Анализ отдельных аминокислот

Книга не является ни компиляцией, ни узким обзором американской литературы, что часто бывает характерно для многих подобных американских произведений она трактует аналитические методы определения аминокислот, в большинстве случаев проверенные, а зачастую и разработанные в лаборатории авторов. Обзор химических методов анализа отдельных аминокислот составлен достаточно полно, причем авторы делают очень ценную попытку подойти критически к каждому методу и выделяют при этом наиболее надежные. [c.5]

Хотя в этой главе уже кратко обсуждались специфические преимущества н недостатки различных методов, но относительная ценность их еще не рассматривалась. К сожалению, лишь немногие исследователи пользовались несколькими методами при анализе отдельных аминокислот. Это и понятно, потому что, когда исследователь овладевает тон или иной методикой, он редко стремится овладеть еще второй пли третьей и этим подтвердить свои собственные результаты. Однако в тех случаях, когда исследователь пользуется несколькими. методами, получаются несомненно интересные результаты. [c.130]

Анализ отдельных аминокислот [c.72]

Методы анализа отдельных аминокислот [c.189]

Для идентификации аминокислот в исследуемом гидролизате наряду с опытными пробами (или предварительно, до анализа опытных проб) на хроматограмму наносят растворы аминокислот- свидетелей . После установления местоположения пятен отдельных аминокислот- свидетелей последние в дальнейшем на хроматограмму можно наносить в составе смесей. Смеси должны иметь известный состав и хорошо разделяться при данных условиях хроматографирования. Этим требованиям удовлетворяют смеси аминокислот следующего состава [c.128]

Аминокислотный анализ существенно способствовал бурному развитию химин белка. Главными областями применения аминокислотного анализа (наряду с идентификацией отдельных аминокислот) являются установление аминокислотного состава белковых гидролизатов, определение первичной структуры белков, а также аналитический контроль пептидного синтеза. [c.55]

После установления условий проведении количественной нингидринной реакции Муру и Штейну удалось в 1948 г. разделить 2,5 мг гидролизата сывороточного альбумина быка с помощью распределительной хроматографии на колонке с крахмалом. Элюат был разделен на 4(Ю фракций, в каждой фракции проведена нингидринная реакция, и из интегральных кривых поглощения, соответствующих отдельным аминокислотам, рассчитывались их молярные доли в смеси. На коллег-современников большое впечатление произвели высокая скорость анализа (I нед), малое количество анализируемого вещества и малая погрешность ( 3%). [c.59]

Гомологичные белки разного происхождения могут иметь определенное структурное сходство, которое характеризуется более или менее сильными реакциями со специфическими антителами против одного из этих белков, взятого в качестве иммуногена. Такие перекрестные реакции между индивидуальными, отдельно взятыми белками разного происхождения использовались в исследованиях по систематике и филогенезу [111]. Но непредвиденные перекрестные реакции могут также обнаружиться у белков, которые явно не сходны между собой ни в функциональном, ни в эволюционном отношении однако они тем не менее имеют структурное сходство, которое подтверждено анализом последовательностей аминокислот [52]. Поэтому такие перекрестные реакции интересны с методической точки зрения при исследованиях структурных гомологий, но могут также представлять неудобства в некоторых областях, как, например, выявление происхождения белков в пищевых продуктах. При решении некоторых из этих проблем распознавания, по существу, необходимо, чтобы специфические антитела к белкам растения какого-то определенного ботанического вида не давали перекрестной реакции с белками растения соседнего вида. Недавно описаны возникающие на практике трудности в связи с использованием антисывороток, вызывающих недостаточно контролируемые и приводящие к ошибочным результатам пере- [c.114]

Вопросу анализа аминокислот методом хроматографии на бумаге посвящено большое число работ советских и иностранных авторов. Однако почти все они связаны с разделением аминокислот белков и других биологических препаратов [61. Наша попытка применить их для анализа мелассы не дала положительных результатов, что можно объяснить мешающим действием остальных компонентов мелассы, ио отношению к которым содержание отдельных аминокислот составляет лишь 0,1—3 вес. %. Описанный в литературе метод 17, 81, состоящий в сорбции аминокислот на катионите с последующей их элюцией и идентификацией на бумаге неудобен, так как требует сложной специальной аппаратуры и чрезмерно длителен. Первой частью нашего исследования было хроматографическое разделение искусственной смеси из десяти аминокислот, приблизительно имитирующей аминокислотный состав мелассы [1, 81. Смесь включала лизин, аргинин, серии, глицин, аспарагиновую и глютаминовую кислоты, а-аланин, валин, метионин и лейцин. Растворы аминокислот готовили в 15%-ном этиловом спирте с концентрацией 0,5—1 у аминокислоты в 1 мкл. [c.212]

