пористого материала, нанесенного на стеклянную пластинку. Растворитель (элюент), двигаясь в пористом материале [c.273]

Перед нанесением веществ пластинки размечают по трафарету на линии старта отмечают точки нанесения проб и проводят линию финиша. Для выравнивания фронта движения растворителя рекомендуют снятие полосы адсорбента шириной в 3—5 мм вдоль вертикальных сторон пластинки. В наборы аппаратуры для тонкослойной хроматографии включают специальные шаблоны для быстрого нанесения проб. [c.256]

Тонкослойная хроматография применяется для быстрого разделения веществ на тонком слое сорбента, нанесенного на стеклянную пластинку. [c.807]

В тонкослойной хроматографии большое значение для получения надежных и воспроизводимых результатов имеет овладение техникой эксперимента (приготовление сорбента, его нанесение, установление толщины слоя, подготовка пластинок, нанесение пробы вещества, подача растворителя, проявление хроматограмм и другие операции). [c.134]

Техника тонкослойной хроматографии заключается в следующем на стеклянную пластинку при помощи специального приспособления наносят слой сорбента (окись алюминия, силикагель и т. д.) толщиной от 0,25 до 2 л ж . После нанесения на слой сорбента исследуемого вещества (смеси веществ), пластинка помещается под небольшим углом к горизонту в ванночку с элюентом, причем стартовая линия не должна соприкасаться с элюентом, после чего ванночку герметично закрывают. Угол, под которым располагают пластинку, должен быть таким, чтобы сорбент не сползал с пластинки. [c.51]

Количественный анализ тонкослойных хроматограмм можно осуществлять, исходя из размера пятен, так как площадь пятна зависит от количества элемента, нанесенного на слой носителя. Площадь пятна зависит также от активности сорбента-носителя, толщины его слоя и объема наносимого раствора. Для сравнения на ту же пластинку наносят контрольные количества этого вещества с известной концентрацией. Площадь пятна определяют так же, как в хроматографии на бумаге (стр. 182). [c.187]

Плоскостная хроматография — бумажная и тонкослойная— осуществляется на специальной хроматографической бумаге или в гонком слое адсорбента, нанесенном на пластинку. Здесь используется распределительный метод в порах бумаги или адсорбента содержится растворитель определенного состава, а разделение проводится растворителем другой природы, свободно перемещающимся по бумаге или пластинке. После разделения веществ по площади пятен можно судить и о количестве каждого из, них. Иногда такой вид хроматографии используют для накопления [c.39]

Наиболее ценные результаты дает применение тонкослойной хроматографии в качестве метода оценки низких уровней примесей в медицинских веществах. Для этой цели вещество наносят на хроматографическую пластинку и после хроматографирования любые вторичные пятна, которые могут быть видны на хроматограмме после соответствующего проявления, сравнивают по размеру и интенсивности с пятнами, которые дают небольшие количества ожидаемых примесей при одновременном хроматографировании на той же пластинке. Для этой методики нужно иметь в наличии ожидаемые примеси, поэтому в некоторых статьях предписывается использование аутентичных образцов примесей. Часто бывает, что в лабораториях этих примесей нет в таких случаях можно сравнивать вторичные пятна, образующиеся от следовых количеств примесей, с пятном, полученным при хроматографировании на той же пластинке соответствующего небольшого количества испытуемого вещества. Этот прием не всегда возможно применить, так как примеси и испытуемое вещество могут по-разному реагировать на метод обнаружения, однако с его помощью можно получить приемлемый критерий, по которому можно судить об уровне примеси в веществе. Третья, иногда рекомендуемая методика состоит в нанесении такого количества испытуемого вещества, при котором после хроматографирования не появляется никаких вторичных пятен, если образец приемлемо чист. Это наименее удовлетворительный из всех трех методов, так как возможность увидеть вторичное пятно зависит от субъективных особенностей наблюдающего, а интенсивность пятен на хроматограмме может значительно варьировать в зависимости от конкретных условий хроматографирования. [c.94]

Посторонние вещества. Проводят испытание, как описано в разделе Тонкослойная хроматография (т. 1, с. 92), используя в качестве адсорбента силикагель Р2 и в качестве подвижной фазы смесь 85 объемов 1-пропанола Р, 10 объемов безводной муравьиной кислоты Р и 5 объемов воды. Для приготовления испытуемого раствора растворяют 75 препарата в 5 мл воды при легком нагревании (раствор А). Готовят раствор сравнения, содержащий 0,12 мг/мл стандартного образца никотиновой кислоты СО (раствор Б). Наносят на пластинку 10 мкл раствора А, используя две аликвоты по 5 мкл и давая пластинке высохнуть в токе холодного воздуха после первого нанесения затем отдельно наносят 5 мкл раствора Б. Вынимают пластинку из хроматографической камеры, высушивают ее в токе теплого воздуха и оценивают хроматограмму в ультрафиолетовом свете (254 нм). Помимо основного пятна, на хроматограмме, полученной с раствором А, должно наблюдаться не более трех дополнительных пятен, интенсивность которых не должна превышать интенсивность пятна, полученного на хроматограмме с раствором Б. [c.28]

Посторонние примеси. Проводят испытание, как описано в разделе Тонкослойная хроматография (т. 1, с. 92), используя в качестве сорбента силикагель Р5 (подходит и предварительно покрытая пластинка из коммерческих источников), а в качестве подвижной фазы бутилацетат Р. Наносят на пластинку отдельно по 5 мкл каждого из 2 растворов в хлороформе Р, содержащих (А) 20 мг испытуемого вещества в 1 мл и (Б) 0,20 мг испытуемого вещества в 1 мл. После извлечения пластинки из хроматографической камеры дают ей высохнуть при комнатной температуре и помещают в камеру во второй раз, дав фронту растворителя подняться на 15 см от линии нанесения. Извлекают пластинку, дают растворителю испариться при комнатной температуре, опрыскивают ее раствором серной кислоты в метаноле ИР и нагревают 10 мин при 105 °С. Оценивают хроматограмму при дневном свете. Любое пятно, которое дает раствор А, кроме основного пятна, не должно быть более интенсивным, чем пятно, которое дает раствор Б. [c.331]

Тонкослойная хроматография. По своей сущности и технике вьшолнения она аналогична бумажной хроматографии. Вместо бумаги, весьма химически активной и неустойчивой, используют в качестве неподвижной фазы оксид алюминия или силикагель, нанесенный тонким слоем на стеклянную пластинку. Этот способ позволяет разделять вещества, взаимодействующие с бумагой, и применять агрессивные по отношению к ней подвижные фазы. [c.98]

При необходимости разработки прописи для анализа лекарственных препаратов известного состава в лаборатории промышленного контроля обычно требуется отчетливое разделение определяемых компонентов с использованием всего разделительного пути. При этом в случае разделения сложных смесей, например приведенного в табл. 71 поливитаминного препарата, необходимо провести многочисленные предварительные опыты с учетом изложенных выше теоретических основ (стр. 81). При получении большого числа хроматограмм их переносят на кальку, как описано на стр. 50, и путем сравнения таких копий находят подходяш,ие условия разделения. Важным предварительным условием является выбор соответствую-ш его экстрагента для отделения смеси биологически активных вещ,еств от вспомогательных лекарственных веш,еств. Следует, по возможности, использовать нейтральный растворитель или смесь растворителей с низкой температурой кипения, чтобы избежать изменения разделяемых вещ,еств в процессе экстракции и при нанесении на тонкослойные пластинки. С другой стороны, при выборе экстрагента следует обратить внимание на то, чтобы экстрагируемые при этом вспомогательные вещества не мешали хроматографическому разделению. Это обстоятельство было подробно обсуждено Нус-баумером [29] при испытании пенициллиновых препаратов. [c.327]

Тонкослойная хроматография (ТСХ) представляет собой разновидность адсорбционной хроматографии. Разделение веществ Происходит на открытых колонках, т. е. в тонком слое адсор-<5ента, нанесенного на стеклянную пластинку. Преимуществом ТСХ как микрометода является быстрое хроматографическое разделение малых количеств веществ. По приемам работы этот метод бо- Дее похож на бумажную хроматографию. [c.105]

Проводят испытание, как описано в разделе Тонкослойная хроматография (т. 1, с. 92), используя в качестве сорбента силикагель Р1, а в качестве подвижной фазы — смесь 93 объемов хлороформа Р, 6,5 объема метанола Р и 0,5 объема аммиака ( 260 г/л) ИР, и дают фронту растворителя подняться только на 10 см выше линии нанесения. Наносят на пластинку отдельно в виде полос 20X3 мм по 10 мкл каждого из следующих растворов для получения раствора А добавляют к 0,1 г распертого в тонкий порошок испытуемого вещества в маленькой пробирке 0,05 мл аммиака ( 260 г/л) ИР и 5 мл хлороформа Р, энергично перемешивают стеклянной палочкой, оставляют на 30 мин и фильтруют для получения раствора Б разводят 1 мл раствора А до 25 мл хлороформом Р для получения раствора В растворяют 5 мг эметина гидрохлорида СО и 6 мг цефаэлина гидрохлорида Р в количестве метанола Р, достаточном для получения 20 мл раствора. После извлечения пластинки из хроматографической камеры дают ей высохнуть на воздухе до исчезновения запаха растворителя, опрыскивают [c.183]

Наиболее подходящая толщина слоя носителя — 0,5 мм. Для нанесения носителя на пластинки могут быть использованы описанные выше приборы, позволяющие получать слой разной толщины. Если суспензию носителя раскатывать стеклянной палочкой, на обоих концах которой наклеено несколько витков изоляционной ленты, также образуется достаточно ровный слой. Свежеприготовленные пластинки в течение 20—25 мин подсушивают на воздухе. Их можно довольно долго хранить во влажной камере, если исключена возможность бактериального роста. При нисходящей тонкослойной гель-фильтрации пластинку располагают в камере под углом 10—15° Как правило, гель-фильтрацию проводят в водных растворах, поэтому хроматографическая камера может быть изготовлена из пластмассы. Она состоит из кюветы для буферного раствора, рамки, поддерживающей пластинку под соответствующим углом, и крышки. Подача буферного раствора на пластинку осуществляется с помощью фитиля из фильтровальной бумаги. В качестве маркеров удобно использовать окрашенные высокомолекулярные вещества (например, меченные флуоресцеином ферритин или 7-глобулин), которые не задерживаются частицами геля. Гель-фильтрацию проводят до тех пор, пока маркер не пройдет по крайней мере 10 см от линии старта. После этого пластинку извлекают из рамки и покрывают слой носителя листом фильтровальной бумаги (например, Шляйхер-Шуль 2043 или ватман 3 ММ), вырезанным по размеру пластинки. Некоторые исследователи рекомендуют применять в этом случае лист сухой фильтровальной бумаги. В нашей лаборатории используется смоченная и тщательно отжатая фильтровальная бумага, так как с ее помощью легче прикрыть слой носителя без образования под бумагой пузырьков воздуха. После этого бумагу снимают (иногда вместе с частичками геля), высушивают при температуре около 120°С и окрашивают красителями, выявляющими белок, или реактивом Паули. Наряду с другими красителями можно воспользоваться, например, амидовым черным ЮВ, кислым фуксином и т. п. Во время отмывания несвязавшегося красителя частички геля отделяются от бумаги, и после высушивания она может быть использована для документации. [c.239]

Метод ТОНКОСЛОЙНО хроматографии заключается в следующем на одну сторону небольшой стеклянной пластинки наносят тонкий слой сорбента. На такой слой, так же как на бумагу в бумажно хроматографии, на стартовую линию наносят пробы веществ и их смесей и край пластинки, ш же стартовой линии, погружают в систему растворителей. По мере продвижения жид- ости по пластин <е происходит разделение смеси веществ. Гранхщу подъема жидкости или Л Н 1Ю фронта отмечают, пластинку сушат и проявляют подобно бумажной хроматограмме, для обнаружения веществ в виде окрашенных пятен. Отмечают, как указано на рис. 1, положение пятен, отвечающих исследуемым веществам и находящихся между линией старта и линией фронта ж д-кости. Для этого измеряют расстояние от центра пятна до стартовой линии (отрезок АБ). Далее определя от расстояние от линии фронта жидкости до стартово точ и (отрезок АВ). Отношение расстояния от стартовой линии до центра пятна (отрезок АБ) к расстоянию от стартово линии до линии фронта (отрезок АВ) обозначается через константу характеризующую положение вещества на данной хроматограмме. Таким образом, величина 7 / = = АБ1АВ характерна для данного соединения на данном сорбенте и в данной системе и зависит от ряда условий способа работы, качества и активности сорбента, толщины слоя, качества растворителей, количества нанесенного вещества, длины пробега растворителей, положения стартовой линии и почти не зависит от температуры [28]. Для [c.7]

Тонкослойная хроматография — это разделение веществ в тонком слое нористого материала, нанесенного на стеклянную пластинку. Получается хроматография как бы в открытых колонках, т. е. в колонках с частично удаленной стенкой. При такой постановке опыта слой пористого материала по всей длине доступен для детектирования зон вещества, разделяемых на пластинке. Последнее обстоятельство удобно тем, что для завершения хроматографического разделения достаточно времени пробега наиболее быстрого компонента. Отсюда вытекает первое преимущество метода — большая скорость процесса (время опыта мало). При этом появляется возможность увеличения эффективности анализа путем применения особо мелкодисперсных материалов, которые обеспечивают высокую разрешающую способность тонкослойной хроматографии. [c.197]

Метод тонкослойной хроматографии (ТСХ) основан на разделении веществ в зависимости от их различной адсорбционной способности. Разделение проводят в тонком слое сорбента, нанесенном на специальную пластинку. Распределение вещества на пластинке происходит с помощью растворителя. Тонкий слой сорбента является неподвижной фазой, растворитель — подвижной фазой. Анализируемую пробу наносят на стартовую линию пластинки с помощью микрошприца или микропипетки. Пластинку помещают в камеру, содержащую растворитель, который перемещается по слою адсорбента под действием капиллярных сил. Камера представляет собой сосуд, размеры которого несколько больше размеров пластинки. Камера должна быть плотно закрыта, чтобы растворитель не испарялся и газовая атмосфера в камере была постоянной. Компоненты анализируемой смеси перемещаются по слою вместе с растворителем с различными скоростями. Когда растворитель достигает противоположного конца пластин, разделение заканчивают, удаляют пластинку из камеры и испаряют растворитель. Анализируемые вещё -ства проявляются на хроматограмме в виде зон или пятен Кибардин С. А., Макаров К. А., 1978 Во1И ег И. К. е а1., 1965]. [c.55]

Тонкослойную пластинку с нанесенной пробой фосфолипидов можно ставить в камеру фирмы Дезага (рис. 19) или в четырехугольный сосуд с пришлифованной крышкой с предварительно налитым на дно камеры растворителем. Для разделения веществ на тонкослойных пластинках можно использовать также камеры из стеклянного кирпича (рис. 20), хотя разделение ве- [c.27]

Рис. 8-1. Нанесение газохроматографически разделенных веществ на пластинку с сорбентом для тонкослойной хроматографии (ТСХ). Стеклянную дозирующую трубку с платиновой спиралью (проволока диаметром 0,5 мм), питаемой источником мощностью 50 Вт, можно нагреть до 200° С. I — хроматографическая колонка 2 — термостат колонки 3 — плакенно-ионизационный детектор газового хроматографа 4 — трансформатор с регулируемым напряжением (например, 6А, 20 В) 5 — пластинка с сорбентом для ТСХ 6 — платиновая спираль

Устройство для нанесения пятен, которое предложили Музил и Фос-слейн [8], создано на базе перистальтического насоса, подающего пробы из восьми оксфордских пипеток. Выход каждой пипетки непосредственно соединен с иглой для подкожных инъекций, смонтированной на регулируемом тефлоновом блоке. Последний устанавливается таким образом, чтобы можно было легко подводить и отводить тонкослойную пластинку и тем самым предотвратить повреждение пластинки иглой. Устройство помещается на термостатируемую горячую плиту, которая поддерживает температуру предварительно нагретой пластинки на заданном уровне и ускоряет испарение растворителя. Испарение можно дополнительно ускорить, направив в точки нанесения проб поток горячего воздуха. В данной системе нельзя использовать органические растворители, так как следы органических веществ, экстрагируемых из трубки насоса, могут повлиять на результаты анализа. [c.275]

Вайденхьювель механизировал шприц многократного действия РВ 600 фирмы "Hamilton" и приспособил его для непрерывного нанесения пятен на тонкослойные пластинки и получения полосок длиной 4—5 см, содержащих до 10 мкг вещества. Автодозатор устанавливается вертикально над тонкослойной пластинкой. При каждом импульсе тока на пластинку выдавливается 1/60 часть раствора, содержащегося в шприце. Затем пластинка смещается в горизонтальном направлении на некоторое расстояние и на дозатор подается следующий импульс. Обычно используются совместно три автодозатора. При этом пробу наносят либо на одну, либо на три отдельные пластинки. В случае применения стандартных игл для подкожных инъекций на кончик иглы надевают кусочек тефлоновой трубки, предотвращающий повреждение кончика. Тефлоновая насадка также предотвращает подъем пленки жидкости по игле, что способствует образованию капель жидкости. При использовании данного устройства обеспечивается прецизионное разделение горизонтальных полос на пластинке. [c.276]

При нанесении веществ, выходящих из газо-хромато-графической колонки на стартовую линию ТСХ-пластинки, необходимо, чтобы последовательно выходящие компоненты характеризовались разностью во временах выхода (Aimai) - не меньшей чем 4а. В ходе тонкослойного хроматографического разделения может произойти перекрывание боковых границ соседних зон, что сведет на нет разделение, полученное в ГХ-колонке. Чтобы этого не произошло, необходимо получать ширину каждой из зон меньше или равной 2о. Ширина зоны 6=4IdVjV, где — расстояние зоны от стартовой линии N — число теоретических тарелок. [c.14]

Метц [360] изучал методом ТСХ ферментативные превращения стероидов. Он применил эффективный метод концентрирования разбавленных растворов перед нанесением их на тонкие слои. Этот метод заключается в следующем. Пробу наносят на короткий кусочек фильтровальной бумаги, который имеет форму узкого треугольника. Основание этого треугольника погружают в ацетон, и пятно стероида или другого соединения перемещается вместе с растворителем к узкой вершине треугольника. Далее бумагу вынимают из растворителя, сушат и повторяют всю процедуру до тех пор, пока в вершине бумажного треугольника не сконцентрируется требуемое количество вещества. После этого кончик бумаги помещают на тонкослойную пластинку и постепенно элюируют с него исследуемое вещество ацетоном. [c.351]

Если разделение проводится в аналитических целях, образцы наносят в виде пятен (стартовые пятна), расположенных на некотором расстоянии от одного края прямоугольного листа или пластинки если же разделение проводится в препаративных целях, образцы наносят вдоль стартовой линии в виде полосок, параллельных краю листа. В последнем случае для нанесения образца часто используют специальные приспособления (например, автоматический аппликатор). Наносить вещество на тонкослойную пластинку можно также путем конденсации фракций, получаемых при газохроматографическом разделении, или из нагретого патрона с образцом (термофрактогра- [c.22]

Для проявления и идентификации аминокислот, производных аминокислот и пептидов хроматограммы опрыскивают специальными реактивами. Опрыскивание реактивом Сакагучи нельзя применять при ТСХ на пластинках с силикагелем, остальные реактивы можно использовать как в случае бумажной, так и тонкослойной хроматографии. (Подробнее о реактивах для опрыскивания см. работы [96, 123, 126, 146].) Опрыскивание некоторыми реактивами можно проводить последовательно и, таким образом, получать максимальную информацию из одного опыта (см. работу [24]). Величины проявляемых пятен должны соответствовать обшепринятым для хроматографии и электрофореза. Если применять слишком много проявляющего реактива, особенно в тех случаях, когда нанесенные вещества в нем растворимы, то пятна на хроматограммах и фореграммах будут получаться расплывчатыми. При опрыскивании хроматограмм, содержащих аминокислоты и пептиды, водными растворами последние следует тщательно распылять и наносить в весьма умеренных количествах. Использование того или иного проявляющего реактива с погружением в него допустимо лишь в том случае, если [c.142]

Целлюлозный адсорбент для тонкослойной хроматографии приготовляют из целлюлозного порошка, для получения которого 800 г хлопковой целлюлозы кипятят с 5 л 10%-ного раствора НС1 в абсолютном этаноле в течение 20— 25 мин, промывают водой и метанолом и высушивают. S г полученной порошкообразной целлюлозы смешивают с 0,3 г гипса и 15 мл воды и полученную пасту наносят равномерным слоем на стеклянные пластинки. Исследуемую смесь углеводов наносят на приготовленный слой адсорбента на расстоянии 15 мм от конца пластинки. Пластинки помещают в камеры с растворителем так, чтобы уровень растворителя был на 10 мж ниже нанесенных на пластинки веществ. Хроматофафирование ведут при комнатной температуре. После хроматографирования пластинки вынимают из камеры, высушивают, проявляют и определяют величину Rf каждого моносахарида. Для идентификации отдельных компонентов параллельно проводят опыты со смесью известных углеводов. [c.78]

В тонкослойной хроматографии адсорбентом служит тонкий, равномерный слой (обычно толщиной около 0,24 мм) сухого мелкоизмельченного материала, нанесенного на подходящую подложку, например на стеклянную пластинку, алюминиевую фольгу или пластмассовую тленку. Подвижная фаза движется то поверхности пластинки (обычно под действием капиллярных сил) хроматографический процесс может зависеть от адсорбции, распределения или комбинации обоих явлений, что в свою очередь зависит от адсорбента, его обработки и природы используемых растворителей. Во время хроматографирования пластинка находится в хроматографической камере (чаще всего изготовленной из стекла, чтобы можно было наблюдать движение подвижной фазы по пластинке), которая обычно насыщена парами растворителя. В качестве твердого носителя часто используются силикагель, кизельгур, окись алюминия и целлюлоза для лучшего сцепления с носителем к нему можно прибавлять соответствующие вещества, например сульфат кальция (гипс). Для изменения свойств приготовленного слоя его можно пропитать буферными материалами, чтобы получить кислый, нейтральный или основной слой можно использовать и другие вещества, такие, как нитрат серебра. В некоторых случаях слой может состоять из ионообменной смолы. Такой широкий диапазон различных слоев, используемых в сочетании с разными [c.92]

Проводят испытание, как описано в разделе Тонкослойная хроматография (т. 1, с. 92), используя в качестве сорбента силикагель Р1, а в качестве подвижной фазы смесь 60 объемов 1-бутанола Р, 10 объемов воды, 6 объемов пиридина Р, 15 объемов ледяной уксусной кислоты Р и 5 объемов этанола ( 750 г/л) ИР. Наносят на пластинку отдельно по 1 мкл каждого из 2 растворов в растворе эдетата динатрия (10 г/л) ИР, содержащих (А) 6,0 мг испытуемого вещества в 1 мл и (Б) 6,3 мг бацитрацина цинка СО в 1 мл. Третье пятно (В) образуется при ианесении на пластинку в одно и то же место по 1 мкл растворов А и Б, причем пятну после нанесения первого раствора дают высохнуть. После извлечения пластинки из хроматографической камеры дают ей высохнуть на воздухе, увлажняют смесью трикетопидрендена/пи-ридина/бутанола/ИР и нагревают при 110°С в течение 10 мин. Дают остыть и оценивают хроматограмму при дневном свете. Пятна, которые дает раствор А, соответствуют по положению, [c.33]

Посторонние примеси. Проводят испытание, как описано в разделе Тонкослойная хроматография (т. 1, с. 92), используя в качестве сорбента силикагель Р4, а в качестве подвижной фазы— смесь 15 объемов 1-пропанола Р и 3 объемов аммиака ( 17 г/л) ИР. Готовят 3 следующих раствора в смеси I объема аммиака (- 17 г/л) ИР и 9 объемов этанола ( 750 г/л) ИР, содержащих (А) 10 мг испытуемого вещества в 1 мл, (Б) 10 мг стандартного образца пробенецида СО в 1 мл и (В) 0,050 мг испытуемого вещества в 1 мл. Наносят на пластинку отдельно по 1 мкл каждого из растворов А и Б. Наносят на пластинку отдельно по 20 мкл каждого из растворов А и В. После извлечения пластинки из хроматографической камеры дают ей высохнуть на воздухе и оценивают хроматограмму в ультрафиолетовом свете (254 нм). Любое пятно, которое дает раствор А (второе нанесение), кроме основного пятна, не должно быть более интенсивным, чем пятно, которое дает раствор Б. [c.291]

Посторонние примеси. Проводят испытание, как описано в разделе Тонкослойная хроматография (т. 1, с. 92), используя в качестве сорбента силикагель Р4, а в качестве подвижной фазы — смесь 80 объемов дибутилового эфира Р, 16 объемов гексана Р и 4 объемов ледяной уксусной кислоты Р. Помещают пластинку в хроматографическую камеру, погружая ее на 5 мм в жидкость. После того как фронт растворителя достигнет высоты около 12 см, извлекают пластинку из камеры и высушивают ее в течение нескольких минут в струе теплого воздуха. Дают пластинке остыть и наносят отдельно по 5 мкл каждого из 2 растворов, содержащих (А) 0,10 г испытуемого вещества в 1 мл и (Б) 0,050 мг 4-аминобензойной кислоты Р в 1 мл. Дают фронту растворителя подняться на 10 см выше линии нанесения. После извлечения из хроматографической камеры высушивают пластинку 10 мин при 105 С и оценивают хроматограмму в ультрафиолетовом свете (254 нм). Любое пятно, которое дает раствор А, кроме основного пятна, не должно быть более интенсивным, чем пятно, которое даст раствор Б, Основное пятно остается на линии нанесения. [c.357]

Тонкослойная хроматография (Шталь, 1958 г.) но технике выполнения анало-гич 1а бума кпой хроматографии, но вместо бумаги в качестве материала неподвижной фазы игиользуют порошок оксида алюминия или силикагеля, нанесенный тонким слоем на стеклянную пластинку. Для закрепления слоя адсорбента на пласт1п1ке к нему добавляют гипс. Такой способ позволяет разделять вещества, взаимодействующие с бумагой, а такл<е использовать агрессивные реагенты для проявлепия иятеп веш,еств на хроматограмме. [c.30]

В классическом методе тонкослойной хроматографии перед нанесением на пластинку исследуемый материал необходимо обессолить. Обессоливание требует больших затрат труда и времени, а при малом количестве вещества приводит к значительным потерям. При ионообменной тонкослойной хроматографии соль, нанесенная вместе с образцом, не мешает Процессу разделения, так как концентрация элюирующего буферного раствора, как правило, превышает концентрацию солей в образце. Чтобы получить полное разделение фракций, необходимо выполнять следующие требования [c.247]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология