Справочник химика 21

Химия и химическая технология

Статьи Рисунки Таблицы О сайте English

Количественное определение ферментативные методы

    Моча здорового человека содержит настолько мало белка, что он не обнаруживается ни с помощью реакций осаждения, ни цветными реакциями на белок. Однако более чувствительные ферментативные методы позволяют обнаружить в моче белки — ферменты. Одним из них является диастаза, называемая иначе амилазой. Амилаза образуется в поджелудочной железе, поступает в кровь и частично выводится с мочой. Содержание амилазы в моче заметно возрастает при воспалительных процессах в поджелудочной железе. Поэтому количественное определение диастазы в моче часто проводят при обследовании больных, обнаруживающих симптомы воспаления поджелудочной железы. [c.249]


    Работа 43. Количественное определение глюкозы в биологических жидкостях ферментативным методом (реагенты НТК Анализ-Х ) (УИРС) [c.157]

    Для количественного определения аминокислот применяют самые разнообразные методы наиболее важные из них можно разбить на следующие группы 1) химические методы 2) ферментативные методы 3) методы с применением изотопов 4) микробиологические методы и 5) хроматографические методы. Из химических методов особое значение имеют метод с использованием азотистой кислоты (стр. 33) и методы, основанные на реакции с нингидрином (стр. 33—34). [c.39]

    Для количественного определения аминокислот существует много методов. Эти методы делят на химические, хроматографические, микробиологические, ферментативные и методы с применением изотопов. [c.16]

    После идентификации сахаров, присутствующих в гидролизате, их можно количественно определить специфическими колориметрическими методами [53], ферментативными способами [117, 211] или гравиметрическими методами, заключающимися в избирательном осаждении нерастворимого производного. Количественное определение сахаров с помощью бумажной хроматографии, требующее всего лишь 1—50 мг исходного вещества, представляет собой общий и точный метод анализа сложных смесей [61, 97]. [c.304]

    Гидролиз белков кислотой обычно сопровождается разрушением (в результате окисления) большей части триптофана, окислением цистеина в цистин и некоторым распадом серина и треонина. Щелочной гидролиз имеет то преимущество перед кислотным, что триптофан в этих условиях более стабилен. Однако при щелочном гидролизе имеет место интенсивный распад серина, треонина, цистина, цистеина и аргинина. Кроме того, при щелочном гидролизе наблюдается рацемизация природных аминокислот. Гидролиз белка как кислотой, так и щелочью сопровождается дезамидированием глутамина и аспарагина. Эти амиды аминокислот и триптофан можно выделить из гидролизатов, полученных при помощи протеолитических ферментов. Однако ферментативный метод также страдает определенными недостатками в частности, гидролиз может быть неполным и сам фермент может распадаться с освобождением аминокислот. Выделение аминокислот из белков и получение их с количественным выходом представляет очень сложную задачу, которой занимались многие исследователи. Эта обширная область всесторонне рассмотрена в монографии Блока и Боллинг [98]. [c.24]


    В настоящее время разработаны разнообразные химические, микробиологические и ферментативные методы количественного определения миоинозита.  [c.217]

    Выбор метода количественного определения крахмала в первую очередь зависит от того, каким способом проведено диспергирование образца набуханием, либо действием кислот (соляной, хлорной) или солей (хлористого кальция, карбоната аммония). В зависимости от этого содержание крахмала определяют одним из следующих методов а) путем прямого измерения оптического вращения раствора после отделения белков [1, 2] б) осахариванием крахмала под действием растительной (из солода) или животной (из слюны, из подчелюстной железы — панкреатической) а-амилазы [3, 4] и последующим определением восстанавливающих сахаров или в) выделением крахмала в виде его комплекса с иодом. В последнем случае либо проводят титрование иода в комплексе [5, 6], либо комплекс разрушают и определяют содержание сахаров, образующихся в результате кислотного [7] или ферментативного [8] гидролиза крахмала, содержащегося в комплексе. Если провести дополнительное диспергирование крахмала, то его можно количественно определить прямым измерением оптического вращения раствора [9]. [c.84]

    Химический метод — количественное определение субстрата или продуктов, образующихся в результате ферментативных реакций с помощью различных химических реагентов. [c.198]

    Хроматографический метод — количественное определение субстрата или продуктов ферментативной реакции с помощью различных видов хроматографии. Так, в настоящее время для количественного определения аминокислот широко применяется автоматический прибор Штейна и Мура, в котором используется ионообменная хроматография. [c.198]

    Глицерин, эритрит и пропандиол-1,2 могут быть разделены хроматографией на бумаге [100] или на колонке [60, 103], после чего количество полиолов можно определить колориметрически по выходу формальдегида, образующегося при их окислении перйодатом [104]. Помимо этого, предложен ферментативный метод количественного определения глицерина [105]. Количество гликолевого альдегида можно определить с помощью специфической цветной реакции [106]. [c.250]

    В данном разделе рассматриваются физические, химические и ферментативные методы, которые используются при исследовании метаболизма бактерий. В последующих главах описаны физические методы и приборы, фракционирование и анализ химических компонентов, выделение и количественное определение ферментов, изучение катализируемых ими реакций, а также исследование проницаемости клеток и транспортных процессов. Все эти вопросы разработаны настолько хорошо, что вполне оправданно опубликование специальных книг, посвященных их методологии и применению. Однако в данном случае авторы ограничились описанием только самых надежных и простых методов, которые могут использовать для достаточно основательного изучения метаболизма бактерий даже начинающие исследователи. [c.166]

    В результате гидролиза простых и сложных полисахаридов в бактериальных клетках образуется большое число моносахаридов. Поскольку полимеры состоят из различных мономеров, за исключением гомополимеров, таких, как гликоген, количественное определение отдельных сахаров представляет собой сложную аналитическую проблему, которую порой можно решить лишь с помощью газожидкостной хроматографии [16]. Однако некоторые сахара и производные сахаров определяют с помощью специфических колориметрических реакций или ферментативных методов [4]. Ниже приведем определения содержания двух наиболее широко распространенных сахаров [c.296]

    Дальнейший анализ липидов проводят методами гидролиза и количественного определения компонентов сложных смесей фосфолипидов, В результате избирательного гидролиза липидов мембран образуются продукты, которые можно разделить по полярности или по остающимся неполярным группам. Описаны различные способы щелочного или кислотного гидролиза мембранных липидов. При использовании ферментативного гидролиза [c.227]

    На заключительной стадии проведения ИФА осуществляется измерение каталитической активности ферментной метки. При наличии отработанной методики анализа регистрируемый при этом параметр однозначно соответствует начальной концентрации измеряемого соединения и служит характеристикой его содержания. Единицы, в которых выражается регистрируемый сигнал, могут быть различны и зависят от метода определения ферментативной актив-сти (например, спектрофотометрический, флуориметрический, электрохимический, люминесцентный и т.д.). На основании полученных данных оператор должен сделать вывод, присутствует ли анализируемое соединение в пробе, и если да, то в какой концентрации. Этот этап является крайне ответственным, и для того чтобы максимально снизить возможность субъективных оценок результатов анализа, современные регистрирующие приборы для проведения ИФА оснащены микропроцессорами, с помощью которых рассчитывают концентрацию определяемого соединения в соответствии с заданной программой. Но пока что в большинстве случаев количественная интерпретация результатов зависит от опыта сотрудника, проводящего анализ. [c.256]


    В большинстве случаев способ обнаружения фермента состоит в том, что электрофореграмму разрезают на небольшие участки, элюируют из них фермент и определяют его активность обычными методами. Такая методика позволяет проводить количественное определение ферментативной активности, однако иногда при этом снижается степень разрешения, поскольку фрагменты геля, как правило, шире, чем зоны разделенных белков. С точки зрения разрешающей способности более предпочтительными являются методы локализации ферментов in situ. Краткое описание таких методов дается в настоящей главе. [c.279]

    Количественно Г. определяют спектрофотометрич., поля-риметрич. и хроматографич. методами. При газохроматографич. определении Г. предварительно переводят в более летучие соед., напр, в ацетаты сорбита илм нитрил глюконовой К-1Ы. Наиб, специфич. метод определения D-Г.-ферментативный, для проведения к-рого используют фермент глюкозооксидазу, катализирующую в аэробных условиях окисление p-D-Г. с образованием б-г люк оно лактона и HjOj. Выделившиеся продукты количественно определяют разл. методами. [c.590]

    Метод основан на количественном определении уксусной кислоты, образующейся из ацетилхолинхлорида в ферментативной реакции, катализируемой холинэстеразой сыворотки. Уксусная кислота сдвигает pH инкубационной смеси, что выявляется с помощью индикатора и количественно определяется колориметрическим методом. [c.198]

    Известны два основных метода деградации белковой молекулы — частичный кислотный гидролиз и ферментативный гидролиз. Первый метод менее селективен, по с его помощью могут быть получены ценные данные относительно структуры низкомолекулярных белков определенного молекулярного веса. Полный гидро.-лиз белков до составляющих аминокислот не позволяет установить последовательность расположения аминокислот в белке. Однако количественное определение соотношений отдельных аминокислотных, остатков дает возможность судить о гомогенности данного белка. На основе этих данных можно рассчитать эмпирические формулы и сравнить их с формулами, полученными нри помощи элементарного анализа. Это необходимо сделать до проведения частичного гидролиза белка или его ступенчатого расщепления для определения последовательности аминокислот. Подобная методика приведена в статьях Белла и сотр., посвященных определению структуры одного из физиологически активных компонентов кортикотронина [И, 25, 152, 153]. [c.392]

    В книге рассматривается химия таких полисахаридных комплексов, называемых мукосоединениями, которые выполняют множество функций в живом организме. Широко обсуждается роль этих соединений, их действие, возможный механизм ферментативного синтеза, структурные и количественные изменения, которые они претерпевают при болезни. Значительное место занимает описание новейшей техники выделения этих соединений из тканей и методов их количественного определения. [c.655]

    Для количественного определения исследуемых веществ методом микрофотометрии непосредственно с гистологических препаратов обычно применяется окраска галлоцианин-хромовыми квасцами на РНК и ДНК и пиронином Ж на РНК в сочетании со специфическими ферментативными тестами. [c.134]

    Для обнаружения и количественного определения некоторых а-кетокислот могут быть использованы ферментативные и микробиологические методы. Многие а-кетокислоты восстанавливаются при действии лактатдегидрогеназы, причем по меньшей мере шесть из них (р-меркаптопировиноградная кислота, а-кето-масляная кислота, а-кето-р-оксимасляная кислота, 3-окснпиро-виноградная кислота, пировиноградная кислота и глиоксиловая кислота) восстанавливаются примерно с одинаковой скоростью. Дрожжевая декарбоксилаза а-кетокислот также отличается широким диапазоном субстратной специфичности (см, табл. 9). [c.104]

    Если измельченное растение вымачивали в воде и затем экстрагировали эфиром, то получали, судя по запаху и по показателю лучепреломления, преимущественно цианистый бензил или же смесь цианистого бензила и бензилизотиоцианата. Требовалось дальнейшее подтверждение того, что при ферментативном расщеплении глюкозида горчичного масла образуются как нитрил, так и изотиоцианат. Указанные авторы видоизменили метод, основанный на применении нитрата серебра, и сделали его пригодным для количественного определения изотиоциаиатов. Они также исследовали кресс-салат Lepidium sativum). При перегонке с водяным паром неизмельченного растения был получен цианистый бензил. Если же подобной операции подвергалось измельченное растение, то образовывалось твердое вещество (фенилуксусная [c.158]

    Недавно Наньо и Гюильбо [255] описали чувствительный к спирту ферментный электрод, пригодный для определения этанола в крови с пределом чувствительности 10 мг.% . Кроме того, было установлено, что такой электрод пригоден для количественного определения альдегидов и карбоновых кислот методом измерения поглощения растворённого кислорода в ферментативной реакции. [c.88]

    Ф. м. а. можно условно подразделить на два вида 1) методы, основанные на количественном определении компонентов ферментативной реакции (исходных веществ или продуктов) после ее заверше-нт1я 2) методы, основанные на измерении скорости ферментативной реакции, или кинетические методы. [c.205]

    Для количественного определения аминокислот применяются самые разнообразные методы, которые можно разбить на следующие группы 1) химические методы 2) ферментативные 3) методы с применением изотопов 4) микробиологиче- [c.41]

    Другим новым методом количественного определения аминокислот является микробиологический метод. Для этой цели используются различные культуры молочнокислых бактерий, культура Ьеисопоз1ос тезеп1его1йе8 и некоторые штаммы Иеигозрога. Интенсивность роста культуры определяется по мутности бактериальной суспензии, по количеству образующейся молочной кислоты или путем взвешивания мицелия [64—66]. Одну из модификаций микробиологического метода представляет метод определения аминокислот по количеству углекислоты, образующейся в результате ферментативного декарбоксилирования аминокислот бактериальными препаратами. Таким путем можно определить тирозин, гистидин, лизин и глутаминовую кислоту [67]. Для количественного определения какой-нибудь аминокислоты микробы высеваются на синтетическую среду, содержащую все необходимые аминокислоты и факторы роста, за исключением исследуемой аминокислоты. [c.34]

    Пинелли и Форменто [367] разработали метод анализа субмикрограммовых количеств стероидов в маленьких пробах мочи, объединив тонкослойную и газовую хроматографию. Чтобы получить свободные стероиды, эти авторы проводили ферментативный и химический гидролиз, после чего разделяли стероиды на силикагеле с.месью диэтиловый эфир—метанол (1 1). Для количественного определения методом газовой хроматографии они использовали триметилсилиловые эфиры. Вайдепхейвель [368] показал, что для ферментативного гидролиза нужны высокие концентрации ферментов. [c.352]

    И. к. имеют максимум поглощения в УФ-свете при 249—250 ммк (в кислой среде) спектры ИМФ, ИДФ и ИТФ в УФ-свете близки между собой. Коэфф. молярной экстинкции И. к при pH 2 и 250 ммк равен 10 900. И. к. дают цветные качественные реакции на гипоксантин, рибозу и органически связанный фосфат. Количественные определения И. к. основаны на тех же цветных реакциях, а также на измерении поглощения И. к. в УФ-свете. Для качественных и количественных определений пользуются также методами хроматографии и ионофореза. И. к. содержатся в животных и растительных организмах. Являясь макроэргич. соединениями, ИТФ и ИДФ принимают участие в таких ферментативных процессах, как, папр., нуклеотидфосфокипазные реакции и декарбоксилиро-вание щавелевоуксусной к-ты до фосфоенолпировиноградной к-ты. [c.136]

    Наиболее удобные и специфические способы определения мурамовой кислоты включают щелочную обработку кислотных гидролизатов клеточных стенок для удаления D-лактата из 3-го положения мурамовой кислоты. Затем проводят количественный анализ D-лактата ферментативным методом, описанным Типпером [17], согласно которому молочную кислоту определяют с помощью лактатдегидрогеназы, или же колориметрическим методом Хадзии [12]. [c.304]

    Незаменимые вещества пищи, объединяемые под общим названием витамины , относятся к различным классам химических соединений, что само по себе исключает возможность использования единого метода их количественного определения. Все известные для витаминов аналитические методы основаны либо на определении специфических биологических свойств этих веществ (биологические, микробиологические, ферментативные методы), либо на использовании их физикохимических характеристик (флюорометрические, хроматографические и спектрофотометрические методы), либо на способности некоторых витаминов вступать в реакцию с некоторыми реагентами с образованием окрашенных соединений (колориметрические методы). [c.289]

    ВОЛЬНО часто, проблеме количественного анализа энзимограмм до сих пор уделялось сравнительно мало внимания. При этом нередко применяют методы, широко используемые для определения белков в зонах, окрашенных специфическими белковыми красителями. Энзимограммы сканируют с помощью денситометров и вычисляют площади пиков, которые служат мерой ферментативной активности. Другие методы количественной оценки ферментов- основаны на элюции и последующем определении ферментативной активности в растворе или на элюции окрашенного продукта, образовавшегося под действием фермента in situ. [c.282]

    Фриц и др. 408] обнаружили, что соотношение между изоферментами ЛДГ, выявленными с помощью электрофореза в геле и последующего специфического окрашивания разделенных зон, зависит от количества нанесенного на гель белка. Более того, соотношение изоферментов, определенное при электрофорезе, отличается от их соотношения при измерении другими методами. Меньшие количества фермента обнаруживали более высокую относительную активность, что, вероятно, объясняется медленным проникновением в гель субстрата и сопрягающего агента. При электрофорезе в микрогелях изоферментов глюко-зо-6-фосфатдегидрогеназы подобных отклонений не наблюдалось [257]. В этом случае субстраты, коферменты, сопрягающие агенты и другие низкомолекулярные соединения очень быстро проникают в гель, благодаря чему обеспечивается постоянный избыток субстрата и других реагентов. Таким образом, микрогель можно рассматривать как микрокювету и использовать его для количественного определения пикограммовых количеств ферментов, а также для изучения кинетики ферментативных реакций. Детальное описание этих методов дается в работе Нейхоффа [915]. [c.283]

    Другие методики. Когда определение ферментативной активности или прямые измерения радиоактивности не подходят для контроля элюирования, следует рассмотреть другие возможности для анализа связывания. Наибольшего внимания в качестве общего чувствительного метода количественного измерения подвижного компонента заслуживает, по-видимому, радиоиммуноанализ. Кроме того, может оказаться целесообразным измерение количества элюированного подвижного компонента с помощью количественного лигандсвязывающего анализа, например в случае доступности радиоактивно меченного лиганда, аналогичного по структуре иммобилизованному лиганду. [c.232]

    Методы иммуноанализа, предназначенные для нелабораторного использования, должны требовать лишь минимальной калибровки или вовсе ее не требовать и должны давать надежные результаты при самых разных внешних условиях. Можно ожидать, что иммунохроматографический анализ мало чувствителен к продолжительности инкубации и температуре, поскольку количественное определение в этом методе не базируется на точном измерении ферментативной активности. Результаты, согласующиеся с этим предположением, были получены при построении калибровочных кривых для определения теофиллина при различных температурах (рис. 10-18). Как видно из рисунка, расстояние миграции существенно не зависит от температуры в интервале от 4 до 37 "С. В другой серии опытов (данные не представлены) варьировали время последовательной инкубации индикаторных полосок в ферментном реагенте и проявителе. Хотя при увеличении времени инкубации до 30 мин в каждом реагенте результаты количественного определения не изменяются, продолжительная инкубация приводила к получению расплывчатых окрашенных зон и снижению воспроизводимости. Вероятно, это обусловлено совместным влиянием диффузии и испарения растворителя. [c.154]

    Таким образом, с помощью ферментативных методов можно будет уже, вероятно, а самом ближайшем будущем количественно определять различные 6-дезоксисаха-ра — Ь-фукозу, Ь-рамнозу и др. Понятие специфичность , которое до сих пор характеризовало возможность суммарного определения 6-дезоксигексоз в присутствии других сахаров, должно получить с развитием ферментативных методов более точный смысл и характеризовать возможность специфического определения индивидуальных 6-дезоксигексоз. [c.120]

Смотреть страницы где упоминается термин Количественное определение ферментативные методы: [c.40]    [c.415]    [c.41]    [c.221]    [c.205]    [c.136]    [c.276]    [c.71]    [c.168]    [c.5]    [c.333]    [c.279]    [c.27]    [c.413]   
Хроматография на бумаге (1962) -- [ c.181 ]



ПОИСК





Смотрите так же термины и статьи:

Количественный методы

Ферментативные методы определения



© 2025 chem21.info Реклама на сайте