Разделение смеси аминокислот. Для разделения смеси аминокислот, находящихся в гидролизате белка, и качественного обнаружения отдельных аминокислот широко используется метод распределительной хроматографии на бумаге. Этот метод представляет собой одну из модификаций метода хроматографического анализа, предложенного М. С. Цветом в 1903 г. [c.15]

Порядок чередования отдельных остатков аминокислот в цепи может быть установлен последовательным отщеплением с обоих концов молекулы отдельных аминокислот, которые предварительно метятся превращением в какие-либо устойчивые к гидролизу производные, например в производные динитроанилина. Этим путем было установлено строение нескольких наиболее простых белков (инсулина, гемоглобина, рибонуклеазы и др.), молекулы которых построены из нескольких десятков (в некоторых случаях больше сотни) различных и одинаковых молекул а-аминокислот и имеют молекулярную массу 5000—15000. Эти химические данные дополняются результатами рентгеноструктурного анализа. Для многих более сложных белков установлен порядок чередования нескольких аминокислотных звеньев с каждого конца молекулы. [c.298]

Впервые общий метод определения аминокислот в гидролизатах белков был предложен Э. Фишером. В настоящее время разработаны весьма совершенные методы анализа продуктов гидролиза белка, позволяющие с большой точностью определять качественно и количественно содержание отдельных аминокислот в тех или иных белковых веществах после их гидролиза. Эти методы основаны главным образом или на осаждении отдельных аминокислот специфическими реактивами, или на образовании с последними характерной окраски. [c.33]

Для разделения и количественного определения аминокислот особенно эффективными оказались методы распределительной, адсорбционной и ионообменной хроматографии. Большое применение, в частности, получил метод Мура и Стейна, в котором исследуемый раствор пропускают через колонку, наполненную или крахмалом (твердый полярный адсорбент), или ионообменной смолой (сочетание адсорбции с ионным обменом), и затем связанные на колонке вещества вымывают с различной скоростью подходящими растворителями. Сбор и анализ отдельных фракций осуществляются при помощи автоматических приспособлений. Метод Мура и Стейна позволяет получить через 24 часа данные о полном аминокислотном составе образца белка, используя при этом только 2,5—3,5 мг белка. Для оценки эффективности и значения этого метода полезно напомнить, что старые и более грубые аналитические приемы требовали для получения данных о полном аминокислотном составе белка нескольких недель трудоемкой работы, связанной с расходованием десятков граммов белка. [c.35]

Этот метод используют для качественного анализа, всякого рода органических смесей. Его можно сделать и количественным, применяя к отдельным пятнам микроаналитические методы, главным образом колориметрические. Классическим примером применения этого метода является качественный анализ смесей аминокислот. [c.24]

В пятидесятых годах, в период бурного развития БХ, был опубликован ряд статей с описанием методик и систем растворителей, предназначенных для разделения белковых гидролизатов или аминокислот, полученных из различных физиологических жидкостей (см. [51, 77]). Эти системы использовались для разделения сложных смесей аминокислот и пептидов и смесей аминокислот, с трудом поддающихся идентификации, например лейцин, изолейцин. С появлением автоматических аминокислотных анализаторов [120], а также новых ионообменников (см. гл. 5) БХ все реже и реже используют для анализа аминокислот и пептидов. В настоящее время в лабораториях, ведущих исследование белков, методом БХ проводят главным образом окончательную очистку простых смесей пептидов, полученных с помощью других методов разделения, кроме того, БХ служит одним из критериев однородности вещества (часто в сочетании с электрофорезом на бумаге), и только в считанных случаях ее применяют для идентификации отдельных аминокислот. [c.121]

Идентификацию аминокислот проводят с помощью свидетелей и на основании известных значений Rf отдельных аминокислот. При анализе дрожжей в гидролизатах белка находят почти все аминокислоты. На хроматограммах таких многокомпонентных смесей пятна аминокислот расположены очень близко, поэтому для их идентификации делают параллельное хроматографирование искусственных смесей аминокислот. [c.217]

Аминокислотный анализ обычно проводят при помощи автоматического анализатора аминокислот. Парциальные удельные объемы отдельных аминокислот [c.93]

Если к методам,ультрамикроанализа причислять также все методы анализа, при которых определяются элементы, группы или соединения в микрограммовых количествах, не принимая во внимание количества исходных веществ, то описание этих методов далеко перешагнет за рамки данного раздела. Так, придется включить описание большинства неорганических и органических цветных реакций, методов анализа витаминов, аминокислот, антибиотиков, ферментов и др. Надо отметить, что несмотря на отсутствие подходящих весов, все же удалось улучшить существовавшие до сих пор микрометоды настолько, что в случае необходимости, например при анализе очень ценных веществ и для отдельных исследований, можно работать с очень малыми количествами исследуемых веществ. Однако эти методы еще недостаточно разработаны для повседневного использования в лаборатории. [c.251]

В сборнике отдельные главы посвящены анализу фенилтиогидантоинов аминокислот с помощью ГХ и жидкостной хроматографии.) [c.313]

НАТРИЙЦИТРАТНЫЕ БУФЕРЫ ДЛЯ АНАЛИЗА ОТДЕЛЬНЫХ АМИНОКИСЛОТ ПО МЕТОДИКАМ А, В, С И ВР (СМ. РАЗД. 1.6.7) [c.75]

К реакционной газовой хроматографии (в смысле определения Драверта и сотр.) должен быть отнесен также метод, разработанный Златкисом и сотр. (1958, 1960) для прямого определения алифатических аминокислот в водном растворе при применении двух реакторов (см. разд. 8.1.2). В нагреваемом до 140° реакторе I, заполненном нингидрином, сначала происходит окислительное разложение аминокислот до летучих альдегидов и двуокиси углерода. Продукты реакции разделяются в присоединенной последовательно колонке при комнатной температуре и переводятся в реактор II, заполненный никелем на кизельгуре. Это заполнение обеспечивает при 425° гидрогениза-ционное расщепление всех альдегидов до метана. Присоединяемая к реактору II короткая колонка с молекулярными ситами служит для абсорбции образующейся и захваченной из пробы воды. Отдельные аминокислоты затем определяются в виде пиков метана при помощи катарометра. Применением реактора II решается относительно простая задача газохроматографического анализа веществ, содержащих воду, тем более что метан в отличие от альдегидов легко высушить. Кроме того, превращение альдегидов в метан позволяет более просто количественно определять аминокислоты, так как специфическая для данных веществ теплопроводность остается всегда одинаковой и вследствие этого не нужно вводить поправочных коэффициентов в количественные результаты. Тот факт, что катарометр при обычной температуре может применяться для определения метана, положительно сказывается на чувствительности метода. [c.274]

Аминоацидурия. Качественный и количественный состав аминокислот мочи человека имеет прежде всего диагностическое значение, поскольку некоторые болезни человека возникают вследствие первичного нарушения обмена отдельной аминокислоты или группы аминокислот. Кроме того, для ряда органических поражений органов и тканей человека, а также аномалий обмена характерен свой аминокислотный спектр мочи. Ввиду этого, а также благодаря легкой доступности объекта исследования анализ мочи на наличие аминокислот приобретает большое клиническое значение. На экскрецию аминокислот большое влияние оказывают возраст, характер питания, пол, гормоны и другие факторы. Установлено, что у младенцев с мочой вьщеляется больше аминокислот, чем у взрослых. Обычно различают повышенную и пониженную экскрецию аминокислот. В свою очередь гипераминоацидурия делится на почечную, связанную с приобретенными или врожденными дефектами реабсорбции аминокислот в почках, и внепочечную, обусловленную увеличением концентрации всех или отдельных аминокислот в крови (см. главу 18). [c.466]

Анализ. Методы анализа белковых макромолекул селективны и осуществляются в зависимости от того, какая структура является объектом исследования, и начинаются с определения аминокислотного состава. Для этого необходимо провести полный гидролиз пептидных связей и получить смесь, состоящую из отдельных аминокислот. Гидролиз проводят при помощи 6 М соляной кислоты при кипячении в течение 24 ч. Так как для гидролиза пептидных связей изолейцина и валина этого может быть недостаточно, проводят контрольный 48- и 72-часовой гидролиз. Некоторые аминокислоты, например триптофан, при кислотном гидролизе разрушаются, поэтому для их идентификации используют гидролиз при помощи метансульфоновой кислоты в присутствии триптамина. Для определения цистеина белок окисляют надмуравьиной кислотой, при этом цистеин превращается в цистеиновую кислоту, которую затем анализируют. Вьщеление и идентификацию аминокислот проводят при помощи аминокислотных анализаторов, принцип действия которых основан на хроматографическом разделении белкового гидролизата на сульфополистирольных катионитах, В основе количественного определения той или иной аминокислоты лежит цветная реакция с нингидрином, однако более перспективным следует считать метод, при котором аминокислоты модифицируют в производные, поглощающие свет в видимом диапазоне. Разделение смеси аминокислот проводят при помощи высокоэффективной жидкостной хроматографии, а само определение — спектрофотометрически. Следующим этапом является определение концевых аминных и карбоксильных [c.40]

Книга Э. Шталя посвящена детальному описанию метода хроматографии в тонких слоях. В общей части излагаются приемы, аппаратура, сорбенты и некоторые общие методы идентификации. Подробно освещены вопросы теории хроматографии в тонких слоях. Специальный раздел посвящен изотопным методам. Специальная часть состоит из ряда глав, в которых п )иводятся примеры анализов отдельных классов соединений, например алифатических липидов, эфирных масел, бальзамов, смол, витаминов, стероидов, аминокислот, сахаров и т. д. [c.5]

Имеется ряд детальных обзоров, охватывающих применение хроматографии для анализа аминокислот, извлеченных из белков гидролитическими методами [89, 127, 134]. Читатель может найти в этих обзорах сведения об анализе отдельных белков. Достаточно указать на то, что в настоящее время количественно наиболее точным является метод, разработанный Муром и Стейном [93]. В этом методе применен градиентный проявительный анализ на ионообменных колонках из сульфированного полистирола. На рис. 165 показан типичный пример [62] превосходного разделения, осуществленного этим методом. Если применение сложной аппаратуры нецелесообразно, то хроматография на бумаге вполне применима для анализа белковых гидролизатов [7, 10, 30, 80]. [c.336]

При гидролизе и аминокислотном анализе нефти и ее фракций, приведенных на схеме, аминокислоты обнаружены в гидролизатах сырой нефти, ДМФА-экстракте, полярной фракции асфальтенов и концентрате ванадилпорфиринов [50]. Остальные нефтяные фракции аминокислот в определяемых количествах не содержат. Проведенные расчеты показывают, что все содержащееся в нефти количество аминокислотных производных переходит в ДМФА-экстракт и затем в полярные асфальтены, которые содержат около 1,3 вес. % аминокислотных остатков и порфириновые концентраты, содержание аминокислот в которых 2,6 вес.%, или около 20 мол. %. Во всех исследованных фгракциях удалось надежно идентифицировать шесть белковых аминокислот (рис. 4.16), причем аминокислотный состав как асфальтенов, так и порфиринового концентрата качественно сходен и очень близок по относительному количественному содержанию отдельных аминокислот. [c.362]

Фирма Be kman выпускает специальные руководства и библиографические справочники, а также поставляет разнообразные дополнительные принадлежности. Фирмой Te hni on (Tarrytown, N. Y., USA) был впервые создан анализатор, состоящий из отдельных блоков. Как уже отмечалось, прибор рассчитан на выполнение одноколоночных анализов. Будучи высоко-разрешающим и в высшей степени универсальным прибором, этот анализатор интересен для небольших лабораторий. Подбирая условия элюирования, можно варьировать время анализа в широких пределах, от 5,5 до 21 ч. Для анализа других соединений выпускают варианты основной модели, включающие три (N -3) и пять (N -5) колонок. Специально для клиник выпущена модель N S, предназначенная для быстрого анализа характерных аминокислот. Во всех указанных моделях использован принцип рассечения потока пузырьками азота на отдельные отрезки, что позволяет улучшить разрешение и ликвидировать [c.324]

Таким образом, для чисто химических или физико-химических исследований основным требованием является точность для широкого обзора в области пищевых белков самое первое, что нужно, это — получить возможно больше материала по присутствию и содержанию незаменимых аминокпслот. В нашей практике часто встречалось, что пищевой белок является хорошим источником больщинства незаменимых аминокислот, которые легко определить (именно цистин, метионин, аргинин, гистидин, лизин, тирозин и триптофан), и все же неполноценен в отношении других аминокислот, для выявления которых нет простых и точных способов определения. Если в таких случаях руководствоваться только анализами первой группы аЛтинокислот, то можно было бы впасть в серьезную ошибку при биологической оценке данного белка. Поэтому только полный анализ аминокислот, имеющих значение для питания, может дать правильную и полноценную картину исследуемых продуктов, даже если определение отдельных аминокислот будет произведено не абсолютными, а скорее сравнительными методами. [c.9]

Спакман, Стейн и Мур [12] предложили метод анализа кислых и нейтральных аминокислот на колонке размером 150 X X 0,9 см при использовании двух буферов, заменяемых один на другой в середине анализа. Согласно их методу, основные аминокислоты анализируются на второй колонке с использованием третьего буфера более высокой ионной силы и pH. Для анализа основных аминокислот, обычно встречающихся в пептидных и белковых гидролизатах, применяется колонка размером 15 X Х0,9 см. По этой методике для каждой колонки требуется отдельная проба однако методика име1Ет большие возможности. Гак, если необходимы сведения только о нескольких основных аминокислотах, например, в случае анализа физиологических жидкостей, то они могут быть получены без предварительного элюирования кислых и нейтральных аминокислот, которые при одноколоночном методе элюируются в первую очередь. [c.17]

Остается сделать вывод, что белки всасываются в кровь в форме более простых соединений, отдельных аминокислот и отчасти простейших пептидов. Применяя анализ оттекающей от кишечника крови, полученной по методу ангиостомии, удается показать, что во время пищеварения через кишечную стенку, действительно, в основном проходят аминокислоты и частично простейшие полипептиды. [c.335]

Экспериментальное определение константы ионного обмена в двойной системе было проведено с применением тех же методов анализа отдельных компонентов, что и для тройных систем. Сорбированное количество аминокислоты определяли по разности концентраций исходного и равновесного растворов. Была проведена серия опытов, в которых сорбированное количество водорода превышало 0,3 мг-эт1г. Изотермы сорбции аминокислоты были сняты для разных, но постоянных pH равновесного рас- [c.97]

Выделение аминокислот из белков и выяснение характера свя зи между аминокислотными остатками в белковой молекуле по требовало огромного труда и очень сложного оборудования Полный анализ того или иного белка, включающий не только ка чественное определение отдельных аминокислот, но и порядок, в каком они соединены в молекуле белка, настолько труден, что завершение исследований лишь одного белка является событием в научном мире. Работы подобного рода часто выполняются совместно лабораториями нескольких стран с использованием электронносчетных машин и других современных средств исследования. [c.50]

Система позволяет анализировать в режиме сканирования окрашенные, флуоресцирующие и поглощающие УФ-излучение соединения, а также авторадиограммы. В ионообменной и лигандообменной тонкослойной хроматографии с помощью этого устройства молено измерять содержание отдельных аминокислот в процентах к общему количеству аминокислот. Для заданной аминокислоты в автоматическом рел име можно последовательно определить концентрацию шести отдельных компонентов в девяти образцах на одной хроматограмме. Видеодепсито-метрические измерения можно проводить со стандартным отклонением не более 5%. Воспроизводимость анализов характеризуется стандартным отклонением не более 1,5%. [c.101]

На широкой полосе бумаги помещают чередующиеся пятна контрольной и анализируемой смеси. Узкую полоску хроматограммы, отрезанную по одному из краев бумажной полосы, проявляют нингидрином. По положению окрашенных участков на отрезанной полоске разрезают остальные части хроматограммы. Полученные кусочки, на которых сорбированы отдельные аминокислоты, разрезают на мелкие части и помещают в пробирки для центрифугирования, куда введена суспензия фосфата меди в борнофосфатном растворе, дают постоять ночь на льду и затем осадок, содержащий фосфат меди и кусочки бумаги, отделяют на центрифуге. К жидкости добавляют сернистокислый натрий, определяют содержание меди полярографическим методом и строят график зависимости силы тока от концентрации для каждой а.минокислоты, используя результаты предварительного анализа нанесенных на бумагу пятен контрольной смеси. Получается прямолинейная зависимость между силой тока и концентрацией аминокислоты. По этому графику можно найти искомое количество аминокислот в анализируемой смеси. [c.161]

При анализе бе.пков применяются поэтому комбинированные методы определения отдельных аминокислот, т. е. целый ряд весьма разнообразных по степени сложности и в то же время совери1енно различных по точности количественных операций, в результате чего и получается та или иная суммарная картнна аминокис.чотного состава от дел ь-ных белков. [c.315]

При гидролитическом распа,о,е целлюлозы но,ручаются целлобиоза и [ люкоза. Гидролиз белка дает отдельные аминокислоты, в чем можно убедиться из анализов многих белко) но зжчи ям основной цени [843— 845]. Возможна также 1шправлеииая деструкция белков [846]. [c.125]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология